Особенности иммунного статуса и цитокинового профиля у детей с бронхолегочной дисплазией при различных вариантах обострения Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

тов периферической крови больных бронхиальной астмой [Текст]/М.Т.Луценко, И.А.Плюснина//Бюл. физиол. и патол. дыхания.-2000.-Вып.7.-С.49-54.

9. Герпес и антифосфолипидный синдром у беременных [Текл]/А.Д.Макарация, Н.В.Долгушина//Акуш. и гин.-2001.-№5.-С.53-56.

10. Акушерская тактика у пациенток с герпетической инфекцией [Текст]/Н.В.Орджоникидзе,

В.Л.Тютюнник//Акуш. и гин.-2001.-№4.-С.56-59.

11. Генитальный герпес. Этиология, патогенез, клиника, диагностика, планирование беременности

[Текст]/Н.В.Орджоникидзе, В.Л.Тютюнник, Л.А.Мар-ченко//Акуш. и гин.-2001.-№3.-С.61-63.

12. Особенности течения и ведения беременности при внутриутробном инфицировании плода [Текст]/ И.С.Сидорова, И.Н.Черненко, А.А.Сидоров//Рос. вестник перинатологии и педиатрии.-1998.-№4.-С.13-17.

13. Иммунитет и генитальный герпес

[Текст]/Г.Т.Сухих, М.В.Ванько, В.И.Кулаков.-

Н.Новгород, 1997.-224 с.

14. Недостаточность плаценты и ВПГ-инфекция [Текст]/В. Л. Тютюнник//Акуш. и гин.-2000.-№6.-С.57.

15. Хроматографический профиль щелочной фос-

фомоноэстеразы плаценты при нормальной и осложненной беременности [Текст]/Н.И.Цирельников,

Н.П.Воронина, Н.Л.Лукьянчикова//Бюл.Сиб. отд-ния РАМН.-2001.-№1.-С.95-97.

16. Reactivation of human herpesvirus 6 and 7 in pregnant women [Text]/ Masahiro О. [at al.]//J. Med.Virol.-2002.-Vol.67, № 3.-P.354-358.

17. Effect of immune complexes on human Neutrophil phagocytic function [Text]/G. Starkebaum, R.A.N.Jimenez, W.P.Arend//J.Immunol.-1982.-Vol.128, № 1.-P.141-147.

П □ □

УДК 616.24-097-053.4/.6

Т.Ф.Боровская, Э.Х.Курпас, О.Е.Гусева, М.В.Ефименко, В.К.Козлов, Е.В.Пичуева, С.Г.Гандуров

ОСОБЕННОСТИ ИММУННОГО СТАТУСА И ЦИТОКИНОВОГО ПРОФИЛЯ У ДЕТЕЙ С БРОНХОЛЕГОЧНОЙ ДИСПЛАЗИЕЙ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ВАРИАНТАХ ОБОСТРЕНИЯ

Хабаровский филиал ДНЦ ФПД СО РАМН - НИИ охраны материнства и детства, Дальневосточный государственный медицинский университет РЕЗЮМЕ

Изучали состояние системного иммунитета периферической крови и особенности цитокинового статуса у детей с хронической бронхолегочной патологией. Выявили различия в иммунном реагировании у детей с врожденными пороками легких на фоне различных типов обострения хронического процесса. Провели анализ особенностей иммунного ответа с исследованием цитокинового статуса с учетом особенностей клинического течения по типу бронхообструктивного синдрома и локального воспалительного процесса в легочной ткани.

SUMMARY

T.F.Borovskaya, E.H.Kurpas, O.E.Guseva, M.V.Efimenko, V.K.Kozlov, E.V.Pichueva,

S.G.Gandurov

IMMUNE STATUS AND CYTOKINE PROFILE PECULIARITIES IN CHILDREN WITH BRONCHO-PULMONARY DYSPLASIA WITH DIFFERENT DEGREES OF EXACERBATION

Systemic peripheral blood immunity and cytokine status peculiarities in children with chronic broncho-pulmonary pathology have been studied. Study results showed differences in immune reactions of children with congenital lung disorders during exacerbation stage. Immune response peculiarities and cytokine status in children showing broncho-obstructive syndrome symptoms and focal inflammation in lung tissues have been analyzed.

