CC BY
67
резервов ауторегуляции доказывает влияние опухоли головного мозга на реактивность мозговых сосудов.
Таким образом, опухоли головного мозга супратен-ториальной локализации в связи с повышением внутричерепного давления приводят к повышению пуль-сативного индекса в основных церебральных артериях и значимо не влияют на среднюю скорость кровотока в артериях основания мозга. Опухоли этой локализации
снижают реактивность церебральных сосудов на физическую нагрузку у 47% пациентов и на гипокапниче-скую нагрузку — у 44%. Максимальное нарушение ауторегуляции выявляется на гиперкапническую нагрузку (у 73% пациентов). Опухоль влияет на показатели кровообращения симметрично, вызывая изменения показателей кровообращения, как на стороне опухолевого процесса, так и на противоположной стороне.
ЛИТЕРАТУРА
1. Белкин А.А. Алашеев А.М., Инюшкин С.Н. Транскраниальная допплерография в интенсивной терапии. — Петрозаводск: ИнтелТек, 2006. — 103 с.
2. Бояринов Г.А., Болоничев А.М., Грибков A.B., Григорьева В.В. Изменение мозгового кровотока, внутричерепного и пер-фузионного давления у нейрохирургических больных во время вводного наркоза диприваном // Анест. и реаниматол. — 2001. — №2. — С. 43-45.
3. Розуменко В.Д. Нейроонкология: современное состояние проблемы // Онкология. — 2006. — Т. 8, №2. — С. 188-191.
4. Лелюк В.Г., Лелюк С.Э. Ультразвуковая ангиология. — М.: Реальное Время, 1999. — 288 с.
5. Лосев Ю.А. Эпидемиология первичных опухолей головного мозга в сельской местности (на модели Ленинградской области): Автореф. дис. ... канд. мед. наук. — СПб., 2003. — 22 с.
6. Свистов Д.В., Парфенов В.Е. Полуколичественная доп-плерографическая оценка ауторегуляции кровоснабжения головного мозга в норме и при нейрохирургической патологии // Вопр. нейрохир. — 1998. — №1. — С.28-34.
7. Davis F.G., Malinsky N., Haenszel W., et al. Primary brain tumor incidens rates in four United States regions, 1985-1989: a pilot study // Neuroepidemiology. — 1996. — Vol. 15. — P. 103112.
8. Ding Y., Hua Y., Duan A. Clinico-transcranial Doppler sonography monitoring on vasospasm and delayed cerebral ischemia after resection of intracranial tumors // Zhonghua Wai Ke Za Zhi. — 1997. Vol. 35, N. 9. — P. 522-526.
9. Chang C-Ch., Kuwana N., Ito S., et al. Effects of peritumoral oedema on cerebral blood flow and cerebrovascular reactivity in patients with alert consciousness // Eur. J. Nuclear Medicine. — 1999. — Vol. 26, N. 11. — P. 1493-1496.
10. Gosling R.G., King D.H. Arterial assessment by Doppler-shift ultrasound // Proc. Roy Soc. Med. — 1974. — Vol. 67. — P.447-449.
11. Kleihouse P., Cavanee W.K. World Health Organization. Classifications of Tumors: Tumors of the Nervous System — Pathology and Genetics. — Lyon, France: IARC Press, 2000. — 314 p.
12. Schimieder K., Schregel W., Engelhardt M., et al. Cerebral vascular reactivity response to anaesthetic induction with propofol in patient with intracranial space-occupying lesions and vascular malformation // Eur. J. Anaesth. — 2003. — Vol. 20. — P. 457-460.
13. Ursino M., Giulioni M., Lodi C.A. Relationships among cerebral perfusion pressure, autoregulation, and transcranial Doppler waveform: a modeling study // J Neurosurg. — 1998. — Vol. 89. — P. 255-266.
Информация об авторах: 644043, Омск-43, ул. Ленина, 12. Тел. сл. 8 (3812) 23-03-78; e-mail: [email protected]
Сбоев Антон Юрьевич — аспирант кафедры,
Долгих Владимир Терентьевич — заслуженный деятель науки РФ, д.м.н., профессор, заведующий кафедрой,
e-mail: [email protected];
Ларькин Валерий Иванович — д.м.н., заведующий кафедрой неврологии и нейрохирургии.
