CC BY
63
УДК 615.322:582.711.71:547.814.5.06
ИЗУЧЕНИЕ КОМПЛЕКСА ФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ СЫРЬЯ ЧЕРНОГОЛОВНИКА МНОГОБРАЧНОГО (POTERIUM POLYGAMUM WALDST. &
KIT.)
Введение. Черноголовник многобрачный (Poterium polygamum Waldst & Kit.) из семейства розоцветных (Rosaceae) - многолетнее травянистое сенокосное и паст-бищное растение с ветвистым стеблем высотой от 30 до 80 см. Растение широко рас-пространено во флоре Северного Кавказа (Тебердино-Зеленчукский, Эльбрусский, Терский районы, Чечня и Ингушетия) [1]. Ч. многобрачный - пищевое и кормовое растение. Оно съедобно как салат, употребляется в качестве приправы к супам, для ароматизации напитков и уксуса [2]. Для крупного и мелкого рогатого скота является кормовым [3]. При возделывании его как новой кормовой культуры в лесостепи Сред-него Поволжья было установлено, что он отличается высокой продуктивностью, широ-кой экологической устойчивостью к биотическим и абиотическим факторам. Сравни-тельная оценка с некоторыми основными кормовыми растениями по продуктивности показала, что ч. многобрачный по урожайности сухого вещества превосходит люцерну и клевер. Максимальная продуктивность ч. многобрачного второго года пользования получена при обработке семян гуматом натрия совместно с аквамиксом: урожайность зеленой массы 37,5 т/га, выход кормовых единиц 5,02 т/га [4, 5]. Ч. многобрачный яв-ляется медоносным растением [6]. В Таджикистане сок листьев используется для лечения гнойных ран [7]. Отвар корней используется в ветеринарии для профилактики и лечения одного из самых распространенных заболеваний домашних животных (цыплят и др.) - эймериоза [8]. В эксперименте отвар надземной части Р. polygamum Waldst. & Kit. обладает противояз-венными свойствами [9]. Сведения о химическом составе ч. многобрачного ограничены. Ч. многобрач-ный ввиду сходных внешних признаков с кровохлебкой лекарственной (Sanguisorba officinalis L.) считался недопустимой примесью к этому фармакопейному виду сырья. Учитывая, что Poterium polygamum Waldst. & Kit. филогенетически близок к видам ро-дов Sanguisorba, Alchemilla, Agrimonia (виды двух последних родов входят в Европей-скую [10] и Британскую травяную [11] фармакопеи) трибы Sanguisorbeae (Poterieae) [12], мы предприняли попытку более основательного изучения P. polygamum Waldst. & Kit., прогнозируя сходство их химического состава и применения с видами вышена-званных родов. Ранее нами впервые был изучен полисахаридный состав травы ч. многобрачно-го [13]. Продолжая химические исследования, мы установили, что сырье ч. многобрач-ного может быть не примесью, а новым видом отечественного лекарственного сырья, благодаря наличию специфичного комплекса фенольных соединений. Объектом исследования являлись трава и корни ч. многобрачного,
В статье впервые приводятся данные об исследовании ком-плекса фенольных соединений нового вида лекарственного сырья - травы и корней черноголовника многобрачного (Poterium poly-gamum Waldst. & Kit.). Методом ВЭЖХ идентифицированы флаво-ноиды (рутин, кверцетин, гиперозид), дубильные вещества (галло-вая кислота, танин, эпикатехин), оксикоричные кислоты (хлороге-новая, кофейная и цикориевая кислоты), кумарины (умбеллифе-рон, дикумарин).
Количественное содержание суммы фенольных соединений в пересчете на рутин в траве черноголовника много-брачного составило 0,47%. Ключевые слова: черноголовник многобрачный ВЭЖХ, фе-нольные соединения
собранные во время цветения на северо-восточном склоне горы Машук г. Пятигорска (Кавказские Минеральные Воды) Ставропольского края в конце мая 2011 г.
Цель работы - изучение фенольных соединений сырья ч. многобрачного.
