Особенности иммунотропного эффекта бемитила при хронических гепатитах Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

м<едщг1н7ск(№яИмл1унзлогия Краткие сообщения

© 2005, СПб РО РААКИ

ОСОБЕННОСТИ ИММУНОТРОПНОГО

ЭФФЕКТА БЕМИТИЛА

ПРИ ХРОНИЧЕСКИХ ГЕПАТИТАХ

Оковитый С.В., Иванова О.В., Бойкова А.А., Калинина Н.М.*, Давыдова Н.И.*, Радченко В.Г.**, Шуленин С.Н.

Военно-медицинская академия, Санкт-Петербург;

* Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины МЧС РФ, Санкт-Петербург;

** Государственная медицинская академия им.И.И.Мечникова, Санкт-Петербург, Россия

Резюме. Введение бемитила в комплексную терапию больных хроническими гепатитами позволяет достичь заметного гепатопротекторного эффекта. Очевидно, он реализуется как за счет прямого гепатотропного воздействия, так и опосредуется через иммуномодулирующее действие препарата, направленное, в первую очередь, на клеточное звено иммунитета. При этом, иммунотропное действие бемитила может быть охарактеризовано как иммуномодулирующее, что подтверждается стимуляцией Т-клеточного звена иммунитета, при некотором подавлении В-звена и гуморального иммунитета. Важным фактом в иммунотропном действии препарата является отсутствие явлений аутоиммунизации при его применении. Влияние бемитила на макро-фагальное звено проявляется уменьшением выраженности инфильтрации ткани печени звездчатым ретику-лоэндотемюцитами и одновременным возрастанием в крови моноцитов. При этом исходно повышенная кис-лородзависимая микробицидная активность макрофагов несколько снижалась, но повышались стимулированные показатели.

Ключевые слова: гепатиты, бемитил, иммунотропное действие

Okovity S.V., Ivanova O.V., Boykova A.A., Kalinina N.M., Davydova N.I., Radchenko V.G., Shulenin S.N. CHARACTERSTICS OF IMMUNE EFFECT OF BEMITHYL IN CHRONIC HEPATITIS Abstract. Introduction of bemithyl into combined therapy of patients suffering chronic hepatitis allows to achieve a noticeable hepatoprotective effect. Apparently it is realized due to direct hepatotropic influence as well as through immunomodulatory action of the preparation directed at cellular immunity. At the same time, immu-notropic action of bemithyl can be characterized as immunomodulatory one, which is confirmed by stimulation of T-cell immunity with some suppression of B-section and humoral immunity. An important factor of the immuno-tropic action of the drug is the absence of autoimmunization phenomena. Influence of bemithyl on macrophages section manifested by the decrease of liver tissue infiltration and simultaneous increase of blood monocyte count. At the same time, initial oxigen-dependent microbicidal activity of macrophages decreased a little. but stimulated indices increased. (Med. Immunol., 2005, vol.7, № 1, pp93-99)

Введение иммунопатологическими сдвигами [5, 11], а, с дру-

Особое место в решении проблемы регенерации гой стороны, установлено, что иммунная система

печени принадлежит исследованию связи состояния играет особую регуляторную роль в репаративных

органа и иммунной системы в репаративных процес- процессах [1, 2]. Нарушения функций печени, раз-

сах, так как известно, что с одной стороны, целый ряд вивающиеся вследствие вирусной агрессии, алкозаболеваний печени сопровождается выраженными гольной интоксикации и т.д., как правило, сопровож-

даются изменениями одного или нескольких звень-

Адрес для переписки ев иммунитета [23]. Поэтому проблема поиска но-

Оковитый Сергей Владимирович, вых препаратов с гепатопротекторной и иммуно-

194223 г Санкт-Петербург тропной активностью и исследование их механизма

пр. 2-й Муринский, д.22, кв.20. Тел.: (812)550-07-30. действия приобретает °с°бую ак_гуальн°сть. Целью Е-таИ жщю968@таИ ги настоящего исследования стало клиническое изуче-

ние характера и особенностей иммунотропного эффекта синтетического адаптогена бемитила при хронических гепатитах.

Материалы и методы

Длительность исследования составила 4 года, считая с момента первого клинического наблюдения. Общее количество больных, подписавших информированное согласие и включенных в исследование -210 человек. Все они проходили лечение в клинике внутренних болезней №2 СПбГМА им. И.И. Мечникова (зав. кафедрой - доктор медицинских наук профессор В.Г.Радченко). Исследование проведено по решению Ученого совета СПбГМА им. И.И. Мечникова.

