CC BY
39
УДК 615.099: 543.054.2/.9
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СТЕПЕНИ ЭКСТРАКЦИИ
ТРИЦИКЛИЧЕСКОГО АНТИДЕПРЕССАНТА КЛОМИПРАМИНА В МОДЕЛЬНЫХ СМЕСЯХ БИОЖИДКОСТЕЙ
Е.Н. Люст
ФГБОУ ВО «Пермская государственная фармацевтическая академия» Минздрава России Пермь, Россия
Аннотация. Статья посвящена разработке методики изолирования антидепрессанта кломипрамина из биологических жидкостей. Наряду с высокой терапевтической эффективностью кломипрамин может стать источником отравлений, а также злоупотреблений совместно с наркотическими средствами, психоактивными веществами, алкоголем. Таким образом, существует необходимость в идентификации данного антидепрессанта в биологических жидкостях организма человека в случаях острых отравлений. В статье отражены результаты исследований по выбору оптимальных условий выделения анализируемого вещества из водных растворов и модельных смесей (моча, плазма) методом жидкость-жидкостной экстракции. Полученные данные могут быть использованы при химико-токсикологических определениях кломипрамина.
Ключевые слова: антидепрессант, кломипрамин, отравление, экстракция, моча, плазма.
В настоящее время отмечается рост числа людей, злоупотребляющих антидепрессантами различной структуры. Наряду с амитриптилином и ими-прамином участились случаи злоупотребления кломипрамином. Он в несколько раз эффективнее, по сравнению с классическими антидепрессантами, блокирует пресинаптический захват серотони-на и считается одним из самых сильных тимоана-лептических средств [1; 2, с. 775; 3, с. 729].
Трициклический антидепрессант кломипра-мин относится к психоактивным препаратам, при передозировке которого может проявляться токсическое действие на организм. Диагностика отрав -лений кломипрамином осложняется еще и тем, что в комплексной терапии с ним могут назначаться препараты из других групп, поэтому в диагностике таких отравлений большое значение приобретают результаты химико-токсикологических исследований [4, р. 41; 5, р. 1134; 6, р. 504].
Цель работы: определение степени экстракции кломипрамина из биологических жидкостей (моча, плазма) для целей химико-токсикологического и судебно-химического исследования.
Задачи исследования:
1) изучить степень извлечения кломипрами-на из водных растворов в зависимости от рН раствора и природы органического растворителя;
2) апробировать полученные результаты исследования в опытах с модельными смесями биологических жидкостей (моча, плазма крови).
Материалы, методы, объекты исследования. Для исследований готовили раствор кломипрамина с концентрацией 1 мг/мл, 100 мкг/мл. Модельные смеси готовили путем прибавления к пробам мочи и плазмы крови раствора кломи-прамина. Для создания необходимого pH водного раствора использовали универсальные буферные смеси [7, с. 238], для модельных смесей плазмы — фосфатный буферный раствор рН 7,0 [8, с. 1097], для модельных смесей мочи — раствор аммиака 10%, раствор кислоты хлористоводородной разведенной 8,3% [8, с. 1389]. Контролировали pH с помощью универсального иономера И-130М.
В качестве метода изолирования была применена жидкость-жидкостная экстракция. Для целей экстракции выбраны органические растворители,
The Journal of scientific articles "Health and Education Millennium", 2016. Vol. 18. No 8
----—
применяющиеся в практике химико-токсикологических исследований: хлороформ, хлористый метилен, хлороформ : н-бутанол (9 : 1), эфир диэти-ловый, н-гексан. Сухие остатки, полученные после удаления экстрагентов, растворяли в 1 мл спирта этилового 95%. Анализ извлечений вели методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на хроматографе «Милихром А-02» (ЗАО «Эконо-ва», г. Новосибирск) со спектрофотометрическим детектором [9, с. 126]. Степень экстракции кло-мипрамина рассчитывали как среднее 6 параллельных измерений с учетом полученных площадей хроматографических пиков через уравнения гра-дуировочных графиков. Построенные в интервале концентраций кломипрамина от 10 до 100 мкг/мл
раствора градуировочные графики характеризуются линейностью и имеют вид: для водного раствора S = 0,1842 • C (R2 = 0,9992), для модельных смесей мочи S = 0,166 • C (R2 = 0,9986), для модельных смесей плазмы S = 0,1182 • C (R2 = 0,9978).
