CC BY
16
УДК 611. 018.18: 617.58-002.44- 089.17
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭКСПРЕССИИ СИНТЕЗА ПРОАПОПТОТИЧЕ-СКОГО БЕЛКА Р53 И АНТИАПОПТОТИЧЕСКОГО БЕЛКА BCL-2 У ФИБРОБЛАСТОВ ДЛЯ ОЦЕНКИ ЗАЖИВЛЕНИЯ ТРОФИЧЕСКИХ ЯЗВ НИЖНИХ КОНЕЧНОСТЕЙ
Нузова1 О.Б., Стадников1 А.А., Файзулина1'2 Р.Р., Колосова1 Н.И.
'ФГБОУ ВО «Оренбургский государственный медицинский университет», г. Оренбург, Российская Федерация 2ГАУЗ "Городская клиническая больница им. Н. И. Пирогова" г. Оренбург, Российская Федерация
Аннотация. Изучение лечебной эффективности сочетанного местного применения милиацила и магнитолазеро-терапии проведено у 40 больных с трофическими язвами (основная группа). Контролем служили 110 аналогичных больных, у которых местное лечение трофических язв не включало использование милиацила и магнитола-зеротерапии. Обоснованный способ прогнозирования течения заживления трофических язв, основанный на определении экспрессии синтеза проапоптотического белка р53 и антиапоптотического белка bcl-2 у фибробластов до лечения, на 7 день консервативного лечения имеет большое значение для оценки эффективности заживления трофических язв, помогает правильно скорректировать лечение.
Ключевые слова: прогнозирование, заживление, трофическая язва, лечение
Введение. Лечение трофических язв нижних конечностей является одной из важнейших проблем хирургии, которой посвящены многочисленные исследования. Большое значение имеет местная терапия трофических язв [3]. Продолжается поиск новых и более эффективных методов и средств местного применения, обладающих оптимизирующим воздействием на репаративные гистогенезы. Этим требованиям соответствует созданный профессором Б.Г. Нузовым и профессором Л.Е. Олифсоном в Оренбургском государственном медицинском университете ранозаживляющий препарат милиа-цил - просяное масло. В последние годы в литературе появились данные об успешном использовании в комплексном лечении трофических язв физиотерапевтических методов воздействия.
Раннее прогнозирование характера течения заболевания позволяет своевременно предпринять определенные мероприятия по предупреждению неблагоприятных осложнений. Апоптоз или запрограммированная форма клеточной гибели, наряду с делением, ростом, дифференцировкой, играет чрезвычайно важную роль в формировании и функционировании многоклеточных организмов [1,2,4,5].
Цель исследования - обосновать способ прогнозирования заживления трофических язв нижних конечностей на основе иммуноцитохимической идентификации экспрессии проапоптотического белка р53, антиапоптотического белка Ьс1-2.
Материалы и методы исследования. Исследования проведены у 150 больных с трофическими язвами нижних конечностей. Из 150 больных 105 (70 %) составляли женщины, 45 (30%) - мужчины. Изучение лечебной эффективности сочетанного местного применения милиацила и магнитолазеро-терапии аппаратом «Изель - 2» проведено у 40 больных с трофическими язвами (основная группа). Контролем служили 110 аналогичных больных, у которых местное лечение трофических язв не включало использование милиацила и магнитола-зеротерапии. Для лечения больных первой контрольной группы (37 пациента) с трофическими язвами местно применяли милиацил и лазерное излучение от аппарата АМЛТ-10-01. Во второй контрольной группе (36 больных) использовали только милиацил. В третьей контрольной группе (37 пациента) применяли местно в течение первых 7-10 дней (до очищения язв от гнойно-некротических
—--—
Журнал включен в Перечень рецензируемых научных изданий ВАК
масс) 1% раствор диоксидина, а затем облепиховое масло.
