CC BY
33
MEDICAL AND BIOLOGICAL ASSURANCE OF THE CHEMICAL SAFETY OF THE RUSSIAN FEDERATION
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2019
Шачнева М.Д., Корягина Н.Л., Савельева Е.И., Уколов А.И., Копейкин В.А., Кессених Е.Д., Хлебникова Н.С., Радилов А.С.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАРКЁРА ЭКСПОЗИЦИИ К ТАБУНУ В БИОПРОБАХ МЕТОДОМ ГАЗОВОЙ ХРОМАТО-МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ
ФГУП «Научно-исследовательский институт гигиены, профпатологии и экологии человека» ФМБА России, 188663, Ленинградская область, Всеволожский район, г.п. Кузьмоловский
Изучены хроматографические и масс-спектральные характеристики фтортабуна - биомаркера табуна, полученных при реализации метода газовой хромато-масс-спектрометрии в режимах одномерного и тандемного масс-спектрометрического детектирования при электронной ионизации. Экспериментально определен индекс удерживания фтортабуна. Проведена апробация подобранных условий идентификации фтортабуна методом ГХ-МС/МС в режиме мониторинга множественных реакций на образцах плазмы крови, in vitro экспонированной табуном. Продемонстрирована линейность отклика детектора в диапазоне концентраций от 10 до 60 нг • мл-1.
Ключевые слова: фосфорорганические отравляющие вещества; табун; газовая хромато-масс-спектрометрия; реактивирование.
Для цитирования: Шачнева М.Д., Корягина Н.Л., Савельева Е.И., Уколов А.И., Копейкин В.А., Кессених Е.Д., Хлебникова Н.С., Радилов А.С. Определение маркёра экспозиции к табуну в биопробах методом газовой хромато-масс-спектрометрии. Медицина экстремальных ситуаций. 2019; 21(1): 205-212.
Для корреспонденции: Шачнева Мария Дмитриевна, младший научный сотрудник ФГУП «Научно-исследовательский институт гигиены, профпатологии и экологии человека» ФМБА России, 188663, Ленинградская область, Всеволожский район, г.п. Кузьмоловский. E-mail: [email protected]
Shachneva M.D., Koryagina N.L., Savelyeva E.I., Ukolov A.I., Kopeikin V.A., Kessenikh E.D., Khlebnikova N.S., Radilov A.S.
DETERMINATION OF THE MARKER OF EXPOSURE TO THE TABUN IN BIOSAMPLES BY THE METHOD OF GAS CHROMATOMASS-SPECTROMETRY
Scientific Medical Institute of Hygiene, Federal Medical and Biological Agency, Kuzmolovsky, 188663, Russian Federation
There were studied chromatographic and mass spectral characteristics of fluorotabun-biomarker of tabun, obtained by implementing gas chromatography-mass spectrometry in one-dimensional and tandem mass spectrometric detection with electron ionization. Experimentally there was determined the retention index offluorotabun. The approbation of selected conditions for the identification offluorotabun by GC-MS / MS method was carried out in the mode of monitoring of multiple reactions on samples of blood plasma exposed to tabun in vitro. The linearity of the detector response was demonstrated in the concentration range from 10 to 60 ng • ml-1.
Keywords: organophosphate poisonous substances; tabun; gas chromatography-mass spectrometry; reactivation
For citation: Shachneva MD, Koryagina NL, Savelyeva EI, Ukolov A.I., Kopeikin V.A., Kessenikh E.D., Khlebnikova N.S., Radilov A.S. Determination of the marker of exposure to the tabun in biosamples by the method of gas chromatomass-spectrometry. Meditsina ekstremal'nykh situatsiy (Medicine of Extreme Situations, Russian journal) 2019; 21(1): 205-212. (In Russian).
For correspondence: Maria D. Shachneva, MD, senior researcher of the Scientific Research Institute of Hygiene, Federal
Medical and Biological Agency, Kuzmolovsky, 188663, Russian Federation. E-mail: [email protected]
Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
Acknowledgments. The study had no sponsorship.