© ЧМЕЛЕВСКАЯ Н.В., ИЛЛАРИОНОВА Е. А., СЫРОВАТСКИЙ И. П., ЛУКЬЯНОВА В.А., ЛУКОШКИНА Т.В. — 2011 УДК 543.544.943.3.068.7:615.07
ОПТИМИЗАЦИЯ УСЛОВИЙ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО АНАЛИЗА ПИКАМИЛОНА МЕТОДОМ «ЛАТИНСКОГО КВАДРАТА»
Наталья Владимировна Чмелевская1, Елена Анатольевна Илларионова2, Игорь Петрович Сыроватский2, Валентина Алексеевна Лукьянова1, Татьяна Васильевна Лукошкина1 ('Иркутское областное бюро судебно-медицинской экспертизы, гл. врач — к.м.н., доц. В.Н.Проскурин; ^Иркутский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф. И.В. Малов, кафедра фармацевтической и токсикологической химии, зав. — д.х.н., проф. Е.А. Илларионова,)
Резюме. Путем математического планирования эксперимента методом «латинского квадрата» изучено влияние двух факторов на хроматографическое поведение пикамилона, кислоты никотиновой и кислоты у-аминомасляной. В качестве фактора «А» использовали различные органические растворители, фактора «В» — ледяную уксусную кислоту и 25% раствор аммиака, которые влияют на рН системы растворителей. Определено, что на хроматографическое поведение пикамилона, кислоты никотиновой и кислоты у-аминомасляной оказывает влияние второй фактор. Оптимизированы условия хроматографического анализа и разработана методика контроля чистоты пика-милона методом тонкослойной хроматографии.
Ключевые слова: пикамилон, кислота никотиновая, кислота у-аминомасляная, контроль чистоты, метод «латинского квадрата», метод тонкослойной хроматографии.
OPTIMIZATION OF CONDITIONS OF CHROMATOGRAPHIC ANALYSIS OF PIKAMYLONE BY THE METHOD OF «LATIN SQUARE»
N.V. Chmelevskaya1, E. A. Illarionova2,1.P. Syrovatskiy2, V.A. Lukyanova1, T.V. Lukochkina1 (1Irkutsk Regional Bureau of Forensic Medical Examenation; 2Irkutsk State Medical University)
Summary. With the help of mathematical planning an experiment by the method of «Latin square» there was studied the influence of two factors on chromatographic behavior of pikamylone, nicotine acid and acids y-aminobutyric. As factor A there were used the different organic solvents, factor B — icy acetic acid and 25% solution of ammonia, which influence upon pH systems of solvents. It has been determined that the second factor influenced upon the chromatographic behaviors of pikamylone, nicotine acids and acids y-aminobutyric. The conditions of chromatographic analysis have been optimized and the method of control of pikamylone purity by the method of thin-layer chromatography has been developed.
Key words: pikamylone, nicotine acid, acid y-aminobutyric, checking the purity, method «Latin square», method of thin-layer chromatography.
Таблица 1
План «латинского квадрата» для пикамилона и его примесей
А ЛУК 1 2 3 4 5 ЛУК 1 2 3 4 5 ЫИ3 (25%) 1 2 3 4 5 ЫИ3 (25%) 1 2 3 4 5 ЛУК:ЫИ3 (25%) (1:1)
в 12 3 4 5
5 6 Ацетон 7 8 9 ■
■
■
5 6 Метанол 7 8 9 ■
■
5 6 Этанол 7 8 9 ■
■
■
5 6 Бутанол 7 8 9
■
■
■
5 6 ИПС 7 8 9
■
■
■
Г
Одной из важнейших характеристик лекарственных препаратов является их чистота. Объектом настоящего исследования был выбран пикамилон, широко применяемый в медицинской практике для лечения заболеваний, связанных с нарушением мозгового кровообращения легкой и средней тяжести, состояний тревоги, страха, повышенной раздражительности, абстиненции у больных алкоголизмом. Большое значение для повышения качества лекарственных средств имеет контроль специфических примесей, которыми, как правило, являются исходные продукты и полупродукты синтеза. Специфические примеси могут присутствовать в основном препарате и оказывать токсическое действие, если их количество превышает норму.
