CC BY
34
ОРИГИНАЛЬНЫЕ РАБОТЫ
ЛИТЕРАТУРА
1. Аль-Шукри, С. X. Опухоли мочеполовых органов: рук-во для врачей / С. X. Аль-Шукри, В. Н. Ткачук. - СПб.: Питер, 2000. - 309 с.
2. Аль-Шукри, С. X. Сексуальная функция у мужчин с сопутствующими урологическими заболеваниями / С. X. Аль-Шукри, И. А. Корнеев // Урология. - 2005. - № 3. - С. 18-22.
3. Андрология: мужское здоровье и дисфункция репродуктивной системы / пер. с англ.; под ред. Э. Нейшлага и Г. М. Бере. -2-е изд. - М.: Мед. информ. аг-во, 2005. - 551 с.
4. Верткин, А. Л. Возрастной андрогенный дефицит в общесоматической практике: причины возникновения, клиника, диагностика, лечение / А. Л. Верткин, А. В. Наумов, Л. Ю. Моргунов [и др.] // Профилактика заболеваний и укрепление здоровья. -2008. -Т. 11. - № 5. - С. 20-29.
5. Дедов, И. И. Возрастной андрогенный дефицит у мужчин / И. И. Дедов, С. Ю. Калинченко. - М.: Практ. мед., 2006. - 239 с.
6. Зимин, О. Н. Влияние андрогенного дефицита на качество жизни мужчин: автореф. дис. ... канд. мед. наук / О. Н. Зимин. -Москов. гос. медико-стоматол. ун-т. - М., 2008. - 24 с.
7. Корнеев, И. А. Достоверность методов оценки уровня тестостерона и резистентность андрогеновых рецепторов при диагностике возрастного дефицита андрогенов у мужчин / И. А. Корнеев // Андрология и генитальная хирургия. - 2007. -№ 2. - С. 6-9.
8. Barry, M. J. The American Urological Association symptom index for benign prostatic hyperplasia / M. J. Barry, F. J. Fowler, M. P. O'Leary [et al] // J. Urol. - 1992. - Vol. 148. - P. 1549-1553.
9. Chang, I. H. A possible relationship between testosterone and lower urinary tract symptoms in men / I. H. Chang, S. Y. Oh, S. C. Kim // J. Urol. - 2009. - Vol. 182. - № 1. - P. 215-220.
10. Heinemann, L. A. J. A new aging males synptoms (AMS) rating Scale / L. A. J. Heinemann, T. Zimmermann, A. Vermeulen // Aging Male. - 1999. - Vol. 2. - № 2. - P. 105-114.
11. Morley, J. E. Comparison of screening questionnaires for the diagnosis of hypogonadism / J. E. Morley [et al] // Maturitas. - 2006. -Vol. 54. - № 3. - P. 305-306.
12. Ponholzer, A. Prevalence and risk factors for erectile dysfunction in 2869 men using a validated questionnaire / A. Ponholzer,
C. Temml, K. Mock [et al] // Eur. Urol. - 2005. - Vol. 47. - № 1. -P. 80-85.
13. Rosen, R. C. The international index of erectile dysfunction (IIEF): a multidimensional scale for assessment of erectile dysfunction / R. C. Rosen, A. Riley, G. Wagner [et al] // Urol. - 1997. - Vol. 49. -P. 822-830.
14. Travison, T. G. The natural history of symptomatic androgen deficiency in men: onset, progression, and spontaneous remission / T. G. Travison, R. Shackelton, A. B. Araujo [et al] // J. Am. Geriatr. Soc. - 2008. - Vol. 56. - №5. - P. 831-839.
15. Vermeulen, A. Hormonal cut-offs of partial androgen deficiency: a survey of androgen assays / A. Vermeulen // J. Endocrinol. Invest. -2005. - Vol. 28. — № 3. - P. 28-31.
РЕЗЮМЕ
С. Х. Аль-Шукри, И. А. Корнеев, С. Ю. Глазнева
Новые перспективы диагностики возрастного дефицита андрогенов у мужчин с расстройствами мочеиспускания
При обследовании мужчин старшего возраста с расстройствами мочеиспускания необходимо учитывать наличие у них возрастного дефицита андрогенов и, при его клинико-лабораторном подтверждении, рассмотреть вопрос о возможности применения гормонзаместительной терапии.
