CC BY
16
КЛИНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ МИКРОБИОЛОГИИ
© Завгородняя Е.Ф., 2017 DOI: 10.24110/0031-403X-2017-96-6-81-87
https://doi.org/10.24110/0031-403X-2017-96-6-81-87
Е.Ф. Завгородняя
ОСОБЕННОСТИ ПЕЙЗАЖА УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫХ БАКТЕРИЙ В СОСТАВЕ КИШЕЧНОЙ МИКРОБИОТЫ ДЕТЕЙ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ВОЗРАСТА И СРЕДОВЫХ ФАКТОРОВ
ФБУН «Хабаровский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, г. Хабаровск, РФ
Большое место в патологии детей на Дальнем Востоке России занимают состояния, связанные с нарушением кишечной микробиоты (КМБ). Однако отдельные стороны проблемы остаются не исследованы. Цель исследования: анализ результатов многолетнего изучения распространенности нарушений КМБ, ее сезонной динамики, а также чувствительности условно-патогенных бактерий (УПБ) к бактериофагам у детей г. Хабаровска. Материалы и методы исследования; в течение 2011—2015 гг. проводили исследования УПБ в составе кишечной микрофлоры детей. Исследовали 2269 проб фекалий детей в возрасте от 1 мес до 6 лет. Идентифицированы 3650 штаммов УПБ, у 832 из них изучена фагорезистент-ность. Исследования проводили по стандартной методике, идентификацию — классическим микробиологическим методом и с помощью баканализатора Vitek-2 фирмы «Biomeriex». Результаты: наиболее часто УПБ в количестве, превышающем 106 колониеобразующих единиц (КОЕ)/г фекалий, встречались у детей первого полугодия жизни (98,9%), находящихся на искусственном и/или раннем смешанном вскармливании, и у детей второго полугодия при переходе на возрастное питание. Увеличение УПБ до значительных количеств выявлено у 88,8% детей. Прослеживается существенный рост УПБ в многокомпонентных ассоциациях. Среди УПБ у детей всех возрастов лидировали S. aureus, далее в убывающем порядке следовали K. pneumoniae, грибы рода Candida и K. oxytoca. Такая тенденция сохранялась ежегодно в течение всех лет и сезонов наблюдения. Значительное увеличение грибов рода Candida с преобладанием видов albicans и glabrata характерно для детей первых 2 лет жизни. У детей этого возраста установлен рост гемолитических эшерихий. Выявлен значительный уровень фагорезистентности (50,7%) штаммов УПБ. Заключение: установлена существенная распространенность УПБ в КМБ у детей г. Хабаровска с наиболее высокими показателями у детей первого года жизни. В большинстве случаев лидировали S. aureus. Показан рост многокомпонентных ассоциаций, а также более частое выделение из них фагорезистентных штаммов. Ключевые слова: дети. микробиота кишечника, условно-патогенные бактерии, фагорези-стентность.
Цит.: Е.Ф. Завгородняя. Особенности пейзажа условно-патогенных бактерий в составе кишечной микробиоты детей в зависимости от возраста и средовых факторов. Педиатрия. 2017; 96 (6): 81-87.
E.F. Zavgorodniaia
PECULIARITIES OF OPPORTUNISTIC PATHOGENS LANDSCAPE IN THE INTESTINAL MICROBIOTA OF CHILDREN, DEPENDING ON AGE AND ENVIRONMENTAL FACTORS
Khabarovsk Scientific Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Federal Service for Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Wellbeing, Khabarovsk, Russia
Контактная информация:
Завгородняя Елена Федоровна - к.м.н., ведущий научый сотрудник лаборатории бактериологии ФБУН Хабаровский НИИ эпидемиологии и микробиологии Роспотребнадзора Адрес: Россия, 680610, г. Хабаровск, ул. Шевченко, 2
Тел.: (4212) 32-88-93, E-mail: baklabhniiem@gmail Статья поступила 21.02.17, принята к печати 6.09.17.
Contact Information:
Zavgorodniaia Elena Fedorovna - Ph.D., leading researcher of Bacteriology Laboratory, Khabarovsk Scientific Research Institute of Epidemiology and Microbiology of Rospotrebnadzor Address: Russia, 680610, Khabarovsk, Shevchenko str., 2
Tel.: (4212) 32-88-93, E-mail: baklabhniiem@gmail
Received on Feb. 21, 2017,
submitted for publication on Sep. 6, 2017.
