CC BY
57
УДК 616.832.-002-056.3-0.92.9.259:591.88
Особенности патоморфологических изменений в спинном мозге крыс при лечении экспериментального аллергического энцефаломиелита нейронально- и глиальнообогащенными фракциями клеток головного мозга
Семенова В.М., Лисяный Н.И., Маркова О.В., Вельская Л.Н.
Институт нейрохирургии им. акад. А.П. Ромоданова АМН Украины, г. Киев, Украина
Изучены патоморфологические изменения в спинном мозге крыс с экспериментальным аллергическим энцефаломиелитом (ЭАЭ), леченных клеточными суспензиями головного мозга новорожденных крыс. ЭАЭ индуцировали гомогенатом мозга с полным адъювантом Фрейнда. Глиально- и нейрональнообогащенные суспензии клеток вводили внутрибрюшинно на 12, 14-е и 16-е сутки после индукции ЭАЭ. Животных забивали для исследования поясничного отдела спинного мозга в сроки от 21 до 70-х суток. Извлеченный спинной мозг фиксировали, готовили срезы (5-6 мм), которые окрашивали гематоксилином и эозином, гематоксилином и пикрофуксином и тионином по Нисслю. Изучение гистологических препаратов проводили на цитоанализаторе изображения «1ЪаБ-2000». Установлено, что введение крысам с ЭАЭ нейрональнообогащенной клеточной суспензии уменьшает степень проявления демиелинизации и распространенность воспалительной инфильтрации паренхимы и оболочек спинного мозга. Введение глиальнообогащенной клеточной суспензии не влияет на объем повреждения и распространенность демиелинизации.
Ключевые слова: экспериментальный аллергический энцефаломиелит,, патоморфология, феталъ-ные ткани, лечение.
Введение. Вопросы этиологии и патогенеза демиелинизирующих заболеваний нервной системы исследованы достаточно разносторонне [4, 7, 8, 9, 20, 23], тем не менее остается нерешенной и нуждается в дальнейших разработках проблема лечения этой патологии. Использование незрелых клеток нервной системы, обладающих иммуноподобными и нейро-трофическими свойствами в тестах in vitro и in vivo [3, 10, 11, 24], является одним из обнадеживающих методов повышения эффективности лечения демиелинизирующих заболеваний ЦНС и, в частности, рассеянного энцефаломиелита (РЭМ). Обоснованием такого подхода к лечению служит накопленный к настоящему времени большой клинический и экспериментальный материал, свидетельствующий о положительном эффекте воздействия эмбриональной нервной ткани в комплексном лечении детского церебрального паралича [22], черепно-мозговой травмы [21], паркинсонизма [19], шизофрении [17], ишемических состояний головного мозга [2, 12]. Показано также, что фракции головного мозга, обогащенные гли-альными или нейрональными клетками, обладают различным влиянием на показатели клеточного и гуморального ответа при моделиро-
вании очаговых поражений ЦНС [1, 7, 14]. Ранее в эксперименте установлено, что эмбриональная и незрелая нервная ткань снижает клинические и иммунологические проявления экспериментального аллергического энцефаломиелита (ЭАЭ) [13, 14, 18]. Поэтому представляет интерес перспектива использования фракций нервной ткани при аутоиммунных демие-линизирующих заболеваниях, лечение которых представляет большие трудности.
Целью настоящей работы явилось изучение патоморфологических изменений в ЦНС крыс с ЭАЭ в зависимости от тяжести, сроков заболевания и лечения клеточными фракциями незрелого головного мозга.