Ключевые слова: возрастной андрогенодефицит, расстройства мочеиспускания, тестостерон.
SUMMARY
S. H. Al-Shukry, I. A. Korneyev, S. Yu. Glasneva
New prospects in diagnosis of age-related androgen deficiency in men with urination defects
On examination of elderly patients with disorders in urination it is necessary to check whether they have an age-related androgen deficiency and in case of clinical and laboratory confirmation of the fact one may tackle the problem of administering the hormone replacement therapy.
Key words: age-related androgen, urination disorders, testosterone.
© Т. Э. Иващенко, В. М. Болотских, 2012 г. УДК 618.3-06:618.346-007.251]:575
Т. Э. Иващенко, В. М. Болотских
ОСОБЕННОСТИ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ ОБТв У БЕРЕМЕННЫХ С ПРЕЖДЕВРЕМЕННЫМ ИЗЛИТИЕМ ОКОЛОПЛОДНЫХ ВОД ПРИ ДОНОШЕННОМ СРОКЕ
НИИ акушерства и гинекологии имени Д. О. Отта СЗО РАМН, Санкт-Петербург
Проблема преждевременного излития околоплодных вод (ПИОВ) в настоящее время остается актуальной, так как данная акушерская патология способствует увеличе-
нию перинатальной заболеваемости и смертности [12]. Несмотря на огромный интерес к данной проблеме, нерешенных вопросов этиологии и патогенеза остается достаточно много. В частности, актуальной проблемой является прогнозирование и профилактика ПИОВ [1, 10].
Одна из вероятных причин разрыва плодных оболочек - изменения в антиоксидантной системе, в частности -активация перекисного окисления липидов (ПОЛ) [13]. Усиление процессов ПОЛ, как доказали А. I. БЪагта е! а1., может активироваться микроорганизмами при участии фагоцитов и макрофагов. Активация этой системы приводит к запуску процессов выработки цитокинов, а это, в свою очередь, может повреждать плодные оболочки [14].
Кроме того, Б. УаёШо-Ог1е§о е! а1. (1995) считают, что витамин С и микроэлементы играют роль в биосинтезе коллагена, поэтому дефицит этих веществ может способствовать или предрасполагать к ПИОВ [15].
Для защиты от активных форм кислорода, азота и других радикалов особенно важен кофермент глутатион -
УЧЕНЫЕ ЗАПИСКИ СПбГМУ ИМ. АКАД. И. П. ПАВЛОВА • ТОМ XIX • NQ1 • 2Q12
N ww *
WW w w^U'-^yJUUUu
Рис. 1. Электрофореграмма ПЦР-продуктов генов вБТМ1 и ОБТП
низкомолекулярный трипептид, водорастворимый антиок-сидант, находящийся в высокой концентрации почти во всех клетках, а также вне клеток [6]. В частности, он содержится в избытке в жидкости, выстилающей эпителий легких, которая является первой линией защиты от ингалированных оксидантов [12]. Глутатионовая антиоксидантная система эффективно защищает клетки от оксидативного стресса.
Синтез глутатион-Б-трансфераз контролируется генами, расположенными на различных хромосомах, для каждого из них описан ряд полиморфизмов, которые влияют на функциональную активность ферментов. Полиморфизм ферментов семейства глутатион-Б-трансфераз определяет индивидуальную чувствительность организма к воздействию факторов внешней среды [7].
К настоящему времени у человека описано несколько классов цитозольных глутатион-Б-трансфераз: альфа (ОБТЛ), мю (ОБТМ), пи (ОБТР), тэта (ОБТТ), каппа (ОБТК), сигма (ОБТБ), омега (ОБТО) и зета (ОБТ2). Деление на классы основано на степени гомологии аминокислотных последовательностей этих ферментов и их иммунореак-тивности. Некоторые из генов, кодирующих этих белки, характеризуются значительным популяционным полиморфизмом.