В настоящее время остается актуальной проблема предупреждения и лечения бронхолегочных заболеваний у детей. В структуре первичной заболеваемости эта патология занимает одно из первых мест у детей всех возрастных групп [7]. Со времени первого описания бронхолегочной дисплазии (БЛД), опубликованного Wh. Jr. Northway в 1967 году, прошло 30 лет. Тем не менее, она остается предметом пристального внимания клиницистов и ученых, работающих в области неонатологии [11]. Это объясняется как ростом частоты БЛД (с 67 до 75%), так и не вполне удовлетворительным пониманием патогенетических закономерностей ее развития и отсутствием эффективных методов профилактики и патогенетической терапии. БЛД остается главной причиной летальных исходов, происходящих после выписки детей из стационара [9]. Данная патология в настоящее время считается вторым по частоте хроническим бронхолегочным заболеванием детского возраста после бронхиальной астмы [2]. БЛД обусловлена морфологическими изменениями в виде уменьшения диаметра бронхов, гипертрофии и гиперплазии гладкой мускулатуры бронхиол и бронхов, плоскоклеточной метаплазии бронхиального эпителия, облитерирующего бронхиолита, перибронхиаль-ной гиперпластической инфильтрации, персистирую-щего интерстициального отека, интерстициального фиброза и может проявляться в виде пневмонии с наличием бронхообструкции или без нее [2, 10].

Цель исследования: изучение особенностей иммунного статуса и цитокинового профиля у детей с БЛД при обострении по типу бронхообструктивного синдрома (БОС) и по пневмоническому типу.

Материалы и методы исследования

Обследовали 103 ребенка с клиническим диагнозом БЛД в периоде обострения. Средний возраст обследуемых детей составил 6,7±0,48 лет. Диагноз БЛД устанавливали на основании клинико-

анамнестических критериев: наличие длительного пульмонологического анамнеза (рецидивирующий обструктивный бронхит, не типичное течение бронхиальной астмы, неоднократно повторяющиеся пневмонии, подтвержденные рентгенологически).

Из них у 51 ребенка диагноз БЛД был подтвержден морфологически: порок развития легких по типу гипоплазии выявлен у 13 человек (25,4%), по типу тканевой дисплазии - у 38 человек (74,5%). В зависимости от степени нарушений проходимости на уровне крупных и средних бронхов у детей с БЛД выделено 2 варианта обострения: по типу БОС - 22 ребенка и по пневмоническому типу - 40 детей.

Бронхообструктивный синдром устанавливали клинически (при наличии аускультативных изменений в виде рассеянных свистящих хрипов, одышки, перкуторно-коробочного оттенка легочного звука), а так же с помощью регистрации показателей ФВД, где отмечалось снижение проходимости на уровне крупных и средних бронхов, положительный эффект при пробе с сальбутамолом.

Всем больным наряду с общеклиническими исследованиями проводили оценку иммунного статуса, которая включала определение показателей клеточного (СБ3+, СБ19+, СБ4+, СБ8+, СБ16+, СБ25+, ИЬЛ-БК+) и гуморального (концентрация ^ Л, ^ М, ^ в, общего ^ Е и ЦИК) звеньев иммунитета. При исследовании параметров клеточного иммунитета использовался метод фенотипирования лимфоцитов в тестах розеткообразо-вания с частицами, покрытыми моноклональными антителами [5]. Содержание сывороточных иммуногло-

булинов основных классов (Ig A, Ig M, Ig G, общего Ig E) определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием тест-систем «Протеиновый контур» (Санкт-Петербург) и «Векгор-Бест» (Новосибирск), уровень ЦИК в сыворотке крови - по стандартной методике с использованием полиэтиленгликоля.

Цитокиновый профиль в периферической крови (ИЛ-lß, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-6, INF-у, INF-a, ФНО-a) исследовали методом иммуноферментного анализа с применением тест-систем фирмы «Протеиновый контур» (Санкт-Петербург). Учет результатов производили по оптической плотности, регистрируемой с помощью иммуноферментного колориметрического анализатора «Multiscan Multisoft».