Received: February 5, 2019
Accepted: February 21, 2019
МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ ХИМИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Несмотря на то, что Конвенция по запрещению химического оружия (ХО) была принята в 1993 г., в течение последнего десятилетия задокументирован ряд инцидентов с применением ХО (Ирано-Иракский конфликт, Сирия). Факт применения ХО может быть установлен на основании результатов анализа проб окружающей среды и биопроб человека или животных, находившихся в зоне инцидента. Ввиду высокой реакционной способности, отравляющее вещество (ОВ), попадая в объекты окружающей среды, очень быстро разрушается и, если доступ к месту инцидента был ограничен, обнаружить присутствие следов токсичных химикатов достаточно сложно. Единственным источником информации в таких случаях являются биопробы человека и животных, которые могли находиться в зоне инцидента. Основной механизм токсического воздействия фосфорорганичес-ких отравляющих веществ (ФОВ) заключается в ингибировании ацетилхолинэстеразы (АХЭ), осуществляющей гидролиз ацетилхолина, таким образом, установление факта отравления ФОВ может быть установлено путем определения степени ингибирования холинэстеразы (ХЭ) крови методами биохимического анализа. ХЭ крови являются чувствительными биомаркерами отравления ФОВ, но недостаточно специфичными. Снижение активности ХЭ крови может быть, например, результатом терапии рядом лекарственных препаратов. Также немаловажной является проблема вариабельности фоновых значений ХЭ у разных людей. Таким образом, достоверно можно установить факт экспозиции ФОВ только зная значение активности ХЭ до отравления. Такой контроль активности ХЭ крови был организован в период эксплуатации объектов по уничтожению химического оружия (УХО), когда активность ХЭ персонала измерялась до и после работы на объекте.
Методами химического анализа отравление ФОВ может быть установлено путем определения маркеров экспозиции к ФОВ в моче и крови. Известно, что низкомолекулярные продукты гидролиза ОВ обнаруживаются в моче пострадавших в течение первых двух недель после отравления ОВ, в то время как аддукты ОВ с белками крови являются ретроспективными маркерами экспозиции к ОВ [1—3]. Недостатком
206
низкомолекулярных продуктов гидролиза как маркеров экспозиции к ОВ является то, что они могут попасть в организм не только вследствие интоксикации ОВ, но и с продуктами питания, водой, содержащими продукты деградации ОВ.
Наиболее надежными маркерами экспозиции к ОВ являются аддукты ОВ с белками крови - фрагменты бутирилхолинэстеразы (БХЭ) и альбумина, модифицированные ФОВ [4]. Определение аддуктов ФОВ с белками крови является неопровержимым доказательством факта интоксикации ФОВ, однако требует высокопрецизионного аналитического оборудования и высокотехнологичной пробоподготовки, связанной с использованием дорогостоящих расходных материалов. К тому же, эти методы достаточно трудо- и времязатратны.