Материалы и методы исследования. Исследования провели на беспородных крысах массой 200 г разводки вивария Института нейрохирургии АМН Украины. ЭАЭ моделировали одноразовым введением в подушечки лап го-могената мозга крыс (50 мг на 100 г массы) с добавлением полного адъюванта Фрейнда [5]. Тяжесть заболевания оценивали в баллах, используя следующую шкалу: отсутствие клинических проявлений — 0+; сниженный тонус хвоста — 1+; слабость или легкий паралич задних конечностей — 2+; тяжелый паралич задних
или всех четырех конечностей — 3+; предсмертное (атональное) состояние — 4+; смерть — 5+ [13]. На 12, 14 и 16-е сутки после индукции ЭАЭ крысам внутрибрюшинно вводили суспензии клеток мозта новорожденных крыс, обота-щенные нейронами или тлией (5-8 млн. клеток мозта на одно животное). Получение оботащен-ных суспензий проводили методом преплейтинта [25]. Животным труппы сравнения вводили питательную среду. Наблюдение за состоянием животных осуществляли в течение 70 сут. Для патоморфолотическото исследования часть животных опытной труппы и труппы сравнения наркотизировали тиопенталом и забивали на 21, 35, 49, 70-е сутки после индукции ЭАЭ. Спинной мозт осторожно извлекали из полости позвоночното канала и выделяли поясничный отдел, поскольку именно в этом отделе наиболее часто развивается демиелинизирующий процесс при ЭАЭ. Ткань спинното мозта фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина и заливали в целлоидин-парафин. Далее из тканевых блоков спинното мозта крыс тотовили срезы толщиной 5-6 мм, которые окрашивали те-мотоксилином и эозином, тематоксилином и пикрофуксином (обзорные методики) и тиони-ном по Нисслю для селективното выявления тонкой структуры нейроцитов [15]. Для светоопти-ческото исследования материала использовали цитоанализатор изображения «1Ъав-2000», снабженный телемонитором с обеспечением фото-ретистрации.
Результаты и их обсуждение. После индукции ЭАЭ у крыс труппы сравнения (без лечения) первые невролотические симптомы заболевания наблюдали на 7-10-е сутки. Пик клинических проявлений энцефаломиелита у большинства животных развивался на 15-18-е сутки. Динамика и тяжесть развития соответствовала ранее описанным проявлениям ЭАЭ [5, 20]. В области введения адъюванта отмечали явления воспаления, которые сохранялись более 3 нед.
На пике клинических проявлений у 44% животных степень тяжести состояния соответствовала 3+; у 28,5% — 1+ — 2+. Бессимптомное течение болезни наблюдали у 27,5% крыс. К 30-м суткам общее состояние у большинства животных постепенно приближалось к нормальному и клинически ето оценивали как «выздоровление».
Гистолотическое исследование спинното моз-та крыс с ЭАЭ, проведенное в разные сроки (от 21 до 70 дней) наблюдения, позволило проследить динамику течения патоморфолотичес-кото процесса и сопоставить клиническую стадию ЭАЭ с морфолотическими данными.
Наши наблюдения показали, что у живот-
ных с ЭАЭ без лечения в период выраженных невролотических расстройств (21-е сутки) в ткани спинното мозта обнаруживались характерные морфолотические изменения. В белом веществе вокрут нервных волокон выявляли очати периаксональной демиелинизации, часто сливавшиеся между собой с образованием спонти-озных структур. В просвете таких очатов часто сохранялись поперечные срезы обнаженных, истонченных и деформированных осевых цилиндров или их теней (рис.1 цветной вкладки). На этом фоне в паренхиме спинното мозта обнаруживали также очати клеточной инфильтрации, представленные лимфоцитами, макрофатами, полинуклеарными лейкоцитами и плазматическими клетками с участием клеток типерплазированной тлии (рис.2 цветной вкладки). Клеточную инфильтрацию чаще наблюдали вокрут сосудов и в подоболочечных пространствах спинното мозта, а также в мятких мозтовых оболочках. Сосуды спинното мозта в этот срок расширены, резко полнокровны с признаками стаза форменных элементов крови. В сером веществе передних и задних ротов в нейроцитах инотда обнаруживали явления титролиза в цитоплазме, набухание ядер, укорочение отростков, появление отдельных клеток-теней (рис.3 цветной вкладки). Такие структурные изменения спинното мозта соответствуют подострой стадии ЭАЭ [6, 8, 16].
Важно подчеркнуть, что наиболее часто зоны демиелинизации располатались по периферии белото вещества спинното мозта в области заднето продольното, переднето пирамид-ното пучков и вестибулоспинальното пути, а также в тонком и клиновидном пучках (пучках Голля и Бурдаха). В отдельных случаях разрушения миелиновых оболочек определяли не только в окружности передней и задней продольной борозды, но и в боковых столбах спин-ното мозта.
