CC BY
23
Международная конференция «Репродуктивная медицина: взгляд молодых — 2016» International conference "Reproductive medicine: young scientists' overlook — 2016"
' - I r
I ■ ' , С ft /
, -it / 'ш m *
1 'V
- V/v-*- : ■
> i v4 ' V
А
Б
Рис. 1. Культура клеток эндометрия человека, окраска гематоксилином и эозином, х400 (А — контрольная группа, Б — группа с введенными КТ в концентрации 1,15 нМ/мкл через 24 ч)
Материалом для исследования были выбраны клетки эндометрия. Их культивирование происходило в среде DMEM/F12, содержащей 10 % сыворотки плодов коровы, 1 % раствор Хепеса, 1 % раствор L-глютамина и антибиотик (пенициллин G, биолот, РФ). Культура поддерживалась при 37 °C в атмосфере 5 % СО2. Культуральная среда менялась каждые 1-2 дня.
Чтобы оценить влияние квантовых точек ZnSe: Мп/МПК на морфологию клеток эндометрия исследование проводилось через 18, 24 и 48 ч после инкубации с КТ, которая имела концентрацию 1,15 нМ/мкл. Окрашивание препаратов проводилось гематоксилином и эозином по стандартной методике. Оценка результатов морфологического исследования осуществлялась с помощью микроскопа BX-46 (Olympus, Япония), цифровой камеры UC 30 и программного обеспечения CellSence Entry.
Результаты исследования
За время длительной инкубации КТ ZnSe: Mn/ МПК с клетками эндометрия не наблюда-
лись морфологические признаки изменения культивируемых клеток, говорящие об изменении их состояния, таких как наличие базальных вакуолей и др. (рис. 1). Также не наблюдалось открепления клеток от субстрата и их гибели. Во всех контрольных группах (контроль и экспериментальные группы) эндометриальные клетки имеют хорошо различимую цитоплазму, занимающую примерно 70 % клетки, небольшое овальной формы ядро.
Выводы
Отработана методика инкубации КТ с клеточной культурой. Наличие МПК-оболочки у исследуемых КТ не вызывает изменений в строении клеток, что говорит о том, одним из важных факторов использования КТ в биологических исследованиях является наличие гидрофильных групп на поверхности частиц.
Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда (проект № 14-1500324).
ОСОБЕННОСТИ популяционного СОСТАВА ЛИМФОЦИТОВ И УРОВЕНЬ ЭКСПРЕССИИ РЕЦЕПТОРА TLR2 МОНОЦИТАМИ ПУПОВИННОй КРОВИ © В.А. Ляпунов, м. н. с., Л.С. Устьянцева, асп.
ФГБУ «Научно-исследовательский институт охраны материнства и младенчества» Министерства здравоохранения Российской Федерации, научное отделение иммунологии и клинической микробиологии, г. Екатеринбург, Россия
Актуальность проблемы
Поверхностный мембранный рецептор врожденного иммунитета TLR2 (Toll-like receptor 2, CD282) экспрессируется на поверхности моноцитов, макрофагов, дендритных клеток, полиморфно-
ядерных лейкоцитов, в некоторых В- и Т-клетках, в том числе Tregs (CD4+CD25+ регуляторные Т-лимфоциты). Его основная функция — распознавание бактериальных, грибковых, вирусных и некоторые других эндогенных веществ, что об-
ЖУРИАЛЪ АКУШЕРСТВА " ЖЕНСКЖЪ БОЛЬЗНЕЙ
ТОМ LXVСПЕЦВЫПУСК 2016
ISSN 1684-0461
ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
81
условливает поглощение объектов фагоцитоза, а также процессы клеточной активации.
Связывание TLR-2 микробными продуктами приводит к воспалительному ответу, опосредованному продукцией цитокинов и противомикроб-ных пептидов.
В настоящее время в литературе недостаточно сведений, описывающих содержание CD282 в соответствии с конкретным гестационным возрастом (ГВ). Существуют лишь разрозненные данные, свидетельствующие о важности данной системы рецепторов врожденного иммунитета в пре- и постнатальном периодах. Снижение экспрессии CD282 обусловливает отсутствие адекватной реакции на проникновение чужеродных агентов, персистирование инфекции и хрониза-цию процесса. В связи с этими факторами оценка содержания популяционного состава лимфоцитов и уровня активированных моноцитов пуповин-ной крови, экспрессирующих TLR 2, является актуальной.