При поступлении больных с трофическими язвами в стационар проводили удаление патологически измененных тканей по окружности язвы и под ней. Оценка результатов лечения больных осуществлялась на основании изучения общего состояния пациентов и данных местного течения процесса. У больных основной и контрольных групп использовали иммуноцитохимическое исследование тканей язв при поступлении, на 7-й день консервативного лечения при их согласии. Забор материала производился под местной новокаиновой анестезией путем иссечения стерильным лезвием фрагмента из края и глубины трофической язвы. Седьмой день лечения является наиболее объективным для получения динамики процессов заживления трофических язв.
Для определения экспрессии проапоптотиче-ского белка р53, а также для определения экспрессии антиапоптотического белка Ьс1-2, обьекты фиксировали в 10% водном растворе нейтрального формалина с последующей спиртовой дегидратацией и заливкой в парафин целлоидин. Затем серийные гистосрезы (толщиной 5-6 мкм) инкубировали с соответствующими моноклональными антителами (фирма <^ако», Дания) в рабочем разведении 1:50. Для визуализации структур использовали стретавидин-биотиновый пероксидазный метод ^ако LSAB-kit, Дания) с дополнительным окрашиванием ядер клеток гематоксилином Май-ера. Полученные данные были обработаны на ЭВМ с помощью программы «Статистика 6.1».
Результаты и их обсуждение. Результаты проведенных клинических исследований больных с трофическими язвами нижних конечностей свидетельствуют о том, что эффективным оказалось использование милиацила и лазеротерапии и особенно применение милиацила и магнитолазеротерапии.
В среднем сроки лечения трофических язв нижних конечностей меньше у больных основной группы в 1,2 раза, чем у пациентов первой контрольной группы и соответственно в 1,7 и 2,6 раза, чем у больных второй и третьей контрольных групп.
О преимущественном воздействии милиацила и магнитолазеротерапии свидетельствуют и проведенные в динамике исследования экспрессии синтезе проапоптотического белка р53 и антиапопто-тических белка Ьс1-2 у фибробластов.
При поступлении в стационар эти показатели составляли 21,4±1,41% и 0,7±0,08% соответ-
ственно. При изучении экспрессии проапоптотиче-ского протеина р53 (%) выявлено, что у больных основной группы, данный показатель составил 9,2±0,92%, что достоверно меньше (р <0,05) в сравнении с таковым показателем пациентов первой контрольной группы (10,6± 0,26%), у больных второй контрольной группы (17,9± 1,42%) и пациентов третьей контрольной группы (20,3± 1,64%).
Милиацил и магнитолазерное излучение стимулирует пролиферативную активность клеток раневой области и приводит к лимитированию апопто-тической доминанты (противоапоптозное действии). При этом при применении 1 % раствора ди-оксидина и облепихового масла, проведенными исследованиями обнаружено, что пролиферативная активность клеток была существенно снижена на фоне интенсивной экспрессии гена р53 и подавления экспрессии гена Ьс1-2. Последний показатель при лечении трофических язв нижних конечностей 1% раствором диоксидина и облепиховым маслом составил 1,2±0,01%. Он был ниже (р <0,05) аналогичного при использовании милиацила (1,4±0,06%), милиацила и лучей лазера (1,6±0,06%), милиацила и магнитолазеротерапии (3,7±0,04%). Высокая эффективность данного метода лечения доказывалась показателями экспрессии синтеза проапоптотического белка р53 и антиа-поптотических белка Ьс1-2 у фибробластов раневой области трофической язвы.
Милиацил и магнитолазерное излучение значительно стимулирует пролиферативную активность клеток раневой области и приводит к лимитированию апоптотической доминанты (противоапоптоз-ное действии). Клинические данные подтвердились значениями экспрессии проапоптотического белка р53 и антиапоптотического белка Ьс1-2 у фибробластов. При лечение трофических язв милиацилом и лазеротерапией через 7 дней показатель экспрессии проапоптотического белка р53 уменьшился в 2 раза, а показатель экспрессии антиапоптоического белка Ьс1-2 увеличился в 2,3 раза. Через 7 дней лечения трофических язв милиацилом и магнитолазе-ротерапией показатель экспрессии проапоптотиче-ского белка р53 уменьшился в 2,3 раза, а показатель экспрессии антиапоптотического белка Ьс1-2 увеличился в 5,3 раза.