Критерии отбора испытуемых:

1) критерии включения: диагноз - хронический гепатит (ХГ) (различной этиологии, стадии заболевания и степени активности патологического процесса); длительность заболевания не менее одного года; госпитализированные больные; пол - мужчины, женщины; возраст - 17-68 лет). При характеристике больных хроническими диффузными поражениями печени была использована классификация международного конгресса гастроэнтерологов (Лос-Анжелес, 1994) [7];

2) критерии исключения: тяжелая патология сердечно-сосудистой системы (острый инфаркт миокарда, сердечная недостаточность П-Ш степени, миокардиты); тяжелая дыхательная патология (бронхиальная астма, тяжелое течение); хроническая почечная недостаточность; коллагенозы; острые инфекционные заболевания; беременность и грудное вскармливание; прочие критерии исключения (ментальные нарушения, участие в других исследованиях); отказ пациента от участия в исследовании.

Технология контроля погрешностей - плацебо-контролируемое слепое рандомизированное исследование. Модель исследования - в 3-х параллельных группах. Распределение больных по группам представлено в табл 1.

Пациенты группы I получали на фоне базисной терапии синтетический адаптоген бемитил (2-этил-

тиобензимидазола гидробромид, регистрационный номер 8З/654/15) по 0,25 г два раза в день тремя пятидневными курсами с двухдневными перерывами между курсами. Препарат был синтезирован на кафедре фармакологии ВМедА и изучался под руководством профессоров В.М.Виноградова и

А.В.Смирнова. Гепатопротекторная активность бе-митила исследовалась ранее [4, 10, 12, ІЗ].

II группе больных на фоне базисной терапии назначалось плацебо (неактивное вещество заводского изготовления (каолин) в таблетках, визуально неотличимых от активного препарата).

Контрольная группа (III) была представлена З0 здоровыми лицами, схожими по полу и возрасту с исследуемыми пациентами.

Среди факторов, отягощающих течение заболевания, наиболее часто встречались наркомания - у 2І пациента (11,66%) и алкоголизм - у З0 больных (i6,66%).

Базисная терапия, проводимая пациентам I-II групп включала:

1. Детоксикационную терапию: (полифепан, по i столовой ложке З раза в день в течение 7 дней; гемодез - 400 мл в момент поступления и через З дня, кристаллоидные растворы (трисоль - i,0 л на 2-й и 5-й дни после поступления).

2. Метаболическую терапию: (витамин В по i мл внутримышечно через день І4 дней с момента поступления; витамин С по i мл внутримышечно через день i4 дней с момента поступления; витамин К по 2 мл внутримышечно через день в течение всего курса и З мл накануне пункционной биопсии печени).

Методы исследования

i. Иммунологические методы. Фракцию моно-нуклеаров выделяли, используя метод Boyum A. [18]. Популяции и субпопуляции Т-лимфоцитов (CD3+), Т-хелперных/индукторных лимфоцитов (CD4+), Т-цитотоксических лимфоцитов (CD8+), В-лимфо-цитов (CDi9+) определяли методом проточной ци-тофлуориметрии на проточном цитометре «Epics

Табл.1. РАСПРЕДЕЛЕНИЕ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМИ ВИРУСНЫМИ ГЕПАТИТАМИ ПО ГРУППАМ В ИССЛЕДОВАНИИ

Группа Подгруппа Нозология Препа- рат Пациенты

Пол Средний возраст (лет) Средняя длитель- ность заболе- вания (лет) Этиология хронического гепатита

Вирус- ный (В) (чел.) Вирус- ный (С) (чел.) Вирус- ный (В+С) (чел.) Алко- голь- ный (чел) Токси- чес- кий (чел.) Крипто- генный (чел.)

I (1GG чел.) Ia (7G чел.) ХГ на стадии до цирроза печени бемитил муж. - 47 жен. - 23 4G,69±2,31 5,71 ±1,24 19 13 12 1б 2 8

I6 (3G чел.) ХГ на стадии цирроза печени бемитил муж. - 21 жен. - 9 49,21±2,34 б,81±1,25 б 8 2 13 - 1

II (4G чел.) IIIa (2G чел.) ХГ на стадии до цирроза печени плацебо муж. - 11 жен. - 9 4G,26±1 ,98 5,24±1,18 5 4 3 4 1 3

Шб (2G чел.) ХГ на стадии цирроза печени плацебо муж. - 14 жен. - б 38,54±2,17 7,G7±1,41 4 б 1 б 1 2

XL» (Coulter Corp., США) с применением FITC-меченых моноклональных антител (DAKO А/S, Дания) [20, 21, 22].