Пикамилон в качестве таких примесей может содержать кислоту никотиновую и кислоту у-аминомасляную. В действующей НД [3,4] контроль специфических примесей в данном препарате проводят методом тонкослойной хроматографии на пластинках Силуфол УФ-254 или Сорбфил ПТСХ-11-А-УФ, используя систему растворителей углерод четыреххлористый — спирт метиловый — кислота уксусная ледяная (30:7:4) при анализе субстанции пикамилона [3] и кислота уксусная ледяная — ацетон — спирт метиловый — бензол (5:5:20:70) при анализе пикамилона в таблетках [4]. Предложенный НД [3,4] хроматографический способ контроля чистоты пикамилона требует использования сложных систем и высокотоксичных растворителей.
Цель настоящего исследования — разработка экспрессной методики обнаружения и разделения всех возможных примесей пикамилона.
Материалы и методы
В работе использовали субстанцию пикамилона, таблетки пикамилона по 0,05г, отвечающие требованиям нормативного документа [3,4], , кислоту никотиновую (ФС 42-2357-00), кислоту у-аминомасляную (ФС 42-1903-89) (хч), органические растворители: метанол (ГОСТ 6995-77) квалификации хч, этанол ректифицированный (ГОСТ 5962-67), изопропанол (ГОСТ 9805-84), ацетон (ГОСТ 2603-79) квалификации чда, кислоту уксусную ледяную квалификации хч (ГОСТ 61-75), бутанол квалификации осч; 25% раствор аммиака (ГОСТ 3760-79), готовые пластинки «Силуфол УФ-254», «Сорбфил УФ-254» (ТУ 26-11-17-89), «Армсорб УФ-254» (ТУ 6-09-37-918-88).
Выбор оптимальной системы растворителей проводили с помощью математического планирования эксперимента по методу «латинского квадрата» [1]. При составлении плана «латинского квадрата» считали все использованные факторы независимыми, хотя на практике они могут в определенной степени взаимодействовать. План «латинского квадрата» включал по одному варианту хроматографирования в каждом столбце и в каждой строке. Путем математического планирования эксперимента методом «латинского квадрата» изучили влияние двух факторов на хроматографическое поведение пикамилона, кислоты никотиновой и кислоты у-аминомасляной [1]. В качестве фактора А использовали различные органические растворители (ацетон, метанол, этанол, бутанол и изопропиловый спирт (ИПС)), а в качестве фактора В — ледяную уксусную кислоту (ЛУК) и 25% раствор аммиака, которые в зависимости от их количества влияют на величину рН системы рас-
Таблица 2
Результаты хроматографирования пикамилона, кислоты никотиновой и кислоты у-аминомасляной
^creMa рacтвoритeлeй Знaчeния Rf
Пикaмилoн Kиcлoтa никoтинoвaя Kиcлoтa Y-aминo- мacлянaя
Aцeтoн-ЛУK (У:З) 0,0s±0,0! 0,УУ±0,0! 0,!У±0,0!
Aцeтoн-ЛУK (З:2) 0,У4±0,0! 0,УS±0,0! 0,09±0,0!
Aцeтoн-[NH3 2s%] (9:!) 0,!У±0,0! 0,2s±0,0! 0,02±0,0!
Aцeтoн-[NH3 2s%] (б:4) 0,ЗS±0,0! 0,9s±0,0! 0,б2±0,0!
Aцeтoн- ^K-NH3 2s% (!:!)] (s:s) 0,З!±0,0! 0,ЗS±0,0! 0,У9±0,0!
Meтaнoл-ЛУK (З:2) 0,6s±0,0! 0,У9±0,0! 0,4У±0,0!
Meтaнoл-ЛУK (9:!) 0,У0±0,0! 0,ЗЗ±0,0! 0,4s±0,0!
Meтaнoл-[NH3 2s%] (б:4) 0,ЗУ±0,0! 0,92±0,0! 0,У0±0,0!
Meтaнoл-[NH3 2s%] (s:s) 0,90±0,0! 0,92±0,0! 0,УУ±0,0!
Meтaнoл-[ЛУK-NH3 2s% (!:!)] (У:З) 0,бУ±0,0! 0,УУ±0,0! 0,Уб±0,0!