Определение методом газовой хроматографии (ГХ) ФОВ, регенерированных из состава белковых аддуктов, является экспрессным доказательным способом подтверждения факта экспозиции к ФОВ. Продуктами регенерации являются сами ФОВ (зарин ^В), циклозарин (GF), зоман (GD)) или фторангидриды соответствующих алкилфосфоновых кислот (табун ^Л^), ФОВ У-типа (УХ-^ [3, 4]. Сущность способа определения регенерированных ФОВ из состава белковых аддуктов заключается в обработке плазмы крови фторидом калия в кислой среде, извлечении образующегося фторпроизводного из образца методом твердофазной экстракции (ТФЭ) и анализа экстракта биопробы методом газовой хроматографии с использованием разных способов детектирования. Первая успешная попытка ретроспективного анализа в целях установления факта воздействия ФОВ на организм путем реактивирования БХЭ была предпринята М. Полхиусом и соавторами [5]. После реактивирования зарин был обнаружен в сыворотке крови 10 из 11 жертв террористической атаки секты АУМ Син-рике в Токийском метро и в 2 из 7 образцов сыворотки крови жертв трагедии в Мацумото. Высокий потенциал метода реактивирования, реализованного в процедуре, описанной в работе [6], для установления факта воздействия ФОВ был продемонстрирован в работе [7] на примере анализа образцов плазмы крови сотрудника лаборатории, который случайно подвергся ин-
MEDICAL AND BIOLOGICAL ASSURANCE OF THE CHEMICAL SAFETY OF THE RUSSIAN FEDERATION
галяционному воздействию УХ в концентрации порядка 0,026 мкг/л (норматив для рабочей зоны - 0,001 мкг/л). Отравление первоначально было диагностировано по клиническим симптомам (миоз, затрудненное дыхание и др.), в связи с чем была произведена оксимная терапия (600 мг пралидоксима и 2 мг атропина). Анализ активности ХЭ крови не выявил существенного угнетения, а через 24 ч уже никаких клинических проявлений не было. В то же время в образцах плазмы крови, обработанных в кислой среде фторидом натрия, был идентифицирован О-этилметилфторфосфонат (УХ^) в концентрациях от 81,4 пг/мл в 1-й день после отравления до 6,9 пг/мл на 27-й день (предел определения метода - 5,5 пг/мл УХ^), в образцах эритроцитов - от 220 пг/мл в 1-й день до 97 пг/мл на 27-й день после экспозиции [7]. С учетом того, что концентрация БХЭ в плазме крови человека составляет около 80 нМ, следует, что метод позволяет подтверждать воздействие низких доз УХ, поскольку маркер надежно детектируется при уровне ингибирования БХЭ > 0,05%.
В работе [8] представлены результаты определения регенерированных ФОВ в образцах сыворотки с уровнем ингибирования БХЭ зарином равным 0,05%, что соответствовало концентрации 6 пг/мл. Соответствующие величины для других ФОВ были оценены как 0,025% (3 пг/мл) для УХ^ - 0,15% (17 пг/мл) для ци-клогексилзарина и 0,10% (11 пг/мл) для фтор-табуна, при этом соотношение сигнал/шум составляло > 3. Авторы отмечают, что более высокий предел обнаружения для табуна и ци-клогексилзарина, вероятно связан с наиболее быстрым процессом старения аддуктов БХЭ с данными ФОВ в сравнении с остальными исследованными в рамках настоящей работы. Авторы пытались снизить предел обнаружения путем использования технологии ввода больших объемов проб в хроматографичскую систему. Введение больших объемов образца с одной стороны, позволяет значительно снизить предел обнаружения, с другой - требует использования высокоселективных методов детектирования для преодоления влияния матричных компонентов на результат идентификации. Авторы отмечают, что при анализе при-
готовленных экстрактов проб методом газовой хромато-масс-спектрометрии (ГХ-МС) в режиме положительной химической ионизации с использованием в качестве газа-реактанта аммиака и мониторингом ионов [M+NH4]+ был зафиксирован высокий уровень шума по иону с массовым числом m/z 99, соответствующий [CH5FO2P]+. При этом предел обнаружения для VX-G составил 10 пг/мл, для зарина - 6 пг/мл. Авторы отметили, что ГХ-МС даже в режиме положительной химической ионизации может приводить к ложноположительным результатам, и поэтому они считают необходимым при обнаружении хроматографического пика, совпадающего по масс-спектральным и хрома-тографическим характеристикам, соответствующим определяемому соединению, проводить подтверждающий анализ с использованием ГХ-МС высокого разрешения или тандемной масс-спектрометрии. Технологии ввода больших объемов проб (50 мкл) в хроматографичес-кую систему также была использована в работе [9]. Увеличение объема вводимой пробы до 50 мкл позволило улучшить чувствительность ГХ-МС-анализа при определении зарина в 670 раз по сравнению с результатами, полученными при вводе в инжектор хроматографа 1 мкл пробы. Пределы обнаружения для 7 исследованных ФОВ составили от 25 до 140 пг/мл.
