Онкоиммунология, гемобластозы Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Медицинская Иммунология 2003, Т.5, №3-4 ©2003, СПб РОРААКИ

ОНКОИММУНОЛОГИЯ, ГЕМ0БЛАСТ03Ы

МАРКЕРЫ АГИОГЕНЕЗА В ПРОГНОЗЕ УВЕАЛЬНОЙ МЕЛАНОМЫ

Астахова С.Е. *, Лихванцева В.Г., Ухов Ю.И. *, Степанова Е.В.**, Верещагина М.В.,

Сутулов А.Ю. *

Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им. Гельмгольца;

* Москва, Рязанский медицинский университет им. И.П. Павлова, Россия;

* * Российский онкологический Центр им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва, Россия

Доказано, что при прекращении кровоснабжения опухоль не растет, не метастазирует и может редуцироваться, а улучшение кровоснабжения сопровождается рецидивом роста. Поэтому не удивительно, что ангиогенные факторы, регулирующие ангиогенез (VEGF и рецептора к нему - Flt-1 и Flk-1/KDR-), рассматриваются с позиции прогностически значимых маркеров. VEGF - многофункциональный цитокин, стимулирует пролиферацию эндотелиальных клеток (ЭК), их миграционную способность, он - фактор их выживаемости ЭК. Передача сигнала внутрь клетки осуществляется через рецепторы на ЭК - Flt-1 и Flk-1/KDR-l. Flk-1/KDR-l наиболее важен для реализации всего спектра эффектов VEGF.

Цель работы: изучить роль ангиогенных факторов ангиогенеза (VEGF и рецепторы к нему - Flt-1 и Flk-1/ KDR) в патогенезе и прогнозе увеальной меланомы.

Материалы и методы. Иммуногистохимические исследования проводили на парафиновых срезах УМ (п=87) по стандартной методике с использованием стрептави-дин-биотиновой тест-системы и моноклональных антител к VEGF и рецепторов Flt-1 и Flk-l/KDR- (DAKO Corp.). Оценивали интенсивность окрашивания, место локализации и количество положительных клеток. В исследование включен 87 больной с различными стадиями T!-4N0Mfl УМ, получивший хирургическое лечение (энуклеация, блокэксцизия, экзентерация) в период между 1982-1999 гг. Причины и дата в случаях смерти официально установлены.

Результаты. VEGF в ЭК сосудов экспрессировался в 32,3 % УМ, причем в половине позитивных образцов все ЭК (100%) продуцировали VEGF. Продукция VEGF в ЭК обнаруживалась только к стадии T2N0M0(Mcp. =9,3±7,1%), далее нарастала, достигая максимума (30,4±7,2%) к стадии T4NQM0(p<0,01) и исчезая на фоне состоявшегося метастазирования (п=14). Продукция VEGF в опухолевых клетках (ОК) выявлена в 62,5% УМ (2-100% позитивных клеток в поле зрения). Причем в 50% позитивных случаев все ОК клетки (100%) фиксировали маркер. Пик продукции VEGF в ОК зафиксирован на стадии T,N0M0 - Мср 50,0±20,0%. При прогрессировании УМ его экспрессия снижалась. Рецепция Flk-KDR-1 обнаружена в 22,1 % УМ на уровне 3-100 %. Ретроспективный анализ результатов во взаимосвязи с исходами заболевания показал, что практически 50% пациентов, у которых >50% ОК экспрессировали VEGF, умерли за 10 лет наблюдения, в то время как при VEGF < 50%, смертность

составила 20%. Гиперэкспрессия VEGF ЭК сосудов (> 20% VEGF-позитивных клеток) также ассоциировалась с поздними стадиями УМ и повышением ее готовности к метастазированию.

Анализ результатов показал, что в патогенезе заболевания играют роль не только количество, интенсивность экспрессии, но и локализация маркеров. Так, при изучении экспрессии Flt-1 было обращено внимание на то, что в одних УМ наблюдается селективная рецепция Fit в ядре, в других - в цитоплазме, в третьих - рецептор экспрессировался и в ядре и в цитоплазме. Для выяснения роли этого феномена мы рассматривали Fit в цитоплазме и в ядре как два самостоятельных независимых показателя; дополнительно ввели индексы их соотношения Fit ци-топлазмы/Flt ядра Оказалось, что прогнозирование возможно на основе каждого из маркеров ангиогенеза, но с различной степенью информативности и достоверности. Прогностически неблагоприятными являются: обнаружение более > 20 % Flk-позитивных, <33% Fit-позитивных клеток с ядерной рецепцией, индекс соотношения Fit в цитоплазме/Flt в ядре > 3,0.

Выводы.

1. Ангиогенез играет важную роль в патогенезе УМ.

2. Оценка ангиогенеза возможна на основе количественных показателей экспрессии ангиогенных факторов

- маркеров ангиогенеза (VEGF и рецепторов Flt-1 и Flk-l/KDR).

3. Прогностически неблагоприятным при УМ следует считать обнаружение более > 20 % Flk-позитивных, <33% Fit-позитивных опухолевых клеток с ядерной рецепцией, индекс соотношения Fit в цитоплазме/Flt в ядре >3,0.

АЛЛОГЕННАЯ ТРАНСПЛАНТАЦИЯ КОСТНОГО МОЗГА, РЕАКЦИЯ «ТРАНСПЛАНТАТ-ПР0ТИВ-Х03ЯИНА», РЕАКЦИЯ «ТРАНСПЛАНТАТ-ПРОТИВ-ОПУХОЛИ»: КЛЕТОЧНЫЕ И МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ОСНОВЫ АДОПТИВНОЙ ТЕРАПИИ

Афанасьев Б.В.. Михайлова Н.Б.

Санкт-Петербургский Государственный медицинский университет им. акад. И.П.Павлова, кафедра гематологии, трансфузиологии и трансплантологии, отделение ТКМ, Санкт-Петербург, Россия

Аллогенная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК) приводит к излечению многих злокачественных заболеваний крови, некоторых солидных опухолей, апластической анемии, врожденных иммуно-дефицитных состояний, наследственных заболеваний. Несмотря на высокую эффективность лечения, аллоТГСК связана с большим количеством осложнений, среди которых реакция «трансплантат-против-хозяина» (РТПХ) является наиболее серьезным, представляющим угрозу для жизни больного. С другой стороны, многочисленными исследованиями был показан мощный противоопухолевый эффект иммунологических процессов, протекающих параллельно с реакцией РТПХ и получивших название

реакция «трансплантат-против-лейкоза/опухоли» (РТПЛ). Ранее считалось, что иммунологические механизмы, лежащие в основе этих двух реакций, идентичны, но в последние годы получены данные о различии процессов, и таким образом, появились предпосылки для разделения РТПХ и РТПЛ. В настоящее время усилия направлены на поиски путей подавления РТПХ с сохранением или даже потенцированием РТПЛ. Роль интенсивной химиотерапии в лечении злокачественных новообразований определена, дальнейшее наращивание дозы ци-тостатиков представляется нецелесообразным. Режимы кондиционирования, используемые при ТГСК, вызывают выраженную миело- и иммуноаблацию. В последние годы показано, что для приживления костного мозга необязательно использование сверхвысоких доз цитостати-ков, гораздо важнее добиться состояния иммунологической толерантности. В режимы кондиционирования были добавлены препараты, обладающие иммунодепрессант-ным эффектом: флюдарабин, антилимфоцитарный глобулин, кладрибин, циклофосфан, тиотепа, небольшие дозы (200 рад) тотального облучения или облучения тимуса. Такие режимы с редуцированным режимом кондиционирования создают необходимый плацдарм для проведения в дальнейшем адоптивной иммунотерапии. Впервые эффективность переливания донорских лимфоцитов у больных с рецидивом хронического миелолейкоза после аллогенной ТГСК была показана Kolb et al в 1993 году. В последующем этот метод лечения стали применять при различных вариантах лейкозов, лимфомах, лимфогранулематозе, некоторых солидных опухолях. Действующим началом иммуноадоптивной терапии является распознавание донорскими клетками минорных тканевых антигенов и специфических опухолевых пептидов на резидуальных опухолевых клетках. Первые работы показали, что немиелоаблативные режимы кондиционирования и последующая иммуноадоптивная терапия имеют ряд преимуществ: минимальная токсичность, более короткий период цитопении, лучшая устойчивость к инфекциям, более быстрое восстановление иммунитета, мощный противоопухолевый эффект донорских лимфоцитов как для контроля за остаточной минимальной болезнью, так и для лечения рецидивов.

На отделении трансплантации костного мозга ал-лоТГСК с редуцированным режимом кондиционирования были использованы у 14 больных, из них 4 пациентам дополнительно проводили переливания донорских лимфоцитов. У 3 больных был ОМЛ, у 3 - ОЛЛ, у 2-ХМЛ,у 2 - ЛГР,у 1 -МДС,у1 - гиперэозинофильный синдром, у 2 - солидные опухоли. У 11 больных наблюдалось быстрое восстановление гемопоэза со 100% хи-меризмом на день +21. Одна больная погибла от токсичности режима кондиционирования до приживления, у двух больных (один из них с тяжелым миелофиброзом, другая - с рецидивом на момент кондиционирования) приживление было замедленным и в дальнейшем было зафиксировано отторжение трансплантата. Острая РТПХ I-II стадии наблюдалась у 5 больных, у 1 больного - III стадии, хроническая РТПХ - у 1 больного. Степень иммуносупрессии в посттрансплантационном периоде была выраженная, о чем свидетельствовали инфекционные осложнения: сепсис у 5 пациентов, и ЦМВ

- инфекция у 3 больных. В настоящее время немиелоаблативные режимы лечения с последующими переливаниями донорских лимфоцитов заняли прочные позиции в лечении хронического миелолейкоза, обнадеживающие

результаты получены при лечении лимфогранулематоза, в том числе рецидивных и резистентных форм заболевания. Эффективность этого метода при других патологиях нуждается в подтверждении.

ЗАКОНОМЕРНОСТИ ЭКСПРЕССИИ КОМПЛЕМЕНТ-РЕГУЛЯТОРНЫХ БЕЛКОВ (CD59, CD55, CD46, CR1-CR4) НА ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТКАХ ПРИ ОСТРОМ ЛЕЙКОЗЕУДЕТЕЙ

БелевыевМ.В.. Потапнев М.П.

Республиканский научно-практический центр детской онкологии и гематологии, Минск, Беларусь

Опухолевые клетки обеспечивают себе защиту от действия комплемента несколькими путями. Это экспрессия на поверхности клеток белков - ингибиторов комплемента - Decay-Accelrating Factor (DAF,CD55), который ингибирует образование и ускоряет распад СЗ/С5 кон-вертаз, Membrane Cofactor Protein (МСР, CD46) - кофактор для протеолиза СЗЬ и С4Ь фактором I, Protectin (CD59), который предотвращает формирования мембран-атакующего комплекса (МАК). Кроме того, на поверхности опухолевых клеток измененяется экспрессия рецепторов комплемента CR1 (CD35), CR2 (CD21), CR3 (CDllc), CR4 (CDllb), регулирующих активацию системы комплемента в основном по альтернативному пути. Дополнительно, опухолевые клетки секретируют протеа-зы, разрушающие белки системы комплемента. Целью нашего исследования являлась оценка особенностей экспрессии комплемент-регуляторных белков на лейкозных клетках различного линейного происхождения, полученных из костного мозга (КМ) и периферической крови (ПК) у детей с острым лейкозом.

Всего обследовано 78 детей, в возрасте от 2 до 16 лет (медиана - 9 лет) с первичным диагнозом острый лейкоз, поступивших на лечение в Республиканский научно-практический центр детской онкологии и гематологии. По результатам иммунофенотипирования у 51 больного был поставлен диагноз В-линейный острый лимфобластный лейкоз (В-ОЛЛ), у 9 больных - Т-линей-ный острый лимфобластный лейкоз (Т-ОЛЛ) и у 18 больных - острый миелобластный лейкоз (ОМЛ). Для определения комплемент - регуляторных белков лейкоз-ные клетки выделяли из КМ и ПК, окрашивали моноклональными антителами к CD59, CD55, CD46, CD35, CD21, CDllc и CDllb (“Becton Dickinson"). Учет результатов проводили на проточном цитометре FACScan (“Becton Dickinson"). Анализировали результаты в прикладной программе CellQuest Pro. В качестве контроля

- использовали данные по экспрессии исследуемых маркеров на нормальных нейтрофилах, Т- и В-лимфо-цитах периферической крови, полученных от 15 здоровых людей.

Нами показано, что CD59, CD55 и CD46 экспрессируются на всех лейкозных клетках полученных из КМ детей больных острым лейкозом и на нормальных лейкоцитах ПК здоровых людей. Используя показатель средней интенсивности флуоресценции (СИФ), мы выявили достоверно более высокие (р<0,001) показатели экспрессии молекулы CD59 на лейкозных клетках при Т-линей-ном ОЛЛ, по сравнению с В-линейным ОЛЛ и ОМЛ, в то же время экспрессия данного маркера на нормальных Т-лимфоцитах практически не отличается от такового на нормальных В-лимфоцитах и нейтрофилах. Если оцени-

вать значения СИФ для молекулы CD55, то данный показатель более чем в 4 раза выше (р<0,001) для ОМЛ, чем для В- и Т-линейных OJIJI, тогда как на нормальных клетках достоверной разницы между экспрессией данного маркера на нейтрофилах и лимфоцитах обнаружено не было. Значения СИФ для молекулы CD46 практически не различаются на лейкозных клетках и нормальных лейкоцитах.

При оценке экспрессии рецепторов комплемента CR1

- CR4 на лейкозных клетках из КМ, мы выяснили, что данные рецепторы практически не экспрессируются на лейкозных клетках, тогда как, практически на всех лейкозных клетках, выделенных из ПК, экспрессия CD59, CD55, CD46 не изменяется, a CR1-CR4 начинают экспрессироваться.

Таким образом, выявлена преимущественная экспрессия комплемент - регуляторных белков CD59 и CD55 на опухолевых клетках костного мозга при Т-линейном ОЛЛ и ОМЛ соответственно. Экспрессия CR1 - CR4 рецепторов комплемента обнаружена на лейкозных клетках, циркулирующих в периферической крови, но не в костном мозге детей с острым лейкозом.

ДИНАМИКА ИЗМЕНЕНИЯ ЕСТЕСТВЕННОЙ КИЛЛЕРНОЙ (NK) И ЕСТЕСТВЕННОЙ СУПРЕССОРНОЙ (NS) АКТИВНОСТЕЙ ПРИ ОПУХОЛЕВОМ РОСТЕ: РАЗЛИЧНАЯ РОЛЬ NS КЛЕТОЧНЫХ СУБПОПУЛЯЦИЙ

Беляев Н.Н.. Богданов А.Ю., Красноштанов В.К.*, Саввулиди Ф.Г.