Целью настоящей работы явилось изучение особенности полиморфизма генов ОБТТ1 и ОБТМ1 у беремен-
Таблица 1
Распределение частот генотипов гена С8ТМ1 в основной группе и в контроле
Генотип Контроль Основная группа
n % n %
GSTM1O/O З5 48,5 51 6O,7
GSTM1 + 37 51,4 ЗЗ З9,З
Всего 72 1OO 84 100
нък c пpeждeвpeмeнным излитиeм omronno№bix вoд ^и дoнoшeннoм cpoкe.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Для oпpeдeлeния ocoбeннocти пoлимopфизмa гeнoв GSTT1 и GSTM1 y бepeмeнныx c пpeждeвpeмeнным из-литиeм oкoлoплoднъIx вoд пpи дoнoшeннoм cpoкe были иccлeдoвaны двe ^уппы жeнщин. Ocнoвнyю rpymy co-cтaвили бepeмeнныe c ПИOB пpи дoнoшeннoм cpoкe. В кoнгpoльнyю гpyппy вoшли пaциeнгки co cвoeвpeмeн-ным излитиeм oкoлoплoдныx вoд прт дoнoшeннoм cpo-кe. В иccлeдyeмыe гpyппы нe включaлиcь бepeмeнныe c тяжeлыми xpoничecкими coмaтичecкими зaбoлeвaния-ми (бpoнxиaльнaя acтмa, caxapmrn диaбeт, ^л^ктозы и т. д.), выpaжeннoй aкyшepcкoй пaтoлoгиeй (тяжeлыe фopмы гecтoзa, дeкoмпeнcиpoвaннaя плaцeнтapнaя те-дocтaтoчнocть и т. д.).
Paбoтa выпoлнeнa нa oбpaзцax ДНК, выдeлeннъIx из лeйкoцитoв пepифepичecкoй кpoви. Meтoдoм пoлимepaз-нoй вдпгой peaкции иccлeдoвaнa чacтoтa нyлeвoгo гето-типa пo гeнaм GSTT1 и GSTM1.
Cмecь для aмплификaции, oбъeмoм 25 мкл, включa-лa 15 нM кaждoгo пpaймepa, б? мЫ тpиc-HCl, pH 8,8, 1б,б мИ cyльфaтa aммoния, 6,V мИ MgCl2, 6,V мкM ЭДТА, 1O hM мepкaптoэтaнoлa, 1VO мкг BSA, 1,O мM кaждoгo dNTP и 1U Taq-ДHK-пoлимepaзы (пpoизвoдcтвo «Бдою^ Mocквa).
Для aмплификaции фpaгмeнтoв гeнoв GSTM1 (GSTM1 F GAA CTC CCT GAA AAG CTA AAG C; GSTM1 R GTT GGG CTC AAATAT ACG GTG G) и GSTT1 (GST T1 F TTC CTT ACTGGT CCTCAC ATC TC; GSTT1 R TCACCGGAT CAT GGC CAG CA) иcпoльзoвaли cлeдyющиe ycлoвия ПЦР: пocлe дeнaтypaции (94 oC, V мин) пpoвoдили 32 цик-лa aмплификaции в peжимe 94 oC - 1 мин; 53 oC - 1 мин; V2 oC - 1 мин 2O c. ^rae aмплификaции aнaлизиpoвaли пpoдyкты peaкции в V,O %-м пoлиaкpилaмиднoм гeлe c пocлeдyющeй oкpacкoй этидиyмбpoмидoм и визyaли-зaциeй в пpoxoдящeм УФ-cвeтe.
ГoмoзигoгъI «+/+» и гeтepoзигoты «+/-» пo нopмaль-тому aллeлю oпpeдeляли пo нaличию га элeктpoфopeг-paMMax пpoдyктa aмплификaции pasMepoM 315 п.o. для GSTT1 и фpaгмeнтa 2V1 п.o. для GSTM1. Oтcyтcтвиe coo^ вeтcтвyющeгo фpaгмeнтoв yкaзывaлo нa гoмoзигoтнocть индивидyyмa пo дeлeции cooтвeтcтвyющeгo гeнa (-/-). В кaчecтвe внyтpeннeгo кoнтpoля иcпoльзoвaли aMm^ фигацию фpaгмeнтa гeнa CYPA1 (192 no.). Гeтepoзигoт-ныe ocoби O/+ ш диcкpиминиpoвaлиcь (pиc. 1).