Для детектирования регенерированных алкилметилфторфосфонатов в методе ГХ могут применяться разные способы детектирования (ПФД, МС, МС/МС, МС высокого разрешения). Достоверность идентификации увеличивается в следующем порядке: ПФД ^ МС ^ МС/МС ^ МС высокого разрешения. Критерием идентификации определяемого соединения при использовании ПФД является только время удерживания. При использовании одномерной МС, достоверность идентификации подтверждается полным масс-спектром, в случае высоких концентраций определяемого соединения в исследуемых образцах или в случае низких концентраций, соотношением интенсивнос-тей характеристичных ионов в масс-спектре при реализации метода ГХ-МС в режиме регистрации выбранных ионов. Точность идентификации повышается при использовании
207
МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ ХИМИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
одномерной масс-спектрометрии в режиме высокого разрешения за счет измерения точного значения m/z при разрешении равном 10 000 и более. Для целевого определения следовых концентраций аналитов в сложных матрицах был разработан метод тандемной масс-спектрометрии. При реализации метода МС/МС из масс-спектра определяемого соединения выбирают информационно-значимые ионы (ионы-предшественники) и подвергают их дальнейшей фрагментации с получением соответствующих продукт-ионов. При этом критерием идентификации является совпадение соотношений интенсивностей характеристичных переходов для аналита, определенного в исследуемом образце и образце сравнения. Метод ГХ-МС/МС характеризуется высокой селективностью и специфичностью.
Несмотря на существующие ограничения (в частности, «старение» аддуктов, спонтанное реактивирование фермента), реактивирование фторид-ионом считается в настоящее время классическим методом установления факта контакта организма с ФОВ, позволяющим детектировать воздействие на уровне ин-гибирования БХЭ < 0,1% и идентифицировать действующий агент. Кроме того, известно [10], что реактивированию подвержены ФОВ, связанные не только с ХЭ, но и с другими белками, что повышает аналитические возможности метода. В связи с этим, работа над оптимизацией способов определения регенерированных ФОВ постоянно продолжается. Оптимизация проводится с целью снижения предела обнаружения определяемых соединений, расширения панели методов детектирования для повышения достоверности идентификации, разработки унифицированных способов, позволяющих в рамках одной процедуры определять неизвестный источник отравления в отсутствие априорной информации о ФОВ. Способы определения фторпроизводных, образующихся при реактивировании белков, модифицированных GB, GD, VX, VR, достаточно широко представлены в доступной литературе, в том числе и авторами настоящей работы. В рамках данной работы проводили разработку способа определения маркера к табуну -фтортабуна, реактивированного из соста-
208
ва белковых аддуктов, методом ГХ-МС/МС. В бывшем СССР табун никогда не производился и не исследовался (в открытых отечественных источниках информация отсутствует). Методики для определения табуна и продуктов его превращений не разрабатывались. ГСО и другие образцы сравнения табуна отсутствуют. В то же время, табун относится к ФОВ и включен в Список 1 Токсичных химикатов Приложения к Конвенции ОЗХО. Табун, как объект анализа, наряду с другими ОВ, представлен в многочисленных зарубежных публикациях и в 2018 г. был использован при подготовке контрольных образцов плазмы крови для 3-го квалификационного международного теста ОЗХО по анализу биопроб. В доступной литературе процедур определения фтортабуна методом ГХ-МС/МС не представлено, таким образом, цель настоящих исследований - дополнение набора идентификационных признаков, необходимых для достоверного надежного определения маркера табуна (^^диметиламидо-О-этилцианфосфат, GA) - фтортабуна (^^диметиламидо-О-этилфторфосфат).