Этaнoл-ЛУK (9:!) 0,У0±0,0! 0,У2±0,0! 0,ЗУ±0,0!
Этaнoл-ЛУK (б:4) 0,49±0,0! 0,бУ±0,0! 0З9±0,0!
Этaнoл-[NH3 2s%] (s:s) 0,З2±0,0! 0,ЗУ±0,0! 0,б3±0,0!
Этaнoл-[NH3 2s%] (У:З) 0,У0±0,0! 0,З!±0,0! 0,3s±0,0!
Этaнoл-[ЛУK- NH3 2s% (!:!)] (З:2) 0,У0±0,0! 0,УУ±0,0! 0,ss±0,0!
Бyтaнoл-ЛУK (s:s) 0,2б±0,0! 0,SУ±0,0! 0,! s±0,0!
Бyтaнoл-ЛУK (У:З) 0,3 ! ±0,01 0,б3±0,0! 0,! ! ±0,0!
Бyтaнoл-[NH3 2s%] (З:2) 0,2У±0,0! 0,З!±0,0! 0,03±0,0!
Бyтaнoл-[NH3 2s%] (9:!) 0,2!±0,0! 0,2s±0,0! 0,02±0,0!
Бyтaнoл-[ЛУK- NH3 2s% (!:!)] (б:4) 0^У±0,0! 0,SУ±0,0! 0,44±0,0!
ИПC-ЛУK (б:4) 0,З2±0,0! 0,бЗ±0,0! 0,24±0,0!
ИПC-ЛУK (s:s) 0,24±0,0! 0,4б±0,0! 0,!У±0,0!
ИПС- [NH3 2s%] (У:З) 0,бУ±0,0! 0,УЗ±0,0! 0,2У±0,0!
ИПC- [NH3 2s%] (З:2) 0,s!±0,0! 0,SЗ±0,0! 0,!З±0,0!
ИПС- [ЛУK- NH3 2s% (!:!)] (9:!) 0,ss±0,0! 0,б3±0,0! 0,2З±0,0!
графирования пикамилона, кислоты никотиновой и кислоты у-аминомасляной представлены в табл.2.
Для разделения веществ важное значение имеет ARf между зонами. Поэтому в дальнейшем план «латинского квадрата» упростили, заменив значения Rf пятен на ARf Эти данные были использованы для установления влияния определенных выше факторов А и В на хроматографическое
поведение пикамилона и его примесей методом дисперсионного анализа по известной методике [1]. По результатам дисперсионного анализа установили, что оба фактора являются значимыми, но меньшее влияние на хроматографическое разделение исследуемых веществ оказывает органический растворитель (фактор А). Более значимым для хроматографического разделения пикамилона, кислоты никотиновой и кислоты у-аминомасляной является фактор В, влияющий на рН системы растворителей. В связи с этим в дальнейших экспериментах варьировали этим фактором.
Анализ значений ARf между зонами показал, что наибольшее значение ARf имеет для системы растворителей с ацетоном, причем вторым компонентом хроматографической системы является 25% раствор аммиака. Была поставлена серия экспериментов с системами растворителей состава ацетон — 25% раствор аммиака, в которых варьировалось количество аммиака. Результаты хроматографирования представлены на рис.1.
Н а
творителей. Выбор данных факторов основывался на физико-химических свойствах пикамилона, кислоты никотиновой и кислоты у-аминомасляной. Пикамилон, представляющий собой натриевую соль обладает более выраженными основными свойствами, кислоты никотиновая и у-аминомасляная, являясь амфотерными соединениями, различаются между собой основными свойствами.
Данные представлялись в виде средних (М) и ошибок средних (m).