Иммуноферментным (ELISA) методом выявляли спонтанную, сывороточную и индуцируемую продукцию IL-ip, IL-10RA, IFNa и IFNy. Для определения цитокинов использовали тест-системы разработанные в ГосНИИ ОЧБ (Санкт-Петербург) и производимый фирмой “Протеиновый контур” (Санкт-Петербург). Эти тест-системы основаны на “сенд-вич”-методе твердофазного иммуноферментного анализа с применением пероксидазы хрена в качестве индикаторного фермента.

В сыворотке крови определяли циркулирующие иммунные комплексы методом преципитации в по-лиэтиленгликоле (ПЭГ) [6, 19], проводили оценку уровня иммуноглобулинов методом радиальной иммунодиффузии в геле [14, 17].

Кислородзависимые микробицидные системы фагоцитов оценивали по тесту восстановления нит-росинего тетразолия (НСТ-тест) [3, 14, 16]. Лизосо-мально-катионный тест (ЛКТ-тест), определяющий кислороднезависимые микробицидные системы фагоцитов выполняли по методу В.Е.Пигаревского в модификации [14, 15].

2. Пункционная биопсия печени (с целью установления этиологии, характера заболевания, а также степени активности и стадии патологического процесса). Кроме того, с помощью светового микроскопа в срезах ткани печени, полученных при биопсии по методу Мангини, окрашенных гематоксилин-эозином производили подсчет количества звездчатых ретикулоэндотелиоцитов (ЗРЭЦ).

В процессе исследования было запланировано две контрольных точки - в начале исследования и через 21 день от момента первого приема препарата. Из исследования по различным причинам было исключено 5 пациентов.

Результаты исследований обработаны методами вариационной статистики с применением пакета прикладных программ «Statgraphics» на персональном компьютере IBM PC/AT, а также с помощью непараметрических методов с использованием критерия Вилкоксона-Манна-Уитни.

Результаты и обуждение

Иммунологическое исследование крови, представленное в табл.2-3, обнаружило у больных гепатитами угнетение клеточного звена иммунитета, выражавшееся в снижении как абсолютного количества Т-лимфоцитов с фенотипом CD3+ (в 2,31 раза), CD4+ (в 1,91 раза), CD8+ (в 1,72 раза), так и их относительного числа (CD3+ в 1,37 раза; CD8+ в 1,29 раза). Также было понижено абсолютное число CD19+ лимфоцитов (в 1,44 раза). При оценке гуморального звена иммунитета было отмечено повышение ЦИК (в 1,62 раза), IgM (в 3,7 раза), IgG (в 1,64 раза) и IgA (в 2,33 раза).

Базальный НСТ-тест оказался увеличен в 1,75 раза, а стимулированный НСТ-тест снижен в 2,14 раза, в то время как величина ЛКТ-теста не отличалась от контрольной группы. При подсчете количества ЗРЭЦ на срезах ткани печени их число составило 179,11±9,30 в 1 мм2.

При оценке показателей иммунной системы (табл.2-3) в подгруппе Ia на фоне применения беми-тила было отмечено выраженное влияние как на клеточное, так и на гуморальное звенья иммунитета. Это подтверждалось повышением в крови абсолютного количества Т-лимфоцитов (CD3+) в 1,6 раза, Т-хел-перов/индукторов (CD4+) в 1,82 раза и цитотокси-ческих Т-лимфоцитов (CD8+) в 1,48 раза. Относительное содержание Т-лимфоцитов и их субпопуляций также изменялось: процент CD3+, CD4+, CD8+ лимфоцитов увеличивался соответственно в 1,35,

Табл. 2. НЕКОТОРЫЕ ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМИ ВИРУСНЫМИ ГЕПАТИТАМИ Ь, На И III ГРУПП

Больные хроническим гепатитом

Контрольная (III) группа, MG±mG (nG=3G) Ia группа На группа

Показатели До лечения, M1±m1 (n1=7G) После лечения, M2±m2 (n2=7G) До лечения, M3±m3 (n3=2G) После лечения, M4±m4 (n4=2G) PG-1 р 1-2 Р3-4 Р2-4

Моноциты, Ю9/л G,24±G,G2 G,21±G,G2 G,33 ±G,G3 G,25±G,G2 G,26±G,G3 >G,G5 <G,GG1 >G,G5 <G,G5