Материал и методы
Реактивы и материалы: калий фтористый 2-водный (CAS 7789-23-3, ГОСТ 20848-75), ацетонитрил (ТУ 6-09-5497-91), ацетат натрия (ГОСТ 199-78), уксусная кислота (ГОСТ 19814-74), дихлорметан (Supelco, кат. № 1.06044.2500), картриджи для твердофазной экстракции (ТФЭ) Supel-Select HLB 60 мг (Supelco, кат. № 54182-U), устройство для проведения ТФЭ Visiprep SPE Vacuum Manifold (Supelco, кат. № 57030-U), смесь алканов С5-С44 (Supelco).
Объекты анализа Аналитический стандарт состава фтортабу-на был получен в лаборатории. Образцы плазмы крови, in vitro экспонированные табуном (получены как контрольные образцы при участии лаборатории в международных сличительных испытаниях).
Пробоподготовка образцов плазмы крови,
in vitro экспонированных табуном К 1 мл плазмы крови добавляли 1 мл ацетатного буферного раствора (pH 3,5) и 0,2 мл водного раствора KF (5,25М). Смесь термо-
MEDICAL AND BIOLOGICAL ASSURANCE OF THE CHEMICAL SAFETY OF THE RUSSIAN FEDERATION
Рис. 1. Схема реакции реактивирования БХЭ, ингибированной табуном, с помощью фторид-иона.
статировали в течение 30 мин при 32 ± 2 °С и центрифугировали в течение 10 мин при 4000 rpm. Затем выполняли следующую последовательность операций. Сорбент Supelco HLB (60 мг) кондиционировали 1 мл метанола и 1 мл деионизованной воды. Образец биопробы пропускали через сорбент со скоростью 1 капля/с. Затем сорбент сушили под слабым вакуумом в течение 15 мин. Элюирование целевых веществ проводили хлористым метиленом (3 х 1 мл). Элюат собирали в хроматографическую виалу через воронку с сульфатом натрия и упаривали в токе азота до объема 0,1 мл. Сконцентрированный экстракт анализировали методами ГХ-МС-ИЭ и ГХ-МС/МС-ИЭ.
Оборудование и условия проведения инструментального анализа
Газовый хроматограф модели 7890 А с масс-селективным детектором с тройным квадрупо-лем Agilent модели 7000 с программным обеспечением Mass Hunter. Условия анализа: температура испарителя 280 °С; объем вводимой пробы 1 мкл; ввод пробы без деления потока (1,0 мин); температурная программа: 40 °C (3 мин) -10 °C /мин - 150 °C (0 мин) - 15 °C /мин - 220 °C (1 мин) - 20 °C /мин - 280 °C (1 мин); температура источника ионов 200 °С; газ-носитель -гелий; расход газа-носителя 1 мл/мин; температура интерфейса 280 °С; расходы азота и гелия 1,5 и 2,25 мл/мин соответственно; время задержки растворителя 4 мин; режимы детектирования - сканирование по полному ионному току в диапазоне массовых чисел m/z 40-200 и мониторинг множественных реакций (ММР) в режиме ионизации электронами(ИЭ).
Результаты и обсуждение
Табун относится к боевым отравляющим веществам нервно-паралитического действия и включен в Список 1 Токсичных химикатов Приложения к Конвенции ОЗХО. Воздействие табуна, как и других ОВ G-типа, сопровождается быстрым образованием ковалентной связи между атомом фосфора молекулы ОВ и активным сайтом серина ХЭ крови Ser198. При этом, в случае интоксикации зарином или зоманом выделяется фторид-ион, табуном - циано-группа. При обработке образца плазмы крови, in vitro экспонированной табуном, фторидом калия в кислой среде, происходит образование фторта-буна. Схема реакции представлена на рис. 1.
В доступной литературе [8, 9] представлен способ определения фтортабуна методом ГХ-МС и ГХ-МС-ВР. В настоящей работе изучены особенности масс-спектров электронной ионизации фтортабуна, полученных при реализации метода ГХ-МС/МС в режиме электронной ионизации [11].