Цель исследования: оценить популяционный состав лимфоцитов и уровень экспрессии рецептора TLR 2 моноцитами пуповинной крови новорожденных различного гестационного возраста.
Материалы и методы исследования
Проведено исследование образцов пупо-винной крови 53 новорожденных детей, из них 10 детей с гестационным возрастом 22-27 недель (1-я группа); 23 ребенка — 28-31 неделя ГВ (2-я группа) и 20 доношенных новорожденных с ГВ более 37 недель (3-я группа). Относительное содержание основных популяций лимфоцитов (CD3+/CD3+, CD19+/CD3-, CD4+/CD3+, CD8+/CD3+, CD16/56+/CD3), а также CD282+CD14+-моноцитов определяли методом проточной цитометрии. Статистическую обработку результатов исследований проводили с использованием пакетов прикладных программ Microsoft Excel 2010 и Statistica 6. Данные представляли в виде медианы (Ме), нижнего и верхнего квартилей (25-го и 75-го перцентилей, Р25 и Р75). Сравнение количественных признаков осуществляли c использованием U-критерия Манна — Уитни. Уровень значимости межгрупповых различий с учетом поправки Боферрони принимали равным 0,017.
Результаты исследования
В результате исследований установлено снижение уровня экспрессии основных лимфоци-тарных маркеров в 1-й группе детей (ГВ 22-27 недель) относительно параметров 3-й группы
(ГВ 37-40 недель): CD3+ (17,5 (12,75-22) % против 53,5 (36-57) %), CD19+CD3- (4,5 (3,75-7) % против 13,5 (9-17) %) и CD8+CD3+ (5 (3,75-7,25) % против 13,5 (10-19) %) (р < 0,017 во всех случаях). Аналогичные результаты получены для детей с ГВ 28-31 неделя по отношению к показателям доношенных новорожденных с ГВ (более 37 недель), в этом случае также отмечалось снижение процентного содержания основных популяций лимфоцитов: CD3+ (42 (27-43) % против 53,5 (36- 57) %), CD4+CD3- (25 (18-34) % против 35 (28,25-41,25) %) и CD8+CD3- (12 (6-13) % против 13,5 (10-19) %) (р< 0,017 во всех случаях). Относительное число CD16/56+CD3- и CD19+CD3--клеток у детей 2-й группы было сопоставимо с показателями доношенных новорожденных. Исследование экспрессии маркеров CD 282+CD 14+ моноцитами пу-повинной крови показало, сниженное количество активированных клеток у детей с ГВ 22-27 недель в сравнении со значениями группы доношенных новорожденных — 39 (29,5-44,25) % против 59 (34-67) % (р< 0,017). Вместе с тем различий между 2-й и 3-й группами по данному параметру не выявлено.
При сравнении количества основных популяций лимфоцитов между группами недоношенных детей выявлено снижение относительного числа В-клеток (CD19+/CD3-) в группе с ГВ 22-27 недель относительно показателей новорожденных с ГВ 28-31 неделя 4,5 (3,75-7) % против (11 (6- 13) %, р < 0,017). В то же время доля CD3+-, CD4+-, CD8- и CD16/56+-клеток значимо не различалась (р > 0,05). Содержание моноцитов пуповинной крови, экспрессирующих ТЪК2 у новорожденных основных групп, также было сопоставимо (39 (29,5-44,25) % против 41 (34,25- 63,75) % (р > 0,017) Полученные данные подтверждаются литературными источниками, в которых также отмечается снижение экспрессии ТЪК2 до 29-й недели ГВ.
Выводы
В результате исследований установлено, что относительное содержание основных лимфоид-ных Т-клеток в группах недоношенных детей достоверно снижено в сравнении с группой доношенных новорожденных (за исключением CD16/56+-клеток). По достижении ГВ в 28-31 неделю процентное содержание В-лимфоцитов и уровень достигает значений доношенных
детей, что свидетельствует об изначальной готовности к распознаванию потенциальных патогенов с целью дальнейшей презентации антигена клеткам адаптивного иммунитета.
ЖУРИАЛЪ АКУШЕРСТВА - ЖЕНСКИХЪ БОЛМНЕЙ
ТОМ LXVСПЕЦВЫПУСК 2016
ISSN 1684-0461 ■