CD3+, в мкл 1197,2±74,29 518,13±59,11 S29,52±6G,9G 573,12±33,79 628,84±42,17 <G,G5 <G,G1 >G,G5 <G,G5

CD3+, % 61,7±1,98 45,1G±2,S1 6G,9G±3,G9 43,76±2,94 43,G1±3,68 <G,GG1 <G,GG1 >G,G5 <G,G5

CD4+, в мкл 5S7,4S±5G,17 3G7,34±45,5S 558,44±59,81 377,52±51 ,G4 4GG,72±49,16 <G,GG1 <G,G1 >G,G5 <G,G5

CD4+, % 35,GG±2,S1 3G,GG±2,76 4G,2G±3,46 33,28±2,14 34,66±4,G5 >G,G5 <G,G5 >G,G5 >G,G5

CD8+, в мкл 45S,GG±21,84 266,25±25,17 394,41 ±37,84 249,2G±32,59 326,G2±36,86 <G,G1 <G,G1 >G,G5 <G,G5

CD8+, % 27,34±1,54 21 ,GG±1,46 26,SG±1,51 18,54±1,97 22,3G±1,26 <G,G1 <G,G1 >G,G5 <G,G5

CD19+, в мкл 145,34±12,9G 1GG,73±15,35 59,85±1G,14 121,73±15,85 159,32±13,92 <G,G5 <G,G5 >G,G5 <G,G5

CD19+, % 7,SG±1 ,G1 6,77±G,S6 4,G6±G,85 6,7G±1,15 7,79±1,22 >G,G5 <G,G5 >G,G5 <G,G5

CD4/CDS 1,2S±G,17 1,42±G,17 1,5G±G,63 1,79±G,14 1,55±G,24 >G,G5 >G,G5 >G,G5 >G,G5

Примечание: р0-1 - показатели достоверности различия между группами III и Ь; р1-2 - показатели достоверности различий до и после лечения в группе Ь; р3-4 - показатели достоверности различий до и после лечения в группе На; р2-4 - показатели достоверности различий после лечения в группах Ь и На.

Табл. 3. НЕКОТОРЫЕ ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМИ ВИРУСНЫМИ ГЕПАТИТАМИ Ь, На И III ГРУПП

Показатели Контрольная (III) группа, Мо±то (По=30) Больные хроническим гепатитом р0-1 р1-2 Р3-4 Р2-4

1а группа ііа группа

До лечения, М1±т1 (П1=70) После лечения, М2±т2 (П2=70) До лечения, М3±т3 (П3=20) После лечения, М4±т4 (П4=20)

ЦИК, ед. 56,50±2,15 91,40±5,85 45,52±4,31 94,00±12,11 101,73±9,62 <0,05 <0,001 >0,05 <0,05

НСТб,ед.экст 0,12±0,01 0,21±0,02 0,12±0,01 0,21±0,02 0,21 ±0,01 <0,001 <0,01 >0,05 <0,05

НСТс, ед.экст 1,39±0,02 0,65±0,05 0,97±0,08 0,78±0,07 0,74±0,58 <0,001 <0,01 >0,05 <0,05

ЛКТ, у.е. 1,57±0,01 1,62±0,05 1,50±0,01 1,69±0,03 1,66±0,01 >0,05 <0,05 >0,05 <0,05

1дМ, г/л 1,05±0,09 3,88±0,45 2,13±0,52 2,88±0,11 2,76±0,19 <0,001 <0,001 >0,05 <0,05

ідв, г/л 11,40±0,61 18,64±0,88 15,93±0,91 17,21±1,90 16,41±2,36 <0,001 <0,05 >0,05 >0,05

1дА, г/л 1,67±0,17 3,89±0,29 2,79±0,26 2,24±0,19 2,18±0,18 <0,001 <0,001 >0,05 <0,05

Примечание: р0-1 - показатели достоверности различия между группами III и ^; р1-2 - показатели достоверности различий до и после лечения в группе ^; р3-4 - показатели достоверности различий до и после лечения в группе На; р2-4 - показатели достоверности различий после лечения в группах Ь и На.

1,34, 1,28 раз. Количество В-лимфоцитов (CD19+) снижалось как в абсолютном, так и в процентном отношении в 1,68 раза. В значительной степени уменьшался уровень ЦИК (в 2,01 раза) и иммуноглобулинов (^М в 1,82 раза, IgG в 1,16 раза, ^А в 1,39 раза), что в совокупности с падением уровня В-лимфоцитов говорит о снижении активности гуморального звена иммунитета.

