64
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
Цитогенетический анализ G-бандированных мета-фазных хромосом клеток выявил мономорфность возможных кариотипических аберраций — возникновение поломок хромосомного материала разной локализации, не стимулирующих клетки к онкогенезу. Проведенный нами молекулярный анализ подтвердил случайный (неклональный) характер выявляемых хромосомных поломок.
В свете полученных данных, на данном этапе использования СК в целях регенеративной медицины, эМСК предлагается рассматривать как наиболее генетически безопасные, а, следовательно, более перспективные клеточные линии. Работа выполнена в рамках гранта РНФ № 22-74-10126.
ОСОБЕННОСТИ ЭКСПРЕССИИ ФЕРМЕНТОВ ОСНОВНОГО ПУТИ СИНТЕЗА ЦЕРАМИДОВ DE NOVO В ЖИРОВОЙ ТКАНИ СЕРДЦА И СОСУДОВ ПАЦИЕНТОВ С СЕРДЕЧНОСОСУДИСТЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ
О.В. Груздева, Ю.А. Дылева, Е.В. Белик,
A.В. Понасенко, А.О. Поддубняк, А.Г. Кутихин,
B.Е. Маркова, С.В. Иванов, О.Л. Барбараш
ФГБНУ НИИ комплексных проблем сердечнососудистых заболеваний, Кемерово, Россия
e-mail: o_gruzdeva@mail.ru
Ключевые слова: церамиды, ферменты синтеза de novo, сердечно-сосудистые заболевания
Церамиды, являясь биологически активными липи-дами и основными составляющими сигнальных путей сфинголипидов в клетках, участвуют во многих фундаментальных клеточных процессах и способны индуцировать воспаление и апоптоз. Церамиды и изменения в их соотношении, согласно данным клинических исследований, рассматриваются в качестве новых предикторов риска сердечно-сосудистых заболеваний независимо от традиционных факторов риска. Однако в основном область научного интереса в исследованиях касается изучения уровня церамидов в плазме крови, в то время как необходимо понимать, как синтезируются и в каком соотношении эти биологические молекулы в непосредственной близости от сердечной мышцы.
Цель: оценить уровень экспрессии ферментов основного пути синтеза церамидов в жировой ткани пациентов различной локализации у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями.
Материалы и методы. В исследование включено 20 пациентов с ИБС и показаниями к прямой реваскуля-ризации миокарда методом коронарного шунтирования (КШ). Группу сравнения составили 18 пациентов с неко-ронарогенными патологиями сердца (приобретенные неревматические пороки сердца — митральный и аортальный стеноз / недостаточность). Во время проведения оперативного вмешательства были получены биоптаты подкожной, эпикардиальной и периваскулярной жировой ткани. Для измерения экспрессии генов ферментов синтеза церамидов пути de novo (SPTLC1 — ген серинпальми-тоилтрансферазы субъединица С1, SPTLC2 — ген серин-пальмитоилтрансферазы субъединица С2, CERS6 — ген церамидсинтазы 6, DEGS1 — ген дигидроцерамиддеса-туразы субъединица 1 ) использовался метод количественной ПЦР с праймерами, синтезированными ЗАО «Евроген» (г. Москва, Россия), на амплификаторе ViiA 7 (Applied Biosystems, США). Нормирование результатов
ПЦР проводилась с помощью референсных генов ACB, GAPDH, B2M. Анализ уровня ферментов синтеза церамидов пути de novo в ЖТ пациентов был проведен методом иммуноблоттинга (вестерн-блоттинг) с использованием поликлональных антител кролика (SPTLC1 Antibody, CSB-PA022639ESR1HU-100, SPTLC2 Antibody, CSB-PA022640LA01HU-100, CERS6 Antibody, CSB-PA751145LA01 HU-100, DEGS1 Antibody, CSB-PA617990-100, Cusabio, Китай) и антител козла к бета-тубулину (контроль загрузки, ab21057, 1:1000, Abcam). Статистический анализ полученных результатов проводили в программе GraphPad Prism 8 (GraphPad Software).
Результаты. Результаты экспрессии генов интереса среди пациентов с ИБС демонстрируют более высокую экспрессию гена ключевого фермента пути de novo SPTLC1 и фермента завершающей стадии синтеза церамидов DEGS1 в образцах ПЖТ (р=0,0002 и р=0,023 со-ответственоо) и эЖт (р=0,015 и р=0,031 соответственно) в сравнении с ПВЖТ. Уровень генной экспрессии SPTLC2 был выше только в образцах ЭЖТ в сравнении в ПВЖТ (р=0,013). Экспрессия СERS6 была максимальной в ЭЖТ в сравнении с ПЖТ (р=0,010) и ПВЖТ (р=0,003). В группе пороков сердца образцы ЖТ не отличались по уровню экспрессии SPTLC1, SPTLC2 и СERS6, в то время как генная экспрессия DEGS1 в образцах ЭЖТ была выше чем в ПЖТ (р=0,014). При этом пациенты с ИБС отличались более высокой экспрессией SPTLC1 в ПЖТ (Р=0,00003), ЭЖТ (Р=0,0022) и SPTLC2 в образцах ЭЖТ (Р=0,039). Генная экспрессия СERS6 не имела межгрупповых различий. DEGS1 был более экспрессирован в ПЖТ (р=0,029) и ЭЖТ (р=0,035) пациентов с ИБС, чем в группе сравнения.
Заключение. Таким образом, коронарогенная патология сердца сопровождается активацией синтеза церами-дов по пути de novo и усиленной экспрессией ключевых ферментов этого пути (серинпальмитоилтрансферазы субъединица С1 и С2, церамидсинтазы 6, дигидроцерамид-десатуразы субъединица 1) в отличие от пациентов с приобретенными пороками клапанов сердца. Работа выполнена в рамка гранта РНФ № 22-15-20007 «Церамидный профиль локальных жировых депо сердца: клинико-патоге-нетическое значение и терапевтический потенциал».
ПРЕКОНДИЦИОНИРОВАНИЕ КЛЕТОК КАРДИОСФЕР С ПОМОЩЬЮ ЛИПОПОЛИСАХАРИДОВ ВЫЗЫВАЕТ УСИЛЕНИЕ СЕКРЕЦИИ ПРОАНГИОГЕННЫХ ФАКТОРОВ
А^. Гусева, К.В. Дергилев, Е.С. Зубкова, А.В. Андреев, М.Ю. Меньшиков, З.И. Цоколаева, И.Б. Белоглазова, Ю.Д. Гольцева, Р.С. Акчурин, Е.В. Парфенова
ФГБУ НМИЦК им. ак. Е.И. Чазова Минздрава России, Москва, Россия
e-mail: doctorkote@gmail.com
Ключевые слова: кардиосферы, ангиогенез, липополисахариды.
Клетки кардиосфер рассматривается в качестве перспективного инструмента клеточной терапии заболеваний сердца, обладающего высоким терапевтическим потенциалом за счет секреции биологически активных соединений, микровезикул/экзосом. В настоящее время ведется активный поиск подходов, направленных на модуляцию секретома клеток кардиосфер с целью его
Гены & Клетки XVII, №3, 2022