Выводы. Таким образом, по показателям экспрессии синтеза проапоптотичесого белка р53 и антиапоптотического белка Ьс1-2 у фибробластов раневой области в динамике можно судить об эффективности заживления. Повышение показателя экспрессии антиапоптотического белка Ьс1-2 на 7
Журнал включен в Перечень рецензируемых научных изданий ВАК
~ 58 ~
сутки лечения в 2,3 раза и понижение экспрессии проапоптоического белка р53 в 2 раза свидетельствуют о благоприятном заживление трофических язв. Предлагаемый способ объективен, прост, позволяет оценить эффективность заживления трофических язв, помогает правильно скорректировать лечение.
ЛИТЕРАТУРА
1. Владимирская, Е. Б. Механизмы апоптоза клеток крови Владимирская // Лабораторная медицина. 2001. № 4. С. 47-54.
2. Ильина Т.С., Романова Ю.М., Гинцбург А.Л. Биопленки как способ существования бактерий в окружающей среде и организме хозяина: феномен, генетический контроль и системы регуляции их развития // Генетика. 2004. Т. 40, № 11. С. 1445-1456.
3. Нузов Б.Г., Стадников А.А., Нузова О.Б. Оптимизация репаративной регенерации тканей. М.: Медицина, 2012. 200 с.
4. Green D.R., Reed J.C. Mitochondria and apoptosis // Science. 1998. № 281. Р. 1309-1312.
5. Kelekar T., Thompson C.Bcl-2 family proteins // Trends Cell. Biol. 1998. № 8. Р. 324-330.
DETERMINING THE EXPRESSION ОF PROAPOPTOTIC PROTEIN P53 AND APOPTOTIC PROTEIN BCL-2 SYNTHESIS IN FIBROBLASTS TO EVALUATE TOE TROPHIC ULCERS HEALING IN LOWER EXTREMITES
Nuzova10.B., Stadnikov1 A.A., Faizulina1,2 R.R., Kolosova1 N.I.
'Orenburg State Medical University, Orenburg, Russian Federation 2 City Clinical Hospital named after N.I. Pirogov, Orenburg, Russian Federation
Annotation. The study of therapeutic effect of the combined local application of Miliacile and magnetolaser-therapy has been conducted on 40 patients with trophic ulcers (basic group). The control group included 110 patiens with analogous pathology. The local treatment of trophic ulcers in these patients did not include Miliacile and magnetolaser- therapy. A new method of prognostication the healing of trophic ulcers in lower extremeties, which is based on determining the expression of synthesis of the proapoptotic p53 protein and antiapoptotic bcl-2 protein in fibroblasts, prior to treatment and on the 7th day of conservative treatment, is of great importance for assessing the effectiveness of trophic ulcers healing and it is of help in treatment correction.
Key words : prognosis, healing, trophic ulcer, treatment
REFERENCES
1. Vladimirskaya, Ye. B. Mekhanizmy apoptoza kletok krovi Vladimirskaya // Laboratornaya meditsina. 2001. № 4. S. 47-54.
2. Il'ina T.S., Romanova YU.M., Gintsburg A.L. Bioplenki kak sposob sushchestvovaniya bakteriy v okruzhayushchey srede i organizme khozyaina: feno-men, geneticheskiy kontrol' i sistemy regulyatsii ikh razvitiya // Genetika. 2004. T. 40, № 11. S. 1445-1456.
3. Nuzov B.G., Stadnikov A.A., Nuzova O.B. Op-timizacija reparativnoj regeneracii tkanej. M.: Medicina, 2012. 200 s.
4. Green D.R., Reed J.C. Mitochondria and apoptosis // Science. 1998. № 281. P. 1309-1312.
5. Kelekar T., Thompson C.Bcl-2 family proteins // Trends Cell. Biol. 1998. № 8. P. 324-330.
—--—
Журнал включен в Перечень рецензируемых научных изданий ВАК