Под действием препарата уменьшались (в 1,25 раза) показатели базального и увеличивались (в 1,49 раза) показатели стимулированного НСТ-теста, что свидетельствует о нормализации кислородзависи-мых микробицидных систем фагоцитов. Достоверно уменьшалось значение ЛКТ-теста (в 1,08 раза), характеризующее кислороднезависимые микроби-цидные свойства макрофагов.

По сравнению с группой 11а (плацебо-контроль), абсолютное количество Т-лимфоцитов и их субпопуляций под влиянием бемитила достоверно увеличивалось (CD3+ в 1,32 раза, CD4+ в 1,40 раза, CD8+ в 1,21 раза), так же как их относительное содержание (CD3+ в 1,42 раза, CD4+ в 1,16 раза, CD8+ в 1,2 раза). Значительнее снижалось как абсолютное, так и относительное содержание В-лимфоцитов (CD19+) - соответственно в 2,66 и 1,92 раза. Заметно уменьшался уровень ЦИК - в 2,23 раза, ^М (в 1,30 раза) и ^А (в 1,28 раза). Бемитил понижал показатель базального НСТ-теста (в 1,75 раза) и повышал показатель стимулированного НСТ-теста (в 1,31 раза). Достоверно уменьшались значения ЛКТ-теста - в 1,11 раза.

На фоне применения препарата количество ЗРЭЦ уменьшалось до 85,03±10,44 (р<0,001) в 1 мм2. По сравнению с группой, получавшей плацебо, бе-митил снижал количество ЗРЭЦ в 2,05 раза.

В подгруппе больных хроническим вирусным гепатитом В (ХГ-В) был исследован цитокиновый статус (табл.4-6). В результате установлено, что при ХГВ по сравнению с нормой происходило резкое повышение сывороточного содержания №N7 (в 18,47 раза, р<0,05) на фоне относительно сохранной продукции IFNa (табл.4). Отмечалась незначительная

тенденция к повышению спонтанной продукции IL-1р (в 1 ,43 раза, р>0,05) и его сывороточного содержания (в 1,66 раза, р>0,05). Индуцированная продукция данного цитокина оказалась резко сниженной (в 9,84 раза, р<0,05). Значения сывороточного содержания IL-lpRA оказались нормальными.

Проведение курса базисной терапии с использованием плацебо привело к незначительному снижению индуцированной продукции IFNa (в 1,67 раза, р>0,05) (табл.5). Заметным изменениям подвергалась продукция №N7. Так, его спонтанная продукция была в 9 раз выше (р<0,05) по сравнению с нормой и в 7,94 раза (р<0,05) по сравнению с показателем до лечения. Индуцированная продукция данного цитокина, наоборот оказалась в 2,27 раза меньше (р<0,05) нижней границы нормы и в 2,34 раза ниже (р<0,05) по сравнению с тем же показателем до лечения. Сывороточные значения №N7 были в 12,7 раза выше (р<0,05), чем в норме и в 1,45 раза меньше (р>0,05), чем до лечения.

Значительные изменения претерпевала продукция ^-1р. Спонтанная продукция данного цитоки-на была выше, чем в норме в 4,4 раза (р<0,05) и в 3,07 раза больше (р>0,05), чем до лечения. Значения индуцированной продукции были в 5,26 раза ниже (р<0,05) по сравнению с нормой, но имели тенденцию к росту по сравнению с периодом до лечения. Значительно возрастало сывороточное содержание ^-1р - в 35,8 раз по сравнению с нормой (р<0,05) и в 21,48 раз по сравнению с периодом до лечения (р<0,05). Показатели спонтанной и индуцированной продукции IL-lpRA не имели достоверных отличий по сравнению с аналогичными показателями до лечения. В то же время сывороточная концентрация цитокина падала в 12,5 раз (р<0,05). По-видимому, данные изменения на фоне проводимой базисной терапии можно объяснить тем, что в результате ее проведения снижались явления интоксикации организма, а включенные в ее состав тиамина бромид и аскорбиновая кислота обладают доказанным иммуностимулирующим действием.