A large part in the pathology of children in the Russian Far East are conditions associated with intestinal microbiota disorders (IMD). However, some aspects of the problem remain unstudied. Objective of the research — to analyze results of a long-term study of IMD prevalence, its seasonal dynamics, and opportunistic pathogens (OP) sensitivity to bacteriophages in children in Khabarovsk. Study materials and methods: OP in the intestinal microflora of children research was performed during 2011-2015. 2269 feces samples of children aged from 1 month to 6 years were examinated. 3650 OP strains were identified, 832 of them were studied for phage resistance. The studies were performed according to a standard procedure, identification by a classical microbiological method and using a bacteriological analyzer Biomeriex Vitek 2. Results: most frequently OP in an amount exceeding 106 colony-forming units (CFU)/g of faeces, occurred in children aged under 6 months (98,9%), on artificial and/or early mixed feeding, and in children aged from 6 months to 1 after feeding change. The increase of OP to significant numbers was found in 88,8% of children. There is a significant increase of OP in multi-component associations. Among OP in children of all ages S. aureus was the leader followed by K. pneumoniae, Candida fungi and K. oxytoca. This trend persisted annually during all observation years and seasons. A significant increase in Candida fungi with a predominance of albicans and glabrata was observed in children of first 2 years of life. In children of this age, the growth of hemolytic Escherichia was found. A significant level of phage-resistance (50,7%) of OP strains was revealed. Conclusion: the study revealed significant prevalence of OP in IMD in children of Khabarovsk with the highest rates in children of the first year of life. In most cases, S. aureus was in the lead. The growth of multicomponent associations was found, as well as the more frequent isolation of phage-resistant strains from them.
Keywords: children, intestine microbiota, opportunistic bacteria, phage-resistance.
Quote: E.F. Zavgorodniaia. Peculiarities of opportunistic pathogens landscape in the intestinal
microbiota of children, depending on age and environmental factors. Pediatria. 2017; 96 (6): 81-87.
Накопленные за последние годы данные по исследованию молекулярных основ здоровья человека убедительно подтверждают, что одним из главных факторов, определяющих рост, развитие, здоровье, продолжительность жизни человека, являются взаимоотношения между хозяином и его микробиотой [1, 2]. Одним из важнейших факторов поддержания гомеоста-за организма является микрофлора желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) как наиболее многочисленная и являющаяся чувствительным индикатором, реагирующим на изменения в организме хозяина [3, 4].
Показано, что в таких сложных биологических системах, как организм человека, различные представители микробиоты участвуют в метаболических процессах в отдельных клетках, а также в органах и тканях всего организма хозяина. Установлено, что в микробиоме (совокупности всех генов микробиоты человека) число генов на несколько порядков больше, чем количество генов генома хозяина [1, 2, 4].
Известный отечественный микробиолог Б.А. Шендеров считает, что все вышеуказанное требует, с одной стороны, дальнейшего и более глубокого изучения роли микробиоты в функционировании организма хозяина, а с другой - более детального исследования ее структуры, что послужит только предшествующей фазой дальнейшего, на новом уровне исследования этой проблемы, в т.ч. выявления механизмов, которые регулируют как работающие, так и выключенные гены микроорганизмов и организма хозяина [1].
Проблема нарушений кишечной микроэкологии на современном этапе продолжает оставаться актуальной прежде всего ввиду значительной их распространенности, формирующихся под влиянием различных факторов, имеющих в настоящее время тенденцию к росту. На Дальнем Востоке эта проблема приобретает еще большее значение ввиду действия на этой территории дополнительных причин (неблагоприятные климатические условия, серьезные экологические нарушения, в т.ч. периодические загрязнения атмосферного воздуха, связанные с деятельностью промышленных предприятий, а также с часто повторяющимися лесными пожарами). Следует учитывать также наличие в пищевом рационе овощей и фруктов, завезенных из соседнего Китая, выращиваемых там с применением запрещенных к использованию в России препаратов.
Несмотря на значительное число работ, опубликованных в последние годы по проблеме нормальной микрофлоры кишечника и ее нарушениям, отдельные ее стороны остаются изученными недостаточно, а серьезных исследований по нашему региону, в т.ч. г. Хабаровску, довольно мало. В связи с этим исследования как состава кишечной микробиоты (КМБ), так и ее изменений под действием различных неблагоприятных факторов, а также выявление среди условно-патогенных бактерий (УПБ), изолированных у лиц с дисбиотическим состоянием, фагорези-стентных штаммов и их распространенности, не теряют актуальности. Эта проблема особенно остро стоит в детской практике, так как именно
среди детей наблюдается значительная распространенность как числа дисбиотических нарушений, так и степени их выраженности [5, 6].
Цель исследования: анализ результатов многолетнего изучения частоты распространенности дисбиотических нарушений КМБ, ее сезонной динамики и фагорезистентности УПБ у детей, проживающих в г. Хабаровске.