Подбор условий хроматографического разделения и масс-спектрометрического детектирования фтортабуна при реализации метода ГХ-МС/МС
Для подбора условий хроматографического разделения и масс-спектрометрического детектирования фтортабуна был проанализирован раствор фтортабуна в ацетонитриле с концентрацией 10 мкг/мл методом ГХ-МС-ИЭ в режиме сканирования по полному ионному току в диапазоне m/z 40-250. Из масс-спектра были выбраны наиболее интенсивные сигналы с m/z 155 [М]+ и 126 [М-С2Н5]+, которые соот-
209
МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ ХИМИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Та блица 1 Оптимизированные параметры детектирования фтортабуна в режиме мониторинга множественных реакций
Соединение RT, мин Мониторинг множественных реакций-переход Энергия соударений, эВ
155 — 126 6
Фтортабун 12,3 155 — 44 12
126 — 42 12
ветствуют молекулярному иону [^^^N0^]+ и фрагменту [С2НД№02Р]+. Для указанных ионов были зарегистрированы масс-спектры диссоциации, индуцированной соударениями в диапазоне энергий от 3 до 12 эВ с шагом 3 эВ.
Критерием оптимального значения энергии соударений служила величина интенсивности аналитического сигнала от характеристичного перехода, полученная при данном значении энергии. В качестве оптимального значения была выбрана величина, при которой была получена максимальная интенсивность аналитического сигнала, табл. 1.
На рис. 2 представлена хроматограмма, полученная при анализе стандартного раствора фтортабуна в ацетонитриле с концентрацией 10 мкг/мл при реализации оптимизированного метода ГХ-МС/МС в режиме мониторинга множественных реакций (ММР).
Переход 155—>126 является самым характеристичным, но в то же время обладающим наименьшей интенсивностью. При низких значениях концентраций определяемого соединения в биопробе детектирование проводили по наиболее интенсивным переходам 155—44 и 126—42. Хроматографические и масс-спектрометрические характеристики фтортабу-на приведены в табл. 2.
Для определения индекса удерживания (ИУ) хроматографировали раствор фтортабуна в аце-тонитриле с концентрацией 10 мкг/мл с внесением стандартной смеси реперных соединений -н-алканов С5-С44 в режиме детектирования по полному ионному току в диапазоне m/z от 45 до 550. Расчет линейных индексов удерживания был произведен в программе GCMS Solution. Величина ИУ на слабополярной фазе (HP-5) для фтортабуна составила 954 ± 2 ед.инд [11]. Экспериментально вычисленный газохромато-
Рис. 2. ГХ-МС/МС-хроматограмма стандартного раствора фтортабуна в ацетонитриле
с концентрацией 10 мкг/мл.
MEDICAL AND BIOLOGICAL ASSURANCE OF THE CHEMICAL SAFETY OF THE RUSSIAN FEDERATION
Таблица 2 Хроматографические и масс-спектральные характеристики фтортабуна
Соединение Ыасс-спектр ИЭ [70 эB, m/z > 40, 1отн > 2%] Ыасс-спектр в режиме SIM ГХЫС высокого разрешения ММР-ИЭ (энергия коллизии, эВ)
Фтортабун (CH3)2NP(O)(F)OC2H5 44 (100) 43 (96) 42 (95) 126 (64) 155 (25) 155,0506 126,0115 155 ^ 126 (6) 155 ^ 44 (12) 126 ^ 42 (12)
Примечание. В скобках представлена относительная интенсивность сигнала (в процентах от максимального пика).