Институт молекулярной биологии и биохимии им. МЛ. Айтхожина;

* Институт онкологии и радиологии,

Алматы, Казахстан

Угнетение NK активности на поздней стадии развития рака считается одной из главных причин ускользания опухоли от иммунологического надзора. Существуют экспериментальные данные, доказывающие участие так называемых NS клеток в этом процессе, активность которых прогрессивно нарастает во время опухолевого роста. NS клетки - гетерогенная популяция незрелых костно-мозговых гемопоэтических предшественников, обладающих способностью неспецифически тормозить различные иммунные реакции in vitro. Опираясь на литературные данные, мы предположили, что существует по крайней мере две субпопуляции NS клеток: NS1 и NS2, которые стимулируются IL-2 и IFNy или IL-3 и GM-CSF соответственно. Взаимоотношения между этими двумя субпопуляциями могут иметь огромное значение. Для того, чтобы подтвердить это предположение, мы провели эксперименты на мышах линии СВА, несущих карциному Эрлиха (КЭ), растущую в виде подкожной солидной опухоли.

Мы исследовали динамику NK и NS активностей в костном мозге и селезенке на 7, 14, 30, 45 и 60 сутки после инокуляции 5х105 клеток КЭ. В качестве источников NS клеток использовали фракцию IV костного мозга (плавучая плотность 1,090 г/мл) и селезеночные мононуклеарные клетки, лишенные моноцитов. NS активность оценивали по способности супернатанта 48-часовой клеточной культуры угнетать пролиферацию миеломных клеток в МТТ-тесте. Мы определяли NS активность, индуцированную в течение 3 ч IL-2 (NS1),

IL-3 (NS2) или спонтанную (sNS). NK активность мо-нонуклеаров селезенки, лишенных моноцитов, оценивали с помощью радиометрического цитотоксического теста, используя клетки К-562, меченные 3Н-уридином. Интактные мыши показали высокую NK активность (87,9±0,3%), тогда как sNS активность отсутствовала как в костном мозге, так и в селезенке. NS1 и NS2 активности не превышали 20% и в костном мозге и в селезенке. В ходе опухолевого роста NK активность прогрессивно снижалась вплоть до 45 суток (32,9±2,6%), но sNS активность возрастала, достигая плато на 45 сутки (63,3±0,1 % в костном мозге и 48,6± 1,9% в селезенке). В то же самое время динамика NS1 и NS2 активностей, вычисленных как индекс участия в результирующей sNS активности, различалась принципиально. NS1 активность в костном мозге снижалась и коррелировала с NK активностью (г=0,95), но не коррелировала в селезенке (r=-0,44). NS2 активность в костном мозге наоборот возрастала и обратно коррелировала с NK активностью как в костном мозге, так и в селезенке (г=-0,95 и г=-1,00 соответственно). Кроме того, мы исследовали влияние супернатантов NS клеток костного мозга на NK активность мононуклеаров интак-тных мышей in vitro. Оказалось, что супернатанты не-стимулированных NS клеток интактных мышей не оказывали никакого влияния на NK клетки. Но, начиная с 7 дня после инокуляции опухолевых клеток, все супернатанты NS клеток (нестимулированных и стимулированных) показывали NK-ингибиторную активность, которая значительно усиливалась на поздней стадии опухолевого роста (45-60 дней). Особенно эта активность усиливалась у супернатантов NS клеток, активированных IL-3. В этом случае антипролиферативная активность высоко коррелировала с NK-ингибиторной активностью (г=0,85). Хирургическое удаление опухоли на 30 сутки давало в результате почти полное восстановление NK активности и падение sNS, NS1 и NS2 активностей до исходного уровня интактных мышей как в костном мозге, так и в селезенке. Таким образом, мы получили косвенные доказательства существования двух NS субпопуляций. Выяснение взаимоотношений между ними в норме и при опухолевом росте нуждается в дальнейших исследованиях.

ОЦЕНКА ИММУНОФЕНОТИПА ВЛАСТНЫХ КЛЕТОК У БОЛЬНЫХ ОСТРЫМ ЛИМФОБЛАСТНЫМ ЛЕЙКОЗОМ НА 33 ДЕНЬ ПРОГРАММНОГО ЛЕЧЕНИЯ

Бортникова О.Г.. Зотова В.В., Бондарева М.П., Сысоева Е.И., Калинина Т.Н.

Областная детская больница, Ростов-на-Дону, Россия

Иммунофенотипирование (ИФТ) бластных клеток у больных острым лейкозом (ОЛ) имеет большое значение в плане проведения программной терапии. Однако следует отметить, что не все дети, больные ОЛ, в равной степени отвечают на проводимую терапию. Успешное проведение лечения зависит не только от иммунологического варианта лейкемии, но и от его эффективности. В ряде случаев у больных ОЛ, несмотря на снижение числа бластных клеток в костном мозге, сохраняется повышенная экспрессия онкомаркеров на клетках, что свидетельствует о развитии остаточной болезни - minimal residual disease (MRD).

В связи с этим целью данной работы явилось изучение фенотипа бластных клеток до начала лечения и на 33-й день терапии для исследования частоты возникновения MRD при различных иммунофенотипических вариантах ОЛ.

Материалы и методы. Было обследовано 70 детей в возрасте от 1 года до 17 лет, страдающих различными вариантами ОЛ. И них у 30 больных проводилось повторное исследование костного мозга на 33-й день от начала лечения. Экспрессию рецепторов бластных клеток изучали с помощью панели моноклональных антител (МАТ) производства Becton Dickinson (BD) и DAKO методом проточной цитометрии на проточном цитофлю-ориметре FACSCalibur (BD).

При ИФТ иммунологические варианты распределились следующим образом: 1). Common-ALL - 65,7%, из них в 54,3% случаев на В-клетках выявлялась коэк-спрессия рецепторов миелоидных маркеров (CD13+ и/ или CD33+); 2). другие В-линейные лейкозы - 10%, ко-экспрессия миеломаркеров в 42,9%; 3). Т-линейные лейкозы - 15,7%, с миелоидными рецепторами - 36,4%; 4). бифенотипический вариант составил 5,7% от общего числа больных; и 5). недифференцированный ОЛ -2,9%. У группы больных (42,9% от общего числа), взятой для изучения MRD, фенотип в процентном соотношении несколько изменился, однако приоритеты остались прежними: Common-ALL - 53,3%; прочие В-ли-нейные лейкозы - 13,3%; Т-линейные лейкозы - 16,7%; бифенотипический ОЛ - 10%; недифференцированный

- 6,7%. При наличии низкого бластоза (менее 5% блас-тов), на 33-й день терапии у 76,7% больных отмечалась повышенная экспрессия дифференцировочных антигенов. В 52,2% случаев это были больные с Common-ALL, в 13% - с другими вариантами В-лейкозов, 21,7% составили Т-лейкозы, 4,3% - бифенотипические (фенотип pre-T-ALL + AML), на недифференцированный ОЛ пришлось 8,7%. Незначительная экспрессия антигенов (21-27,7%) наблюдалась у 30,4%, имеющих вариант Common и Т-линейную принадлежность. У остальных больных лейкозные маркеры экспрессировались в более высоких процентах. Несмотря на высокую экспрессию антигенов на 33-й день, в ремиссию вышло 99% больных. Два ребенка (10%) оказались резистентными к терапии, т.н. non-responders (NR). Интересно, что высокий процент бластов (57%) на 33-й день выявился лишь у одного ребенка, мальчика 3 лет с недифференцированным ОЛ. Фенотип бластов сохранился и по-прежнему наблюдалась высокая экспрессия CD13+, CD34\ CD133+, CD34+CD133+, HLA-DR+. У девочки 5 лет с бифенотипическим вариантом (Common-ALL + AML) на 33-й день при бластозе 4% наблюдалась высокая экспрессия опухолевых маркеров. Три ребенка из исследуемой группы дали ранний рецидив - мальчик

7-и лет с фенотипом pre-B-ALL с коэкспрессией миелоидных маркеров; мальчик 3 лет с бифенотипическим ОЛ (Common-ALL + AML) и девочка 4-х лет, имеющая Т-линейный вариант с коэкспрессией миелоидных маркеров. Эти дети также были отнесены к NR. Впоследствии все 5 больных NR (16,7%) имели летальный исход.

Таким образом, для прогноза развития заболевания важно: установление изначального фенотипа опухолевого клона; сравнение с фенотипом на 33-й день терапии с целью выбора дальнейшей тактики лечения и прогноза заболевания.

ИММУНОГЕНЕГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПОДБОРА ДОНОРОВ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК

Бубнова Л.Н., Беркос А.С., Беляева Е.В., Ерохина Л.В., Реутова Н.В., Рыбина О.В., Беркос М.В., Павлова И.Е.

Трансплантация стволовых клеток является одним из наиболее эффективных методов лечения многих гематологических заболеваний, однако добиться успеха алло-генной пересадки можно лишь при минимальных расхождениях между донором и реципиентом по антигенам гистосовместимости.

Как известно, полиморфизм системы НЕА необычайно высок: количество специфичностей этого генетического комплекса превышает 1000, а число различных фенотипов, встретившихся среди 7,5 миллионов типирован-ных доноров Всемирного донорского регистра, составило около 600 тысяч. Но даже эта впечатляющая цифра составляет лишь 1% от теоретически возможных HLA-A,-

В,-ОН фенотипов. Однако примерно у 60% европеоидов достаточно часто встречаются одни и те же гаплотипы, что позволяет находить совместимого донора для большинства больных, нуждающихся в трансплантации стволовых клеток. При этом наиболее успешным является поиск доноров среди соответствующей этнической группы, что делает исключительно ценными национальные регистры, даже если они не слишком велики.

Республиканский регистр доноров костного мозга в Российском НИИ гематологии и трансфузиологии М3 РФ существует более 20 лет, однако в связи с отсутствием финансирования численность его в последние годы практически не увеличивается, и в настоящее время составляет около 4000. Соотношение мужчин и женщин в регистре составляет примерно 2:1, по возрасту доноры распределяются следующим образом: от 18 до 25 лет -14%, от 26 до 40 - 50,3%, и от 40 до 50 лет - 35,7%. Все доноры типированы по антигенам локусов А и В 1 класса серологическим методом, с использованием двух серий гистотипирующих панелей, примерно у 5% доноров определены гены локусов DRB1*,DP*,DQ* методом молекулярного типирования (РЗЯ-ЗБР).

Для оценки эффективности работы с таким относительно небольшим регистром была проанализирована возможность подбора донора, идентичного по антигенам 1 класса, для 52 больных онкогематологическими заболеваниями - жителей Северо-Запада, находившихся на лечении в клинике института. Оказалось, что для 25 (48%) больных в регистре имелось от 1 до 14 доноров, при этом наиболее часто идентичные доноры встретились для больных со следующими НЕА-фенотипами: А2,3; В35,62 (14 доноров), А1,2;В8,13 (12 доноров), А2,24; В7,27 (9 доноров).

Для больной С., 27 лет, с диагнозом хронический ми-елолейкоз и фенотипом А2,24; В7,27; DRB1*01,16; 0(^В1 *0501,0502, в регистре было выявлено 9 потенциальных доноров, идентичных по локусам А и В, 6 из которых подтвердили предварительное согласие стать донорами стволовых клеток, после чего им было проведено подтверждающее типирование 1 класса и молекулярное типирование генов DRB1* и 0£)В1*, установившее донора, различающегося с больной лишь по одному аллелю гена 1ЖВ1*. При этом различающиеся аллели - ОНВ1*16 у пациентки и DRB1* 15 у донора - являются сплитами одной более широкой специфичности ОНВ1*02. Обследование донора на наличие гемотрансмиссивных инфек-

ций и общее состояние здоровья подтвердило возможность использования его стволовых клеток для трансплантации, и в апреле 2002 г. в отделении трансплантации костного мозга Российского НИИ гематологии и трансфу-зиологии (руководитель клиники з.д.н.РФ, профессор К.М.Абдулкадыров) была проведена первая в России трансплантация периферических стволовых клеток от донора из собственного регистра потенциальных доноров костного мозга. Стоимость подбора донора составила 1 тысячу долларов США, в то время как подбор донора за рубежом составляет 18-20 тысяч долларов.

Таким образом, данный случай показывает, что даже при наличии небольшого регистра возможно осуществить подбор донора для трансплантации костного мозга пациенту, проживающему в том же регионе. Однако для повышения эффективности подбора расширение как Российского, так и Северо-Западного регистра является абсолютно необходимым.

ВОССТАНОВЛЕНИЕ КЛЕТОЧНОГО ИММУННОГО ОТВЕТА У ПАЦИЕНТОВ, ПЕРЕНЕСШИХ АЛЛОГЕННУЮ ТРАНСПЛАНТАЦИЮ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ КЛЕТОК ОТ НЕРОДСТВЕННОГО ДОНОРА

Вавилов В.Н.1. Витрищак А. А.1, Зуева Е.Е.2, Фезе Б.3, Михайлова Н.Б1. Цандер А.Р.3, Афанасьев Б.В1.

1 Кафедра гематологии, трансфузиологии

и трансплантологии СПбГМУ им.акад. И.П.Павлова, Санкт-Петербург, Россия;

2 Лаборатория клинической иммунологии СПбГМУ им.акад. И.ПЛавлова, Санкт-Петербург, Россия;

3 Центр ТКМуниверситетской клиники Эппендорф, Гамбург, Германия

В настоящее время аллогенная трансплантация гемо-поэтических стволовых клеток (алло-ТГСК) от неродственного донора является рутинной процедурой, и практически единственным методом, позволяющим полностью излечить злокачественные заболевания кроветворной и лимфоидной ткани. Одним из важнейших факторов, влияющим не только на вероятность развития рецидива основного заболевания, но и на развитие тяжелых осложнений, является восстановление клеточного звена иммунного ответа. Раннее восстановление числа нейтрофилов и лимфоцитов в периферической крови является благоприятным прогностическим фактором, увеличивающим безрецидивную выживаемость пациентов и снижающим частоту развития тяжелых инфекционных осложнений

- основных причин смертности больных после алло-ТГСК. Восстановление клеточного звена иммунитета в настоящее время стало предметом пристального внимания, как клиницистов, так и иммунологов.