Табл. 4. ЦИТОКИНОВЫЙ СТАТУС БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМИ ВИРУСНЫМИ ГЕПАТИТАМИ (Х±тх)

Показатели 1РЫа (п=10) 1РЫу (п=10) ІІ.-1Р (п=1 0) ІІ_-1 РЯА (п=10)

Спонтанная продукция, пг/мл 2,00±0,02 56,67±24,98 71,67±21,16 673,33±151,67

Индуцированная продукция, пг/мл 217,50±60,48 1028,33±261,07 101,67±40,671 1096,67±197,83

Сывороточное содержание, пг/мл 0,83±0,63 923,33±261,071 83,33±42,71 501,66±167,84

Примечание: 1 - различия достоверны (р<0,05) по сравнению со значениями нормы

Табл. 5. ЦИТОКИНОВЫЙ СТАТУС БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМИ ВИРУСНЫМИ ГЕПАТИТАМИ ПОСЛЕ ПРИМЕНЕНИЯ ПЛАЦЕБО (Х±тх)

Показатели 1РЫа, (п=5) 1РЫу (п=5) ІІ_-1|3 (п=5) 11_-1|ЗВА (п=5)

Спонтанная продукция, пг/мл Ниже чувствительности метода 450,0±150,01,2 220,0±80,01 535,0±25,0

Индуцированная продукция, пг/мл 60,0±20,02 440,0±120,01,2 190,0±60,01 1114,5±242,5

Сывороточное содержание, пг/мл Ниже чувствительности метода 635,0±195,0 1790,0±410,01,2 40,0±0,52

Примечание: 1 - различия достоверны (р<0,05) по сравнению со значениями нормы; 2 - различия достоверны (р<0,05) по сравнению со

значениями до лечения

Введение бемитила в комплексную терапию ХГВ не оказывало достоверного влияния на продукцию и сывороточное содержание IFNa (табл.6). Спонтанная продукция №N7 на фоне препарата была выше (по сравнению с нормой) в 2,98 раза (р>0,05), в 2,63 раза больше (р>0,05) по сравнению с периодом до лечения и в 3,02 раза ниже (р>0,05), чем после применения плацебо. Индуцированная продукция данного цитокина после применения бемитила была по сравнению с нормой в 2,47 раза ниже (р<0,05), в 2,45 раз ниже по сравнению с группой до лечения (р<0,05) и практически не отличалась от группы, получавшей плацебо. Сывороточная концентрация №N7 была в 5,24 раза выше, чем норма (р>0,05), но в 3,52 раза ниже (р<0,05), чем в группе до лечения и в 2,42 раза меньше (р>0,05), чем в группе, получавшей плацебо.

Спонтанная продукция ^-1р не отличалась от таковой в группе до лечения и от нормы, но была в 6,11 раз ниже (р<0,05), чем в группе, получавшей плацебо. Индуцированная продукция цитокина была в 10 раз меньше, чем в норме (р<0,05) и не отличалась от аналогичного показателя в группе до лечения и в группе, получавшей плацебо. Сывороточная концентрация ^-1р была в 2,7 раза выше (р>0,05), чем в норме и не отличалась от группы до лечения. Значительное падение данного цитокина достигалось при применении бемитила по сравнению с группой, получавшей плацебо (в 13,26 раза, р<0,05).

Анализ влияния исследуемого препарата на продукцию и уровень IL-lpRA показал, что бемитил практически не изменял спонтанную продукцию

данного цитокина по сравнению с группой, получавшей плацебо и уменьшал по сравнению с группой до лечения (в 1,68 раза, р>0,05). Резко падала индуцированная продукция IL-lpRA - в 2,78 раза (р<0,05) по сравнению с группой до лечения и в 2,9 раза (р<0,05) по сравнению с группой, получавшей плацебо. Сывороточная концентрация цитокина находилась в пределах нормы и достоверно не отличалась от содержания в других группах.

Исходя из представленных выше данных можно заключить, что бемитил, очевидно, не является классическим индуктором эндогенных интерферонов. При этом он, практически не снижает продукции 1БКР и не вызывает гиперпродукции №N7, нередко сопровождающей развитие аутоиммунного процесса. Кроме того, препарат очень «мягко» вмешивается в продукцию ^-1р и IL-lpRA, уменьшая возникающий при развитии патологического процесса дисбаланс.