Таблица 3 Соотношение сигнал/шум при определении регенерированного фтортабуна в плазме крови методом ГХ с разными способами детектирования
Содержание табуна в образце плазмы крови, нг/мл ГХ-ЫСМС ГХ-ЫС-BP
характеристичный переход s/n точная масса s/n
10 126 ^ 42 60 126,0115 286
155 ^ 44 10 155,0506 398
20 126 ^ 42 122 126,0115 639
155 ^ 44 50 155,0506 864
60 126 ^ 42 460 126,0115 2282
155 ^ 44 171 155,0506 2470
графический индекс удерживания фтортабуна впоследствии был подтвержден в работе Сето и соавт. [14] - ИУ 951,80 ± 3,27.
Определение фтортабуна в плазме крови
Подобранные условия идентификации фтортабуна методом ГХ-МС/МС-ИЭ были апробированы при анализе образцов плазмы крови, in vitro экспонированных табуном, в рамках решения задач 3-го квалификационного теста ОЗХО по анализу биомедицинских проб.
Сравнительный анализ эффективности различных видов масс-спектрометрического детектирования для определения регенерированного фтортабуна в плазме крови представлен в табл. 3.
Как следует из данных табл. 3, соотношение s/n при реализации метода ГХ-МС-ВР практически на порядок больше, чем в методе ГХ-МС/МС. Метод ГХ-МС-ВР позволяет проводить сверхвысокочувствительный и специ-
фичный целевой анализ, дающий достаточную информацию для достоверной идентификации определяемого вещества. К ограничениям метода ГХ-МС-ВР следует отнести высокую стоимость оборудования, сложности настройки прибора при детектировании легких масс, быстрое загрязнение ионного источника матричными компонентами. Метод ГХ-МС-ВР может рассматриваться как метод арбитражного анализа для подтверждения результатов, полученных методом ГХ-МС/МС.
Заключение
В настоящем исследовании дополнен набор идентификационных признаков, необходимых для достоверного надежного определения маркёра табуна - Д^-диметиламидо-О-этилфторфосфата (фтортабуна) в плазме крови. В доступных литературных источниках способов определения фтортабуна методом
211
МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ ХИМИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ГХ-МС/МС не найдено, в библиотеках масс-спектров NIST 14, OCAD 2018 индекс удерживания данного соединения не представлен.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
ЛИТЕРАТУРА
(пп. 2, 5-10 см. в REFERENCES)
I. Корягина Н.Л., Савельева Е.И., Хлебникова Н.С., Уколов А.И., Уколова Е.С., Каракашев Г.В., Радилов А.С. Хромато-масс-спектрометрическое определение алкилметилфосфоновых кислот в моче. Масс-спектрометрия. 2015; 12(4): 236-46.
3. Корягина Н.Л., Савельева Е.И., Каракашев Г.В., Бабаков В.Н., Дубровский Я.А., Уколова Е.С., Хлебникова Н.С., Мурашко Е.А., Конева В.Ю., Уколов А.И., Копейкин В.А., Радилов А.С. Определение конъюги-рованных с белками метаболитов фосфорорганиче-ских отравляющих веществ в плазме крови. Журнал аналитической химии. 2016; 71(8): 883-93.
4. Корягина Н.Л., Савельева Е.И., Хлебникова Н.С., Копейкин В.А., Конева В.Ю., Радилов А.С. Особенности анализа фосфорорганических отравляющих веществ, реактивированных из состава аддуктов с белками крови при установлении факта воздействия химического оружия. Токсикол. вест. 2014; 4: 39-46.
II. М.Д. Шачнева, Н.Л. Корягина, Е.И. Савельева, А.И. Уколов, Е.Д. Кессених, Н.С. Хлебникова, А.С. Радилов. Усовершенствованный способ определения маркера табуна - фтортабуна в плазме крови методом газовой хроматомасс-спектрометрии. Медико-биологические аспекты химической безопасности: Сборник трудов III всероссийской научной конференции молодых ученых. Санкт-Петербург 5-7 сентября 2018. Под общей редакцией д.м.н., профессора А.С. Радилова и д.м.н., профессора В.Р. Рембовского. СПб; 2018: 139.