Показатели функциональной активности нейтрофи-лов изучали в тестах фагоцитарной активности с определением фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа с частицами латекса (ФАН - спонтанная и стимулированная, ФЧ - спонтанная и стимулированная) и в реакциях восстановления нитросинего тетразолия (НСТ - спонтанный и стимулированный) («Реакомплекс» г. Чита) [3].

Результаты исследований и их обсуждение

Анализ полученных данных позволил выявить значительные нарушения иммунного реагирования у детей с БЛД с различными вариантами характера обострения - по бронхообструктивному и пневмоническому типам (табл. l). В периоде обострения у детей с БОС процентное содержание лимфоцитов в крови было в l,3 раза выше, чем у больных с обострением по пневмоническому типу, клеток цитотоксиче-ского ряда (CD8+) - в 1,4 раза, натуральных киллеров (CD16+) - в 1,9 раза, активированных клеток (CD25+) - в

1,8 раза и клеток активации позднего иммунного ответа (HLA-DR+) - в 1,9 раза.

В периоде обострения наблюдали более выражен-

Таблица1

Сравнительная характеристика относительных и абсолютных значений показателей клеточного иммунитета периферической крови у детей с БЛД при обострении

Показатель Бронхобструктивный тип, n=10 Пневмонический тип, n=17

Лейкоциты 8,06±0,08 8,35±0,89

Лимфоциты, % 64,0±2,79x 48,9±3,7

Лимфоциты, абс. 5,15±0,33 4,15±0,62

CD3+, % 33,3±1,38 30,2±3,39

CD3+, абс. 1,72±0,15* 1,07±0,21

CD19+, % 17,3±4,76 15,6±2,1

CD19+, абс. 0,87±0,21 0,55±0,08

CD4+, % 27,0±4,9 26,5±3,78

CD4+, абс. 1,38±0,31 0,97±0,18

CD8+, % 26,3±4,96 19,0±2,52

CD8+, абс. 1,26±0,28 0,72±0,15

CD16+, % 26,0±2,7Л 13,8±2,23

CD16+, абс. 1,32±0,19” 0,51±0,09

CD25+, % 25,3±2,6+ 14,2±2,29

CD25+, абс. 1,25±0,27# 0,53±0,12

HLA-DR+, % 30,0±3,93+ 15,83±2,68

HLA-DR+ абс. 1,46±0,32x 0,59±0,13

ИРИ 1,17±0,2 1,42±0,18

Примечание: здесь и далее * - p<0,05, # - p<0,02, x - p<0,01, л - p<0,002, + - p<0,005, “ - p<0,001.

ную напряженность показателей гуморального звена иммунитета у детей с БОС (табл. 2), что представлено достоверным увеличением содержания всех основных классов иммуноглобулинов в сравнении с показателями у больных с обострением по пневмоническому типу.

Показатели про- и противовоспалительных цито-кинов в группе детей с обострением по пневмоническому типу (табл. 3) имеют тенденцию к значительному увеличению по сравнению с показателями в группе детей с БОС. При этом наблюдали достоверное снижение содержания INF-y (p<0,005) и повышение содержания iNF-a (p<0,001) в группе детей с БОС по сравнению с показателями группы больных с обострением по пневмоническому типу.

В периоде обострения (табл. 4) у больных с БОС выявлено достоверное снижение фагоцитарной активности нейтрофилов (p<0,001) и показателей НСТ (в спонтанных тестах - p<0,01 и в стимулированных тестах - p<0,001), при этом значения фагоцитарного числа в данной группе по сравнению с соответствующими значениями у больных с обострением по пневмоническому типу были достоверно выше в 3,5 раза - в спонтанной и в 2,7 - в стимулированной реакциях.