Таким образом, есть основания предпола-тать, что невролотическая симптоматика в острый период ЭАЭ у крыс обусловлена деструкцией миелиновых волокон преимущественно двитательных проводящих путей спинното моз-та, сочетающейся с острой воспалительной реакцией в паренхиме и оболочках спинното мозта. По сравнению с этим у животных с отсутствием явной клинической картины ЭАЭ процесс дезинтетрации миелиновых волокон захватывал менее протяженные территории, а воспалительная реакция была выражена значительно слабее.
На 35-е сутки течения ЭАЭ степень деми-елинизации нервных волокон в спинном мозте сохранялась на прежнем уровне. При этом воспалительная реакция в ткани спинното мозта
сопровождалась диапедезом эритроцитов в результате нарушения проницаемости стенок сосудов (рис.4 цветной вкладки).
В более поздние сроки (49-59-е сут) при тистолотическом исследовании спинното мозта нелеченых животных с ЭАЭ наблюдали снижение остроты воспалительното процесса как в паренхиме, так и в оболочках: в клеточных инфильтратах стали преобладать лимфоциты, моноциты и клетки тлии, трансформированные в зернистые шары. Как известно [23, 24], такие формы активированной тлии выполняют макрофатальную функцию и принимают участие в резорбтивных процессах в ответ на повреждение нервной ткани.
В белом веществе спинното мозта в эти сроки прослеживались нервные волокна с неровными контурами вследствие неравномерното набухания и нарушения их тинкториальных свойств. Местами вокрут части таких волокон еще сохраняются оптически пустые просветы, что может быть связано с нарушением целостной структуры миелиновых оболочек.
На 70-е сутки наблюдения в белом веществе спинното мозта нелеченых крыс с ЭАЭ обнаруживали сходную картину цитоструктур-ных изменений. Вместе с тем, в этот срок почти купировался клеточный компонент воспа-лительното процесса в паренхиме спинното мозта. В то же время отмечали фиброз мятких мозтовых оболочек, их сращение с поверхностными отделами спинното мозта, облитерацию передней щели, а также небольшие очати лим-фоцитарной инфильтрации. Такая картина соответствует резидуальной стадии хроническо-то лептоменинтита с облитерацией субарахно-идальных пространств и исходом в фиброз.
Таким образом, патоморфолотическая картина индуцированното ЭАЭ в поясничном отделе спинното мозта крыс соответствует воспалительному демиелинизирующему заболеванию в стадии острото, подострото и хрони-ческото течения. В острой стадии процесса множественные очати периаксональной демиели-низации в спинном мозте сочетаются с сосуди-сто-мезенхимной реакцией в виде расширения сосудов, лейкодиапедеза и эритродиапедеза, пролиферации стромальных клеток. Обнаружение диффузно-очатовых скоплений эритроцитов вне сосудов отражает значительное нарушение проницаемости капиллярното русла, что обусловливает присоединение теморрати-ческото компонента в проявлениях ЭАЭ. Такая реакция наблюдается по преимуществу в белом веществе и в оболочках спинното мозта. Важно отметить также участие клеток местной тлии в формировании воспалительных инфильтратов.
В подострой стадии воспалительная реакция постепенно стихает, а в отдаленные сроки наблюдения завершается фиброзом мятких моз-товых оболочек с облитерацией субарахнои-дальных пространств. Можно предположить, что этот процесс может вторично приводить к нарушению ликворо-циркуляции и являться поддерживающим фактором деструкции бело-то вещества, в котором еще длительно сохраняются признаки демиелинизирущето процесса.
Таким образом, на всех стадиях развития ЭАЭ у крыс без лечения наиболее характерным признаком поражения поясничното отдела спинното мозта является формирование множественных очатов периаксональной демиели-низации в виде распада миелиновых оболочек проводящих путей. Аналотичные данные приведены в других исследованиях [8, 16], в которых наблюдали демиелинизирующую активность процесса при спинальной форме ЭАЭ даже через 100 дней, хотя воспалительная клеточная инфильтрация значительно уменьшалась, вплоть до полното исчезновения. На этом основании авторы пришли в заключению, что в разные сроки течения ЭАЭ различия в структурных признаках демиелинизации носят количественный характер и сводятся к объему повреждений и распространенности демиели-низации. В наших экспериментах при анализе патоморфолотической картины ЭАЭ у крыс в динамике длительното наблюдения (до 70 сут) это положение также подтверждается.