Задачей работы явилось исследование микробного пейзажа кишечника детей, направляемых в ФБУН Хабаровский НИИЭМ Роспотреб-надзора с подозрением на дисбактериоз кишечника, а также изучение фагорезистентности изолированных от детей УПБ.
Материалы и методы исследования
В течение 2011-2015 гг. проводили сезонные исследования КМБ детей, проживающих в г. Хабаровске, - крупном промышленном центре Дальнего Востока. Всего исследованы пробы фекалий 2269 детей, в т.ч. 526 детей первого полугодия жизни, получающих грудное вскармливание, 430 детей этого же возраста, находящихся на искусственном и/или раннем смешанном вскармливании, 335 детей второго полугодия жизни, 398 детей от 1 года до 2 лет и 580 детей от 2 до 6 лет. Изучены и идентифицированы 3650 штаммов УПБ и грибов Candida spp., в т.ч. 2845, изолированных от детей до 2 лет, и 805 - от детей от 2 до 6 лет. Исследования КМБ и оценку результатов проводили по стандартной методике [7], идентификацию микроорганизмов - классическим микробиологическим методом, отдельных штаммов - с помощью баканализатора Vitek-2 Compact 30 фирмы «Biomeriex» (Франция), а также хромогенных сред «Hi Media» (Индия). Изучена литическая активность отечественных бактериофагов по отношению к 832 штаммам УПБ, изолированным от детей, в т.ч. 266 штаммов S. aureus, 191 - Klebsiella pneumoniae, 116 - Klebsiella oxytoca, 24 - Proteus vulgaris, 26 -Proteus mirabilis, 91 - E. coli гемолитических (E. coli (гем+), 118 - E. coli лактозонегативных (E. coli (лак-). Литическую активность специфических бактериофагов в отношении изолированных УПБ изучали методом «стерильных пятен» [8] с использованием монофагов «Стафилококковый» и «Клебсиелл пневмонии» производства «Микроген», г. Пермь, а также поливалентного «Коли-протейного бактериофага» производства «Микроген», г. Нижний Новгород. Статистический анализ проводили по стандартным методикам с использованием t-критерия Стьюдента.
Результаты и их обсуждение
Показанием к исследованию кишечной микрофлоры служили жалобы, предъявляемые родителями во время врачебного осмотра детей. При выяснении характера предъявляемых жалоб установлено, что в большинстве случаев (у 70,2% детей) преобладали жалобы, касающиеся ЖКТ (наличие болей в животе, усиливающихся после приема пищи, фекалий зеленого цвета, иногда со слизью, поносов или запоров, выраженного метеоризма, а также частого сры-
гивания); на втором месте (23,7%) были жалобы на аллергические проявления (кожные высыпания, часто с сильным зудом), на третьем месте (6,1%) - жалобы на зуд и рези в области ануса, а также неприятные ощущения в области наружных половых органов. У младших детей нередко были жалобы на отсутствие прибавки массы тела, а также жалобы смешанного характера. Следует отметить,что у многих детей с выраженными нарушениями КМБ жалобы были минимальными, что подтверждает известный факт выделения УПБ от здоровых детей.
Наиболее частыми направительными диагнозами детей были: «Функциональное нарушение кишечника», «Гипотрофия», «Бактериальный вагиноз?», «Аллергический дерматит». Нередко поступал материал от часто болеющих детей, а также от детей, плохо набирающих или теряющих вес, с беспокойством, особенно после кормления или просто с подозрением на нарушение КМБ (без определенного диагноза).
Следует отметить, что абсолютное подтверждение диагноза наблюдалось при функциональном нарушении кишечника, бактериальном вагинозе и аллергическом дерматите, когда при клинической картине основного заболевания из фекалий были изолированы УПБ в количестве, превышающем возрастную норму. При гипотрофии высокий уровень УПБ наблюдался у 54% детей. При нарушении КМБ высокий уровень УПБ зарегистрирован у 2/3 обследованных.
Результаты проведенного исследования позволили установить, что по суммарным данным наличие УПБ выше 106 КОЕ/г фекалий было выявлено во всех группах обследованных. Самые высокими показатели выявлены у детей первого полугодия жизни, находящихся на искусственном и/или раннем смешанном вскармливании (99,1±0,6%). Уменьшение в питании детей материнского молока, а тем более его полное отсутствие лишают ребенка необходимых для роста и развития питательных веществ, секреторного ^А, лизоцима и других компонентов, влияющих в т.ч. и на становление нормальной микрофлоры кишечника, предотвращающей рост в большом количестве УПБ.