Мы провели исследование, задачей которого являлась оценка кинетики восстановления различных популяций лимфоцитов в раннем посттрансплантационном периоде и ее связь с результатами лечения у пациентов, перенесших неродственную алло-ТГСК. В исследование вошли 58 взрослых пациентов (35 мужчин и 21 женщина, средний возраст - 41 год) с различными злокачественными заболеваниями крови: 14 - с острыми лейкемиями, 28

- с хроническим миелолейкозом, 4 - с миелодиспласти-ческими синдромами, 8 - с множественной миеломой и 3

- с другими опухолевыми заболеваниями. Из 59 транс-

плантаций (одна пациентка получила повторную трансплантацию в связи с развитием рецидива острого лейкоза) 34 были проведены с миелоаблативным кондиционированием и 25 - с неаблативным, 31 - с использованием периферических стволовых клеток крови и 27 - с использованием костного мозга. Средняя доза CD34 клеток составила 4,7Ч106/л. Проводилась оценка восстановления основных субпопуляций лимфоцитов (CD3 ,CD4 ,CD8 , CD19+, CD56+, CD45RA ) на день 20-60 (в среднем день 35) и на день 80-120 (в среднем день 101) после трансплантации.

Было выявлено резкое снижение всех лимфоидных субпопуляций ниже нормального уровня, за исключением натуральных киллеров (CD56 ), в течение 1-2 месяцев после трансплантации. В течение последующих 3-4 месяцев наблюдалось статистически значимое (р < 0,005) повышение уровня CD8 , CD4 ^ CD3 , CD45RA субпопуляций. При этом число CD8 клеток, а также CD19 клеток достигло нормальных значений. Была также сделана попытка выявить связь между восстановлением конкретной популяции с развитием того или иного вида осложнений. Оценивались показатели лимфоидного восстановления через месяц после трансплантации в зависимости от развития в дальнейшем у пациентов острой реакции «трансплантат против хозяина» (РТПХ) или рецидива заболевания, а также связь восстановления лимфоидного ростка к концу раннего посттрансплантацион-ного периода с развитием хронической РТПХ. При оценке среднего числа лимфоцитов разных популяций статистически достоверной разницы показателей выявлено не было. Однако наблюдалось снижение числа практически всех (кроме CD19 клеток) популяций у пациентов, имевших в дальнейшем рецидив заболевания. Кроме того, анализ лимфоидного восстановления показал, что развитию хронической формы РТПХ предшествует снижение числа CD3 , CD4 , CD8 , CD19 клеток с одновременным повышением уровня CD45RA и CD56 популяций.

Учитывая влияние скорости восстановления числа лимфоцитов на прогноз выживаемости пациентов после неродственной алло-ТГСК и выявляемые количественные изменения в клеточном звене иммунитета, можно предположить существование связи между восстановлением лимфоцитарных субпопуляций и исходом трансплантации. Отсутствие достоверности результатов при оценке такой связи в нашем исследовании могло быть связано как с малыми размерами выборки, так и с необходимостью более подробного анализа антигенного спектра лимфоидных клеток, играющих роль в развитии иммунных реакций.

КОМБИНАЦИЯ ГМДП, ЦИСПЛАТИНА И TNF-cc ОБЛАДАЕТ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫМ ДЕЙСТВИЕМ И ВЛИЯЕТ НА ИММУННЫЙ СТАТУС МЫШЕЙ ОПУХОЛЕНОСИТЕЛЕЙ

ВалякинаТ.И.. Петрова Е.Э., Симонова М.А., Комалева Р.Л., Хайдуков С.В., Несмеянов В.А.,

Институт биоорганической химии им. М. М. Шемякина и ЮА.Овчинникова,

РАН, Москва

Введение. В настоящее время в химиотерапии онкологических заболеваний получает распространение комбинаторный подход, в котором основным моментом является рациональное сочетание химиотерапии и иммуномодуляторов, позволяющее снижать дозу вводимого ци-тотоксического агента. К числу таких иммуномодулято-

ров относятся мурамилпептиды, в том числе N- ацетил-глюкозаминилмурамоилдипептид - ГМДП.

В данной работе изучалось влияние комбинации ГМДП, цисплатина и TNF-a в системе in vivo на мышиные опухоли: аденокарциному Эрлиха, мастоцитому Р388 и меланому В16.

Основные результаты. Для оценки противоопухолевой эффективности комбинации препаратов на аденокарциному Эрлиха, клетки опухоли имплантировали внут-рибрюшинно мышам линии Balb/с. Вводили 1 и 3 млн опухолевых клеток на мышь. Через сутки вводили внут-рибрюшинно в физиологическом растворе цисплатин (40 мкг/мышь), p-TNF-a (5000 ед/мышь) и ГМДП - 160,80, 40, 20, 10 или 5 мкг/мышь. Противоопухолевый эффект оценивали по числу выживших животных во временном интервале до 100 дней. В контрольной группе животных, которым имплантировали 1 млн опухолевых клеток, выживаемость составила 20%. Комбинация из двух агентов (ЦП и TNF-a) повышала число выживших животных (60%), Включение ГМДП повышало эффективность комбинации препаратов, причем наблюдалась прямая корреляция противоопухолевой активности с дозой ГМДП, а именно: ГМДП в дозах 5 и 10 мкг/мышь не увеличивал выживаемость, доза 20 мкг/мышь увеличивала до 85 %, 40 мкг/мышь и выше - до 100%.

Для повышения терапевтической эффективности исследуемой комбинации препаратов для мышей, которым вводили 3 млн опухолевых клеток карциномы Эрлиха, требовались более высокие дозы ГМДП. Наибольший эффект (50%) обеспечивала тройная комбинация препаратов, в которой содержалось 160 мкг/ мышь ГМДП. В случае двойной комбинации (ЦП и TNF) выживало 25% мышей, а в контрольной группе все мыши погибали в течение 3 недель.

Для изучения противоопухолевого действия комбинации ЦП, TNF-a и ГМДП по отношению к мастоцитоме Р388 клетки опухоли (1 млн/мышь) имплантировали внутрибрюшинно мышам линии DBA. Через сутки вводили внутрибрюшинно в физиологическом растворе цис-платин(160 мкг/мышь), 500 ед/мышь p-TNF-a (500 ед/ мышь) и ГМДП (1 мг или 160 мкг/мышь). ГМДП потен-циировал действие цисплатина: в группе мышей, получивших комбинацию препаратов ЦП и ГМДП, через 100 дней выжило 80% животных, в то время как в контрольной группе все животные погибли уже к 30 дню, введение индивидуального препарата ЦП обеспечивало выживание 40% мышей. Смертность в группах животных, которым вводили препараты ЦП и ГМДП или препараты TNF-a, ЦП и ГМДП была одинаковой.

С целью оценки влияния комбинации ГМДП, ЦП и TNF-a на рост меланомы В16 клетки (1 млн/мышь) имплантировали подкожно в область бедра мышам F1 (CBAxC57BL/6). Через сутки вводили внутрибрюшинно в физиологическом растворе цисплатин (160 мкг/мышь), p-TNF-a (500 ед/мышь) и ГМДП (150, 15 или 0,15 мкг/ мышь. В данной серии экспериментов только тройная комбинация препаратов с ГМДП в дозах 15 и 0,15 мкг/ мышь полностью ингибировала развитие меланомы В16 в течение 40 дней наблюдения. Комбинация препаратов ЦП, TNF и ГМДП в дозе 150 мкг незначительно замедляла процесс роста опухоли. Все мыши контрольной группы пали через 3 недели.

Методом проточной цитометрии проводили сравнение иммунного статуса мышей с асцитом Эрлиха после введения животным комбинации препаратов 40 мкг ЦП,

5000 ед/мышь p-TNF-a и 150 мкг/мышь ГМДП с иммунным статусом мышей-опухоленосителей контрольной группы.

Заключение. ГМДП потенцирует противоопухолевое действие цитотоксических агентов по отношению к аденокарциноме Эрлиха, мастоцитоме Р388 и меланоме file. Комбинация ГМДП, ЦП и TNF-a в случае аденокарциномы Эрлиха и меланомы В-16 обладает большей противоопухолевой активностью, чем ЦП и ГМДП. Противоопухолевая активность комбинации препаратов зависит от дозы ГМДП. Комбинация ГМДП, TNF-a и ЦП при введении ее внутрибрюшинно мышам с асцитом Эрлиха индуцирует изменения в иммунном статусе этих животных.

Работа выполнена при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (гранты № 00-04-48682 и инно-02-04-08081).

ИССЛЕДОВАНИЕ ДНК-ТОПОИЗОМЕРАЗЫI КАК АУТОАНТИГЕНА ПРИ РАКЕ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

ВигонтинаО.Г.. Лизогубов В.В.*, РибкинскаТ.А., Вудмаска М.И., Найденов В.Г., Усенко B.C.*, Гайдар Ю.А.**, Сидорик Л.Л.

Институт молекулярной биологии и генетики НАН Украины, Киев, Украина;

* Морфологическая лаборатория БИОНТЕКС, Днепропетровск, Украина;

* * НИИ Гастроэнтерологии, Днепропетровск, Украина

Топоизомеразы - важнейшие ядерные и митохондриальные ферменты, модифицирующие и регулирующие топологию (фолдинг) ДНК. Они участвуют в большинстве клеточных процессов, таких как репликация, транскрипция, рекомбинация и сегрегация/десегрегация хромосом и являются основной клеточной мишенью для многих противоопухолевых химиопрепаратов и большинства антибиотиков.

ДНК-Топоизомераза I (Топо 1) была идентифицирована как первый ядерный аутоантиген человека при склеродерме: анти-Топо 1 регистрируются у половины пациентов со склеродермой и у 87% с ее диффузной формой, и считаются клиническим маркером данной патологии. Установлено, что при данной патологии высок риск развития рака легких, кожи, прямой кишки, щитовидной железы. Особенно у пациентов с повышенным титром анти-Топо 1 антител. Однако механизмы развития аутоиммунных реакций против внутриклеточных и ядерных антигенов, таких как изомераза, изучены недостаточно. Новые представления о роли аутоиммунных механизмов в канцерогенезе выдвигают проблему детального изучения механизмов экспрессии ДНК-Топо I как аутоантигена при различных типах онкопатологий, особенно с сопутствующим аутоиммунными поражениями органа -мишени. Удобной моделью для таких исследований является рак щитовидной железы, часто сопровождающийся аутоиммунным тиреоидитом.

Целью данной работы явилось изучение ДНК-Топо-изомеразы I как аутоантигена при раке щитовидной железы.

Топо I была очищена из ядер плаценты человека по разработанной нами схеме. Чистоту и специфичность препаратов Топо I определяли гель-электрофорезом и

иммуноблотингом. Активность полученного фермента определяли в реакции релаксации суперскрученной плазмиды pBR 322 с последующим анализом полученных продуктов реакции электрофорезом в агарозном геле.

Иммуноскрининг иммуноферментным методом (ELISA) и иммуноблоттингом (Western-blot) сывороток пациентов с раком щитовидной железы (58), аутоиммунным тиреоидитом (26) и практически здоровых доноров (39) показал, что 76% сывороток пациентов с раком щитовидной железы содержали аутоантитела против Топо I в титре, достоверно превышающем титр анти-Топо 1 антител в сыворотках пациентов с аутоиммунным тиреоидитом. Наивысший титр анти-Топо 1 антител отмечен в сыворотках пациентов с раком щитовидной железы с сопутствующим аутоиммунным тиреоидитом, что коррелировало со степенью поражения щитовидной железы у данной группы пациентов (иммуногистохимические исследования биопсийного послеоперационного материала).

Изучение биологической активности аффинно очищенных анти-Топо 1 аутоантител показало дозозависимое ингибирование активности Топоизомеразы I анти-топоизомеразными аутоантителами.

На основании полученных результатов и анализа литературных данных высказано предположение об участии аутоиммунных механизмов в малигнизации щитовидной железы.

ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОЕ СОДЕРЖАНИЕ РЕЦЕПТОРОВ ИНТЕРЛЕЙКИНА-2 (IL-2) ПРИ КАРЦИНОМАХ РАЗЛИЧНЫХ ГИСТОТИПОВ И ЛОКАЛИЗАЦИЙ

Гасанов И. А.

Медицинский университет, Баку, Азербайджан

Введение. Существуют противоречивые оценки им-муногистохимического содержания цитомембранных рецепторов одного из основных цитокинов - интерлейки-на-2 при злокачественной опухолевой трансформации различных типов покровного, выстилающего и железистого эпителиев. Успешное решение данного вопроса способствовало бы разработке дополнительных критериев прогнозирования различных карцином и новых подходов к их лечению.

Цель. Сравнительно изучить светомикроскопическое содержание рецепторов IL-2 в опухолевой ткани карцином различных гистологических типов и локализаций.

Материал и методы. Гистологически, гистохимически, электронно-микроскопически и иммуногистохимически изучены образцы опухолевой ткани 68 карцином. Среди них: 28 случаев плоскоклеточного рака (кожа, ротовая полость, гортань, пищевод, аноректальная область, шейка матки); 23 - аденокарциномы (молочная железа, желудок, кишечник, тело матки, простата); 7 - нейроэндокринного рака (бронхи, молочная железа, кишечник, кожа, простата); 5 - особых гистотипов и гистовариантов рака (носоглотка, молочная железа); 5 - “недифференцированной карциномы" (носоглотка, пищевод, мочевой пузырь). Рецепторы IL-2 идентифицированы мышиными моноклональными антителами к CD25 человека стандартным набором авидин-биотиновой реакции (“Novocastra”). Содержание CD25 оценено визуально-полуколичественно по 4-балльной шкале. Цифровые данные обработаны корреляционной статистикой для непараметрических критериев.

Основные результаты и заключение. CD25 позитивность имеет очаговый (прерывистый) линейный характер, присуща плазмолемме и не свойственна кариолемме. Абсолютное большинство CD клеток находится не в паренхиме, а в строме опухолевой ткани различных карцином. Среди них идентифицированы лимфоциты, гистиоциты, единичные сегментоядерные лейкоциты, адвентициальные (периваскулярные) клетки, а также отдельные атипичные, но достаточно хорошо дифференцированные покровные, выстилающие и железистые эпителиоциты. Максимальная плотность распределения (частота встречаемости) рассмотренных клеток зарегистрирована как в плоскоклеточных, так и в железистых раках высокой степени гистодифференцировки (G1), а минимальная - при “недифференцированных” (GX) карциномах. Часть специфически окрашенных лимфоидно-макрофагальных элементов инфильтрирует также опухолевую паренхиму и тем самым усиливает позитивность последней, что наиболее демонстративно при “воспалительном раке” молочной железы и назофарингеальной карциноме. Среди изученных локализаций наибольшая плотность распределения CD25 клеток отмечена при высокодифференцированной аденокарциноме слепой кишки, а наименьшая - низкодифференцированном плоскоклеточном раке кожи, шейки матки и пищевода.