С целью установления стабильности достигнутой ремиссии, через 6 месяцев после проведенного лечения с применением бемитила в 1а группе больных было предпринято дополнительное исследование. Наиболее заметное воздействие препарата через 6 месяцев по окончании курса лечения определялось преимущественно на показатели клеточного звена иммунитета. При этом поддержание общего числа Т-лимфоцитов (CD3+) достигалось преимущественно за счет Т-хелперов/индукторов (СD4+), в то время как пул CD8+ лимфоцитов на достигнутом уровне не удерживался. Также нестойким оказалось и влияние препарата на В-лимфоци-ты (СD19+), сочетавшееся с повышением уровня

иммуноглобулинов. Однако, содержание ЦИК и ^М при этом оставались достаточно низкими. Выраженным и стойким оказалось влияние препарата на некоторые показатели макрофагально-моноци-тарного звена. По-прежнему достаточно высоким был уровень моноцитов в крови, сохранялись нормальные показатели базального и стимулированного НСТ-теста.

Таким образом, введение бемитила в комплексную терапию больных хроническими гепатитами позволяет достигать длительной ремиссии, достаточно полно сохраняющейся в течение 6 месяцев по окончании курса лечения.

Иммунотропный эффект бемитила при циррозе (группа 1б) имел такую же направленность, как и при гепатите без цирроза, и включал влияние как на клеточное, так и на гуморальное звено иммунитета, с активацией первого и подавлением последнего. Изменение макрофагальной функции под влиянием исследуемого препарата характеризовалось ее преимущественным снижением (в базальном НСТ-тесте), при незначительном росте после стимуляции. Важным показателем эффективности бемитила стало уменьшение в ткани печени числа ЗРЭЦ, играющих важную роль в процессе фиброзирования органа. Главным отличием иммунотропного эффекта при циррозе печени является его меньшая выраженность, в связи с чем может возникать необходимость в проведении повторных курсов терапии препаратом.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что бемитил обладает заметным иммуномодулирующим действием. Под воздействием препарата происходит изменение субпопуляционного состава лимфоцитов, в первую очередь касающееся Т-лимфоцитов, что вполне согласуется с ранее полученными данными [8, 9] и проявляется увеличением как абсолютного, так и относительного количества CD3+, CD4+ и CD8+ лимфоцитов. Последнее достигается, очевидно, не только усилением пролиферации и дифференцировки лимфоцитов, что показано для бензимидазольных препаратов, но и снижением миграции CD8+ лимфоцитов в печень, с сопутствующим уменьшением процессов иммунного повреждения гепатоцитов. Одновременно происходит снижение активности В-клеточного звена и уменьшение антителообразования, что позволяет

предположить и одновременное снижение интенсивности специфического антителообразования.

Бемитил не является классическим индуктором продукции эндогенных интерферонов, практически не изменяя продукции IFNa и не вызывая гиперпродукции №N7. Препарат восстанавливает взаимоотношение между про- и противовоспалительными цитокинами, уменьшая их дисбаланс, возникающий при развитии патологического процесса в печени. Происходит модулирование функциональной активности моноцитарно-макрофагального звена, влекущее за собой изменение в цитокиновом статусе. Это влияние носит достаточно «мягкий» характер, и, очевидно, не является определяющим в механизме иммуномодулирующего действия бемитила.

Список литературы

1. Алексеева И.Н., Брызгина Т.М., Павлович С.И., Ильичев Н.В. Печень и иммунологическая реактивность. - Киев: Наукова думка, 1991. - 168с.

2. Бабаева А.Г., Зотиков Е.А. Иммунобиология процессов адаптивного роста, пролиферации и их нарушений.- М.: Наука, 1987. - 207 с.

3. Виксман М.Е., Маянский А.Н. Способ оценки функциональной активности нейтрофилов человека по реакции восстановления нитросинего тетразо-лия // Методические рекомендации. Казань: Б.и., 1979. - 18 с.

4. Гайворонская В.В. Изыскание средств, защищающих и восстанавливающих функцию печени при повреждающих воздействиях. Автореф. дис. ... канд. мед. наук. СПб, 1992. - 22 с.

5. Греджев А.Ф., Трунова О.А., Хацко В.В., Зорина С.В. Имунореактивность больных с патологией печени, желчного пузыря и желчевыводящих путей // Клиническая хирургия.- 1990.- N.9 (585).-С. 29-30.

6. Гриневич Ю.А., Алферов А.Н. Определение иммунных комплексов в крови онкологических больных // Лаб. дело. - 1981. - № 8. - С. 493-495.

7. Десмет В., Гербер М., Хуфнэгл Дж. Г. Классификация хронических гепатитов: диагностика, определение степени тяжести и стадии течения // Росс. журн. гастроэнт., гепатол. и колопрокт. - 1995. - Т.5, №2. - С.38-45.