Дети на грудном вскармливании также имели достаточно высокий показатель распространенности УПБ (98,6±0,5%), что может быть объяснено наличием среди них значительного числа младенцев, рожденных путем кесарева сечения. Так, 49,3% детей первого полугодия, находящихся на грудном вскармливании, были рождены путем кесарева сечения, когда ребенок не проходил по естественным родовым путям матери и не получил ее микрофлоры. Установлено, что у 97,7±0,9% детей, находящихся на грудном вскармливании и рожденных в нормальных родах, в КМБ присутствовали УПБ в количестве, превышающем 106 КОЕ/г фекалий. У детей, находящихся на грудном вскармливании, но рожденных путем кесарева сечения, аналогич-
ный показатель составил 99,6±0,4% (р>0,05). Однако у этих детей удалось установить факт изоляции УПБ в более высоком титре (108 КОЕ/г фекалий и выше), что не регистрировалось у детей, рожденных в нормальных родах, или встречалось редко.
Значительная распространенность УПБ (99,4±0,39%) установлена у детей второго полугодия, что может быть объяснено переводом этой группы детей на возрастное питание, что обычно сопровождается перестройкой микрофлоры кишечника. У детей от 1 года до 2 лет показатель частоты распространенности УПБ составил 93,9±0,2%, а наименьший показатель (78,1 ±1,7%) зарегистрирован у детей старшей возрастной группы, что подтверждается наличием выраженной обратной связи между возрастом обследуемых и показателями частоты распространенности дисбиотических нарушений кишечника (p<0,001).
Выраженных сезонных колебаний (с подъемами и спадами) частоты распространенности УПБ, превышающих возрастную норму, в КМБ детей в возрасте от 1 месяца до 1 года, получающих различные виды вскармливания, а также детей от 1 года до 2 лет в течение срока наблюдения не регистрировалось, тогда как в группе старших детей прослеживается четкая сезонная динамика с наиболее высокими показателями весной (81,8%) и осенью (84,2%) и более низкими - летом (72,7%) и зимой (73,7%) (р<0,05 - весна-зима и р<0,001 - лето-осень). Аналогичная динамика наблюдалась в указанных группах в течение каждого года исследования с некоторым сдвигом более значительной частоты распространенности с осеннего периода на летний в 2012 г. Следует отметить, что в большинстве случаев изменения КМБ были обусловлены наличием УПБ и/или грибов рода Candida в количествах, превышающих возрастную норму (92% у детей от 1 месяца до 2 лет и 86,5% у детей от 2 до 6 лет).
В составе кишечных биоценозов обследованных детей (по всем группам и суммарно) лидиро-
8 4,7% g - з;7%
1 - 27,8%
5 - 8,4%
4 - 13
2 - 20,4%
3 - 11,3%
Рис. 1. Структура УПБ в КМБ детей (суммарные данные 2011-2015 гг.).
1 - S. aureus, 2 - K.pneumoniae, 3 - K. oxytoca, 4 - Candida spp., 5 - E. coli (гем+), 6 - E. coli (лак-), 7 - Enterobacter spp., 8 - Proteus vulgaris и mirabilis, 9 - Citrobacter spp.
вали S. aureus (рис. 1), затем в убывающем порядке следовали K. pneumoniae, грибы рода Candida и K. oxytoca. Следует отметить, что подобное распределение по частоте встречаемости преобладающих групп микроорганизмов регистрировалось ежегодно в течение всех лет и сезонов наблюдения, кроме осеннего периода 2013 г., когда на 3-е место переместились K. oxytoca, а грибы рода Candida - на 4-е, выделяясь соответственно у 19,2 и 17,1% детей. Следует отметить, что преобладание в КМБ детей первого и второго года жизни S. aureus наблюдали и другие исследователи [9, 10]. Однако есть и иные данные. Так, Н.М. Бисенева и соавт. [4] при изучении изоляции УПБ из кишечника лиц с дисбактерио-зом в 2006-2009 гг. в Казахстане отметили наибольшее и стабильное выделение бактерий родов Enterobacter, Proteus и Citrobacter, что совсем не соответствует полученным нами результатам и, возможно, связано со значительной циркуляцией именно указанных микроорганизмов в обследуемой авторами популяции.
В связи с тем, что дети в возрасте от 1 месяца до 2 лет имеют близкие показатели частоты распространенности дисбиотических нарушений, было решено для анализа состава биоценозов объединить их в одну группу (1-я), а во 2-ю группу включить детей от 2 до 6 лет. Кроме того, мы посчитали целесообразным учитывать только группы микроорганизмов, преобладающих в биоценозах.