Результаты и обсуждение
Схема планирования опытов по методу «латинского квадрата» представлена в табл.1, а результаты хромато-
основании анализа экс-перимен-тальных данных, представленных на рис.1, определено, что хроматографическое разделение исследуемых веществ наблюдается в системах 1 и 2. В системах 3, 4, 5 и 6 зоны веществ имеют вытянутую форму и не разделяются. Наибольшее значение
AR
Рис. 2. Хроматограмма модельной смеси пикамилона и возможных примесей в оптимальной системе растворителей
1 — раствор пикамилона (Rf 0,37-0,38)
2 — раствор модельной смеси пикамилона, кислоты никотиновой и кислоты у-амино масляной
3 — раствор кислоты никотиновой (Rf 0,60-0,61)
4 — раствор кислоты у-аминомасляной (Rf
0,06-0,07) f
Рис. 1. Зависимость значения Rf пикамилона и его примесей от соотношения компонентов системы растворителей ацетон — раствор аммиака 25%
Номер кривой соответствует: I-пикамилон; II-кислота никотиновая; III-кислота у-аминомасляная
Примечание: Состав системы растворителей (СР): 1) ацетон-25% раствор аммиака(10:1,5);
2) ацетон-25% раствор аммиака (10:2,0); 3) ацетон-25% раствор аммиака (10:2,5);
4) ацетон-25% раствор аммиака (10:3,0); 5) ацетон-25% раствор аммиака (10:3,5);
6) ацетон-25%раствор аммиака (10:4,0).
между зонами пикамилона, кислоты никотиновой и кислоты у-аминомасляной наблюдается в системе 1, которая является оптимальной для контроля чистоты пикамилона.
Методика определения чистоты пикамилона: 0,2 г препарата растворяют в 10 мл спирта 95% и перемешивают. На линию старта пластинки «Армсорб» или Сорбфил» размером 7,5x15 см микропипеткой наносят 0,005 мл (100 мкг) раствора пикамилона. Рядом наносят 0,002 мл (0,4 мкг) 0,002% раствора стандартного образца вещества-свидетеля (COВC) кислоты никотиновой в спирте этиловом 95% и 0,001 мл (0,1 мкг) 0,01% водноспиртового раствора COВC кислоты у-аминомасляной. Пластинку сушат на воздухе в течение 5 минут, а затем помещают в камеру со смесью растворителей: ацетон —
25% раствор аммиака (10:1,5) и хроматографируют восходящим методом. Когда фронт растворителя пройдет почти до конца пластинки, её вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 20 мин и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм, а затем опрыскивают 1% раствором нингидрина в спирте этиловом 95%. На хроматограмме анализируемого образца наблюдается пятно, соответствующее пикамилону с Я- 0,37-0,38. Пятно примеси кислоты никотиновой (И- 0,60-0,61) на хроматограмме испытуемого препарата не должно превышать по величине и интенсивности пятно стандартного образца вещества свидетеля (СОВС) кислоты никотиновой (не более 0,4% в препарате), пятно примеси кислоты у-аминомасляной (^ 0,06-0,07) на хроматограмме испытуемого препарата не должно превышать по величине и интенсивности пятно СОВС кислоты у-аминомасляной (не более 0,1% в препарате).
Результаты хроматографирования считаются до-
стоверными, если соблюдаются условия пригодности хроматографической системы. Для проверки пригодности хроматографической системы была проведена апробация выбранных условий хроматографического анализа пикамилона на модельной смеси, состоящей из одинаковых количеств препарата и возможных примесей. На рис.2 представлена модельная хроматограмма, показывающая, что выбранные условия хроматографирования являются оптимальными и позволяют разделять пикамилон, кислоту никотиновую и кислоту у-аминомасляную. По данной методике было проанализировано 10 серий пикамилона.
Taким образом, в результате проведенных исследований была разработана унифицированная методика хроматографического контроля чистоты пикамилона в субстанции и таблетках, которая позволила использовать более простую по составу и не содержащую высокотоксичных компонентов систему растворителей.
ЛИТЕРАТУРА
1. Беликов В.Г., Пономарев В.Д., Коковкин-Щербак Н.И. Применение математического планирования и обработка результатов эксперимента в фармации — М.: Медицина, 1973. — 232 с.
2. Гейсс Ф. Основы тонкослойной хроматографии (планар-
ная хроматография) — Пер. с англ. — М.: Мир, 1999. — 611 с.
3. Фармакопейная статья предприятия ЗАО «НПК ЭХО» 42-02901618 — 05. Пикамилон. — М., 2005. — 10 с.
4. Фармакопейная статья предприятия ЗАО «НПК ЭХО» 42-02901295 — 06. Пикамилон таблетки. — М., 2006. — 9 с.