Cтaтиcтичecкyю oбpaбoткy peзyльтaтoв пpoвoдили c иcпoльзoвaниeм кoмпьютepнoй пpoгpaммы «STATISTICA v6.0». Пpи cpaвнeнии чacтoт гeнoтипoв ж-пoльзoвaли w^^pra^ кpитepий %2.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Ген GSTM1. 4acrorn гeнoтипoв GSTM1 O/O и GSTM1+ cocтaвили 48,5 и 51,4 % в кoнтpoльнoй гpyппe, 6o, V и 39,3 % y muHemo® c ПИOB (табл. 1).
ОРИГИНАЛЬНЫЕ РАБОТЫ
Сравнительный анализ частоты делеции гена GSTM1 между выборками пациентов с ПИОВ и контролем не выявил статистически значимых различий (p>0,05). Однако хотелось бы отметить некоторое повышение частоты «функционально ослабленного» генотипа GSTM1 0/0 в основной группе.
Ген GSTT1. Сравнительный анализ частоты делеции гена GSTT1 между выборками пациентов с ПИОВ и контролем выявил статистически значимые различия (p=0,038, c2=4,6). Частоты генотипов GSTT10/0 и GSTT1+ составили 16,7 и 83,3 % в контрольной группе и 31,0 и 69,0 % в группе пациентов с ПИОВ (табл. 2). Согласно рассчитанному коэффициенту соотношения шансов, носитель-ство генотипа GSTT10/0 увеличивает риск развития ПИОВ более чем в 2 раза (OR =2,2; CI:95 % 1,0-4,9).
Пациенты и контрольная группа по генотипу GST T1 и GST M1 были разделены на 4 группы: 1 - генотипы GST T1 0/0; GST M1 0/0; 2 - генотипы GST T1 0/0, GST M1+; 3 - генотипы GST T1 + , GST M1 0/0; 4 - генотипы GST T1+, GST M1+.
Как следует из полученных данных, у пациентов с ПИОВ гомозиготность по нулевым аллелям GST T1 и GST M1 встречается несколько чаще, чем в контрольной группе (17,9 и 9,7 % соответственно), тогда как частота генотипа GST T1+GST M1+достоверно снижена (р=0,041) (рис. 2).
Согласно современным представлениям, система де-токсикации играет важную роль в нормальной жизнедеятельности человека, а совместное функционирование ферментов системы детоксикации обеспечивает обезвреживание всех ксенобиотиков, включая канцерогены, мутагены, тератогены, пестициды, промышленные и сель-ско-хозяйственные яды, пищевые добавки, красители и т. д.
Во многих исследовательских работах показано, что при снижении или отсутствии ферментов фазы 2 системы детоксикации, к которым относятся глутатион^-транс-феразы, нарушается баланс между ферментами первой и второй фаз системы детоксикации, следствием чего может быть накопление активных метаболитов, что способствует развитию оксидативного стресса - одного из ключевых компонентов повреждения ткани.
Оксидативный стресс определяется как дисбаланс между прооксидантными и антиокисдантными силами в сторону превалирования прооксидантов, приводящий к гибели клеток [9]. Учитывая данный факт, можно предположить, что патологические изменения в плодных оболочках при ПИОВ возникают вследствие истощения антиоксидантной системы на фоне тканевой ишемии.
В настоящем исследовании нами проанализирована частота нулевых генотипов по генам GST T1 и GST M1 у пациенток с ПИОВ и в контрольной группе. Выявлено достоверное повышение частоты «функционально ослабленного» генотипа GSTT1 0/0 в группе пациентов и снижение частоты функ-
Таблица 2
Распределение частот генотипов гена 08ТТ1 в основной группе и в контроле
Генотип
GSTT10/0 GSTT1+ Всего
Контроль
n %
12 16,7
60 83,3
72 100
Основная группа
26 58 84
31,0 69,0 100
ционально активного сочетанного генотипа GST T1+/+ GST M1 +/+. Согласно рассчитанному коэффициенту соотношения шансов, носительство генотипа GSTT10/0 увеличивает риск развития ПИОВ более чем в 2 раза.
Как известно, ПИОВ происходит на фоне снижения ПОЛ в системе «мать - плацента - плод», гиперлипиде-мии и активации антиоксидантной системы и может сопровождаться выраженным дисбалансом основных микро- и макроэлементов, связанных с показателями системы перекисного окисления липидов в фетоплацентарном комплексе [5].