Сравнительное изучение патоморфолотии спинното мозта крыс с индуцированным ЭАЭ после введения им клеточных суспензий, обо-тащенных соответственно тлиальными клетками и нейроцитами, показало, что эти фракции осуществляют неоднозначное влияние на патоморфолотическую картину нарушения спинното мозта леченых животных. Введение тлиальнооботащенной клеточной суспензии существенно не снижает степень проявлений пе-риаксональной демиелинизации как в ранние, так и в более поздние сроки лечения животных. В то же время выраженность воспалительной инфильтрации паренхимы и оболочек спинното мозта крыс нарастает в динамике наблюдения.
Как и в опытах без лечения, в составе клеточных инфильтратов в острой стадии процесса (21-е сутки) определяли полинуклеары и плазматические клетки с участием типерп-лазированной тлии. В более поздние сроки (35-е сутки) в ткани спинното мозта животных этой труппы сохранялись признаки демиелинизации, которые особенно выражены в периферических отделах срезов спинното мозта, а также
нередко наблюдаются вокруг передних и задних рогов. При этом участки спонгиозных структур в белом веществе визуально подобны таковым у нелеченых крыс группы сравнения.
На 49-59-е сутки после индукции ЭАЭ в ткани спинного мозга крыс с ЭАЭ, которым внутри-брюшинно вводили глиальнообогащенную суспензию, степень периаксональной демиелинизации оставалась значительно выраженной и характеризовалась наличием участков мелкоячеистого разрежения, которое прослеживалось и на 70-е сутки (рис.5 цветной вкладки). Вместе с тем, воспалительная инфильтрация паренхимы спинного мозга местами приобретала многоочаговый характер.
В отличие от этого после введения крысам с ЭАЭ нейрональнообогащенной клеточной суспензии во все сроки наблюдения морфологически обнаружена значительно меньшая степень проявления демиелинизации, как и меньшая распространенность воспалительной инфильтрации паренхимы и оболочек спинного мозга. Как в ранние, так и в отдаленные сроки морфологических исследований спинного мозга крыс этой серии опытов общая структура спинного мозга обнаруживает большую сохранность при значительно меньшей распространенности демиелинизации, чем структура группы сравнения (без лечения) и у животных, которым вводили глиальнообогащенную фракцию. Так, полости опустошения от предшествовавшей демиелинизации более мелкие и чаще выглядели как зоны просветления. При этом отсутствовали сливные очаги дефектов и спон-гиозные структуры. Кроме того, не было признаков зональности клеточной инфильтрации как в паренхиме мозга, так и в оболочках. Во-лее сохранную структуру на поперечных срезах имели и осевые цилиндры (рис.6 цветной вкладки).
Таким образом, сравнительное изучение па-томорфологии спинного мозга крыс с индуцированным ЭАЭ при лечении глиально- и ней-рональнообогащенными клеточными фракциями позволяет подтвердить положение о том, что клетки нейрональнообогащенной суспензии головного мозга осуществляют позитивный протекторный эффект и обеспечивают подавление активности демиелинизирующего процесса, что соответствует ранее описанным клиническим и иммунологическим изменениям при ЭАЭ [13].
Выводы. 1. Патоморфологические изменения в поясничном отделе спинного мозга крыс после индукции ЭАЭ соответствуют воспалительному демиелинизирующему заболеванию, в стадии острого, подострого и хронического течения.
2. Тяжесть клинических проявлений ЭАЭ на пике клинической картины коррелирует с объемом повреждения и распространенностью демиелинизации в спинном мозге.
3. Внутрибрюшинное введение крысам гли-альнообогащенной клеточной суспензии не снижает выраженности периаксональной демие-линизации и усиливает воспалительную инфильтрацию в ткани спинного мозга крыс.
4. Внутрибрюшинное введение нейрональ-нообогащенной клеточной суспензии уменьшает степень проявления демиелинизации и распространенность воспалительной инфильтрации в паренхиме и оболочках спинного мозга крыс.