ОСОБЕННОСТИ ИММУННОГО СТАТУСАУ БОЛЬНЫХ ДИФФЕРЕНЦИРОВАННЫМ РАКОМ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ПОСЛЕ ОПЕРАТИВНОГО ВМЕШАТЕЛЬСТВА

ГлазановаТ.В.. Черников Р.А., Бубнова Л.Н., Шестериков А.С.

Развитие злокачественных новообразований, а также возникновение рецидива заболевания и метастазирова-ние не может не быть связано с изменениями в иммунной системе. Однако эти изменения носят неоднозначный характер и часто зависят от характера и степени радикальности лечения, а также от течения послеоперационного периода.

Целью настоящего исследования являлось изучение иммунного статуса пациентов папиллярным раком щитовидной железы (РЩЖ) в отдаленные сроки после оперативного вмешательства при отсутствии признаков рецидива заболевания.

Материалы и методы. Обследовано 15 больных папиллярным раком щитовидной железы (14 женщин и 1 мужчина), перенесших оперативные вмешательства. На момент обследования длительность послеоперационного периода составляла от 2,5 до 6 лет. Пациентам были выполнены: тиреоидэктомия, субтотальная резекция щитовидной железы либо гемитиреоидэктомия. В момент проведения обследования у всех больных отсутствовали данные за рецидив заболевания или наличие метастазов. Всем больным проводилась заместительная и супрессивная терапия. Они получали лечебный препарат (L-тироксин или эутирокс), содержащий тиреоид-ный гормон - тетрайодтиронин. Уровень тиреотропного гормона гипофиза у всех был в районе пороговых значений или нижней границы нормы. Изучено относительное содержание в периферической крови основных субпопуляций лимфоцитов (CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD20 , CD25 , CD95 , HLA DR ), сывороточных иммуноглобулинов классов G, А и M, а также циркулирующих иммунных комплексов низкой и средней молеку-

Группа CD3+ (%) CD20+(%) DR+ (%) CD95+(%) IgM (г/л)

Больные РЩЖ (1) Норма (2) Р(1-2) 71,0 ±1,5 61,4 ±1,8 <0,0001 35,1 ±2,2 22,0 ± 1,2 <0,0001 33.3 ±2,0 25.3 ±1,3 <0,01 22,9 ±2,2 11,8 ± 1,6 0,0001 3,4 ±0,5 1,3 ±0,11 <0,01

лярной массы. Контрольную группу составили 48 практически здоровых лиц, доноров крови.

Результаты. Полученные данные показали выраженное повышение по сравнению с нормой следующих показателей: относительного содержания Т-лимфоцитов (CD3 ), В-лимфоцитов (CD20 ), активированных клеток (HLA DR ) и клеток, экспрессирующих рецепторы апоп-тоза (CD95 ), а также сывороточного иммуноглобулина IgM. Остальные показатели достоверно не отличались от значений контрольной гшруппы. Данные приведены в таблице.

Таким образом, у подвергшихся оперативному лечению больных раком щитовидной железы, у которых с момента операции прошло от 2,5 до 6 лет и признаков рецидива заболевания или появления метастазов не было выявлено, не только не отмечено вторичного иммунодефицита, но, наоборот, имеется выраженная активация иммунной системы. Возможно, это связано со стимулирующим эффектом тиреоидных гормональных препаратов, получаемых этими больными постоянно, и подтверждает необходимость пожизненного проведения этой группе больных супрессивной терапии тиреоидными гормонами.

ЭКСПРЕССИЯ ВАХ ПРИ РАКЕ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

Глухова Е.И.. Лукашина М.И., Богатырев В.Н., Барышников А.Ю.

Российский онкологический научный центр им. Н.Н.Блохина РАМН, Москва

В семейство Вс1-2 входит более двух десятков белков, по-разному влияющих на апоптоз, некоторые из них (Вс1-2, Bcl-xl, Bag) препятствуют развитию апоптоза, другие, в том числе ВАХ, служат промоторами этого процесса.

Целью настоящего исследования было оценить экспрессию ВАХ на опухолевых клетках молочной железы.

Материалы и методы. В работу были включены 75 образцов опухолевой ткани больных раком молочной железы (РМЖ). Оценку экспрессии ВАХ проводили имму-ноцитохимическим методом на цитопрепаратах.

Результаты. В процессе исследования установили, что связывание антител против ВАХ с соответствующим антигеном локализовалось в цитоплазме опухолевых клеток. Экспрессию ВАХ в опухолевых клетках молочной железы наблюдали в 33 (44%) случаях из 75. Был проведен корреляционный анализ экспрессии ВАХ с клиникоморфологическими характеристиками опухоли. Возрастающий уровень ВАХ коррелировал с увеличением стадии заболевания и степени злокачественности. Причем с увеличением стадии РМЖ экспрессия ВАХ возрастала с 12,5% на 1 стадии до 66,7% на 4 стадии (р<0,05). При I степени злокачественности ВАХ был положительным в

1 (12,5%) случае из 8, при II степени злокачественности -в 4 (30,8%) случаях из 13, при III степени злокачественности - в 27 (51,9%) случаях из 52 (р<0,05).

Установлена достоверная связь экспрессии ВАХ с количеством пораженных регионарных лимфоузлов,

т.е. с распространенностью заболевания (г=0,32; р<0,05). Было показано сочетание возрастания экспрессии ВАХ с увеличением уровня рецепторов эстрогенов (г=0,35; р<0,05). При анализе зависимости экспрессии ВАХ от менструального статуса обнаружили снижение уровня этого маркера у женщин в менопаузе (р<0,05).

Заключение. С ростом агрессивности опухоли молочной железы экспрессия ВАХ увеличивается.

СООТНОШЕНИЕ ВС1.-2 И ВАХ ПРИ РАКЕ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

Глухова Е.И., Лукашина М.И., Богатырев В.Н., Барышников А.Ю.

Российский онкологический научный центр им. Н.Н.Блохина РАМН, Москва

Один из путей апоптоза - это митохондриальный путь или Вс1-2-зависимый. Большое количество Вс1-2 постоянно презентировано на внешней митохондриальной мембране. Этот протеин и его гомологи (Вс1-хЬ, Мс1-1 и др.) выполняют функцию защиты клеток от апоптоза. Среди белков Вс1-2-семейства существует также группа апоп-тоз-опосредующих факторов (например, Вах, Вас!, Вак, В1к, В1с1, Вс1-хв и др.). Для переключения клетки в режим апоптоза необходимо связывание Вс1-2, что нейтрализует ингибирующее действие последнего. Такое связывание может осуществляться любым из проапоптических факторов Вс1-2-семейства.

Целью исследования было определить экспрессию Вс1-2 и Вах в опухолевых клетках молочной железы и оценить их соотношение.

Материалы и методы. В работу были включены 60 образцов опухолевой ткани больных раком молочной железы (РМЖ). Оценку экспрессии онкобелков проводили иммуноцитохимическим методом на цитопрепаратах.

Результаты. В процессе исследования установили, что антитела к Вс1-2 и Вах при связывании с соответствующим белком в иммуноцитохимических реакциях гомогенно окрашивали цитоплазму клеток. При анализе данных наблюдали коэкспрессию между данными онкобелками (р<0,05). Вс1-2положительные опухоли молочной железы чаще экспрессировали Вах в 29 из 36 случаев (80,6%), а полное отсутствие маркеров наблюдали в 21 из 25 случаев (84%). Было определено соотношение Вс1-2/Вах, разброс значений был от 0 до 35. Средняя величина составила 2,09, а медиана - 1,04. Достоверных различий соотношения Вс1-2/Вах в зависимости от гистологической формы рака молочной железы, размера опухоли, наличия метастазов в регионарных лимфоузлах не обнаружили. В зависимости от степени злокачественности наблюдается изменение соотношения Вс1-2/Вах. При III степени злокачественности Вс1-2/Вах<2 было 32 из 35 случаев (88,9%), при II степени злокачественности - в 3 из 7 случаев (42,9%), при I - 1 из 3 случаев (33,3%) (р=0,01). В зависимости от экспрессии р53 наблюдали следующую тенденцию: в р53-отрицательных опухолях молочной железы было увеличение соотноше-

ния Bcl-2/Bax, т.е. экспрессия Вс1-2 была значительно выше, чем экспрессия Вах. Соотношение Bcl-2/Bax >2 в этой группе наблюдали в 9 случаях из 12 (75%). В зависимости от плоидности и количества анеуплоидных клеток в опухоли установили достоверное различие соотношения Bcl-2/Bax (р=0,04). Рост соотношения Вс1-2/ Вах наблюдали с увеличением количества анеуплоидных клеток в опухоли.

Заключение. Определение экспрессии Вс1-2 и Вах в клетках рака молочной железы может служить дополнительными биологическими характеристиками клеток опухоли для оценки течения и прогноза данного заболевания.

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ ИММУННОГО СТАТУСА БОЛЬНЫХ НЕХОДЖКИНСКИМИ ЛИМФОМАМИ

Долгополова Е.В.. Никитин В.Ю.. Цыган В.Н., Санжаревский В. А.

Военно-медицинская академия, Санкт-Петербург, Россия

Неходжкинские лимфомы (НЛ) представляют собой гетерогенную группу злокачественных опухолей, возникающих из лимфоидной ткани. Они отличаются друг от друга клиническими, морфологическими, иммунофено-типическими характеристиками и ответом на химиотерапию (XT). Патогенетические изменения, связанные с ростом и метаболизмом опухолевых клеток, ведут к подавлению развития здоровых клеток и вызывают у больных иммунодефицитные состояния, которые становятся одной из причиной возникновения рецидивов и вторичных опухолей, а также присоединения бактериальных и вирусных инфекций.

Цель. Оценить иммунный статус больных НЛ с целью выявления взаимосвязей с тяжестью заболевания, проводимой терапией, развитием инфекционных осложнений и рецидивов.

Материалы и методы. Оценка иммунного статуса проводилась у 40 больных НЛ с III и IV стадиями, до лечения, в процессе полихимиотерапии (программы СОР, CHOP, CHOP-VP) и после нее.

Оценивали экспрессию CD3, CD4, CD8, CD5, CD16, CD56, CD19, CD25, CD71, HLA-DR на лимфоцитах, функциональную активность Т-клеток, натуральных киллеров (НК) и нейтрофилов. Определяли содержание IgA, IgM, IgG, иммунных комплексов (ИК) и цитокинов (IL-4, IL-6, TNFa, IL-1P) в сыворотке крови.

Результаты. Несмотря на широкий спектр изменений показателей периферической крови у первичных больных НЛ, у большинства из них отмечалась недостаточность Т-звена иммунитета (снижено количество клеток, несущих маркеры CD3 и CD5, нарушена субпопуляционная структура Т-клеточного звена, за счет выраженного снижения абсолютного и относительного содержания CD4, низкая функциональная активность Т-лимфоцитов). У 80% пациентов отмечалась высокая экспрессия на лимфоцитах маркеров ранней и поздней активации (CD25, CD71, HLA-DR). В 75% случаях наблюдалось увеличение числа НК. Количество В-лимфоцитов было незначительно снижено, уровень ИК был высоким у большинства больных (особенно с В-симптомами), содержание иммуноглобулинов у 70% было высоким, у остальных в пределах нормы, за исключением IgM, уровень которого

наоборот был низким. Пациенты с В-симптомами отличались также более высоким содержанием IL-6, TNFa в сыворотке крови.

ПХТ усугубила уже имеющиеся нарушения иммунного статуса, в результате полная ремиссия (ПР) была достигнута только в 65% случаях, а в 25% отмечалось присоединение вирусной инфекции. Спустя 6 мес и более после лечения у 40% пациентов возник рецидив НЛ (причем у 20% больных, у которых ранее была констатирована ПР).

В течение 1,5 лет после лечения наблюдалось постепенное восстановление количества клеток CD3, CD8, CD5, CD16, CD56, CD19, однако отмечался длительный дисбаланс в соотношении CD4 к CD8 (на фоне недостатка CD4 - повышенное число CD8). Функциональная активность Т-клеток, НК и нейтрофилов также возрастала. Содержание ИК, IgG, IgA снизилось до уровня контрольной группы. По-прежнему, у большинства больных наблюдались высокие концентрации IL-6, TNFa в сыворотке крови, на уровень которых лечение не оказывало практически никакого влияния.

Выводы.

1. У 74% больных НЛ заболевание сопровождается угнетением Т-клеточного звена иммунитета, повышенным содержанием НК, IL-6 и TNFa, выраженными изменениями со стороны гуморального и фагоцитарных звеньев иммунитета, указывающими на высокую активность иммунопатологического процесса.

2. ПХТ оказывает выраженное иммуносупрессивное влияние на иммунную систему, что приводит к развитию у больных НХ вторичного иммунодефицита смешанного типа.

3. После лечения происходит постепенное восстановление большинства иммунологических показателей, однако они не всегда достигают уровней контрольной группы.

4. Период рецидива характеризуется проградиентны-ми изменениями со стороны всех звеньев иммунитета по сравнению с данными первичных больных НЛ.

ПОТЕНЦИАЛЬНОЕ ЗНАЧЕНИЕ ПРОМОТОРНОГО ПОЛИМОРФИЗМА И ЭКСПРЕССИИ ГЕНА ИНТЕРЛЕЙКИНА 6 В ПРОГНОЗЕ ОСЛОЖНЕНИЙ ПРИ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК

Зарайский М.И.. Михайлова Н.Б., Афанасьева А.Б., Г олощапов О.В.,

Зубаровская Л.С., Столов С.В.*, Афанасьев Б.В.

СПб Государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова;

* СПб медицинская академия последипломного образования.

Введение. Интерлейкин 6 (IL-6) - провоспалитель-ный цитокин, играющий центральную роль в развитии тяжелых осложнений при трансплантации аллогенных стволовых гемопоэтических клеток (ТСГК), таких как острая реакция трансплантант против хозяина (оРТПХ) и пост-трансплантационные инфекции. Уровень продукции IL-6 генетически обусловлен биаллельным (С/G) нуклеотидным полиморфизмом в промоторе гена в позиции -174. Таким образом, выделяют гиперпродуцирующий - G/G и гипопродуцирующие (С/С и С/G) генотипы.

Вариант промотора IL-6 Пациенты (%) Доноры (%)

С/С 7,7 30,8

C/G 61,5 38,4

G/G 30,8 30,8

Целью исследования явилось выявление корреляции между различными генотипами промотора, динамикой продукции мРНК 1Ь-6 и развитием осложнений у пациентов при аллогенных неродственных ТСГК.

Материалы и методы. В обследование были включены 13 пар донор-пациент. Генотипирование промоторно-го полиморфизма гена 1Ь-6 проводилось с помощью ал-лельспецифической ПЦР с оригинальными праймерами. Продукция мРНК 1Ь-6 исследовалась с использованием полуколичественного протокола РТ-ПЦР с экзонспеци-фическими праймерами.