Следовательно, у детей с БЛД при исследовании показателей клеточного иммунитета выявлено, что период обострения по обструктивному типу протекает с увеличением числа антигенпрезентирующих

(ИЬЛ-БК+), активированных (СБ25+) и цитотоксиче-ских (СБ8+, СБ16+) клеток. Активация иммунных клеток периферической крови при этом варианте характеризовалась увеличением уровня иммуноглобулинов всех классов и усилением фагоцитарной активности, что указывает на включение клеточных механизмов в процесс ликвидации обострения по типу бронхиальной обструкции. Отсутствие увеличения числа СБ19+ клеток на фоне высокого уровня иммуноглобулинов различных классов косвенно указывает на активацию процесса дифференцировки незрелых В-лимфоцитов в зрелые формы и плазматические клетки с усилением продукции и секреции антител. Воспаление по типу бронхиальной обструкции сопровождается низким уровнем цитокинов про-и противовоспалительного свойства, что не противоречит данным литературы [1, 3]. Интересным является тот факт, что в группе с БОС имеет место достоверно низкий уровень ЮТ-у, но значимо высокое содержание ЮТ-а, что, возможно, указывает на заинтересованность в запуске механизмов различных типов воспаления интерферонового статуса [4, 8]. Низкие значения функциональных показателей клеточного иммунитета в периоде обострения у детей с обострением по пневмоническому типу, наряду с повышением секреции определяемых цитокинов (ИЛ-1Р, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-6, ЮТ-у, ФНО-а), возможно,

Таблица 2

Сравнительная характеристика показателей гуморального иммунитета периферической

крови у детей с БЛД

Показатель Бронхообструктивный тип, n=10 Пневмонический тип, n=17

Ig A 2,66±0,73 * 1,36±0,17

Ig M 2,88±0,12 л 1,84±0,20

Ig G 23,9±4,08 # 12,9±2,45

Ig E 444,5±32,0 # 168,9±79,05

ЦИК 41,0±0,57 46,4± 11,6

Таблица 3

Сравнительная характеристика показателей цитокинового профиля у детей с БЛД

Показатель Бронхообструктипный тип, n=10 Пневмонический тип, n=16

ИЛ-10 6,02±1,25 268,1±205,7

ИЛ-2 22,4±1,05 336,5±138,2

ИЛ-4 39,7±21,4 449,1±214,02

ИЛ-6 3,96±1,44 18,9±12,4

INF-y 3,73±2,15 + 34,03±7,5

INF-a 10,6±1,24 “ 5,9±0,54

ФНО-a 45,6±19,0 110,5±54,9

Таблица 4

Сравнительная характеристика функциональных показателей клеточного иммунитета периферической крови у детей с БЛД

Показатель Бронхообструктивный тип, n=10 Пневмонический тип, n=17

НСТ спонтанный 11,3±2,69+ 32,18±4,65

НСТ стимулированный 17,6±1,8“ 42,27±3,11

ФЧ спонтанная 15,6±3,54Л 4,45±1,25

ФЧ стимулированная 13,55±2,78x 5,02±1,52

ФАН спонтанная 15,5±0,28“ 38,5±3,99

ФАН стимулированная 18,0±0,57“ 48,8±5,78

свидетельствуют о снижении энергетических ресурсов клеток за счет частоты обострений.

Выводы

У детей с БЛД при обострении по типу БОС происходит активация всех звеньев системного иммунитета на фоне невысокого уровня про- и противовоспалительных цитокинов, что, видимо, указывает на участие компенсаторных реакций за счет незначительной секреции цитокинов при данном типе обострения. У детей с БЛД при обострении по пневмоническому типу выявлено снижение уровня показателей клеточного и гуморального звеньев иммунитета с дисфункцией фагоцитарной активности клеток, что, возможно, обусловлено особенностями клинического течения хронического процесса и косвенно свидетельствует об истощении энергетического потенциала иммуноцитов, в результате чего, вероятно, происходит компенсаторное повышение продукции про- и противовоспалительных цитокинов. Следовательно, имеют место диаметрально противоположные механизмы иммунной защиты при различных вариантах обострения БЛД.

Выявленные различия в иммунном реагировании у детей с БЛД при различных вариантах обострения подтверждают обоснованность использования и дифференциального подхода при выборе иммуномодулирующей терапии в комплексном лечении больных с данной патологии.