По мнению многих исследователей, ПИОВ происходит из-за вторичного местного повреждения коллагена в плодных оболочках, а оксидативный стресс и антиокислительное истощение могут быть причиной разрушения коллагена. Применение витаминов С и Е одновременно может быть защитным фактором и уменьшит риск ПИОВ [16]. Эту позицию поддерживают E. Casanueva et al. (2005). В своих исследованиях они показали, что назначение витамина С в количестве 100 мг в сутки с двадцати недель беременности достоверно снижает риск развития ПИОВ. В группе, которая получала витамин С, частота ПИОВ составила 7,69 %, тогда как в группе, которая получала плацебо, - 24,5 % [8]. Эти данные согласуются с результатами наших более ранних исследований при изучении эффективности витаминно-минерального комплекса «Сана-Сол для беременных и кормящих женщин». Установлено, что антиоксид ант-ные компоненты, входящие в его состав, оказывают положительное влияние на процессы свободнорадикаль-ного окисления, вследствие чего применение данного препарата позволяет снизить частоту осложнений при беременности, в родах и послеродовом периоде, в том числе и частоту ПИОВ [4].
Jj.ini ?
13.1
В
| Осчоичв' г^ппа I №эктраль*м ipvnnj
GSTTL а/а, GET-KT7L П/П, GST ЙЬТТ] Iл. GST GLT T] М10Ю M1+ Ml WO +f*. ВСТМШ+
Рис. 2 Частоты генотипов по генам 08ТТ1 и 08ТМ1 в основной и в контрольной группах
УЧЕНЫЕ ЗАПИСКИ СПбГМУ ИМ. АКАД. И. П. ПАВЛОВА • ТОМ XIX • N01 • 2012
Несмотря на достаточно большое внимание к проблеме ПИОВ со стороны многих исследователей, генетический аспект данной патологии изучен недостаточно, а опубликованные данные очень противоречивы. Дальнейшее изучение генетической предрасположенности к ПИОВ позволит прогнозировать данное осложнение и оптимизировать методы ведения беременности, профилактики и выбора способов подготовки беременных к родам.
ЛИТЕРАТУРА
1. Авзалова, Д. Г. Оптимизация тактики ведения родов и послеродового периода при преждевременном разрыве плодных оболочек до начала срочных родов: дис____канд. мед. наук / Д. Г. Авзалова. - Душанбе, 2004. - 120 с.
2. Айламазян, Э. К. Акушерство / Э. К. Айламазян. - СПб.: Спецлит. 2005. - 528 с.
3. Артамонов, В. В. Неблагоприятная экология и молекулярные системы проспективной диагностики высокого риска развития онкозаболеваний (на примере рака молочной железы) /
B. В. Артамонов [и др.] // Вестник. НИИ мол. мед. Молекулярная медицина и биобезопасность. - М.: Русский врач, 2004. - Вып. 4. -
C. 37-54.
4. Болотских, В. М. Клиническая оценка влияния витаминно-минерального комплекса «Сана-Сол для беременных и кормящих» на течение беременности, родов и послеродового периода / В. М. Болотских [и др.] // Рос. вестник акушера-гинеколога. -2008. - Т. 8. - № 5. - С. 66-70.
5. Жилко, А. Л. Преждевременный разрыв плодных оболочек у беременных: клинико- эксперимент. исслед.: дис. ... канд. мед. наук / А. Л. Жилко; Киевский НИИ педиатрии, акушерства и гинекологии им. П. М. Буйко. - 1992. - 144 с.
6. Кольман, Я. Наглядная биохимия / Я. Кольман, К.-Г. Рем; пер. с нем. - М.: Мир, 2000. - 469 с., ил.
7. Board, P. G. Human muscle glutathione S-transferase (GST-4) shows close homology to human liver GST-1 / P. G. Board [et al] // Biochim Biophys Acta. - 1988. - № 953 (3). - Р. 214-217.
8. Casanueva, E. Vitamin C supplementation to prevent premature rupture of the chorioamniotic membranes: a randomized trial / E. Casanueva [et al] // Am. J. Clin. Nutr. - 2005. - № 81 (4). -Р. 859-863.