Основные результаты. Распределение аллельных вариантов промотора 1Ь-6 представлено в таблице. Нами не выявлено достоверной корреляции между возникновением оРТПХ или инфекционных осложнений и определенными генотипами.

Однако при несоответствии генотипов донора и пациента до ТГСК мы проводили исследование возможности использования данного показателя для оценки химе-ризма и приживления трансплантата в пост-ТГСК периоде. Было показано, что информативность данной методики составляет примерно 69%. Изучение динамики продукции мРНК 1Ь-6 показало, что значительное снижение данного показателя наблюдалось как следствие различных режимов кондиционирования и/или усиления им-муносупрессивной терапии. При возникновении оРТПХ или вирусной инфекции (ЦМВ, ВПГ) уровень мРНК повышался за 3-5 дней до возникновения клинических проявлений.

Заключение. Исследование промоторного полиморфизма гена 1Ь-6 может быть использовано как чувствительный метод быстрой оценки химеризма и приживления трансплантата у двух третей пациентов. Полуколи-чественная оценка продукции мРНК 1Ь-6 может быть использована для корректной оценки как эффективности уровня иммуносупрессии, так и времени возникновения осложнений ТГСК.

ОСОБЕННОСТИ ИММУННОГО СТАТУСА БОЛЬНЫХ ПОЧЕЧНОКЛЕТОЧНЫМ РАКОМ

Зуков Р.А.. Шкапова Е. А.,

Куртасова Л.М., Савченко А.А.

Красноярский государственный университет, Красноярская государственная медицинская академия, Краевой онкологический диспансер, Красноярск, Россия

Почечноклеточный рак (ПКР) - общепринятый в настоящее время термин для обозначения рака, развившегося из эпителия почечных канальцев. ПКР составляет около 3% всех злокачественных новообразований и 97% всех опухолей почек (Заридзе Д.Г. и соавт., 2001; Negrier Б. ес а1. 2000). Ведущая роль в лечении ПКР, безусловно, принадлежит хирургическому методу. Однако при наличии признаков диссеминации процесса более целесообразна

комбинированная модель терапии, включающая в себя наряду с хирургическим лечением применение иммуномодулирующих препаратов (Козлов В.К , 2002; Clark N. et al. 1995). Таким образом целью исследования явилось изучение динамики иммунологических показателей у больных ПКР до и после хирургического лечения.

Обследованы больные ПКР (III стадия заболевания) до хирургического лечения (N=110) и через 14 дней после оперативного вмешательства (N=32) в возрасте 35-55 лет. В качестве контрольной группы были обследованы 25 здоровых доноров аналогичного возраста. Общую фракцию лимфоцитов периферической крови выделяли по общепринятому методу в градиенте плотности ф и колла-верографина. Содержание CD3% CD4+, CD8+, СБ19+-лим-фоцитов, а также CD 16/56+-клеток оценивали с помощью проточного цитометра FACS Calibur («Becton Dickinson», USA). Концентрацию иммуноглобулинов классов А, М и G в сыворотке определяли методом радиальной иммунодиффузии по Манчини.

При исследовании иммунного статуса больных ПКР до хирургического лечения относительно соответствующих параметров контрольной группы обнаружено снижение относительной и абсолютной концентрации общих лимфоцитов. Кроме того, у данной группы обследуемых обнаружено статистически значимое увеличение содержания IgA в сыворотке по сравнению с контрольным диапазоном. При этом величина показателей исследуемого иммунофенотипического спектра лимфоцитов не имела статистически значимых различий с контрольными величинами.

Анализ иммунологических результатов исследования параметров иммунного статуса больных ПКР после хирургического лечения относительно соответствующих показателей здоровых доноров показал снижение абсолютного и относительного количества лимфоцитов. Наряду с этим у больных ПКР после хирургического лечения установлено увеличение относительного содержания С04+-лимфоцитов и снижение относительной и абсолютной концентрации С08+-клеток. Кроме того, отмечена тенденция к снижению содержания С08+-лимфоцитов у прооперированных больных по сравнению с концентрацией этих клеток в крови пациентов до хирургического лечения. Что же касается содержания С016/56+-клеток, то отмечено снижение их количества у больных ПКР после операции относительно соответствующих показателей, как в группе здоровых людей, так и в группе больных ПКР до хирургического лечения. Также было установлено увеличение концентраций и IgM в сыворотке данной группы обследуемых больных по сравнению с показателями контрольной группы и тенденция к увеличению концентрации IgM в данной группе обследуемых пациентов относительно соответствующего показателя больных, не подвергавшихся оперативному воздействию.

Таким образом, можно констатировать, что в результате хирургического лечения состояние иммунного статуса у больных ПКР значительно изменяется. Повыше-

ние содержания хелперной фракции Т-лимфоцитов и снижение концентрации СБ8+-клеток, сопровождающееся повышением величины иммунорегуляторного индекса, а также увеличение концентрации IgA и IgM в сыворотке, по-видимому, определяется реакцией иммунитета на удаление опухоли как очага иммуносупрессии и собственно оперативное вмешательство. Следует отметить уменьшение циркулирующих в крови NK-клеток у прооперированных пациентов, что необходимо учитывать при разработке иммунореабилитационных программ у данной категории больных.

ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЛИМФОЦИТОВ ОКОЛОУШНОЙ СЛЮННОЙ ЖЕЛЕЗЫ КРЫС В УСЛОВИЯХ НОРМЫ И ВНУТРИБРЮШИННОГО ВВЕДЕНИЯ ЦИКЛОФОСФАНА

Керимова Г.Э.

Медицинский университет, Баку, Азербайджан

Введение. После метаболической трансформации в организме часть противоопухолевых препаратов удаляется также слюнными железами, в связи с чем не исключается токсическое воздействие ряда цитостатиков на состояние последних. Между тем, слабо изучены особенности иммунной защиты указанных органов при длительном применении основных цитостатиков, в частности -изменения лимфоцитов околоушной слюнной железы (ОСЖ) в условиях регулярного применения циклофос-фана.

Цель: иммуногистохимически оценить суммарную популяцию Т- и В-лимфоцитов околоушной слюнной железы (ОСЖ) у крыс в норме и при внутрибрюшинном введении циклофосфана.

Материал и методы. Объектами для исследования послужили белые беспородные лабораторные крысы-сам-цы, разделенные на контрольную (интактные; 6) и основную (подопытные; 30) группы. Животным основной группы в течение 5 суток ежедневно внутрибрюшинно вводился циклофосфан (6,0 мг сухого препарата на каждое животное весом 200,0 гр). Забой животных и взятие образцов ОСЖ - на 5, 8, 11, 14 и 21 сутки со дня начала введения циклофосфана. Наряду с общегистологическим анализом на серийных криомикротомных срезах органа посредством авидин-биотиновой реакции с помощью моноклональных кроличьих антител были идентифицированы CD4 , CD8+ (Т-) и CD20+ (В-) лимфоциты (“Novocastra”). Были определены микроскопические параметры и суммарное содержание соответствующих популяций указанных клеток.

Основные результаты. Установлено, что у интакт-ных лабораторных крыс лимфоциты ОСЖ, главным образом, сосредоточены в составе мелких скоплений в стро-ме органа и гораздо реже “инфильтрируют” эпителиальные структуры его паренхимы (серозные секреторные отделы, выводные протоки различного калибра). Соотношение между стромальными и паренхиматозными лимфоцитами - 81,0 : 19,0, а между суммарными Т- и В- популяциями - 46,0:54,0.

При сравнительном анализе соответствующих показателей после ежедневного внутрибрюшинного введения циклофосфана в течение 5 суток выявлено, что значительная часть идентифицированных клеток подвергается глубоким альтеративным и некробиотическим изменениям. Общее число суммарной популяции лимфоцитов

ОСЖ уменьшается в 3,3 раза. В дальнейшем, даже к 21 суткам данный показатель восстанавливается лишь частично. При этом возрастает удельный вес паренхиматозных лимфоцитов до 34,0%. Соотношение между Т- и В-популяциями характеризуется значительным колебанием при общей тенденции сохранения исходных показателей.

Заключение. Внутрибрюшинное введение лабораторным крысам одного из основных противоопухолевых цитостатиков - циклофосфана обусловливает альтерацию, некробиоз и гибель части лимфоцитов ОСЖ, резко уменьшает их общую численность с одинаковым поражением как Т- , так и В- популяций и повышает удельный вес лимфоидной инфильтрации паренхимы органа.

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ ЛЕЙКОЦИТОВ КРОВИ В УСЛОВИЯХ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА ПРИ РАКЕ ЛЕГКОГО

Койков В.В.

Карагандинская государственная медицинская академия, г.Караганда, Республика Казахстан

Окислительный метаболизм (ОМ) биомакромолекул способен существенно изменять их структуру и функции, тем самым выступая в качестве важного регуляторного звена функционирования всей клетки в целом. Решающая роль в жизнедеятельности клетки отводится биомембранам, липидные компоненты которых, имея высокое содержание ненасыщенных жирных кислот, легко подвержены перекисному окислению и в целом отражают характер нарушений в ОМ клетки. Состояние ОМ в организме во многом определяется уровнем функциональной активности самих клеток, прежде всего клеток крови -лейкоцитов. В условиях выраженного окислительного стресса эти клетки сами будут подвергаться повреждающему действию свободных радикалов. В первую очередь будут реагировать их биомембраны, опосредующие изменение геометрии, механических свойств и функционального состояния клетки. В свете выявленной роли данных иммунокомпетентных клеток в развитии опухолевого процесса представляет интерес изучение их морфофункциональных параметров на фоне прогрессирующего злокачественного новообразования т.е. в условиях устойчивого окислительного стресса, тем более, что в ряде исследований отмечается неоднозначность изменений ОМ лейкоцитов на отдельных стадиях опухолевого процесса.

Целью настоящей работы явилось изучение площади поверхности, резервных возможностей цитоплазматической и ядерной мембран, осморегуляторных возможностей лейкоцитов крови (нейтрофилов и лимфоцитов) при немелкоклеточном раке легкого (НМКРЛ) и определение зависимости данных параметров от степени выраженности окислительного стресса, оцениваемого по уровню оксида азота (N0 ) в плазме и фагоцитах.

Нами были обследованы лейкоциты крови 22 больных НМКРЛ, с 3-й (п=12) и 4-й (п=10) стадиями опухолевого процесса. Лейкоциты выделяли из гепаринизиро-ванной крови на желатиновом градиенте. Изучение кинетики набухания, осморегуляции и осмотической стойкости лейкоцитов осуществлялось с использованием изо-и гипотонических растворов ЫаС1 по методу Федоровой М.З. и Левина В.Н. (1997). Обогащенную суспензию клеток, в которой 75-80 % составляли нейтрофилы, помещали на предметное стекло, окрашивали азур-эозином по

Романовскому и определяли морфометрические параметры лейкоцитов при увеличении х1350.

Оксид азота определяли в плазме и фагоцитах периферической крови по методу П.П. Голикова и соавт., (1998). При этом клеточный лизат получали путем трехкратной заморозки суспензии клеток, выделенной на желатиновом градиенте, при температуре -20°С и оттаивании. Полученные показатели пересчитывали на 106 клеток/мл.

Анализ данных морфометрии лейкоцитов показал резкое нарушение их функционального состояния, что проявляется в изменении размеров клеток по сравнению с контрольными значениями, в дефиците мембранного фонда и ухудшении осморегуляции лейкоцитов. При этом лимфоциты характеризуются достоверным (р<0,005) увеличением размеров - диаметра и площади поверхности ядра, что сопровождается снижением резервных возможностей мембраны, цитоплазматической и ядерной. Для нейтрофилов, представленных малыми формами клеток, характерно более явное ухудшение осморегуляции.

Анализ уровня оксида азота показал достоверное (р<0,001) снижение его содержания в плазме, но прежде всего отмечается существенное угнетение генерации N0 в фагоцитах.

С ростом степени тяжести опухолевого процесса происходит дальнейшее, по ряду показателей достоверное, ухудшение морфофункциональных параметров лейкоцитов (р<0,05) и снижение уровня оксида азота в плазме и фагоцитах (р<0,001). Таким образом, прослеживается тесная взаимосвязь снижения осморегуляции и резервных возможностей лейкоцитов у больных НМКРЛ с падением уровня генерации в организме одного из факторов регуляции ОМ - оксида азота.

Оксид азота - антиоксидант и противоопухолевый агент и, в то же время, стимулятор свободно-радикаль-ных процессов и некоторых звеньев канцерогенеза. По-видимому, N0' реализует свои функции в полной мере на начальных стадиях опухолевого процесса, а с ростом степени тяжести заболевания происходит постепенное угнетение его протекторных функций, что может быть связано в том числе с повреждением фагоцитов, основных продуцентов N0', свободно-радикальными продуктами. При этом, как следует из полученных результатов, существует определенная разница между резервными возможностями мембран нейтрофилов и лимфоцитов. Возможна также различная чувствительность нейтрофилов и лимфоцитов к повреждающим факторам.

ОЦЕНКА ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ НЕИТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ РАКОМ ЖЕЛУДКА

КуртасоваЛ.М.. Наумов Р.В., Финогенова Е.Е.

Красноярская государственная медицинская академия, Россия;

Краевой онкологический центр, г. Красноярск

Зрелый нейтрофильный гранулоцит является высокоспециализированной клеткой и занимает одну из наиболее активных позиций в системе гуморально-клеточной кооперации крови и соединительной ткани. Это делает его универсальной мишенью и, соответственно, индикатором различных нарушений гомеостаза. В свою очередь, стимулированный нейтрофил сам становится мощ-

ным эффектором и одним из пусковых механизмов каскадных реакций, обеспечивающих развитие воспаления (Д.Н. Маянский,1992)

Наряду с установленной ролью нейтрофильных гра-нулоцитов в формировании иммунобиологической реакции по ограничению и подавлению микробной инфекции, известна их способность к выраженному цитотоксичес-кому действию на опухолевые клетки, что отражает один из механизмов обеспечения противоопухолевой резистентности организма (Н.М.Бережная, 1998; В.П.Кузнецов, 2000; И.В.Нестерова, 2000).

Следует отметить, что цитопатогенное действие нейтрофилов связано главным образом с генерацией активных форм кислорода (Д.Н.Маянский, 1992; В.А.Ляшен-ко, 1995). Одним из перспективных методов, позволяющих оценить кислородозависимую биоцидность нейтрофильных гранулоцитов, является хемилюминесцентный анализ.

Целью данного исследования являлась оценка кислородозависимой киллинговой активности нейтрофильных гранулоцитов у больных раком желудка.