Результаты исследований, обсуждение. При изучении степени экстракции кломипрамина из водных растворов установлено, что кломипрамин в значительной степени извлекается органическими растворителями в широком диапазоне значений рН (3—12), что, вероятно, может быть связано с ли-пофильностью вещества (Log P (octanol/water) = = 5,19 (5,65) [5, р. 1134]. Результаты экспериментов представлены в табл. 1.
Таблица 1
Результаты экстракции кломипрамина из водных растворов органическими растворителями (%; n = 6; f = 5)
рН водного раствора Хлористый метилен Хлороформ : н-бутанол (9 : 1) Хлороформ Н-гексан Эфир диэтиловый
2 ХСр = 47,02; АХСр = 1,48; £Ср = ±3,14% Хср = 44,76; АХср = 2,81; £ср = ±6,28% Хср = 69,79; АХср = 1,59; £ср = ±2,28% Хср = 1,79; АХср = 0,39; £ср = ±21,79% Хср = 8,07; АХср = 0,50; £ср = ±6,20%
3 Хср = 87,62; АХср = 1,80; еСр = ±2,04% Хср = 77,85; АХср = 1,76; £ср = ±2,26% Хср = 70,20; АХср = 2,80; £ср = ±3,99% Хср = 6,82; АХср = 0,69; £ср = ±10,27% Хср = 11,76; АХср = 0,88; £ср = ±7,48%
4 ХСр = 90,13; АХср = 0,78; еСр = ±0,86% Хср = 79,10; АХср = 2,08; £ср = ±2,64% Хср = 91,40; АХср = 2,52; £ср = ±2,76%; Хср = 17,04; АХср = 2,00; £ср = ±11,74% Хср = 12,58; АХср = 0,69; £ср = ±5,48%
5 Хср = 85,61; АХср = 0,63; еСр = ±0,73% Хср = 75,39; АХср = 1,51; £ср = ±2,00% Хср = 91,66; АХср = 1,80; £ср = ±1,96% Хср = 62,69; АХср = 1,72; £ср = ±2,74% Хср = 31,56; АХср = 1,90; £ср = ±6,02%
6 ХСр = 91,84; АХср = 0,85; £ср = ±0,93; Хср = 75,24; АХср = 1,56; £ср = ±2,07% Хср = 96,75; АХср = 2,03; £ср = ±2,10% Хср = 74,37; АХср = 1,52; £ср = ±2,04% Хср = 43,59; АХср = 0,66; £ср = ±1,51%
7 Хср = 95,22; АХср = 0,96; £ср = ±1,01% Хср = 86,96; АХср = 1,90; £ср = ±2,19% Хср = 97,78; АХср = 0,59; £ср = ±0,6% Хср = 78,38; АХср = 1,70; £ср = ±2,17% Хср = 58,92; АХср = 1,72; £ср = ±2,92%
8 Хср = 96,48; АХср = 0,95; еср = ±0,99% Хср = 83,33; АХср = 1,30; £ср = ±1,57% Хср = 93,41; АХср = 0,59; £ср = ±1,96% Хср = 68,95; АХср = 0,64; £ср = ±0,93% Хср = 68,44; АХср = 1,26; £ср = ±1,84%
9 Хср = 96,63; АХср = 1,19; £ср = ±1,23% Хср = 91,99; АХср = 1,58; £ср = ±1,72% Хср = 95,75; АХср = 1,98; £ср = ±2,07% Хср = 70,66: АХср = 1,41; £ср = ±1,99% Хср = 69,36; АХср = 1,03; £ср = ±1,46%
10 Хср = 95,30; АХср = 1,06; £ср = ±1,12% Хср = 89,62; АХср = 1,81; £ср = ±2,03% Хср = 89,58; АХср = 2,54; £ср = ±2,84% Хср = 54,36; АХср = 1,21; £ср = ±2,23% Хср = 79,73; АХср = 1,57; £ср = ±1,97%
11 Хср = 86,96; АХср = 0,86; £ср = ±0,99% Хср = 71,69; АХср = 1,96; £ср = ±2,73% Хср = 92,24; АХср = 1,93; £ср = ±2,09% Хср = 37,18; АХср = 2,57; £ср = ±4,49% Хср = 78,93; АХср = 1,52; £ср = ±1,93%
12 Хср = 80,10; АХср = 1,41; £ср = ±1,76% Хср = 33,92; АХср = 1,74; £ср = ±5,14% Хср = 89,71; АХср = 0,51; £ср = ±0,57% Хср = 34,98; АХср = 0,77; £ср = ±2,07% Хср = 58,49; АХср = 1,47; £ср = ±2,51%
Люст Е.Н. Определение степени экстракции трициклического антидепрессанта кломипрамина...
