CC BY
136
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТАНИНОВ В ВОДЯНИКЕ ГЕРМАФРОДИТНОЙ (EMPETRUM HERMAPHRODITUM)
Струсовская О.Г., Буюклинская О.В., Бурдейная К.В., Байкин П.И.
Северный государственный медицинский университет, кафедра фармации и фармакологии г. Архангельск
Растительные танины относятся к одной из наиболее распространенных групп полифенольных соединений, обладающих антирадикальной, антиоксидантной и иммуномодулирующей активностью. Целью настоящей работы являлось количественное определение танинов, содержащихся в траве Empetrum hermaphroditum (Empetraceae L.), произрастающей на островах Соловецкого архипелага. В ходе проведенных исследований установлено, что в химическом составе Empetrum hermaphroditum присутствуют фенольные соединения в общем количестве около 14%, из которых проантоцианидины составляют около 1%, гидролизуемые танины - 13%.
Растительные танины относятся к одной из наиболее распространенных групп полифенольных соединений и подразделяются на конденсированные и гидролизуемые. Танины обладают антирадикальной, антиоксидантной и иммуномодулирующей активностью /1,2/.
Целью настоящей работы являлось количественное определение танинов, содержащихся в траве Empetrum hermaphroditum (Empetraceae L.).
Объектом исследования служило воздушно-сухое сырье Empetrum hermaphroditum, собранное в июле 2011 г на территории островов Соловецкого архипелага. Для определения соединений фенольной структуры использовали метод Фолина-Чокальтеу в модификации Makkar/3/. С этой целью около 2 г (точная масса) измельченного и просеянного через лабораторные сита С30/50 (ГОСТ 3826-82) с размером отверстий 1 мм, воздушно-сухого сырья Empetrum hermaphroditum, помещали в коническую колбу со шлифом, прибавляли 50 мл /4/ смеси: ацетон (ТУ 6-09-3513-82) - вода очищенная (ФС 422619-97) (вода), в соотношении 7:3 по объему (70% раствор ацетона) /3/. Колбу закрывали стеклянной крышкой и помещали на лабораторное перемешивающее устройство ЛАБ-ПУ-02 (Россия) на 60 мин. Полученное извлечение фильтровали в мерную колбу вместимостью 50 мл через бумажный фильтр «синяя лента» (ТУ 03-11-03) и объем раствора в колбе доводили до метки 70% раствором ацетона. 25 мл полученного раствора переносили пипеткой в мерную колбу вместимостью 50 мл. Объем раствора в колбе доводили до метки 70% раствором ацетона (раствор А).
В качестве стандартного образца (РСО) использовали 0,1 мг/мл раствор танина (Sigma Aldrich CAS 1401-55-4). Для приготовления раствора РСО 0,05 г танина (точная масса) помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяли в 30 мл воды и объем в колбе доводили тем же растворителем до метки. 1 мл полученного раствора переносили в мерную колбу вместимостью 10 мл. Объем раствора в колбе доводили водой до метки (раствор Б).
Содержание суммы фенольных соединений в экстракте рассчитывали по градуировочному графику (рис. 1).
Рис. 1 Градуировочный график раствора РСО танина
Empetrum hermaphroditum
Для построения градуировочного графика готовили серию растворов, содержащих по 1; 2; 3; 4; 5 мкг/мл РСО танина. С этой целью навеску раствора Б помещали в мерную колбу вместимостью 10 мл, прибавляли реактив Фолина-Чокалтеу и 20% водный раствор натрия карбоната (ГОСТ 83-79), объем раствора в колбе доводили водой до метки (табл. 1). Таблица 1
Приготовление растворов РСО танина для построения градуировочного графика
раствор Б, мл вода, мл реактив Фолина-Чокалтеу, мл раствор натрия карбоната 20% содержание танина в растворе, мкг/мл оптическая плотность раствора
0 2,0 0,25 1,25 0 0
0,1 2,0 0,25 1,25 1 0,112
0,2 2,0 0,25 1,25 2 0,218
0,3 2,0 0,25 1,25 3 0,285
0,4 2,0 0,25 1,25 4 0,371
0,5 2,0 0,25 1,25 5 0,449
Растворы перемешивали, колбы укупоривали и выдерживали при комнатной температуре в защищенном от света месте в течение 40 мин, после чего определяли их оптическую плотность на спектрофотометре СФ-56А в кварцевых кюветах с толщиной слоя 1 см при длине волны 725 нм относительно раствора сравнения. Раствор сравнения представлял собой смесь реагентов без добавления РСО танина (раствор В). Для определения суммы фенольных соединений в экстракте Етре^ит hermaphroditum 20 мкл раствора А помещали в мерную колбу вместимостью 10 мл, прибавляли 2 мл воды, 0,25 мл реактива Фолина-Чокалтеу и 1,25 мл 20% раствора натрия карбоната. Объем раствора в колбе
доводили водой до метки. Колбу укупоривали и выдерживали при комнатной температуре в течение 40 мин в защищенном от света месте. Оптическую плотность исследуемого раствора определяли относительно раствора сравнения (раствор В).