REFERENCES
1. Koryagina N.L., Savelieva E.I., Khlebnikova N.S., Ukolov A.I., Ukolova E.S., Karakashev G.V, Radilov A.S. Chromatography-mass spectrometry determination of alkylmethylphosphonic acids in urine. Mass-spe-ktrometriya. 2015; 12(4): 236-46. (in Russian)
2. Baygildiev T., Zatirakha A., Rodin I., Braun A., Stavri-anidi A., Koryagina N., Rybalchenko I., Shpigun O. Rapid IC-MS/MS determination of methylphosphonic acid in urine of rats exposed to organophosphorus nerve agents. J. Chrom. B. 2017; 1058: 32-9.
3. Koryagina N.L., Savelieva E.I., Karakashev G.V., Baba-kov V.N., Dubrovskiy Y.A., Ukolova E.S., Khlebnikova
N.S., Murashko E.A., Koneva V.Y., Ukolov A.I., Kopey-kin V.A., Radilov A.S. Determination of protein-conjugated metabolites of organophosphorus toxic agents in plasma. J. analiticheskoy Chimii. 2016; 71(8): 883-93. (in Russian)
4. Koryagina N.L., Savelieva E.I., Khlebnikova N.S., Ko-peykin V.A., Koneva V.Y., Radilov A.S. Features of the analysis of organophosphorus toxic substances reactivated from adducts with blood proteins in determining the fact of impact of chemical weapons. Toksikol. vest. 2014; 4: 39-46. (in Russian)
5. Polhuijs M., Langenberg J.P., Benschop H.P. New Method for Retrospective Detection of Exposure to Or-ganophosphorus Anticholinesterases: Application to Alleged Sarin Victims of Japanese Terrorists. Toxicol. Appl. Pharmacol. 1997; 146(1): 156-61.
6. Holland K.E., Solano M.I., Johnson R.C. et al. Modifications to the Organophosphorus Nerve Agent-Protein Ad-duct Refluoridation Method for Retrospective Analysis of Nerve Agent Exposures. J. Anal. Toxicol. 2008; 32(1): 116-24.
7. Solano M.I., Thomas J.D., Taylor J.T. et al. Quantification of Nerve Agent VX-Butyrylcholinesterase Adduct Biomarker from an Accidental Exposure. J. Anal. Toxicol. 2008; 32(1): 68-73.
8. Carla E.A.M. Degenhardt, Kees Pleijsier, Marcel J. van der Schans, and Jan P, Langenberg. Improvements of the Fluoride Reactivation Method for the Verification of Nerve Agent Exposure. J. Anal. Toxicol. 2004; 28: 364-71.
9. Seto Y., Kanamori-Kataoka M., Komano A., Nagoya T., Sasano R., Matsuo Sh. Gas chromatography-mass spectrometry with spiral large volume injection for determination of fluoridated phosphonates produced by fluoridemediated regeneration of nerve agent adduct in human serum. J. Chrom. A. 2019; 1583: 108-16.
10 Holland K.E., Solano K.E., Johnson R.C. et al. Modifications to the organophosphorus nerve agent-protein adduct refluoridation method for retrospective analysis of nerve agent exposures. J. Anal. Toxicol. 2008; 32(1): 116-24.
11. Shachneva M.D., Koryagina N.L., Savelieva E.I., Ukolov A.I., Kessenikh E.D., Khlebnikova N.S., Radilov A.S. Improved method for determining the tabun marker - fluorotabun in blood plasma by gas chroma-tography-mass spectrometry. Medical and biological aspects of chemical safety: Book of abstracts presented at III All-russian scientific conference of young scientists. St. Petersburg. 5-7 September 2018 [Mediko-biologicheskie aspekty chimicheskoy bezopasnosti: Sbornik trudov III vserossiiskoy nauchnoy konferencii molodykh uchenykh]. SPb; 2018: 139. (in Russian)
Поступила 05.02.2019 Принята в печать 21.05.2019