----—
Для учета влияния матричного эффекта исследования были продолжены с модельными смесями мочи и плазмы крови. В данных экспериментах апробированы экстрагенты и диапазоны рН, при которых наблюдался значительный выход кломипрамина из водных растворов:
♦ модельные смеси мочи: хлороформ — рН 4—11; хлористый метилен — рН 6—10; хлороформ : н-бутанол (9 : 1) — рН 7—10; н-гексан — рН 6—10; эфир диэтиловый — рН 8—11 (рис. 1);
♦ модельные смеси плазмы — хлороформ — рН 4—11; хлористый метилен — рН 6—10 (рис. 2).
С модельными смесями плазмы изучение степени изолирования эфиром диэтиловым, н-гекса-ном, смесью хлороформ : н-бутанол (9 : 1) по отношению к кломипрамину не проводилось в связи с более низкими выходами аналита.
При изучении степени извлечения кломипра-мина из водных растворов установлены наиболее
оптимальные экстрагенты и условия эстракции: хлороформ (рН 7: 97,78%; еср = ±0,6%), хлористый метилен (рН 8—9: 96,48—96,63%; вф = ±0,99; 1,23%).
При определении условий выделения кломи-прамина из модельных смесей биологических жидкостей установлено:
♦ из мочи максимальный выход наблюдается при экстракции: хлороформом — рН 7 (92,32%; еср = ±1,70%), хлористым метиленом — рН 8—10 (89,79%; 89,06%; 89,46% соответственно; вф = ±3,95; 3,05; 2,52%), хлороформ : н-бутанол (9 : 1) — рН 9—10 (80,89—81,82%; еСр = ±2,89; 2,85%), эфиром диэтиловым — рН 10—11 (79,73—78,93%; еСр = = ±2,11; 1,49%), н-гексаном — рН 7 (78,38%; еСр = ±2,19%);
♦ из плазмы максимальный выход наблюдается при экстракции: хлороформом — рН 5—6 (67,81—66,60%; вср = ±9,36; 6,01%), хлористым метиленом — рН 8 (35,58%; еСр = ±8,27%).
Степень экстракции,
%
100 95 90 85 80 75 70 65 60 55 50
\ <—1 ^---
' н \—
> ^—> с
/ /
/ ---^ / «—> с
{ .—> ( i г —) *--- Г
ч
N к
6 7 8 9
рН модельной смеси мочи
10
11
12
хлороформ н-гексан
хлористый метилен хлороформ: н-бутанол (9:1)
Рис. 1. Зависимость степени экстракции кломипрамина (%) от рН модельной смеси мочи
3
The Journal of scientific articles "Health and Education Millennium", 2016. Vol. 18. No 8
—--—-
Степень экстракции, % 70
60
50
40
30
20
10
5 6 7 8 9 10
рН модельной смеси плазмы
□ хлороформ □ хлористый метилен
Рис. 2. Зависимость степени экстракции кломипрамина (%) от рН модельной смеси плазмы
11
Наибольшую экстрагирующую способность по отношению к кломипрамину в экспериментах как с водными растворами, так и модельными смесями мочи и плазмы показали органические растворители хлороформ и хлористый метилен. Балластные вещества биологических жидкостей, извлекающиеся совместно с кломипрамином, не мешают его хроматографическому определению, что было установлено при анализировании холостых проб биожидкостей.
Выводы
1. Установлена степень извлечения кломи-прамина из водных растворов в зависимости от рН и природы органического растворителя.
2. Определены условия экстракции кломи-прамина из модельных смесей биологических жидкостей (моча, плазма крови).
ЛИТЕРАТУРА
1. Марценковский И. А. Клиническая фармакология антидепрессантов: механизмы эффективности и побочных эффектов // Нейро News: психоневрология и нейропсихиатрия. 2006. № 1 (1). URL: http://neuronews.com.ua.
2. Государственный реестр лекарственных средств: офиц. изд. / под ред. Н.В. Юргеля. Т. 1. М., 2008. С. 775.