Под нашим наблюдением находились 38 первичных больных раком желудка в возрасте 40-55 лет (3 стадия, аденокарцинома) в период до хирургического лечения. Контрольную группу составили 18 здоровых доноров.

Хемилюминесцентный анализ функционального со-стояниг нейтрофилов крови проводили по методу De Soli Р et al.( 1989) Оценка спонтанной и индуцированной хе-милюминесценции проводилась на ХЛ-анализаторе «Са3604» (Россия). В качестве индуктора дыхательного «взрыва» использовали опсонированный зимозан 20 мг/ мл («Sigma», USA). Усиление хемилюминесценции, индуцированной зимозаном, оценивали соотношением S2 зим./S2 спон.

Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием пакета прикладных программ «Statistica 6.0».

Результаты исследования показателей фоновой хемилюминесценции установили статистически значимое укорочение времени выхода на максимум (396,74±40,51; 691,88±86,87, Р<0,01 соответственно) и в 2,2 раза (Р<0,001) повышение уровня хемилюминесцентной кривой у больных раком желудка по сравнению с показателями контрольной группы.

Между тем, известно, что повышение уровня хемилю-минесцентного ответа на фоне резкого сокращения времени индукции быстрой вспышки способствует быстрому истощению функциональной активности клетки.

При индукции хемилюминесцентной реакции нейтрофилов крови, опсонированным зимозаном у больных раком желудка в 7,4 раза (Р<0,001) сокращается время реагирования на стимул и отмечается тенденция к снижению уровня максимального свечения относительно параметров контроля. Кроме того, в группе больных раком желудка в 2,3 раза (Р<0,01) снижен индекс активации по сравнению с контрольными показателями. В то же время, как свидетельствуют данные литературы, именно нагрузочные пробы позволяют выявить компенсаторные возможности клетки.

Таким образом, результаты проведенных исследований выявили у больных раком желудка нарушения кинетики и уровня хемилюминесцентного ответа нейтрофиль-ными гранулоцитами крови. Установили снижение способности нейтрофилов отвечать на стимуляцию in vitro, что проявляется недостаточной генерацией активных

форм кислорода и отражает пониженные резервные метаболические возможности данных клеточных популяций. Очевидно, обнаруженные нарушения кислородозависимой киллинговой активности нейтрофильных грануло-цитов у больных раком желудка могут в определенной мере снижать цитотоксические эффекты нейтрофилов на опухолевые клетки. Данное обстоятельство, безусловно, влияет на состояние противоопухолевой защиты у данной категории больных.

ЭКСПРЕССИЯ УЕвРШ (РШ) И \lEGfR2 (ПК1 /КОЯ)

ПРИ МЕСТНОРАСПРОСТРАНЕННОМ РАКЕ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

ЛукашинаМ.И.. Жукова Л.Г., Ермилова В.Д., Барышников А.Ю.

Российский онкологический научный центр им.Н.Н.Блохина РАМН, Москва

УЕСР112 является посредником при передаче сигнала от УЕСР внутрь клетки и, таким образом, стимулирует пролиферацию, а также дифференцировку эндотелиальных клеток путем паракринного механизма. Повреждение гена, кодирующего рецептор УЕСРШ, не предотвращает дифференцировку клеток эндотелия, но нарушает функциональное развитие кровеносных сосудов. Активация УЕСРШ способствует миграции клеток, но не индуцирует пролиферацию. УЕСРШ может также действовать как негативный регулятор УЕСРа, уменьшая сигналы к пролиферации, проходящие через УЕСР11-2.

Цель. Оценить экспрессию рецепторов ростового фактора эндотелия сосудов на опухолевых клетках рака молочной железы и эндотелиальных клетках кровеносных сосудов.

Материалы и методы. В работу были включены 75 образцов опухолевой ткани больных раком молочной железы. Оценку экспрессии УЕСРШ, УЕСРЯ2 проводили иммуногистохимическим методом на гистологических срезах.

Результаты. Экспрессию УЕСРШ в опухолевых клетках наблюдали в 54 случаях (72,%), отсутствие экспрессии - в 21 случае (28,0%); в эндотелии кровеносных сосудов распределение было следующее: УЕСРШ (+) -25 случаев (33,3%), УЕСРШ (-) - 50 случаев (66,7%). Обнаружили, что если отсутствовала окраска опухолевых клеток, то эндотелиальные клетки также не были окрашены; в случае положительной реакции в опухоли, сосуды были окрашены в 25 тканевых образцах (46,3%) и не окрашены в 29 образцах (53,7%). Экспрессию УЕСЕЯ2 в опухолевых клетках обнаруживали в 51 образце (68,0%), отсутствие экспрессии - в 24 образцах (32,0%), в эндотелии сосудов наблюдали следующее: УЕСРЫ2 (+) - 30 образцов (40,0%), УЕСР112 сосудов (-) - 45 образцов (60,0%).В группе УЕвРК2 опухоли (+) 22 тканевых образцов (43,1%) не имели окраски в эндотелии и в 29 образцах (56,9%) обнаружили окрашенный эндотелий. В процессе исследования обнаружили, что 23 образца из 24 (95,8%), вошедших в УЕСРИ2 опухоли (-) группы, не имели окраски на опухолевых и эндотелиальных клетках и только в 1случае (4,2%) были окрашены сосуды при отсутствии реакции на опухолевых клетках. Наблюдали ко-экспрес-сию УЕСРШ и УЕСРЯ2 в опухолевых клетках в 40/75 (53,3%) образцах ткани РМЖ, в 10/75 (13,3%) случаях экспрессия обоих рецепторов отсутствовала, коэффициент корреляции составил г=0,36 (р=0,001). Ко-экспрес-

сия рецепторов в эндотелии сосудов обнаруживалась в 14/75 случаях (18,7%), полное их отсутствие в 34/75 случаях (45,3%), коэффициент корреляции составил г=0,28 (р-0,01).

Заключение. Поскольку известно о разнонаправленное™ действия этих рецепторов, вероятно, более сильная экспрессия одного по сравнению с другим будет влиять на развитие опухолевого процесса в целом.

КОМПЛЕКСНОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ЛАКТОФЕРРИНАИ ИНТЕРЛЕЙКИНА 6 В ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКЕ НОВООБРАЗОВАНИЙ ГОРТАНИ

Махов В.А.. Толченицин И.А., Чиркова Т.С., Зорина В.Н., Мингалёв Н.В., Антонов А.Р.

Государственный институт усовершенствования врачей, Новокузнецк, Россия

Новосибирская государственная медицинская академия, Новосибирск, Россия

Рак гортани относится к числу распространенных опухолей верхних дыхательных путей, при этом среди раковых опухолей ЛОР-органов он занимает первое место. При этом, несмотря на многочисленные клинические и экспериментальные исследования, значительно затруднена оценка ряда предопухолевых состояний верхних дыхательных путей. Не разработаны достаточно четкие критерии, позволяющие установить озлокачествление на ранней стадии развития предопухолевых состояний. Улучшить показатели лечения в настоящее время возможно, в большей степени, за счет разработки более совершенных методов ранней диагностики злокачественных опухолей, опираясь на патофизиологические механизмы прогрессии и трансформации предопухолевых заболеваний и фоновых процессов.

Лактоферрин является одним из неспецифических универсальных маркеров рака. Повышенное содержание лактоферрина в крови наблюдается при таких злокачественных новообразованиях, как лимфогранулематоз и лимфосаркома лейкозы, рак молочной железы, яичников, пищевода, желудка, кишечника.

Так же к одному из свойств лактоферрина относят иммунорегуляторные свойства - он участвует в стимуляции фагоцитоза, клеточной адгезии и контроле над синтезом провоспалительных цитокинов, таких как интерлейкин 6 (1Ь-6), фактор некроза опухоли-альфа (ЮТа).

1Ь-6 наряду с выраженными провоспалительными свойствами обладает и иммуномодулирующими свойствами. Ряд авторов относят повышение концентрации 1Ь-6 при злокачественных опухолях к негативным факторам в прогностическом плане. Так, при раке легкого и желудка рядом авторов отмечено усиление продукции 1Ь-6 при прогрессирующей опухоли (Бережная Н.М., 2000; В1ау X е1 а1„ 1992; иввот Р. е1 а1., 1997).

Целью нашей работы было изучение уровня 1Ь-6 и лактоферрина сыворотки крови у больных предраковыми заболеваниями гортани, доброкачественными и злокачественными новообразованиями гортани, выявление взаимосвязи данных показателей с типом патологического процесса.

Материалы и методы. Проведено исследование содержания лактоферрина и 1Ь-6 в сыворотки крови больных раком гортани. Группы сравнения составили больные с

доброкачественными опухолями гортани и больные с предраковыми заболеваниями гортани (хронический ги-перпластический ларингит, лейкокератоз гортани).

Определение концентрации 1Ь-6 в сыворотке крови проводили методом иммуноферментного анализа (ИФА) на тест-системах «РгоСоп 1Ь-6» (ООО «Протеиновый контур», Санкт-Петербург, Россия) по инструкции производителя. Концентрацию лактоферрина в сыворотке проводили методом ИФА на тест-системах «Лактофер-рин - стрип» (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск, Россия) по инструкции изготовителя. За норму принимались значения концентрации лактоферрина в сыворотке здоровых доноров согласно инструкции (1100±400 нг/мл).

Результаты и обсуждение. Показано, что концентрация 1Ь-6 в крови больных раком гортани составляет 65,73±4,27 пг/мл, у пациентов с предраковыми заболеваниями гортани 49,29±6,75 пг/мл, у больных с доброкачественными новообразованиями гортани 33,82±2,77 пг/мл. При этом значение 1Ь-6 статистически значимо различалось во всех группах (р<0,05).

Концентрация лактоферрина в сыворотке больных раком гортани составила 1861 ±194 нг/мл, у больных предраковыми заболеваниями гортани - 1647± 155 нг/мл, у пациентов с доброкачественными новообразованиями -1768±218 нг/мл. При этом получены статистически значимые различия в концентрации лактоферрина в сыворотке крови всех обследуемых групп больных и здоровых доноров (р<0,05).

По нашему мнению, представленные данные свидетельствуют о перспективности дальнейшего изучения и практического использования определения уровня 1Ь-6 и лактоферрина в комплексной диагностике новообразований гортани.

СПОНТАННАЯ РЕАКЦИЯ «ТРАНСПЛАНТАТ-ПРОТИВ-ХОЗЯИНА» ПОСЛЕ АУТОЛОГИЧНОЙ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК

Михайлова Н.Б.. Зубаровская Л.С.. Вавилов В.Н., Пугачев А.А., Подольцева Э.И., Попов С.Д., Чухловин А.Б., Афанасьев Б.В.

Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П.Павлова, Санкт-Петербург, Россия;

Больница №31, гематологическое отделение №2, Санкт-Петербург, Россия

Введение. Аллогенная трансплантация гемопоэтичес-ких стволовых клеток (ТГСК) ассоциируется с низким уровнем рецидивов по сравнению с аутологичными ТГСК за счет реакции трансплантат-против-лейкоза (РТПЛ), протекающей паралельно с реакцией трансплантат-про-тив- хозяина (РТПХ). Хотя в основе РТПХ лежат различия в гистосовместимости, реакции, подобные РТПХ, встречаются и после аутологичных трансплантаций в 5-10% случаев. В экспериментальных работах показан противоопухолевый эффект аутоРТПХ, однако в клинической практике данные противоречивы.

Цель: на примере двух клинических случаев показать, что спонтанная аутоРТПХ может играть роль в пост-трансплантационном противоопухолевом иммунитете и способствовать длительной ремиссии гемобластозов.

Материалы и методы. Нами представлены двое больных с гемобластозами, имеющими плохие исходные

прогностические признаки, у которых после аутоТГСК развилась аутоРТПХ. У первого больного 57 лет диагноз острого миелобластныго лейкоза, Ml-вариант был поставлен в 1993 году. Ремиссия получена после стандартной химиотерапии цитозаром и даунорубицином. Консолидация ремиссии была проведена большими дозами цитозара. 25.03.94 выполнена аутоТГСК после режима кондиционирования циклофосфаном, бусуль-фаном и вепезидом. Посттрансплантационный период осложнился нейтропенической лихорадкой, мукозитом

2 степени, желудочно-кишечным кровотечением. Признаки приживления появились на день +30, однако полностью гемопоэз восстановился на день +101. Второй пациент 43 лет страдал пролимфоцитарной лим-фомой с 1994 года с вовлечением периферических, абдоминальных, парааортальных лимфоузлов, костного мозга, печени, селезенки. Прогрессирование заболевания, потребовавшее агрессивной химиотерапии, началось с 1999 года. С этого периода больной получил 8 курсов ПХТ по схеме CHOP и 2 курса DexaBEAM, после которых была получена полная ремиссия заболевания. 13.12.00 больному выполнена аутоТГСК с режимом кондиционирования BEAM. В раннем посттранс-плантационном периоде отмечалась нейтропеническая лихорадка, сепсис, мукозит 2 степени. Приживление зарегистрировано на день +21. Оба больных не получали циклоспорина А.

Результаты. Спонтанная РТПХ развилась у обоих больных параллельно с началом восстановления гемо-поэза: у первого больного на день+31, у второго больного на день+ 25. В обоих случаях отмечалось характерное поражение кожи: макулопапулезная генерализованная сыпь, небольшой кожный зуд. Вовлечения внутренних органов не было. У обоих больных наличие РТПХ подтверждено биопсией кожи. РТПХ длилась 78 дней и 22 дня, и потребовала введения глюкокорти-коидов. Оба больных на настоящий день живы, в полной ремиссии: у больного ОМЛ ремиссия сохраняется более 9 лет, у больного пролимфоцитарной лимфомой

- более 2 лет.

Выводы: мы предполагаем, что поддержание длительных ремиссий у данных больных было вызвано аутологичной РТПЛ, протекавшей параллельно с РТПХ, и обеспечившей контроль за остаточной минимальной болезнью.

ИММУНОТЕРАПИЯ АУТОЛОГИЧНЫМИ ПРЕДШЕСТВЕННИКАМИ ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК БОЛЬНЫХ ДИССЕМИНИРОВАННОЙ МЕЛАНОМОЙ КОЖИ И МЕТАСТАТИЧЕСКИМ РАКОМ ПОЧКИ: ОПЫТ НИИ ОНКОЛОГИИ ИМ.ПРОФ.Н.Н.ПЕТРОВА

Моисеенко В.М.. БалдуеваИ.А.. Данилов А.О.. Щёкина Л.А., ОрловаР.В., СеменоваА.И., Проценко С. А., Михайличенко Т.Д., Данилова А.Б., КочневВ.А., ГафтонГ.И., Барчук А.С., Анисимов В.В., Молчанов О.Е., Хансон К.П.