Список литературы
1. Белъсъка Л.М. Дослщження продукцл фактора некрозу пухлини-альфа ¡мунокомпетентними кл№и-нами ЦНС шур1в з експериментальним алергш-ним енцефалом1ел№ом шсля корекцп клиинами алогенного головного мозку // Наук. практ. конф. „Нейро1мунолопя в неврологи та нейроярургп" — К., 2000. — С.7-9. 2 Влияние трансплантации эмбриональной нервной ткани на восстановление морфофункционально-го состояния головного мозга при экспериментальной ишемии. Цымбалюк В.И., Носов А.Т., Бондарь Л.В., Васлович В.В. // Журн. теорет. и клин. медицины. — 2000. — №3. — С.305-307. 3. Вивчення in vitro та in vivo протипухлинно! дл клиин головного мозку тварин р1зного в1ку. Ллся-ний М.1., Маркова О.В., Семенова В.М., Олейник Г.М. // Журн. АМН Украши. — 1999. — Т.5. — №2. — С.328-337. 4 Гусев Е.И., Демина ТЛ, Бойко А..Н. Рассеянный склероз. — М., 1997. — 463 с.
5. Давыдова Г.С. Применение адъюванта с различ-
ным количеством БЦЖ для воспроизведения ЭАЭ у крыс // Острый энцефаломиелит в эксперименте и клинике. — Минск: Наука и техника, 1969. — С.32-37.
6. Динамжа патоморфолопчних зрушень при експе-
риментальному алерпчному енцефалом1елт шур1в шсля корекцп нейрональними та дальними клиинами мозку новонародженних тварин. Семенова В.М., Лисяний М.1., Бельська Л.М. и др. // Укр. вюн. психоневрологи. — 2002. — Т.10. — вип.1(30), (додаток): Матер1али Нац. Конгр. невро-лопв, псих1атор1в та нарколопв Украши (Харюв, 21-24 травня 2002р.) — С.123
7. Дoслiдження гуморальних аутсямунних реакцш до
нейроспециф1чних бшгав у раз1 експерименталь-ного алерпчного енцефалом1ел№у на етапах патогенеза та ¡мунокорекцп алогенною нервовою тканиною. Лшяний М.1., Любич Л.Д., Маркова О.В., Бельська Л.М. // Ф1зюл. журн. — 2002. — №1. — С.15-24.
8. Завалишин И.А., Головкина В.И. Рассеянный скле-
К статье Семеновой В.М., Лисяного Н.И., Марковой О.В., Вельской Л.Н.
"Особенности патоморфологических изменений в спинном мозге крыс при лечении экспериментального аллергического энцефаломиелита нейронально- и глиальнообогащенными фракциями клеток головного мозга"
Рис.1. Очаги демиелинизации в белом веществе спинного мозга крыс на 21-е сутки после индукции ЭАЭ. Пояснение в тексте. Окраска гематоксилином и эозином. х 800
Рис.2. Воспалительная инфильтрация с участием клеток глии на фоне демиелинизации спинного мозга. 21-е сутки после индукции ЭАЭ. Окраска гематоксилином и эозином. х 200
4L
Л ".« Г
Рис.3. Различные типы дистрофических и некро- Рис.4. Гистоструктура спинного мозга крыс с ЭАЭ биотических изменений в нейронах спинного мозга (35-е сутки). Пояснения в тексте. Окраска гематок-
при ЭАЭ. Окраска тионином. х 800
силином и эозином. х 200
Рис.5. Гистоструктура спинного мозга крыс с ЭАЭ после введения глиальнообогащенной клеточной суспензии (70-е сутки). Пояснения в тексте. Окраска гематоксилином и эозином. х 100
Рис.6. Гистоструктура спинного мозга крыс с ЭАЭ после введения нейрональнообогащенной клеточной суспензии. Пояснения в тексте. Окраска гематоксилином и эозином. х 100
роз. Избранные вопросы теории и практики. — М., 2000. — 639 с.
9. Заргарова Т.А., Фаворова О.О. Экспериментальный
аутоиммунный энцефаломиелит — модель рассеянного склероза // Иммунология. — 1999. — №2. — С.5-8.