3. Клиническая фармакология: учебник / под ред. В.Г. Кукеса. 4-е изд., перераб. и доп. М.: ГЭОТАР-Ме-диа, 2013. С. 729.
4. Antidepressant-related deaths and antidepressant prescriptions in England and Wales, 1998—2000 / Survjit Cheeta [et al.] // The British Journal of Psychietry. 2004 Jan. № 184. Р.41—47.
5. Moffat A.C., Osselton M.D., Widdop B. Clarke's Analysis of Drugs and Poisons [Electronic Edition]. London: Pharmaceutical Press, 2011. Р. 1134—1136.
6. Two Cases involving Clomipramine intoxication / Avella J. [et al.] // Journal of Analytical Toxicology. 2004. № 28 September. Р. 504—508.
7. Лурье Ю.Ю. Справочник по аналитической химии. М.: Химия, 1971. Изд. 4, перераб. и допол. С. 238.
8. Государственная Фармакопея Российской Федерации. Изд. XIII. Т. 1. М., 2015. URL: http://feml.scsml.rssi.ru/feml.
9. Главатских А.В., Люст Е.Н. Выбор условий хро-матографирования и обнаружения кломипрамина в ряду антидепрессантов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии // Вестник Пермской государственной фармацевтической академии. 2015. № 15. С. 126— 128.
0
flwcm E.H. Onpege^eHHe CTeneHH экcтpaкцнн TpHU,HKÄHHecKoro aHTHgenpeceaHTa KnoMHnpaMHHa..
—--
DETERMINATION OF THE EXTRACTION DEGREE OF TRICYCLIC ANTIDEPRESSANT CLOMIPRAMINE IN MODEL MIXTURE OF BIOLIQUIDS
E.N. Lyust
Perm State Pharmaceutical Academy Perm, Russia
Annotation. The article is devoted to the development of techniques of the antidepressant clomipramine isolation from biological fluids. Along with high therapeutic efficiency clomipramine may cause poisoning, as well as in conjunction with the abuse of narcotic drugs, psychotropic substances, alcohol. Thus, a need exists for the identification of an antidepressant in biological fluids of the human body in cases of acute poisoning. The article describes the results of studies of the choice of optimal conditions for isolation of the analyte from aqueous solutions and mixtures model (urine, plasma) by liquid-liquid extraction. The obtained data can be used in the chemical-toxicological determinations of clomipramine.
Key words: antidepressants, clomipramine, poisoning, extraction, urine, plasma.
REFERENCES
.1 Marcenkovskij I.A. Klinicheskaja farmakologija antidepressantov: mehanizmy jeffektivnosti i pobochnyh jeffektov. Nejro News: psihonevrologija i nejropsihiatrija, 2006, no. 1 (1). Available at: http://neuronews.com.ua.
2. Gosudarstvennyj reestr lekarstvennyh sredstv: ofic. izd. Ed. N.V. Jurgelja. Vol. 1. Moscow, 2008. P. 775.
3. Klinicheskaja farmakologija: uchebnik. Ed. V.G. Kukesa. 4-e izd., pererab. i dop. Moscow, GJeOTAR-Media, 2013. P. 729.
4. Survjit Cheeta et al. Antidepressant-related deaths and antidepressant prescriptions in England and Wales, 1998—2000. The British Journal of Psychietry, 2004 Jan., no. 184, pp.41—47.
5. Moffat A.C., Osselton M.D., Widdop B. Clarke's Analysis of Drugs and Poisons [Electronic Edition] — London, Pharmaceutical Press, 2011. P. 1134—1136.
6. Avella J. et al. Two Cases involving Clomipramine intoxication. Journal of Analytical Toxicology, 2004, no. 28 September, pp. 504—508.
7. Lur'e Ju.Ju. Spravochnik po analiticheskoj himii. Moscow, Himija, 1971. Izd. 4, pererab. i dopol. P. 238.
8. Gosudarstvennaja Farmakopeja Rossijskoj Fede-racii. Izd. XIII. Vol. 1. Moscow, 2015. Available at: http://feml.scsml.rssi.ru/feml.
9. Glavatskih A.V., Ljust E.N. Vybor uslovij hroma-tografirovanija i obnaruzhenija klomipramina v rjadu anti-depressantov metodom vysokojeffektivnoj zhidkostnoj hro-matografii. Vestnik Permskoj gosudarstvennoj farmacevti-cheskoj akademii, 2015, no. 15, pp. 126—128.