Табл.6. ЦИТОКИНОВЫЙ СТАТУС БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМИ ВИРУСНЫМИ ГЕПАТИТАМИ ПОСЛЕ ПРИМЕНЕНИЯ БЕМИТИЛА (Х±тх)

Показатель Некоторые воспалительные и противовоспалительные цитокины

^Ыа, (п=5) ^Ыу, (п=5) ІІ_-1|3, (п=5) ІІ_-1 РЯА, (п=5)

Спонтанная продукция, пг/мл Ниже чувствительности метода 149,0±79,76 36,0±16,313 401,0±110,64

Индуцированная продукция, пг/мл 120,0±50,49 405,0±128,091,2 100,0±37,461 394,0±87,362,3

Сывороточное содержание, пг/мл Ниже чувствительности метода 262,0±129,402 135,0±68,36 3 317,0±118,863

Примечание: 1 - различия достоверны (р<0,05) по сравнению со значениями нормы; 2 - различия достоверны (р<0,05) по сравнению со значениями до лечения; 3 - различия достоверны (р<0,05) по сравнению со значениями группы, получавшей плацебо.

8. Иванова О.В. Клиническая оценка применения препарата группы актопротекторов бемитила у больных хроническими гепатитами. Автореф. дисс. ... канд. мед. наук. СПб, 2001.- 15 с.

9. Кузнецов И.А. Функциональное состояние иммунной системы у больных различными клиникоморфологическими вариантами хронического гломе-рулонефрита.: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. СПб., 1994. - 17 с.

10. Лобзин Ю.В., Смирнов А.В. Бемитил в комплексной терапии и реабилитации больных вирусным гепатитом А // Физиологически активные вещества / Межведомственный сборник науч. трудов. - 1993.

- Вып.25. - С.23-27.

11. Маянский Д.Н., Виссе Э., Декер К. Новые рубежи гепатологии.- Новосибирск: Наука, 1992.- 267 с.

12. Оковитый С.В. Протеинсинтетические и иммунные механизмы защитно-репаративных эффектов гепатотропных средств. Автореф. дис. ... канд. мед. наук.- СПб, 1995.- 24 с.

13. Оковитый С.В. Экспериментально-клиническое обоснование применения препаратов с метаболическим и иммунотропным действием при различной патологи печени. Автореф. дис. ... доктора. мед. наук. СПб, 2004.- 40 с.

14. Оценка иммунного статуса организма в лечебных учреждениях Советской армии и Военно-морского флота . Методическое пособие / Под ред.

В.Г.Морозова. Москва: Б.и., 1987.- 62 с.

15. Пигаревский В.Е. Цитохимия антибактериальных катионных белков лейкоцитов при фагоцитозе и воспалении // Архив патологии. - 1975. - Т.37,

№ 9. - С. 3-10.

16. Покровский В.И., Нагоев Б.С. НСТ-тест ней-трофильных лейкоцитов и его клиническое значение.

- Нальчик, 1983. - 144 с.

17. Чернушенко Е.Ф., Когосова Л.С. Иммунологические исследования в клинике. - К.: Здоровья, 1978.-158с.

18. Boyum A. Separation of leukocytes from blood and bone marrow // Scand.J.Clin.Lab.Invest.-1968.-Vol.21.- Suppl.97.- P.1-9.

19. Digeon M., Laver M., Riza J., Bach J.F. Detection of circulating immune complexes in human sera by simplified assays with polyethylene glycol. // J. Immunol. Methods.- 1977. - Vol.16. - P.165-183.

20. Lai R.B., Edison L.J., Chused T.M. Fixation and long-term storage of human lymphocytes for surface marker analysis by flow cytometry // Cytometry.-1988.- Vol.34. - P.213-219.

21. Ling N.R., MacLennan I.C.M., Mason D.Y. B-cell and plasma cell antigens: new and previously defined clusters / McMichael AJ. et al., eds. Leucocyte typing III. White cell differentiation antigens. Oxford-New York-Tokyo: Oxford Press, 1987.- P.302-335.

22. McMichael A.J., Gotch F.M. 5.1. T-cell antigens: new and previously defined clusters // McMichael A.J., eds. Leucocyte typing III. White cell differentiation antigens. Oxford-New York-Tokyo: Oxford University Press, 1987.- P.31-62.

23. Weiss G. Association between cellular immune affector function, iron metabolism and disease activity in patients with chronic hepatitis C virus infection // J. Infect. Dis. - 1999. - Vol. 180, №5. - P.1452-1458.

поступила в редакцию 05.10.2004 принята к печати 22.12.2004