10. Изучение противоопухолевой активности клеток развивающегося мозга мышей линии СВА при совместной трансплантации с клетками карциномы легкого Льюис под капсулу почки мыши/ Лисяный Н.И., Маркова О.В., Олейник Г.М. и др. // Эксперим. онкология. — 1993. — №6. — С.47-51.
11. Иммунная система головного мозга / Под. ред. Н.И. Лисяного. — К., 1999. — 216 с.
12. Лгкувалъно-вгдновний вплив експериментально! нейротрансплантацп на структуру тканини ше-м1зованолого мозку/ Цимбалюк В.1., Щмейко О.А., Носов А.Т., Бондар Л.В. // Бюл. АМН. — 1998. — №7. — С.50-53.
13. Лгсяний M.I., Маркова О.В., Белъсъка Л.М. Моде-лювання GAG у щур1в та його коррекция клиина-ми алогенного головного мозку // Ф1зюл. журн.
— 2001. — №5. — С.37-40.
14. Маркова О.В. Мехашзми антипрол1феративно! та ¡мунокорегуючо! дл клиин незршого мозку екс-периментальних тварин: Наук. практ. конф. „Ней-ро1мунолопя в неврологи та нейрох1рурги" — К., 2000. — С.56-58.
15. Никулеску И.Т. Патоморфология нервной системы. — Бухарест, 1963. — С.15-17.
16. Пашковская М.И. Развитие демиелинизирующе-го процесса при остром и хроническом ЭАЭ // Демиелинизирующие заболевания нервной системы в эксперименте и клинике. — Минск: Наука и техника. — 1975. — С.122-133.
17. Применение подкожных имплантаций специфической межвидовой эмбриональной нервной ткани у больных с резистентными формами шизофрении / Павленко В.В., Кутько И.И., Воробьева Т.М. и др. // Укр. вест. психоневрологии. — 1995.
— Т.5. — Вып2(6). — С.249-252.
18. Супрессия экспериментального аллергического энцефаломиелита субокципитальным ведением трофина-экстракта их эмбриональной нервной ткани / Цимбалюк В.И., Лисяный Н.И., Маркова О.В. и др. // Аллергия и иммунология. — 2001.
— Т.2. — №2. — С.135.
19. Трансплантация дистальной и ксеногенной нервной ткани при болезни Паркисона / Савельев С.В., Лебедев В.В., Войтина С.В. и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. — 1994. — №4.
— С.369-371.
20. Функциональное состояние иммунокомпетентных клеток в селезенке и в головном мозге крыс после индукции экспериментального аллергического энцефаломиелита / Лисяный Н.И., Маркова О.В., Горобец О.Б., Бельская Л.Н. // 1мунолопя та алерголопя. — 1998. — №1. — С.98-103.
21. Цимбалюк B.I., Сутковой Д.А., Троян O.I. Вплив трансплантаци фетально! нервово! тканини на актившсть процеав перекисного окислення лшвдв та антиоксидантного захисту у вщдаленний пер-¡од експериментально!! тяжко:! черепно-мозково!! травми // Укр. нейрох1рург. журн. — 2001. — №1.
— С.109-114.
22. Цымбалюк В.И., Пичкур Л.Д, Пичкур И.А. Влияние нейротрансплантации на рефлекторную активность мышц и пассивности движения у больных со спастическими формами ДЦП // Укр. нейро-х^рург. журн. — 2000. — №2. — С.116-125.
23. Benveniste E.N. Role of macrophages/microglia in multiple sclerosis and experimental allergic encephalomyelitis // J. Mol.Med. — 1997. — V.75.
— P.165-173.
24. Gehmann J, Matsumoto Y, Kreutzberg GW. Microglia: intrinsic immuneffector cell in the brain // Brain Res. Rev. — 1995. — V.1, №20. — P.269-287.
25. Frischbach O.K. Synapse formation between dissociated nerve and muscle cells in density cell cultures // Kevelop. Biol. — 1972. — V.28. — P.407-429.