При анализе сезонной изоляции УПБ у детей различного возраста установлено, что в обеих группах лидировали S. aureus, которые выделялись у 24,3% детей 1-й группы зимой, у 30,6% - весной, у 29,7% - летом и у 26,5% - осенью; у детей 2-й группы эти показатели составляли 25,7% - зимой, 30,3% - весной, 22,6% - летом и 34,3% - осенью. У детей 1-й группы наиболее высокая изоляция S. aureus зарегистрирована в весенний период, тогда как во 2-й группе прослеживалась сезонная динамика, проявляющаяся в увеличении выделения S. aureus весной и осенью (у 30,3 и 34,3% детей) и снижении зимой и летом (у 25,7 и 22,6% соответственно) (р<0,001). Частота изоляции и динамика по сезонам года ведущих микроорганизмов в биоценозах детей представлены на рис. 2 и 3.
Для штаммов Klebsiella pneumoniae, занимающих 2-е место по удельному весу в составе микроорганизмов биоценоза, характерно увеличение изоляции (как в монокультуре, так и в ассоциациях) у 24,3% детей 1-й группы в осенний период (в остальные сезоны года эти микроорганизмы выделялись в меньшем количестве: у 19,1% - зимой, 18,2% - весной и 18,6% - летом). Во 2-й группе K. pneumoniae изолировались зимой и весной у 22,6 и 22,5% обследуемых, в летний период - только у 19,5%, осенью - у 20,8%.
Klebsiella oxytoca в 1-й группе детей изолировалась равномерно во все сезоны года в течение
12 3 4 Зима
12 3 4 Весна
12 3 4
Лето
12 3 4 Осень
Рис. 2. Сравнительная динамика наиболее часто встречаемых УПБ в КМБ детей в возрасте до 2 лет в различные сезоны года (суммарные данные 2011—2015 гг.).
Здесь и на рис. 3: 1 - K. pneumoniae, 2 - Candida spp., 3 -S. aureus, 4 - K. oxytoca.
35
30
25
rt 20
H
n
с « 15
tr
10
5
I
■■I 1
1234 1234 1234 1234 Зима Весна Лето Осень
Рис. 3. Сравнительная динамика наиболее часто встречаемых УПБ в КМБ детей 2—6 лет в различные сезоны года (суммарные данные 2011—2015 гг.).
наблюдаемого периода (у 10,5% - летом, у 11,7% - весной, у 12,6% - зимой и у 12,6% - осенью); у 13,2% детей 2-й группы эти микроорганизмы преобладали зимой, а весной, летом и осенью они изолировались у меньшего числа детей (8,3, 6,8 и 9,2% соответственно). Значительное выделение бактерий рода Klebsiella в составе КМБ было обнаружено у детей первого года жизни в работах других исследователей [9, 11]. Наши результаты свидетельствуют об их большой циркуляции и у более старших детей, а данные по изучению характера КМБ детей, находящихся на искусственном и раннем смешанном вскармливании, приближаются к результатам, изложенным в работе А.Ф. Алексаниной и соавт. [6].
В течение наблюдаемого периода отмечается значительный рост изоляции грибов рода Candida в биоценозах детей всех групп, особенно в возрасте от 1 мес до 2 лет. Анализ выделения грибов рода Candida по сезонам установил, что у детей до 2 лет наблюдалось увеличение их выделения зимой и весной так же, как и у детей более старшего возраста, однако у детей до 2 лет регистрировались более высокие показатели.
Преобладающими видами грибов рода Candida в обеих группах сравнения были C. albicans, обнаруживаемые в количествах, превышающих
возрастную норму (50,3 и 49% детей), а также C. glabrata с соответствующими показателями 29,8 и 32,7%, далее следовали С. krusei (у 14,9 и 11,2%) и C. tropicalis (у 5 и 7,1% детей).
Наиболее часто (в 79,3% случаев) грибы рода Candida выделялись от детей первых 2 лет жизни. Вероятнее всего, это обусловлено возможной колонизацией кишечника детей в период новорожденности путем антенатального, а также интранатального инфицирования [13]. Следует отметить, что у детей до 2 лет 85,9% штаммов грибов рода Candida изолированы из ассоциаций, тогда как от старших детей - только 47% (р<0,001). Высокий процент выделения грибов Candida spp., преимущественно в ассоциациях, обнаружен и другими авторами [14, 15].
