CC BY
38
изменяет эффективность связывания ДНК с праймерами к неметилированной ДНК, это проявляется различным образом у крыс линий ВП и НП. В гиппокампе подобных изменений под влиянием ДЭБС и МЭБС не обнаружено, что указывает на существование более жестких факторов защиты генома в нервной ткани.
Литература.
1. Вайдо А.И., Дюжикова Н.А., Ширяева Н.В., Соколова Н.Е., Вшивцева В.В., Савенко Ю.Н. Системный контроль молекулярно-клеточных и эпигенетических механизмов долгосрочных последствий стресса. // Генетика.2009.Т.45. №3.C.342-348.
2. Hecht K., Treptov K., Choinovski K., Peschel M. Die raum-zeitliche organisation der reiz-reaktion-beziehungen bedingt reflectorische rprozesse. - Yena: Fischer. 1972. 213 p.
Ключевые слова: метилирование ДНК, гиппокамп, костный мозг, психоэмоци-альный стресс, возбудимость, ген GRIN1, крысы.
Key words: DNA methylation, hippocampus, bone marrow, psychoemotional stress, excitability, GRIN 1 gene, rats.
УДК 616.151
C.A. Смирнова, А.Б. Смолянинов
ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА ЖИЗНЕСПОСОБНЫХСБ34+ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ПУПОВИННОЙ КРОВИ ПОСЛЕ ЗАМОРАЖИВАНИЯ1
1 ООО «Покровский банк стволовых клеток»; 2 Санкт-Петербургский государственный университет, Россия, [email protected]
Введение. В практике иммунофенотипирования особое место занимает работа с малоклеточными популяциями, и в первую очередь, гемопоэтическими стволовыми клетками (ГСК), используемыми для аутологичной и аллогенной видов трансплантаций [1]. В настоящее время, выявление и учет CD34+ клеток в различном биологическом материале осуществляется с помощью ISHAGE
1Smirnova S.A., Smolyaninov A.B. Flow cytometric enumeration of CD34+ haematopoietic stem
cells in thawed Cord Blood Units.
протокола. Однако на данный момент отсутствует общепринятый стандартизированный протокол исследования криоконсервированной пуповинной крови (ПК). Разработка рекомендаций для анализа размороженных образцов ПК позволит повысить воспроизводимость результатов между лабораториями и обеспечит их достоверность.
Целью данной работы являлось изучение влияния лизиса эритроцитов (как одного из критических этапов в процедуре пробоподготовки образца) на процент определяемых CD34+ клеток.
Материалы и методы. В работе были использованы 20 образцов ПК, находящихся на длительном криохранении в ОРДПК НИЛ клеточных технологий Северо-Западного Государственного Медицинского университета имени И.И. Мечникова и Покровского банка стволовых клеток (срок хранения - от 10 месяцев до 3 лет). Материалом для исследования служила кровь, полученная из магистрали криопакета. Оттаивание образцов проводили на водяной бане при 37 °С в течение 5 минут [2]. Далее образец разделяли на две равные части: первую аликвоту крови разводили раствором PBS до конечной концентрации 15*106кл/мл и проводили лизис эритроцитов по безотмывочной технологии (инкубация образца с лизирующим раствором не проводилась, сразу после добавления раствора образец анализировали на проточном цитометре); вторую часть разводили до конечной концентрации 5*106кл/мл и лизис эритроцитов не проводили. Для подсчета количества CD34+ клеток использовали реагенты набора StemKit (BeckmanCoulter, ША).Измерения проводили на проточном цитометре FC 500 (BeckmanCoulter, США), оснащенном программой CXP-Cytometer с программным обеспечением stemCXPSystem для автоматического подсчета гемопоэтических клеток.
Результаты исследования. При сравнении средних значений характеристик образцов ПК, таких как количество жизнеспособных CD34+ клеток и лейкоцитов, между двумя группами, достоверных отличий выявлено не было (p>0,05). Полученные данные свидетельствуют о том, что лизис эритроцитов в образце криоконсервированной ПК без инкубации в течении 10 минут (в соответствие с инструкцией производителя) не приводит к значительному снижению при анализе количества CD34+ ГСК и лейкоцитов.
Заключение. Изменение условий подготовки проб криоконсервированной крови для определения количества жизнеспособных CD34+ ГСК, а именно исключение этапа лизиса эритроцитов, не приводит к достоверному снижению
количества погибших CD34+ ГСК. Однако, поскольку в данном исследовании этап лизиса был максимально сокращен во времени, невозможно судить о влиянии продолжительности лизирования на процент определяемых CD34+ клеток. В связи с этим, в дальнейшем потребуется изучить влияние времени инкубации образца с лизирующим раствором на количество выявляемых при анализе CD34+ ГСК.
Литература:
1. Lacombe, F. Flow cytometry CD45 gating for immunophenotyping of acute myeloid leukemia / F. Lacombe, F. Durrieu, A. Briais, P. Dumain, F. Belloc, E. Bas-cans // Leukemia. - 1997. - Vol.11. - P. 1878-1886.
2. Rubinstein, P. Processing and cryopreservation of placental umbilical cord blood for unrelated bone marrow reconstitution / L. Dobrila, R. E. Rosenfield, J.W. Adamson // PNAS. - 1995. - Vol. 92. - no. 22. - P.10119-10122.
Ключевые слова: CD34+ гемопоэтические стволовые клетки, пуповинная кровь, проточная цитометрия.
Key words: CD34+ haematopoietic stem cells, Cord Blood, flow cytometry.
12 2 Хавинсон В.Х.’, Линькова Н.С. ,
22 УмновР.С. , ЧервяковаН.А.
ПЕПТИДЕРГИЧЕСКАЯ РЕГУЛЯЦИЯ ФУНКЦИЙ НЕРВНОЙ И ИММУННОЙ СИСТЕМЫ ПРИ СТАРЕНИИ
1 Институт физиологии им. И.П. Павлова РАН, Санкт-Петербург, Россия;
2Санкт-Петербургский институт биорегуляции и геронтологии, Санкт-Петербург, Россия, miayy@yandex. ru
Нейродегенеративные заболевания снижают функции мозга и иммунной системы и являются одной из причин смертности у лиц старше 60 лет. При этом значительная часть патологий, связанных с гибелью нейронов, снижением когнитивных функций (болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона и др.), возрастной инволюцией тимуса (аутоиммунные, инфекционные, онкологические заболевания) у людей пожилого возраста представляют большую проблему. Новым подходом к восстановлению функций мозга и тимуса является приме-