Особливост патоморфолопчних змш у спинному мозку щур1в при лжуванш експериментальното алерпйното енцефалом1ел1ту нейронально- 1 тл1альнозбатаченими фракщями кл1тин толовното мозку
Семенова В.М, Лгсяний М.1., Маркова О.В., Бельська Л.М.
Вивчено патоморфолопчш змши в спинному мозку щур1в з експериментальним алерпйним енцефалом1ел1-том (ЕАЕ), яких л1кували кл1тинними суспензиями з то-ловното мозку новонароджених щур1в. ЕАЕ шдукували томотенатом мозку з повним ад'ювантом Фрейнда. Гл1аль-но- 1 нейрональнозбатачеш суспензй клггин уводили внут-р1шньоочеревинно на 12, 14 1 16-ту добу шсля шдукцп ЕАЕ. Для досл1дження поперековото в1дд1лу спинното мозку тварин забивали в терм1ни в1д 21-1 до 70-1 доби. Видале-ний спинний мозок ф1ксували у формал1н1, заливали у цело1дин-парафш, з блоков тотували зр1зи (5-6 мм), як1 забарвлювали тематоксил1неозином, тематоксил1ном та п1крофуксином 1 т1он1ном за Н1сслем. Вивчення т1столот-1чних препарат1в проводили на цитоанал1затор1 зобра-ження „1ЪаБ-2000". Встановлено, що введення щурам з ЕАЕ нейрональнозбатачено! кл1тинно1 суспензп зменшуе ступень прояву дем1елш1зацп 1 поширен1сть запально! 1нф1льтрац11 паренх1ми та оболонок спинното мозку. Вве-дення тл1альнозбатачено1 кл1тинно1 суспенз11 не впливае на обсят ушкодження, поширен1сть дем1елш1зацп та ви-ражен1сть запальното процесу.
The pathomorfology of changes in rat's spinal cord in experimental allergic encephalomyelitis after treatment by neuron and glial-enriched fractions of cells of brain
Semionova V.M., Lisyany N.I., Markova K.V., Belskaya L.N.
The pathomorfologic changes of rat's spinal cord in experimental allergic encephalomyelitis (EAE) after the neuron and glial-enriched fraction brain cells treatment were investigated. EAE induced by immunization of rats with Freind's adjuvant and spinal cord tissue gomogenat. Correction was carried on 12-th, 14-th, 16-th day after the induction of the EAE by intraperitoneal injections of newborn brain rat's neuron and glialenriched fractions.
Treament EAE by the brain's neuron al-enriched fraction was decreased inflammatory infiltration and demyelination spinal brain. The glial cells correction was not changes volume of damage and demyelination.
Комментарий
к статье В.М.Семеновой, Н.И.Лисяного, О.В.Марковой, Л.Н.Бельской «Особенности патоморфологических изменений в спинном мозге крыс при лечении экспериментального аллергического энцефаломиелита нейро-нально- и глиальнообогащенными фракциями клеток головного мозга».
Представленная к публикации работа В.М. Семеновой и соавторов посвящена крайне актуальной проблеме клеточной терапии экспериментального энцефаломиелита (ЭАЭ), индуцированного у крыс по специально разработанной авторами методике.
Создание экспериментальной адекватной модели ЭАЭ уже само по себе представляет важное значение, способствуя изучению этиопатогенеза демиелинизирующих заболеваний ЦНС, в частности рассеянного склероза.
Авторы проследили динамику клинического течения и патоморфологическую характеристику ЭАЭ у крыс в различные сроки после лечения этого заболевания внутрибрюшинным введением глиально- и нейрональнообо-гащенных клеточных суспензий в сопоставлении с таковыми у контрольных (нелеченых) крыс.
Приведенные в работе результаты патоморфологического исследования ЭАЭ детально описаны, характеризуют динамику процесса, достаточно аргументированы и наглядно подкреплены микрофотоиллюстрациями высокого качества.
Полученные авторами в эксперименте результаты о санирующем влиянии на процесс демиелинизации нейро-нальнообогащенной клеточной фракции (из мозга новорожденных животных) позволяют предложить этот метод клеточной терапии для апробации в клинических условиях при демиелинизирующих заболеваниях ЦНС.
Профессор Носов А.Т. Институт нейрохирургии им. акад. А.П. Ромоданова АМН Украины