С целью определения конденсированных танинов (проантоцианидинов) 0,5 мл раствора А помещали в термостойкую коническую колбу со шлифом, прибавляли 3 мл смеси, состоящей из 95 мл н-бутанола (ГОСТ 6006-78) и 5 мл кислоты хлористоводородной концентрированной (ГОСТ 3118-77) и 0,1 мл 2% раствора квасцов железоаммонийных в 2 Моль/л растворе кислоты хлористоводородной. Смесь перемешивали, закрывали пробкой и помещали на кипящую водяную баню на 1 час, после чего раствор охлаждали и количественно переносили в мерную колбу вместимостью 10 мл с помощью 70% раствора ацетона. Объем раствора в колбе доводили тем же растворителем до метки и измеряли оптическую плотность полученного раствора при 550 нм относительно раствора сравнения, представляющего собой смесь реагентов без раствора А. Содержание проантоцианидинов (%) в пересчете на лейкоцианидин, с учетом значения удельного показателя поглощения (Ej'% = 460) рассчитывали по формуле:
^ D„0 • 78.26 • F • 100
X = —250--------------, где
a • (100 - b)
D - оптическая плотность исследуемого раствора при длине волны 550 нм;
F - фактор разведения; a - масса ЛРС, г;
b- потеря в массе при высушивании, %
78,26 - молярная масса лейкоцианидина [3].
Результаты количественного определения исследуемых групп соединений представлены в табл.2.
Таблица 2
Результаты количественного определения фенольных соединений, содержащихся в экстракте Empetrum hermaphroditum
Содержание суммы фенольных соединений, % Метрологически е характеристики (Р=95%; t(P,f)2.57) Содержани е проантоциа нидинов,% Метрологические характеристики (Р=95%; t(P,f)2.57)
13,92 x = 14.06 S- = 0.321 x A x = 0.826 £ = ±5.9% 1,12 x = 1.11 S- = 0.018 x A x = 0.047 £ = ±4.3%
15,40 1,07
12,98 1,07
13,98 1,09
14,30 1,11
13,87 1,19
Содержание гидролизуемых танинов определяли по разнице суммы фенольных соединений и проантоцианидинов /3/.
В ходе проведенных исследований установлено, что в химическом составе Empetrum hermaphroditum присутствуют фенольные соединения в общем количестве около 14%, из которых проантоцианидины составляют около 1%, гидролизуемые танины - 13%.
ЛИТЕРАТУРА
1. Аль-Хуссейн, Мартынов А.В. Сорбционно-люминесцентное определение кверцетина в лекарственных растениях //Annals of Mechnikov Institute.-2010.- № 4. -С. 35-42.
2. Бельтюкова С.В. Бычкова А.А. Структура и биологическая активность некоторых растительных эллагитанинов, выделенных из разных представителей рода миртовых // Труды Одес. политех. ун-та.- 2008, вып. 2(30).- С.242-247.
3. Quantification of Tannins in Tree Foliage /FAO/IAEAWorking Document. IAEA.-Vienna. 2000.- 26 р.
4. Humadi S. S., Istudor V. Lythrum salicaria (purple loosestrife). Medicinal use, extraction and identification of its total phenolic compounds.// Farmacia.-2009.-Vol. 57. Iss. 2.- P. 192-200.
DETERMINATION OF TANNINS IN EMPETRUM HERMAPHRODITUM
Strusovskaya O. G., Buyuklinskaya O. V., Burdeynaya K.V., Baykin P.I.
Northern State Medical University, Department of Pharmacy and Pharmacology, Arkhangelsk
Vegetable tannins are one of the most common groups of polyphenolic compounds with antiradical, antioxidant and immunomodulatory activity. The aim of this study was to quantifycation of the tannins, contained in the grass Empetrum hermaphroditum (Empetraceae L.), growing on the islands of Solovetsky archipelago. In the course of the studies it was found that the chemical composition of Empetrum hermaphroditum phenolic compounds: total phenol consists in amount of about 14%, of which are proanthocyanidins about 1%, hydrolyzable tannins - 13%.
Keywords: Empetrum hermaphroditum, total phenol, proanthocyanidins, hydrolyzable tannins
