CC BY
23
БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТАГОНИСТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ И ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ВЫДЕЛЕННЫХ КУЛЬТУР ИЗ КИШЕЧНИКА ТЕЛЯТ К АНТИБИОТИКАМ Маматкулова Ф.А.1, Жураева У.М.2, Черкасова Г.В.3, Хамидова Х.М.4 Email: Mam atkulova1136@scientifictext.ru
'Маматкулова Феруза Абдурашид кизи — магистр, биологический факультет; 2Жураева Умида Миркамиловна — доцент, кафедра микробиологии, биологический факультет, Национальный университет им. Мирзо Улугбека;
3Черкасова Галина Викторовна - кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник;
4ХамидоваХуршидаМуминовна - кандидат биологических наук, директор, Научно-исследовательский институт микробиологии Академии наук Республики Узбекистан, г. Ташкент, Республика Узбекистан
Аннотация: на сегодняшний день считается бесспорным, что дисбактериозы у сельскохозяйственных животных и птиц приобретают широкое распространение, так как при отсутствии своевременной коррекции нарушений нормальной микрофлоры кишечника весьма высока вероятность развития у них тяжелых, рецидивирующих инфекционных заболеваний, иммунодефицитов, различных аллергопатий, анемий, гастроэнтерологических и других болезней, включая отставание в привесах, роста и развития, снижение репродуктивности. Учитывая отмеченное, профилактика и лечение инфекционных заболеваний и дисбактериозов сельскохозяйственных животных и птиц в настоящее время и на ближайшую перспективу являются приоритетными задачами ветеринарии и микробиологии. В связи с утерей актуальности применения антибиотиков в сельском хозяйстве на смену им пришли пробиотики. В Узбекистане производства ветеринарных пробиотиков практически нет. Поэтому поиск новых культур, выделенных из ЖКТ животных и природных источников, - это актуально и ново.
Ключевые слова: пробиотики, антибиотики, дисбактериоз, условно патогенные бактерии, чувствительность, ветеринария, микробиология.
DETERMINATION OF THE ANTAGONISTIC ACTIVITY AND SENSITIVITY OF ALLOCATED CULTIVARS FROM THE INTELLIGENT OF CALVES TO ANTIBIOTICS Mamatkulova F.A.1, Zhuraeva U.M.2, Cherkasova G.V.3, Khamidova Kh.M.4
'Mamatkulova Feruza Abdurashid kizi — Master, FACULTY OF BIOLOGY; 2Zhuraeva Umida Mirkamilovna - Associate Professor, DEPARTMENT OF MICROBIOLOGY, BIOLOGICAL FACULTY, NATIONAL UNIVERSITY NAMED AFTER MIRZO ULUGBEK;
3Cherkasova Galina Viktorovna - Candidate of Biological Sciences, Leading Researcher;
4Khamidova Khurshida Muminovna - Candidate of Biological Sciences, Director, RESEARCH INSTITUTE OF MICROBIOLOGY OF THE ACADEMY OF SCIENCES OF THE REPUBLIC OF UZBEKISTAN, TASHKENT, REPUBLIC OF UZBEKISTAN
Abstract: for today it is considered indisputable that dysbiosis in agricultural animals and birds is becoming widespread, since in the absence of timely correction of violations of normal intestinal microflora, the probability of developing severe, recurrent infectious diseases, immunodeficiencies, various allergopathy, anemia, gastroenterological and other diseases is very high , Including a backlog in weight gain, growth and development, a decline in reproductive performance. Taking into account the mentioned, prevention and treatment of infectious diseases and dysbacteriosis of agricultural animals and birds are currently priority tasks for veterinary and microbiology at present and for the near future. In connection with the loss of the relevance of the use of antibiotics in agriculture, they were replaced by probiotics. In Uzbekistan, there is practically no production of veterinary probiotics. Therefore, the search for new cultures isolated from the digestive tract of animals and natural sources is relevant and new.
Keywords: probiotics, antibiotics, dysbacteriosis, conditionally pathogenic bacteria, sensitivity, veterinary medicine, microbiology.
УДК 579.222
В последние годы в Узбекистане наблюдается резкое изменение эпидемической и эпизоотической ситуации, что, безусловно связано с нарастанием неблагоприятных изменений в экосфере. Отмечено повышение удельного веса дисбактериозов, причиной которых являются ухудшение экологической обстановки, неконтролируемое использование в ветеринарии и сельском хозяйстве антибиотиков и различных химиопрепаратов, гормонов и т.п., а также стрессовые факторы и условия, снижающие качество питьевой воды и кормов.
На сегодня считается бесспорным, что дисбактериозы у сельскохозяйственных животных и птиц приобретают широкое распространение, так как при отсутствии своевременной коррекции нарушений нормофлоры кишечника весьма высока вероятность развития у них тяжелых, рецидивирующих инфекционных заболеваний, иммунодефицитов, различных аллергопатий, анемий, гастроэнтерологических и других болезней, включая отставание в привесах, роста и развития, снижение репродуктивности. Учитывая отмеченное, профилактика и лечение инфекционных заболеваний и дисбактериозов сельскохозяйственных животных и птиц в настоящее время и на ближайшую перспективу являются приоритетными задачами ветеринарии и микробиологии.
Целью данного исследования являлось определение антагонистической активности и чувствительности выделенных культур к антибиотикам.
Объект и методы исследования
Объектом исследования служили здоровые телята 3-месячного возраста. Исследовалось содержимое толстого кишечника - фекалии. Из отобранных образцов фекалий готовили серийные десятикратные разведения в стерильном физиологическом растворе. Для количественного определения числа бактерий проводили посев в элективную жидкую среду для молочнокислых бактерий - MRS.