Дальнейшие исследования позволили установить увеличение в течение последних лет доли детей с изменениями КМБ, обусловленными микробными и грибково-микробными ассоциациями. Так, если в 2011 г. ассоциации выявлены у 10,4% детей, то в 2014 г. - у 12,6%, а в 2015 г. - у 28,5%. В основном, ассоциации регистрировались у детей младшей возрастной группы. Начиная с 2013 г. наблюдается рост многокомпонентных (трех- и четырехкомпонентных) ассоциаций. Если в 2011 г. все выделенные от детей ассоциации микроорганизмов были только двухком-понентными, то среди изолированных в 2015 г. преобладающими были трех- и четырехкомпо-нентные (р<0,05). Наиболее часто, особенно у детей до 2 лет, встречались ассоциации S. aureus+ K.pneumoniae или S. aureus+K. oxytoca. Частым ассоциантом в биоценозах этой группы детей, помимо клебсиелл, были гемолитические E. coli, чего не наблюдалось ранее. Распространенность гемолитических E. coli возросла, начиная с 2011 г., в последующие 3 года наблюдались ее умеренное снижение и изоляция только от 5,1% обследуемых, а в 2015 г. количество детей, выделяющих эти бактерии, увеличилось до 21,9%. Чаще всего эти микроорганизмы изолировались в весенний сезон.
Показатель увеличения в биоценозах детей различных возрастных групп гемолитических E. coli, наблюдаемый нами с 2011 г. и составивший в 2015 г. 21,9%, близок к данным Е.В. Потап и соавт. [15]. Этими авторами в период 2011-2015 гг. при исследовании КМБ 220 детей, проживающих в Ленинградской области, в 26,8% случаев из проб фекалий изолировали гемолитические эшерихии. О выделении гемолитических эшерихий из фекалий детей сообщали и другие исследователи [14].
При изучении чувствительности изолированных штаммов УПБ к отечественным бактериофагам выявлен высокий уровень (50,7%) фагорезистентных. Наиболее высокий процент фагорезистентных бактерий изолирован у следующих штаммов: Proteus mirabilis, Klebsiella oxytoca, Proteus vulgaris и Klebsiella pneumoniae (92,3, 79,3, 74,3 и 70,8% соответственно).
В 2015 г. по сравнению с 2014 г. значительно увеличилось число фагорезистентных штаммов среди E. coli (гем+) и E. coli (лак-) - 47,4 и 40,7% соответственно и уменьшилось до 19,5% - среди S. aureus. Изоляция фагорезистентных штаммов УПБ чаще происходит из микробных или грибко-во-микробных ассоциаций. Это особенно характерно для штаммов S. aureus и E. coli (гем+), у которых из ассоциаций изолировалось соответственно в 4 и 2 раза больше фагорезистентных штаммов, чем из монокультур (р<0,001).
Наши данные по изучению частоты распространенности фагорезистентных штаммов среди представителей родов Klebsiella, а также S. aureus приближаются к показателям других исследователей, изучавших этот вопрос [17-21]. Результаты фагорезистентности представителей рода Proteus, особенно Proteus mirabilis, полученные в наших исследованиях, превышают, а по E. coli (гем+) значительно ниже показателей, приведенных этими же авторами. При объяснении этого различия прежде всего можно думать, как об особенностях местных штаммов УПБ, циркулирующих в различных регионах, так и об использовании нестандартных методик исследования.
Одной из возможных причин широкой циркуляции фагорезистентных штаммов Klebsiella pneumoniae, которые стали регистрироваться в нашем регионе с 2014 г., является смена доминирующего штамма. Другой причиной, возможно, служит малое представительство штаммов УПБ, изолированных от лиц нашего региона, в процессе изготовления бактериофагов. Мы считаем, что этот вопрос требует должной проработки и активной деятельности по включению дальневосточных штаммов в производство бактериофагов.
Учитывая факт наибольшего выделения штаммов-ассоциантов УПБ и грибов рода Candida от детей первых 2 лет жизни, можно предположить, что инфицирование этими микроорганизмами происходит в период пребывания детей в родильном доме, где эти штаммы могут циркулировать. Именно эти штаммы, попадающие затем в ЖКТ детей, оказываются наиболее резистентными к применяемым бактериофагам.