Экспериментальная часть. Изучение качественного состава комплекса фе-нольных соединений травы и корней ч. многобрачного проводили на высокоэффек-тивном жидкостном хроматографе фирмы «GILSTON», модель 305, ФРАНЦИЯ; ин-жектор ручной, модель RHEODYNE 7125 США с последующей компьютерной обработ-кой результатов исследования с помощью программы Мультихром для «Windows». В качестве неподвижной фазы была использована металлическая колонка раз-мером 4,6х250 мм KROMASIL C18, размер частиц 5 мк. В качестве подвижной фазы метанол : вода : кислота фосфорная конц. : тетра-гидрофуран (370:570:5:60). Анализ проводили при комнатной температуре. Скорость подачи элюента 0,8 мл/мин. Продолжительность анализа 60 мин. Детектирование проводилось с помощью УФ-детектора «GILSTON» UV/VIS модель 151, при длине вол-ны 254 нм. Для исследования траву и корни ч. многобрачного измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм по (ГОСТ 214-83). Измельченное сырье ч. многобрачного (10,0 г для травы и 15,0 г для корней) вместимостью 250 мл, прибавляли по 50 мл спирта этилового 70% для травы и по 70 мл спирта этилового 70% для корней, присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 1 часа с момента закипания спиртоводной смеси в колбе. После охлаждения смесь фильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл и до-водили спиртом этиловым 70 % до метки (исследуемый раствор). Параллельно готовили серию 0,05 % растворов сравнения в 70% спирте этило-вом: рутина, кверцетина, лютеолина, лютеолин-7-гликозида, галловой кислоты, ко-фейной кислоты, хлорогеновой кислоты, коричной кислоты, цикориевой кислоты, ги-перозида, геспередина, апигенина, феруловой кислоты, изоферуловой кислоты, ди-гидрокверцитина, умбеллиферрона, танина, дикумарина. По 20 мкл исследуемых рас-творов и растворов сравнения вводили в хроматограф и хроматографировали в выше-приведенных условиях. Результаты представлены в табл. 1 и 2.
Таблица 1 Результаты идентификации комплекса фенольных соединений травы черноголовника (водно-
спиртовое извлечение)
No Время мин Высота mV Площадь mV*ceK ФО Конц. % Название
1 2.712 1110-92 32302-96 1-000 29-99 метанол
2 3-27 373-25 2067-26 1-000 1-92 неидент.
3 3-407 1110-70 11432-28 1-000 10-61 галловая кислота
4 3-839 98-86 2288-95 1-000 2-13 танин
5 4-344 59-99 1074-94 1-000 1-00 хлорогеновая кислота
6 4-814 62-42 1577-49 1-000 1-46 эпикатехин
7 5-113 66-36 1819-03 1-000 1-69 кофейная кислота
8 5-699 46-07 1091-73 1-000 1-01 дикумарин
9 6-103 42-12 800-59 1-000 0-74 цикориевая кислота
10 6-48 44-30 2153-22 1-000 2-00 неидент.
11 7-805 20-22 656-52 1-000 0-61 неидент.
12 8-985 27-58 1680-62 1-000 1-56 неидент.
13 12-26 209-16 15474-35 1-000 14-37 рутин
14 12-95 155-78 4915-28 1-000 4-56 гиперозид
15 15-97 171-64 11472-35 1-000 10-65 неидент.
16 18-6 202-77 15275-51 1-000 14-18 неидент.
17 34-57 16-61 1552-37 1-000 1-44 кверцетин
18 65-93 0-66 64-81 1-000 0-06 кверцетин
Таблица 2 Результаты идентификации комплекса фенольных соединений корней черноголовника (водно-
спиртовое извлечение)
No Время сек Высота mV Площадь шУ*сек ФО Конц. % Название
1 169.7 643.16 11160.09 1.000 47.49 умбелли ферон
2 198.4 239.88 1567.26 1.000 6.67 галловая кислота
3 206.2 1112.04 7172.62 1.000 30.52 танин
4 221.2 210.80 1933.89 1.000 8.23 неидент.
5 254.5 3.73 81.69 1.000 0.35 неидент.
6 334.7 0.80 18.18 1.000 0.08 дикумар ин
7 570.4 2.82 117.63 1.000 0.50 рутин
8 946.9 17.27 846.83 1.000 3.60 неидент.
9 1208 11.54 599.41 1.000 2.55 неидент.
Количественное определение фенольных соединений в пересчете на рутин в траве черноголовника многобрачного методом ВЭЖХ. Для исследования траву ч. многобрачного измельчали до размера частиц, про-ходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм по (ГОСТ 214-83). Около 10,0 г измельченного сырья помещали в колбу вместимостью 150 мл, прибавляли по 70 мл спирта этилового 70 %, присоединяли к обратному холодильни-ку и нагревали на кипящей водяной бане в течение 1 часа с момента закипания спир-товодной смеси в колбе. После охлаждения смесь фильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводили спиртом этиловым 70% до метки (исследуемый раствор). Параллельно готовили раствор РСО рутина в 70% спирте этиловом. Для этого около 0,02 г (точная навеска) рутина помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляли 20 мл спирта этилового 70 %, перемешивали до растворения и доводили объем до метки тем же растворителем (РСО). По 20 мкл исследуемого раствора и раствора РСО вводили в хроматограф и хроматографировали по выше приведенной методике. Расчет количественного содержания фенольных соединений в пересчете на ру-тин производили методом абсолютной калибровки с помощью компьютерной про-граммы «Мультихром» для «Windows» и с помощью формулы:
Х % = S^. хСх.50х100х100 Sct.x 25Х ах 100- W) где: S ис. - площадь пика рутина в исследуемом растворе; S ст. - площадь пика стандартного раствора РСО рутина; Х % - концентрация рутина, %; С - концентрация РСО рутина, г; а - навеска сырья, г; W - потеря в массе при высушивании, %. В результате установлено, что количественное содержание фенольных соедине-ний в пересчете на рутин в траве ч. многобрачного составляет 0,47%. Вывод. Установлено, что в сырье черноголовника многобрачного содержатся флавоноиды (рутин, кверцетин, гиперозид), дубильные вещества (галловая кислота, танин, эпикатехин), оксикоричные кислоты (хлорогеновая, кофейная и цикориевая кислоты), кумарины (умбеллиферон, дикумарин). Количественное содержание суммы фенольных соединений в пересчете на ру-тин в траве составило 0,47%.