НИИ онкологии им.проф.Н.Н.Петрова, Санкт-Петербург, Россия

Иммунотерапия аутологичными предшественниками дендритных клеток (АПДК) относится к перспективным направлениям биотерапии и представляет собой попытку коррекции иммунологического дисбаланса, приводя-

щего к развитию в организме человека злокачественной опухоли.

Цель исследования: Определение эффективности и токсичности иммунотерапии АПДК больных диссеминированной меланомой кожи и метастатическим раком почки.

Материалы и методы. В исследование включены пациенты, соответствующие следующим критериям: гистологически верифицированный диагноз меланомы кожи, рака почки, толстой кишки с доступной для выполнения эксцизионной биопсии локализацией метатстазов; возраст старше 18 лет; наличие измеримых очагов поражения; отсутствие какого-либо противоопухолевого лечения в течение последних 4-х недель или наличие признаков прогрессирования после их проведения; информированное согласие пациента на участие в данном исследовании.

Методика. 1 этап: мобилизация АПДК из костного мозга в периферическую кровь ежедневным подкожным введением ГМ-КСФ (“Ьеисошах") в дозе 250 мкг/кв.м в течение 4 дней. На 5 день с помощью клеточного сепаратора “СОВЕ-8рес1га” производится операция лейко-фереза с последующим культивированием полученной клеточной (СБ34 ) популяции в полной среде ИРМ1 1640 с ГМ-КСФ в течение 12 дней с целью увеличения содержания АПДК до 90%. 2 этап: получение лизата опухолевых клеток путем дезагрегации хирургически удаленного препарата первичной опухоли или метастаза (размером не менее 1 куб.см) и выращивания опухолевых клеток. 3 этап: инкубация АПДК с опухолевым лизатом и фактором некроза опухоли-альфа в течение 36-48 часов с последующим программным замораживанием (“БУ-ЬаЬ”). До и после инкубации проводится определение уровня экспрессии на АПДК антигенов ГКГС 1 и 2 класса, линейно-специфических, костиму-лирующих и адгезионных молекул. 4 этап: введение больному предварительно размороженных дендритных клеток в дозе не менее Зх10/кг в/в, п/к или в/к каждые 2-3 недели.

Результаты. За период с 1998 по 2003 в исследование включено 12 больных с метастатической формой рака: 6 - рак почки, 6 - меланома кожи. Средний возраст пациентов - 54,6 (41-68) года. В течение этого времени: 1) Шесть пациентов получили от 2 до 6 внутривенных инфузий АПДК (в среднем 3 инфузии на пациента). Терапевтический эффект: полный или частичный ответы - не были зарегистрированы, стабилизация опухолевого процесса наблюдалась у 1 пациента (3 мес.), прогрессирование - у 5. Побочные эффекты (лихорадка, астения или гепатотоксичность) наблюдались во всех случаях. 2) Три пациента получили 6-8 подкожных и внутрикожных инъекций АПДК. Побочные эффекты не наблюдались, реакция “гиперчувствительность замедленного типа” - в одном случае. Стабилизация опухолевого процесса - у 2 пациентов (5 и 7 мес.). 3) В настоящее время: один пациент получает внутрикожное введение ДК два раза в месяц; один пациент - внутрикожные и внутриопухолевые инъекции ДК в комбинации с низкими дозами цитостатиков; один пациент - внутрикожные введения в комбинации с интерлейкином-1. В последнем случае зарегистрирован регресс метастатического образования рака почки в легком на 30%.

Выводы. Внутрикожное и подкожное введение АПДК не вызывает побочных эффектов и может вызывать иммунный и клинический ответы.

ПРИМЕНЕНИЕ ВАКЦИН НА ОСНОВЕ АУТОЛОГИЧНЫХ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ ДИССЕМИНИРОВАННОЙ МЕЛАНОМОЙ КОЖИ И МЕТАСТАТИЧЕСКИМ РАКОМ ПОЧКИ Моисеенко В.М.. Данилов А.О.. Ларин С.С.*, Данилова А.Б., Балдуева И.А., Семенова А.И., Щёкина Л.А.**, Киселев С.Л.*, Барчук А.С., Анисимов В.В., Гафтон Г.И., Кочнев В.А., Молчанов О.Е., Хансон К.П.

НИИ онкологии им.проф.Н.Н.Петрова;

* Институт биологии гена РАН, Москва, Россия;

* * Больница №31, Санкт-Петербург

Введение. Одним из наиболее перспективных подходов к созданию противоопухолевых вакцин является модификация опухолевых клеток генами цитокинов. При этом продукты, синтезируемые модифицированными опухолевыми клетками, активируют антигенпредставляющие клетки (АПК), в результате чего ожидается “обучение” и стимуляция цитотоксических Т-лимфоцитов, в том числе против антигенов клеток данной опухоли. В настоящее время проводится большое количество исследований с целью клинической оценки этого метода биотерапии при опухолях различных локализаций. Белок Tag7 является гомологом семейства фактора некроза опухолей и обладает цитотоксическими свойствами. Кроме того, он активирует через посредство АПК лимфоциты, которые, в свою очередь, атакуют и разрушают как модифицированные, так и неизмененные опухолевые клетки.

Цель работы. Оценить клиническую эффективность вакцинотерапии с помощью модификации геном tag7 аутологичных опухолевых клеток у больных диссеминированной меланомой кожи и метастатическим раком почки.

Материал и методы. Исследование основано на клиническом материале 26 пациентов (23 больных меланомой кожи и 3 больных раком почки), получавших лечение в НИИ онкологии им.проф.Н.Н.Петрова с 2001 по 2003 год. Технология приготовления противоопухолевой вакцины, модифицированной геном tag 7, предполагала дезагрегацию образцов опухоли, культивирование клеток, их трансфекцию липосомным методом, анализ экспрессии введенных генов с помощью иммуноблотинга и облучение с целью инактивации пролиферации.

Результаты. Были получены культуры опухолевых клеток, модифицированные геном tag 7 (23 культуры меланомы кожи и 3 культуры рака почки) у 26 больных. Минимальное количество трансфецированных клеток составило 4%, максимальное - 30%. Больные получили от 3 до 6 введений вакцины (в среднем 4 введения). У 16 больных оценена клиническая эффективность вакцинотерапии. Установлено, что изучаемый вакцинный препарат безвреден для аутологичного больного и вызывает иммунный ответ на опухолевые клетки хозяина у 90,9% первично иммунизированных пациентов. Иммунологический мониторинг вакцинотерапии выявил тенденцию к увеличению абсолютного содержания Т-клеток в периферической крови и усилению их функциональной активности. Лечебных клинических эффектов (полный или частичный регресс) у больных не зарегистрировано, за исключением непродолжительной стабилизации процесса у 2 больных.

Заключение. 1. Вакцинотерапия аутологичными опухолевыми клетками, модифицированными геном tag 7,

хорошо переносится больными и сопровождается определенным иммунологическим эффектом.

2. Низкая клиническая эффективность обусловлена:

- тяжестью состояния больных, получавших ранее химио- и иммунотерапию;

- низкой эффективностью трансфекции опухолевых клеток.

КОНЦЕНТРАЦИЯ БЕЛКОВ МАКРОГЛОБУЛИНОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ У БОЛЬНЫХ С ПРЕДРАКОМ ГОРТАНИ

Осипов В.Д.

Новокузнецкий институт усовершенствования врачей; кафедра оториноларингологии

Обратив внимание на указания в единичных работах отечественных и зарубежных авторов (Зорин Н.А. с со-авт.,1991; ВоЛЬ АУ., Ь1^ег Т.А., 1982) на иммуносуп-рессивное действие ассоциированного с беременностью альфа-2-гликопротеина (АБГ) и альфа-2-макроглобули-на (МГ) на Т-систему лимфоцитов, мы в данной статье приводим оценку содержания белков АБГ и МГ, не изученных ранее, при предраковых заболеваниях гортани: хроническом гиперпластическом ларингите и лейкоплакии.

Цель данной работы - улучшение результатов диагностики, лечения и прогнозирования больных с предраковыми заболеваниями гортани с использованием белков АБГ и МГ.

Поставлены задачи - определение концентрации белков АБГ и МГ в сыворотке крови для оценки результатов лечения предраковых заболеваний гортани.

Материалы и методы. Динамическое исследование содержания АБГ и МГ в сыворотке крови проведено у 50 больных при предраковых заболеваниях гортани. Возраст пациентов колебался в диапазоне от 28 до 69 лет, все больные были мужского пола. Концентрацию АБГ определяли с использованием иммуноферментного метода. Содержание МГ определяли методом низковольтного ракетного иммуноэлектрофореза.

Проведено исследование белка АБГ и МГ при хроническом гиперпластическом ларингите у 25 пациентов и при лейкоплакиях у 25 больных. Исследование проводилось до лечения, через 10-12 дней и через год после лечения. Контролем служило содержание АБГ и МГ в сыворотке крови 30 здоровых лиц мужского пола в возрасте от 28 до 69 лет. Полученные результаты исследования обработаны статистически.

У больных с хроническим гиперпластическим ларингитом до лечения уровень АБГ увеличен в 2 раза (0,017±0,013 г/л), что достоверно по отношению к концентрации здоровых лиц (0,008±0,002 г/л). Через 10-12 дней после консервативного лечения концентрация АБГ не отличалась от концентрации у здоровых лиц. При обследовании через год, если у пациента не было обострения процесса, концентрация АБГ осталась на уровне показателей здоровых лиц.

Концентрация АБГ у больных с лейкоплакиями гортани (0,019±0,003 г/л) была выше, чем у здоровых лиц (0,008+0,002 г/л) в 2,4 раза. После оперативного удаления лейкоплакий через 10-12 дней при эффективной операции концентрация АБГ не отличалась от контрольных данных. Однако при рецидиве лейкоплакий в гортани концентрация АБГ вновь увеличивалась в 2,2 раза по от-

ношению к контрольным показателям здоровых лиц. При благоприятном исходе, контрольное исследование через год, концентрация АБГ не отличалась от данных здоровых лиц.

При анализе МГ с хроническим гиперпластическим ларингитом до лечения отмечается достоверное (р<0,05) уменьшение его содержания (2,272±0,154 г/л) по сравнению с показателями контрольной группы (2,610±0,201 г/л). После консервативного лечения через 10-12 дней концентрация МГ значительно увеличилась, но не достигла уровня данных здоровых лиц. При контрольном исследовании больных через год, вне обострения заболевания, показатели концентрации МГ не отличались от уровня здоровых лиц.

Полученные данные свидетельствуют, что концентрация МГ у больных с лейкоплакиями достоверно (р<0,05) ниже (2,164±0,122 г/л), чем показатели здоровых лиц (2,61010,201 г/л).

При удалении лейкоплакии оперативным путем концентрация МГ возрастала и не отличалась от показателей здоровых лиц. Однако при рецидиве лейкоплакии вновь уменьшается концентрация МГ в крови (2,194±0,125 г/л) в сравнении с показателями контрольной группы. При контрольном исследовании через год этого контингента больных и при отсутствии рецидива лейкоплакий уровень белка МГ не отличался от концентрации у здоровых лиц.

Таким образом, динамическое наблюдение за больными с предраковыми заболеваниями (хронический гиперп-ластический ларингит и лейкоплакии гортани) с исследованием содержания МГ и АБГ в крови может служить показателем эффективности эндоларингеальной операции (лейкоплакия) или консервативного лечения при хроническом гиперпластическом ларингите и тем самым может способствовать раннему выявлению озлокачеств-ления процесса в гортани.

РОЛЬ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОГО ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА В ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ ЗАЩИТЕ ПРИ ОСТРОМ ЛИМФОБЛАСТНОМ ЛЕЙКОЗЕУДЕТЕЙ

ПотапневМ.П.. .Белевцев М.В., Борткевич Л.Г.*, Петевка Н.В.2, Гринев В.В.3, Мигаль Н.В., Кравчук З.И.4, Марцев С.П.4

Республиканский научно-практический центр детской онкологии и гематологии,

1 Белорусский Зеленый Крест,

2НИИ гематологии и переливания крови,

3 Белорусский государственный университет,

4 Институт биоорганической химии НАНБ,

Минск, Беларусь

Считается, что противоопухолевая защита включает множество составляющих при ведущем значении Т-кле-точного иммунитета. Целью нашего исследования было выявление участия сывороточных иммуноглобулинов (^) классов М, в, А, С1, С2, 03, С4, фактора некроза опухо-лей-альфа (ТЫБ-альфа), неспецифических противоопухолевых антител в регулировании лейкемизации, ответа на химиотерапию и выживаемость больных острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ).

Результаты иммунологического и клинико-лаборатор-ного обследования 68 больных В-линейным ОЛЛ в воз-

расте 3-17 лет показали следующее. Средние значения уровня ^М, ^А, ^С1, ^02, ^03, ^С4 достоверно

не различались у больных и группы здоровых детей того же возраста. Не установлена связь уровня ^ с частотой инфекций у больных ОЛЛ. Между уровнем ^М (и 1яС1) и количеством лейкозных клеток в периферической крови выявлена обратная корреляционная зависимость. Сравнение трех подгрупп больных с низким, средним и повышенным уровнем показало, что в группе больных со средними (нормальными) значениями отмечается достоверно более низкое содержание лейкозных клеток в периферической крови (но не костном мозге), чем в группе больных с низким значением при одинаковой час-

тоте инфекционных осложнений. Кроме того, низкий уровень ассоциировался с большей частотой больных, плохо отвечающих на терапию, и достоверно худшим клиренсом лейкозных клеток в периферической крови. Показатель 4-летней выживаемости был наилучшим (91,2%) в подгруппе больных с нормальным содержанием в крови, а наихудшим (58,8%) в подгруппе больных с повышенным содержанием в крови. Интересно, что последняя подгруппа больных характеризовалась достоверно большей частотой обнаружения гомогенных форм и противоопухолевых антител.

Уровень ЮТ-а в плазме крови достоверно не различался между группами здоровых детей и больных ОЛЛ. В то же время отмечена достоверная положительная корреляционная зависимость уровня цитокина и содержания лейкозных клеток в периферической крови, но не костном мозге больных.

Активность классического и альтернативного путей активации, а также содержание СЗс и С4 компонентов комплемента были достоверно повышены в периферической крови больных по сравнению со здоровыми. При этом установлена прямая корреляционная связь между уровнем СЗс и содержанием опухолевых клеток в периферической крови, но не в костном мозге.