Заключение
Результаты проведенных исследований свидетельствуют о продолжающейся тенденции к росту частоты распространенности УПБ в количествах, превышающих возрастную норму, в КМБ у детей г. Хабаровска. Наиболее значи-
тельная распространенность УПБ характерна для детей первого полугодия жизни (98,9%), особенно находящихся на искусственном и/или раннем смешанном вскармливании, а также детей второго полугодия при переходе на возрастное питание. Для исследуемого периода характерно значительное увеличение изоляции S. aureus и представителей рода Klebsiella (pneumoniae и oxytoca), а также грибов рода Candida. Прослеживается также существенный рост выделения УПБ в ассоциациях между собой и/или с грибами рода Candida. Наиболее часто встречаемыми являются ассоциации S. aureus+K. pneumoniae или oxytoca, S. aureus+ K.pneumoniae+E. coli (гем+), а также ассоциации грибов рода Candida с одним или несколькими представителями УПБ. Отчетливо проявляется тенденция к увеличению трех- и четырехкомпо-нентных микробных или грибково-микробных ассоциаций. Отмечен выраженный рост числа фагорезистентных УПБ, а также статистически достоверно большая их изоляция из ассоциаций.
Полученные результаты могут быть использованы в лабораторной практике, где необходимо постоянно контролировать чувствительность УПБ к соответствующим бактериофагам для решения вопроса о целесообразности фаготерапии как одного из первых этапов коррекции микрофлоры кишечника или лечения выраженного патологического процесса кишечной или внекишечной локализации.
Учитывая высокую фагорезистентность штаммов УПБ, изолированных от детей г. Хабаровска, считаем важным обратить внимание фаговых производств на необходимость при производстве бактериофагов использовать штаммы дальневосточного региона.
В связи с наиболее неблагоприятным состоянием КМБ в весенний и осенний периоды считаем необходимым рекомендовать проведение сезонной профилактики пробиотическими молочными продуктами детям г. Хабаровска, особенно дошкольного возраста, в течение одного месяца весной и осенью. Это послужит важным фактором нормализации микрофлоры кишечника, укреплению иммунитета и, как следствие, снижению общей и инфекционной заболеваемости.
Конфликт интересов: автор заявляет об отсутствии конфликта интересов при выполнении этого исследования.
Автор выражает глубокую признательность бактериологу Людмиле Александровне Сташкевич за техническую и другую работу при выполнении этого исследования.
Литература
1. Шендеров БА. Роль питания и кишечной микрофлоры в програмировании и реализации эпигенома здоровых и больных людей. Вестник восстановительной медицины. 2013; специальный выпуск: 102-107.
2. Бондаренко В.М., Рыбальченко О.В. Анализ профилактического и лечебного действия пробиотических препаратов
с позиций новых научных технологий. Журнал микробиологии, эпидемиологии, иммунобиологии. 2015; 2: 90-104.
3. Бисенева Н.М., Абжалимов А.Б., Миту с Н.М., Тулеубаева ЭА, Ергалиева АС. Динамика выделения условно-патогенных энтеробактерий при дисбактериозе кишечника. Национальные приоритеты России. 2009; 2: 235-236.
4. Булатова Е.М. Богданова Н.М., Лобанова ЕА., Габ-русская Т.В. Кишечная микробиота: современные представления. Педиатрия. 2009; 87 (3): 104-110.
5. Самсыгина ГА. Особенности становления биоценоза кишечника и кишечный дисбактериоз. Лечащий врач. 2003; 5: 52-57.
6. Алексанина А.Ф., Твердохлебова Т.И. Динамика параметров микробиоценоза кишечника детей на протяжении первого года жизни в зависимости от характера вскармливания. Педиатрия. 2016; 95 (1): 156-158.
7. Отраслевой стандарт «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника» (ОСТ 91 500. 11. 0004. 2003). Приказ МЗ РФ № 231 от 9 июля 2003 г. «Об утверждении отраслевого стандарта «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника.» М., 2003: 173.
8. Бочков ИА., Лавренова Э.С., Юрко Л.П. Влияние лечебных бактериофагов на условно-патогенную и симби-отическую микрофлору толстой кишки. Эпидемиология и инфекционные болезни. 2009; 9: 48-51.
9. Леванова ЛА., Алешкин ВА, Воробьев АА, Афанасьев С.С., Зинин-Бернес Н.Н, Алешкин А.В. Микробиоценоз кишечника в критические периоды развития ребенка. Журнал микробиологии, эпидемиологии, иммунобиологии. 2001; 6: 69-73
10. Ракитянская Т.П., Антипова А.Ф., Варфоломеева В.Н., Тюнева Н.Н., Антонова В.С., Манчушина Т.И. Обнаружение факультативной микрофлоры при исследовании на кишечный дисбактериоз. Инфекция и иммунитет. 2016; 6 (3): 290.
11. Егорова С А Частота обнаружения бактерий рода Klebsiella в составе кишечной микрофлоры детей. Тезисы докладов 3-й международной конференции, посвященной
80-летию института им. Пастера «Идеи Пастера в борьбе с инфекциями». Санкт-Петербург, 2003: 107.