ЛИТЕРАТУРА

1. Цитокины клеток крови здоровых и больных с атопией: особенности методической интерпретации [Текст]/Е.В.Бердышев, Е.Г.Исаченко//Тихоокеанский медицинский журнал.-1999.-№3.-С.61-63.

2. Клинические особенности и течение бронхо-

легочной дисплазии [Текст]/Богданова А.В. [и

др.]//РМЖ.-2002.-№1.-С.28-32.

3. Цитокины - общая система гомеостатической регуляции клеточных функций [Текст] /Г.И.Васильева, С.Ю.Тюкавкина, И.А.Иванова//Цитология.-2001.-.№12.-СЛ101-1111.

4. Цитокины и аллергия [Текст]/Н.В.Медуницын //Иммунология. -1999. -№5 .-С.5-9.

5. Метод фенотипирования лимфоцитов в тестах розеткообразования с частицами, покрытыми моноклональными антителами [Текст]/Д.К.Новиков: методические рекомендации.-Витебск: Изд-во Витебского мед. ун-та, 2000.

6. Определение общей окислительновосстановительной активности нейтрофилов в тесте восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) [Текст]/В.В.Климов, Т.В.Кошовкина: методические указания.-М.: Изд-во ЦОЛИУВ, 1995.-6 с.

7. Цитокины и оксид азота при бронхиальной астме [Текст]/Огородова Л.М. [и др.]//Бюллетень сибирской медицины.-2002.-№1.-С.70-73.

8. Клетки иммунной системы

[Текст]/И.С.Фрейдлин, А.А.Тотолян.-СПб.: Наука,

2001.-390 с.

9. Bronchopulmonary dysplasia [Text]/Farell P.A. [et al.]//Curr. Probl. Pediatr.-1998.-Vol.27.-P.127-163.

10. Bronchopulmonary dysplasia: ante - and postnatal [Text]/A.A.Hislop//Pediatr.Pulmonol.-1997.-Vol.23.-P.71-75.

11. Bronchopulmonary dysplasia: then and now [Text]/W.H.Northway//Am. J. Dis. Child.-1990.-Vol.65.-P.1076-1081.

П □ □

УДК 612.398.145.1:615.711.17-092.9

О.А.Лебедько, С.С.Тимошин

АТРИАЛЬНЫЙ НАТРИЙУРЕТИЧЕСКИЙ ПЕПТИД КОРРИГИРУЕТ НАРУШЕНИЯ ПРОЦЕССОВ СИНТЕЗА ДНК И СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ, ИНДУЦИРОВАННЫЕ Ь-КАМЕ, В ОРГАНАХ ДЫХАНИЯ НОВОРОЖДЕННЫХ БЕЛЫХ КРЫС

Хабаровский филиал ГУДНЦ ФПД СО РАМН - НИИ охраны материнства и детства, Дальневосточный государственный медицинский университет

РЕЗЮМЕ

Пятикратное введение Ь-КАМЕ (внутри-брюшинно, в дозе 9,3*10-5 М/кг, ежедневно, с 2 по 6 сутки постнатального развития) стимулировало ДНК-синтетическую активность гладких миоцитов в бронхах белых крыс на фоне активации процессов свободнорадикального окисления в легких. Атриальный натрийуретический пептид (вводимый в аналогичном режиме, через 30 минут после инъекции Ь-КАМЕ) в дозе 3,2*10'8 М/кг нивелировал эффекты Ь-КАМЕ.

SUMMARY

O.A.Lebedko, S.S.Timoshin

ATRIAL SODIUM UREIC PEPTID CORRECTS L-NAME - INDUCED DNA SYNTHESIS AND FREE-RADICAL OXIDATION IN RESPIRATORY ORGANS OF NEWBORN WHITE RATS

L-NAME injected 5 times (intraperitoneally, at a dose 9,3*10'5 М/kg, daily, on the 2-6 days of the postnatal period) stimulated DNA synthetic activity of smooth myocytes in bronchi of white rats with free-radical oxidation processes in lungs