Использованные материалы. Ниже приводится перечень использованных антибиотиков и условно-патогенных бактерий (тест-культуры):
Таблица 1. Перечень использованных антибиотиков и условно-патогенных бактерий (тест-культуры)
Антибиотики Тест-культуры
1. Erythromycin E15 I.Salmonella tuphimorium
2. Streptomycin S10 2.St.aureus
3. Gentamicin Gen10 3.Ps. aeruginosa
4. Chloramphenicol С30 4.Euterobacter cloacae
5. Cephotaxine CTX30 5.Proteus mirabilis
6. Amikacin Ak30 6.E.coli
7. Tetracyclin TE30 7.Candida albicans
8. Penicillin P10
9. Kanamycin K30
10. Ciprofloxacin CIP5
11. Rifampicil RIF5
12. Cefoperazone CPZ75
13. Ampicillin ANP10
14. Cefazolin CZ30
Определение антибиотической чувствительности диско-диффузионным методом.
Антибиотическую чувствительность определяют диско-диффузионным методом с помощью готовых бумажных дисков, пропитанных антибиотиками. На плотную питательную среду MRS поверхностным способом высевают 0,1 мл культуры МКБ плотностью ~ 2 млрд клеток/мл. КЖ тщательно распределяют шпателем по всей пластинке MRS агара. Через 15 мин после посева на поверхность агаровой пластинки накладывают бумажные диски, пропитанные антибиотиком. Чашки выдерживают в течение 24 часов при 37°С. Через 24 часа инкубации учитывали чувствительность выделенных культур к антибиотикам в мм [1].
Метод лунок
На поверхность твердой питательной среды МПА засевают по 0,1 мл условно патогенных тест-штаммов, которые распределяют шпателем Дригальского по всей поверхности агаровой пластинки. Через 15 мин. дыроколом вырезают лунки 0,8 мм диаметром, в которые вносят по 0,1 мл КЖ молочнокислых бактерий. После впитывания суспензии МКБ в агар, чашки переворачивают дном вверх и помещают в термостат при 37°С, через 1 сутки анализируют результаты. Зоны задержки роста УПК измеряют в мм [2].
№ культуры Salmonella tuphimorium St. aureus Ps. aeruginosa Euterobacter cloacae Proteus mirabilis E.coli Can. Albic.
1 тел 19,22 24,23 18,19 18,16 20,20 12,11 0
2 тел 13,12 21,23 18,18 18,16 18,18 13,13 0
Рис. 1. Антагонистическая активность МКБ
Из рисунка 1 и таблицы 2 видно, что молочнокислые бактерии частично подавляют рост условно патогенных культур. Из 7 проверенных условно патогенных культур частично подавляют рост Salmonella tuphimurium, St.aureus, Ps. aruginosa, Enterobacter cloacae, Proteus mirabilis, E.coli, но не подавляют рост Candida albicans.
В следующих исследованиях были проведены опыты по изучению чувствительности выделенных культур 1 -тел и 2-тел к различным антибиотикам. Полученные результаты приведены в 3 таблице и 2 рисунке.
Таблица 3. Чувствительность вы10еленныа; культур 1-тел и 2-тел к антибиотикам
№ антибиотиков Антибиотики 1 тел (мм) 2 тел (мм)
1. Erythromycin^" 14 13
2. Sla Streptomycin 11 14
3. Gentamicin i1 ; ■ ■ ■ 1 14 15
4. Г'Зп Chloramphenicol - 36 36
5. гтузо Cephotaxine - * -1 22 23
6. Л3а Amikacin - ■ -: 13 12
7. тр 30 Tetracyclin * ~ 35 37
8. Penicillin "5 18 15
9. Kanamycin -1"'1 " 3 0 14
10. rjps Ciprofloxacin - * * 19 19
11. Rifampicin ^ ~ ' 17 19
12. rp77S Cefoperazone - * — 22 20
13. Ampicillin 28 25
14. Cefazolin '■- ^ ' ' 14 0
а) б) в)
Рис. 2. Определение чувствительности к антибиотикам на среде MRS 1-тел
Из полученных результатов экспериментов видно, что культура Т-1 устойчива к Kanamycin (0 мм), (рис. 2. б 9), а культура Т-2 устойчива к Cefazolin (0мм). К остальным антибиотикам испытуемые культуры проявили чувствительность. Все это свидетельствует о том, что культуры Т-1 и Т-2, выделены от здоровых особей, к которым не применяли еще никакие антибиотики и имеющих хороший иммунитет. Поэтому ими подавляется рост многих условно-патогенных культур.
Из вышесказанного можно сделать следующие выводы: изученные культуры обладают антагонистической активностью ко всем использованным условно патогенным тест-культурам, таким как Salmonella tuphimurium, St. aureus, Ps. aeruginosa, Enterobacter cloacae, Proteus mirabilis, E. coli за исключением Candida albicans и чувствительностью ко всем вышеперечисленным антибиотикам. Также была изучена их чувствительность к различным антибиотикам на среде MRS. Полученные данные показывают, что культура Т-1 устойчива к канамицину, а Т-2 - к цефозолину. На основании этого данные культуры разнятся (отличаются) по чувствительности к антибиотикам.
Список литературы / References
1. Семина Н.А. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам: МУК 4.2.1890004 // Клин. микробиол. антимикроб. химиотер., 2004. № 4. С. 306-359.
2. Тец В.В. Микроорганизмы и антибиотики. Спб «Клет», 2006. С. 7-22.