12. Алексанина Н.В. Изучение чувствительности к бактериофагам условно-патогенных энтеробактерий, выделенных от детей раннего возраста. Инфекция и иммунитет. 2014; Специальный выпуск: 62-63.
13. Буслаева Г.Н. Кандидоз новорожденных: пути инфицирования, клиника, диагностика, терапия. Фарматека. 2007; 14: 59-64.
14. Кафарская Л.И., Шуникова Л.М., Ефимов БА., Шкопоров А.М., Голубцова Ю.М., Сигова ЮА. Особенности формирования микрофлоры у детей раннего возраста и пути ее коррекции с помощью пробиотиков. Педиатрическая фармакология. 2011; 8: 94-98.
15. Потап Е.В., Кускова Г.М., Кутькина Ф.Ф., Сура-вицкая О.Е., Сивкова Н.М., Михайлова Г.В., Попова О.В. Частота выделения гемолизирующей кишечной палочки (E. coli Hly+) и ее влияние на бифидобактерии в анализах на дисбактериоз. Инфекция и иммунитет. 2016; 6 (3): 287-288.
16. Лавренова Э.С., Юрко Л.П., Славнов Н.Н., Бочков ИА. Влияние лечебных бактериофагов на микрофлору толстой кишки. Инфекционные болезни. 2012; 10 (2): 56-60.
17. Вакарина Ф.Ф., Катаева Л.В., Карпухина Н.Ф. Рациональные аспекты использования бактериофагов. Журнал микробиологи, эпидемиологии, иммунобиологии. 2015; 5: 76-79.
18. Оришак ЕА., Бойцов А.Г, Нилова Л.Ю. Антибиотико-резистентность и фагорезистентность условно-патогенной микрофлоры при дисбактериозе толстого кишечника. Эпидемиология, микробиология, инфекционные и паразитарные болезни. 2008; 4 (29): 167-170.
© Коллектив авторов, 2017
DOI: 10.24110/0031-403X-2017-96-6-87-92 https://doi.org/10.24110/0031-403X-2017-96-6-87-92
Ф.С. Флуер1, А.В. Кудрявцева2, К.А. Нескородова2, С.И. Титарев1
ПРОДУКЦИЯ ЭНТЕРОТОКСИНОВ А, В, С И ТОКСИНА СИНДРОМА ТОКСИЧЕСКОГО ШОКА РАЗЛИЧНЫМИ ВИДАМИ СТАФИЛОКОККОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ С КОЖИ ДЕТЕЙ БОЛЬНЫХ
АТОПИЧЕСКИМ ДЕРМАТИТОМ
1ФГБУ ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи, 2ФГБОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова, Москва, РФ
Проведено исследование энтеротоксигенной активности коагулазопозитивных и коагулазоне-гативных штаммов стафилококка для оценки роли Staphylococcus spp. в течении атопического дерматита (АтД) в детской популяции. Определение энтеротоксинов (SEA, SEB, SEC, TSST-1) проводили методами двойной диффузии в геле и иммуноферментного анализа. Исследование показало, что как коагулазопозитивные, так и коагулазонегативные штаммы стафилококков способны продуцировать все виды энтеротоксинов: SEA, SEB, SEC, TSST-1. Энтеротоксигенная активность S. aureus превышает возможности коагулазонегативных видов стафилококков: больший процент штаммов в большей концентрации способен вырабатывать энтеротоксины SEB (94,12%), TSST-1 (88,24%) и SEC (41,18%). В отличие от S. aureus, штаммы S. epidermidis чаще обладали способностью синтезировать SEA (94,74% против 88,24% у S. aureus). Продукция остальных токсинов S. epidermidis составила 89,47, 10,53 и 68,4% соответственно для SEB, SEC и TSST-1. Среди исследованных штаммов S. haemolyticus продуцентами SEA и SEB были 83,33%, TSST-1 - 50%, SEC - 33,33% штаммов. Некоторые коагулазонегативные
Контактная информация:
Флуер Федор Семенович - к.б.н., с.н.с. ФГБУ
ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи
Адрес: Россия, 123098, г. Москва, ул. Гамалеи, 18 Тел.: (903) 538-08-87, E-mail: fluerfs@yandex.ru Статья поступила 2.05.17, принята к печати 17.11.17.
Contact Information:
Fluer Fedor Semenovich - Ph.D., senior researcher
of Scientific Research Institute of Epidemiology and
Microbiology named after N.F. Gamalei
Address: Russia, 123098, Moscow, Gamalei str., 18
Tel.: (903) 538-08-87, E-mail: fluerfs@yandex.ru
Received on May 2, 2017,
submitted for publication on Nov. 17, 2017.