Информация об авторах: 664003, г. Иркутск, ул. Карла Маркса, 10, тел. (395) 243447 Чмелевская Наталья Владимировна — судебно-медицинский эксперт; Илларионова Елена Анатольевна — заведующая кафедрой, профессор, д.х.н.; Сыроватский Игорь Петрович — доцент кафедры, к.ф.н.;
Лукьянова Валентина Алексеевна; — судебно-медицинский эксперт; Лукошкина Татьяна Васильевна — судебно-медицинский эксперт.
© ЛИШМАНОВ Ю.Б., КРИВОНОГОВ Н.Г., АГЕЕВА Т.С., ДУБОДЕЛОВА A.B. — 2011 УДК 616.24 — 002.5 — 003.2: 616.24 — 006.6 — 031.62 — 031.21] — 073.916 — 079.4
ВЕНТИЛЯЦИОННО-ПЕРФУЗИОННАЯ ПУЛЬМОНОСЦИНТИГРАФИЯ В ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ИНФИЛЬТРАТИВНОГО ТУБЕРКУЛЕЗА ЛЕГКИХ И ПЕРИФЕРИЧЕСКОГО РАКА ЛЕГКОГО ПРИ ВЕРХНЕДОЛЕВОЙ
ЛОКАЛИЗАЦИИ ПРОЦЕССА
Юрий Борисович Лишманов1, Николай Георгиевич Кривоногое1,
Татьяна Сергеевна Агеева2, Анна Валентиновна Дубоделова2 ('Научно-исследовательский институт кардиологии СО РАМН, директор — д.м.н., акад. РАМН, проф. P.C. Карпов, лаборатория радионуклидных методов исследования, рук. — д.м.н., член-корр. РАМН, проф. Ю.Б. Лишманов; Сибирский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., акад. РАМН, проф. В.В. Новицкий, кафедра пропедевтики внутренних болезней, зав. — д.м.н., проф. Ф.Ф. Тетенев)
Резюме. 17 пациентам с верифицированным диагнозом инфильтративного туберкулеза легких (ИТЛ) и 10 — периферического рака легкого (ПРЛ), проведена вентиляционно-перфузионная пульмоносцинтиграфия. Выполнен анализ вентиляционно-перфузионного соотношения (V/Q), верхушечно-основного градиента вентиляции (U/L-V) и перфузии (U/L-q) легких, альвеолярно-капиллярной проницаемости (АКП). Сцинтиграфические исследования выполнены на гамма-камере «0мега-500» («Technicare» США-Германия). Установлено, что для ПРЛ в отличие от ИТЛ, характерно увеличение V/Q-соотношения на стороне поражения выше 1,13 при одновременном его снижении в интактном легком, снижение U/L-Q в пораженном легком, замедление АКП в пораженном легком на 30-й мин после ингаляции радиоаэрозоля. Результаты исследования могут быть использованы в качестве дополнительных сцинтиграфических признаков для оптимизации дифференциальной диагностики между инфильтративным туберкулезом легких и периферическим раком легких при верхнедолевой локализации процесса.
Ключевые слова: альвеолярно-капиллярная проницаемость, периферический рак легкого, инфильтративный туберкулез легких
VENTILATION-PERFUSION PULMONOSCINTIGRAPHY IN DIFFERENTIAL DIAGNOSTICS OF INFILTRATIVE PULMONARY TUBERCULOSIS AND PERIPHERAL PULMONARY CANCER IN UPPER LOBE PROCESS LOCALIZATION
Yu.B. Lishmanov1, N.G. Krivonogov1, T.S. Ageeva2, A.V. Dubodelova2 ('Cardiology Research Iinstitute of Siberian Department of Russian Academy of Medical Sciences;
2The Siberian State Medical University)
Summary. 27 patients with the upper lobe localization of the process: 17 patients with the verified diagnosis of infiltrative pulmonary tuberculosis (IPT) and 10 patients with peripheral pulmonary cancer (PPC) underwent ventilation-perfusion pulmonoscintigraphy aimed at searching for additional possibilities to optimize differential diagnostics of the diseases. We performed the analysis of the ventilation-perfusion ratio (V/Q), lung apical-basal grades ventilation (U/L-V) and perfusion