9. Holley, A. E. Measuring free radical reactions in vivo / A. E. Holley, K. H. Cheeseman // Br. Med. Bull. - 1993. - Vol. 49. -P. 494-505.
10. Mathews, F. Antioxidants and preterm prelabour rupture of the membranes / F. Mathews, A. Neil // BJOG. - 2005. - № 112 (5). -Р. 588-594.
11. McGregor, J. A. Bacterial protease-induced reduction of chorio-amniotic membrane strength and elasticity / J. A. McGregor [et al] // Obstet. Gynecol. - 1987. - № 69. - Р. 167.
12. Rahman, I. Lung glutation and oxidative stress: implications in cigarette smoke-induced airway disease / I. Rahman, W. MacNee // Am. J. Physiol. - 1999. - Vol. 277. - P. L1067-L1088.
13. Romero, R. Amniotic fluid elastase and secretory leukocyte protease natural inhibitor during labor, rupture of membranes and intrauterine infection / R. Romero [et al] // Forty-First Annual Meeting of the Society for Gynecologic Investigation, March 22-26, 1994 // Scientific. Abstr. - 1994. - № 183. - Р. 193.
14. Sbarra, A. J. Infection and phagocytosis as possible mechanisms of rupture in premature rupture of the membranes / A. J. Sbarra [et al] // Am. J. Obstet. Gynecol. - 1985. - № 153. - Р. 38.
15. Vadillo-Ortega, F. Dietetic factors and premature rupture of fetal membranes. Effect of vitamin С on collagen degradation in the chorioamnion / F. Vadillo-Ortega [et al] // Ginecol. Obstet. Мех. -1995. - № 63. - Р. 158.
16. Wall, P. D. Preterm premature rupture of the membranes and antioxidants: the free radical connection / P. D. Wall, E. K. Pressman, J. R. Woods // J. Perinat. Med. - 2002. - № 30 (6). - Р. 447-457.
РЕЗЮМЕ
Т. Э. Иващенко, В. М. Болотских
Особенности полиморфизма генов GSTs у беременных с преждевременным излитием околоплодных вод при доношенном сроке
Целью работы явилось изучение особенностей частот аллель-ного полиморфизма генов GSTT1 и GSTМ1 у беременных с преждевременным излитием околоплодных вод (ПИОВ) при доношенном сроке. Основную группу составили 84 беременные с ПИОВ при доношенном сроке. В контрольную группу вошли 72 пациентки со своевременным излитием околоплодных вод при доношенном сроке. В исследуемые группы не включались беременные с тяжелыми хроническими соматическими заболеваниями и выраженной акушерской патологией. Сравнительный анализ частоты делеции гена GSTM1 между пациентками с ПИОВ и контрольной группой не выявил статистически значимых различий. Частота делеции гена GSTT1 между пациентками основной и контрольной групп имеет статистически значимые различия. Носительство генотипа GSTT10/0 увеличивает риск развития ПИОВ более чем в 2 раза. У пациентов с ПИОВ частота генотипа GST T1+GST M1+ достоверно снижена.
Ключевые слова: преждевременное излитие околоплодных вод, доношенный срок беременности, гены GSTT1 и GSTМ1, полиморфизм генов.
SUMMARY
T. E. Ivashchenko, V. M. Bolotskikh
GSTs gene polymorphism features in women with premature rupture of the term fetus membrane
The aim of the study was to investigate the frequency of matrix GSTT1 and GSTМ1 gene allele polymorphisms in pregnant women with premature rupture of the term fetus membrane (PRTFM). The main group under study included 84 women with PRTFM. The control group consisted of 72 patients with timely rupture of the term fetus membrane. Pregnant women with severe chronic somatic diseases and severe obstetric pathology were excluded from the study. Comparative analysis of GSTM1 gene deletion frequency in the patients with PRTFM and those in the control group showed no difference. Frequency of GSTT gene deletion in the patients with PRTFM and those in the control group was statistically significant. The risk of PRTFM is twice as high in the carriers of GSTT10/0 genotype. The frequency of GST T1+GST M1+ genotype is significantly reduced in the women with PRTFM.
Key words: premature rupture of membranes, term pregnancy, GSTT1 gene, GSTМ1 gene, gene polymorphism.