Благодаря обнаруженному комплексу фенольных соединений в исследуемом виде сырья мы считаем, что черноголовник многобрачный может быть рассмотрен как новый вид лекарственного растительного сырья в связи с тем, что он не только близок по комплексу фенольных соединений, но и превосходит виды близких родов Sanguisorba, Alchemilla и Agrimonia своими дикорастущими ресурсами и развитой кормовой культурой.
Литература
1. Галушко, А.И. Определитель растений сенокосов и пастбищ Северного Кавказа / А.И. Галушко. -Нальчик, 1964. - 372 с.
2. Медведев, П.Ф. Пищевые растения СССР / П.Ф. Медведев // Растительное сырье СССР : в 2 т. -М. ; Л., 1957. - Т. 2. - С. 5-151.
3. Кормовые растения сенокосов и пастбищ СССР / И.В. Ларин [и др.] : в 3 т. - М. ; Л., 1951. - Т. 2. -948 с.; 1956. - Т. 3. - 879 с.
4. Медведев, П.Ф. Новые кормовые культуры СССР / П.Ф. Медведев. - М. ; Л., 1948. - 326 с.
5- Петров, Д.И. Приемы возделывания черноголовника многобрачного в лесостепи сред-него Поволжья : автореф. дис. ... канд. с/х наук : 06.01.09 / Д.И. Петров. - Пенза, 2008. - 19 с.
6. Патрабалова, И.Г. Медоносные растения Тебердинского заповедника / И.Г. Патраболо-ва // Труды Теберд. заповедника. - 1960. - Вып. 2. - С. 153-183.
7. Дадабаева, О. Словарь научных местных названий растений северного Таджикистана / О. Дадабаева. - Душанбе, 1972. - 130 с.
8. Пат. № 2173160 Российская Федерация, С1 А61К35/78 Способ лечения и профилактики эймериоза у цыплят Л.П. Миронова [и др.] (РФ). - № 2000101385/13; заявл. 17.01.2000; опубл. 10.09.2001, Бюл. № 7.
9. Gurbuz, I. Anti-ulcerogenicactivity of some plants used in folc medicine of Pinarbasi (Kaysery, Turkey) / I. Gurbuz, A.M. Ozkan, E. Yesilada, O. Kutsal // J. Ethnopharmacol. - 2005. - Vol. 101, № 1-3. - P. 313-318.
10. European Pharmacopoeia. 4th ed. - 1995. - 2416 p.
11. British Herbal Pharmacopoeia. British Herbal Medicine Association. - Bournemouth : Fifth impression, 1995. - 255 p.
12. Тахтаджян, А. Л. Система магнолиофитов / А. Л. Тахтаджян. - Л. : Наука, 1987. - 439 с.
13. Охремчук, А.В. Изучение полисахаридов черноголовника многобрачного (Poterium po-lygamum Waldast. et Kit.) / А.В. Охремчук, В.А. Челомбитько // Гаммермановские чтения-2011 : сб. трудов науч.-метод. конф. - СПб., 2011. - С. 54-57.
STUDY OF COMPLEX PHENOLIC COMPOUNDS OF A CHERNOGOLOVNIK POLYGAMOUS (POTERIUM POLYGAMUM WALDST. & KIT
.) A.V. OKHREMCHUK V.A. CHELOMBITKO
Pyatigorsk State Pharmaceutical Academy email: vachelombitko@mail.ru
The paper first presents data on the chemical study of the phe-nolic composition of a new species of medicinal raw materials - grass and roots of chernogolovnik polygamous (Poterium polyga-mum Waldst. & Kit.). HPLC identified flavonoids (rutin, quercetin, hyperoside), tannins (gallic acid, tannin, epicatechin), oxycinnamic acids (chlorogenic, caffeic and chicory acid), coumarins (umbellife-rone, bishydroxycoumarin). The quantitative content of the amount of phenolic compounds in terms of routines in the grass of cherno-golovnik polygamous was 0,47%. Key words: Poterium polygamum Waldst. & Kit., HPLC, phe-nolic compounds