Анализ представленных данных свидетельствует о том, что уровень миграции опухолевых клеток из костного мозга (где они преимущественно образуются) в периферическую кровь определяется уровнем неспецифического гуморального иммунитета в периферической крови. Снижение уровня периферизации лейкозного процесса (лейкемизации) связано с нормальным уровнем повышенным уровнем ^М и ^С1, низким уровнем гомогенных молекул низким уровнем противоопухолевых неспецифических антител, низким уровнем ТЫЕ-альфа и СЗс компонента комплемента. Таким образом, перечисленные факторы гуморального неспецифического иммунитета оказывают сдерживающее влияние на генерализацию опухолевого процесса, а также на эффективность проводимой химиотерапии ОЛЛ у детей.

МИКРОСКОПИЧСКАЯ ОЦЕНКА С020 И С025 ПОЗИТИВНЫХ ИММУНОЦИТОВ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПОЛОСТИ РТА (СОПР) КРЫС В НОРМЕ И ПРИ ВНУТРИБРЮШИННОМ ВВЕДЕНИИ ЦИКЛОФОСФАНА

РагимовЧ.Р.. Керимова Г.Э., Гасанов И.А.

Медицинский университет, Баку, Азербайджан

Введение. Одним из путей выведения из организма метаболически трансформированных противоопухоле-

вых препаратов является их экскреция слюной, в составе которой могут оказаться компоненты с токсическим воздействием на СОПР, язык, пародонт, слюнные железы. При этом недостаточно исследовано состояние различных типов иммуноцитов в органах ротовой полости, что обусловливает необходимость эксперимен-тально-клинического анализа данного вопроса с последующей разработкой и внедрением в практическую работу рекомендаций по профилактике возможных осложнений.

Цель: иммуногистохимически изучить суммарную популяцию В-лимфоцитов и клеток с рецепторами к интерлейкину-2 (1Ь-2) в СОПР у крыс в норме и при внутрибрюшинном введении циклофосфана.

Материал и методы. Эксперименты выполнены на белых беспородных лабораторных крысах - самцах, разделенных на контрольную (интактные; 6) и основную (подопытные; 30) группы. В основной группе в течение

5 суток ежедневно внутрибрюшинно введен циклофос-фан в суммарной дозе 6,0 мг сухого препарата на каждое животное весом 200,0 гр. Животные умерщвлены, и образцы из различных участков СОПР взяты на 5, 8,

11, 14 и 21 сутки со дня начала введения циклофосфана. Параллельно с общегистологическим изучением СОПР на серийных криомикротомных срезах авидин-биотиновой реакцией с помощью моноклональных кроличьих антител идентифицированы В-лимфоциты (СБ20 ) и клетки с рецепторами к 1Ь-2 (СБ25 ) (“Моуосав^а”). Изучены микроскопические параметры и суммарное содержание соответствующих популяций указанных клеток.

Основные результаты. Установлено, что у интак-тных лабораторных крыс иммунный аппарат СОПР содержит В-лимфоциты, локализованные, в основном, одиночно или мелкими скоплениями в ее собственном слое. Кроме того, обнаружены единичные СБ20 клетки в эпителиальной пластинке, а также - в эпизодичных мелких белково-слизистых железах. Соотношение между стромальными и эпителиальными лимфоцитами - 91,0 ; 9,0. Иммуноциты с рецепторами к 1Ь-2 представлены единичными периваскулярными СБ25 клетками и не найдены в составе ни эпителия, ни желез СОПР.

После ежедневного внутрибрюшинного введения циклофосфана в течение 5 суток 60,0-70,0% идентифицированных клеток подвержены глубокой альтерации и некробиозу. Непосредственно после прекращения введения циклофосфана общее число СЭ20 лимфоцитов уменьшено в 3,0 раза. В дальнейшем, даже к 21 суткам указанный показатель восстановлен лишь частично и недостоверно. При этом их удельный вес в составе эпителиальной пластинки и желез СОПР возрос до 21,0%. К 5,8 и 11 суткам введения циклофосфана остается резко сниженным также общее число СБ25 иммуноцитов, которые частично восстанавливаются лишь к 21 суткам экспериментов.

Заключение. Итак, внутрибрюшинное введение белым лабораторным крысам одного из основных противоопухолевых цитостатиков - циклофосфана приводит к резкому угнетению локального иммунного аппарата СОПР, которое проявляется уменьшением общего числа В-лимфоцитов и иммуноцитов с рецепторами к 1Ь-2, а также - повреждениями и некробиозом сохранившейся части указанных клеток.

ОСОБЕННОСТИ КЛИНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ И ОТВЕТА НА ТЕРАПИЮ БОЛЬНОГО CD5 НЕГАТИВНЫМ В-КЛЕГОЧНЫМ ХРОНИЧЕСКИМ ЛИМФ0ЛЕЙК030М (В-ХЛЛ)

Салогуб Г.Н.. Стадник Е.А., Зуева Е.Е., Молчанова И.В.,

Моторин Д.В., Зарицкий А.Ю.

Санкт -Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П.Павлова, Санкт -Петербург, Россия

В-клеточный хронический лимфолейкоз - наиболее часто встречающееся онкогематологическое заболевание, на долю которого приходится 30% всех случаев лейкозов. Наиболее характерными иммунологическими маркерами опухолевых клеток являются - CD5, CD19, CD23, CD20.

Больной Ч, 53 лет, поступил в клинику факультетской терапии 30.10,02. При физикальном обследовании увеличения периферических, внутригрудных, абдоминальных лимфатических узлов, а также гепатоспленомегалии не выявлено. При лабораторном исследовании уровень лейкоцитов составил 16*109/л с абсолютным лимфоци-тозом , тромбоцитов - 252*109/л, гемоглобин - 125 г/л, СОЭ 50мм/ч, в протеинограмме М-градиент за счет секреции IgG достигал 23 г/л. По данным цитологического исследования аспирата, костный мозг в основном был представлен зрелыми лимфоцитами ( 90 %) с иммунофенотипом CD5 CD10 CD19+ CD23+ CD22+ CD20+ HLADR+ slgM kappa CD38 , иммунологически опухолевый клон однородный. Время удвоения лимфоцитов периферической крови составило 2 недели (16*109/л -32*109/л). За это время появилась анемия (гемоглобин 98 г/л), тромбо-цитопения (48*109/л) при отсутствии антиэритроцитар-ных и антитромбоцитарных антител (стадия IV С) .

Учитывая быструю прогрессию заболевания и молодой возраст больного, была начата химиотерапия флю-дарабином, который в дальнейшем сочетался с цикло-фосфаном. После второго курса терапии флюдарабином опухолевая популяция в периферической крови по данным иммунофенотипирования не выявлена. Показатели клинического анализа крови полностью нормализовались. Иммунологическое исследование костного мозга через две недели после окончания второго курса флудара-бином показало уменьшение опухолевой популяции, несущей исходный фенотип, до 10%. Для достижения клинико-гематологической ремиссии и закрепления эффекта к флударабину добавлен циклофосфан. После одного курса терапии флударабин + циклофосфан в костном мозге опухолевая популяция не выявлена.К настоящему времени поведено еще два курса ПХТ флударабин+цик-лофосфан. Перенес без осложнений, показатели клинического анализа крови в пределах нормы.

Таким образом, особенностью нашего больного явилось отсутствие экспрессии CD5, что наблюдается у 7-20% больных В-ХЛЛ. Это сочеталось с быстрой прогрессией заболевания, однако очень хорошим ответом на терапию. Требуется дальнейшее исследование прогностического значения CD5 негативного фенотипа при В-ХЛЛ.

В-КЛЕТОЧНЫЙ ХРОНИЧЕСКИЙ ЛИМФОЛЕЙКОЗ. ПОДХОДЫ К ТЕРАПИИ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ПРОГНОСТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ

Стадник Е.А.. Зуева Е.Е.. Салогуб Г.Н.,

Молчанова И.В., Моторин Д.В., Зарицкий А.Ю., НикитинЕ. А.

Государственный медицинский Университет им. акад. И.П.Павлова, Санкт-Петербург, Россия

В-клеточный хронический лимфолейкоз (ХЛЛ) гете-рогенен по клиническим проявлениям и продолжительности жизни больных. Достижения фундаментальной иммунологии и внедрение в практику иммунофенотипирования позволили четко выделить В-ХЛЛ среди других хронических лимфопролиферативных заболеваний. До сих пор в терапии ХЛЛ используется стандартный паллиативный подход, при котором лечение начинают только на стадии развернутых клинических проявлений. Однако такая выжидательная тактика не оправдана, так как в результате выжидания допускается появление субклонов, что ведет к озлокачествлению течения опухоли, формированию лекарственной резистентности.

При иммунофенотипическом исследовании таких больных выявляется гетерогенность опухолевой популяции лимфоцитов по уровню экспрессии классических диагностических маркеров. Изменяется профиль антигенной экспрессии В-клеточных маркеров: наиболее часто выявляется неоднородность по экспрессии CD 19, снижается или исчезает CD22 при сохранности CD20. Часть CD23+ опухолевых клеток теряет экспрессию CD5. Раз-нонаправленность этих изменений является еще одним свидетельством опухолевой прогрессии в отсутствие адекватной терапии.

В современных условиях возможно получение полных ремиссий, в том числе и молекулярных, благодаря появлению в клинической практике аналогов пуринов и химерных моноклональных антител. Но назначение терапии в дебюте болезни невозможно, так как приблизительно в 30% случаев необходимость в лечении может возникнуть очень поздно или не понадобиться никогда. Поэтому должны быть четко определены показания к раннему интенсивному лечению. Они основываются на прогностических факторах: возраст, стадия заболевания на момент постановки диагноза; время удвоения лимфоцитов; иммунофенотип опухолевых клеток; мутационный статус генов вариабельного региона иммуноглобулинов опухолевых В-лимфоцитов; цитогенетические изменения.

Некоторые прогностические факторы могут быть учтены не у всех больных. В частности:

- время удвоения лимфоцитов должно быть определено в отсутствие терапии, что противоречит современным подходам раннего начала лечения пациентов с плохим прогнозом.

- Выявление цитогенетических изменений не всегда возможно в связи с методическими сложностями работы с опухолевыми лимфоцитами при хронических лимфопролиферативных заболеваниях.

- Анализ мутационного статуса дорлжен проводиться в высокоспециализированных лабораториях в условиях безусловной стандартизации используемых методов и реагентов.

На основании проведенного клинико-лабораторного исследования 30 первичных больных В-ХЛЛ показано,

что заболевание протекает неблагоприятно у больных моложе 40 лет и требует раннего начала интенсивной полихимиотерапии, хотя и в этой группе необходим учет прогностических факторов. Наихудший прогноз имеют пациенты с высокой экспрессией СБ38 и иммунофенотипически неоднородной опухолевой популяцией, временем удвоения лимфоцитов менее 12 месяцев, отсутствием соматических мутаций генов вариабельного региона иммуноглобулинов опухолевых В-лимфоцитов, хромосомными изменениями.

ИММУННЫЙ ОТВЕТ - ДРУГ ИЛИ ВРАГ ПРИ ТЕРАПИИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ ОНКОЛ ИТИЧЕСКИМИ ВИРУСАМИ

ТенплерЕ.*. Зиндер О.*, Паныпин А.

Ветеринарный Институт им. Кимрона,

БейтДаган, Израиль;

* Медицинский Центр им. РАМБАМ,

Хайфа, Израиль

Минуло почти 100 лет с момента первого применения вирусов для лечения злокачественных опухолей. Клинические наблюдения и эксперименты на животных, выполненные в начале прошлого века, показали, что вирусы способны инфицировать и разрушать опухолевые клетки. Однако дальнейшие исследования показали, что регрессия опухолей, наблюдаемая у половины больных после инокуляции вирусов, вскоре сменялась бурной опухолевой прогрессией. Ввиду низкой эффективности данный метод лечения был оставлен на многие годы. Интерес к противоопухолевой терапии онколитическими вирусами вновь пробудился в конце прошлого века. Успехи последних десятилетий в молекулярной биологии, вирусологии, генетике, клеточной биологии и онкологии позволили разработать новые подходы, позволяющие включить онколитическую вирусную терапию в комплекс мероприятий по эффективному лечению рака.

Противоопухолевое действие вирусов слагается из двух основных компонентов. С одной стороны, сам вирус или вирус в комбинации с другими терапевтическими воздействиями (химиотерапией, радиационной терапией) оказывает прямое цитолитическое действие на опухолевые клетки. С другой стороны, вирус может усиливать противоопухолевые иммунные реакции путем модуляции иммунного ответа носителя опухоли. Таким образом, роль иммунного ответа хозяина на терапию онколитическими вирусами нельзя рассматривать однозначно. Имеющиеся в литературе данные по этому вопросу весьма противоречивы. С одной стороны, вируснейтрализующие антитела препятствуют дальнейшей экспансии вирусов, ограничивая тем самым терапевтический эффект. С другой стороны, достаточно высокая активность иммунной системы необходима для развития противоопухолевых иммунных реакций. Соответственно, иммуносупрессивная терапия усиливает прямое цитолитическое действие, но отменяет пролонгированный эффект, обусловленный противоопухолевыми иммунными реакциями. Для преодоления этого противоречия были предложены различные подходы: отбор вирусов, обладающих необходимой активностью, локальная аппликация вирусов, генетическая модификация вирусных векторов и пр. Однако до сих пор роль иммунной системы в терапии онколитическими вирусами остается областью интенсивных исследований.

С целью изучения возможности повышения эффективности терапии онколитическими вирусами нами предложен следующий принципиальный подход - применение вместо «онколизатов» препаратов рибонуклеиновой кислоты, полученных из инфицированных онколитическими вирусами опухолевых тканей и очищенных от нежелательных компонентов с помощью Subtractive hybridization technique.

THE IMMUNE RESPONSE - FRIEND OR ENEMY IN THERAPY OF MALIGNANT TUMOURS BY ONCOLYTIC VIRUSES.

Tendler Y. *, Zinder O. *, Panshin A.

Division of Avian Diseases, Kimron Veterinary Institute, BEIT DAG AN, ISRAEL

'Department of Clinical Biochemistry, Rambam Medical Center, Haifa, ISRAEL

Almost 100 years have passed since the first application of viruses for treatment of malignant tumors. In the beginning of the last century clinical research and animal experiments have shown that viruses are capable of infecting and destroying malignant cells. Further investigations have shown, that the tumor regression observed in half of the patients inoculated with viruses, was soon replaced by active tumor progression. Thus, in view of low efficiency, this method of treatment has been abandoned for many years. Interest in anti-neoplastic therapy by oncolytic viruses has re-awakened at the end of the last century. Progress in molecular biology, virology, genetics, cellular biology, and oncology have allowed to development of new approaches, including oncolytic virus therapy, in a complex of actions for the effective treatment of a cancer.

The anti-neoplastic action of viruses is composed of two basic components. First, the virus - or a virus in a combination with other therapeutic influences (chemotherapy, radiating therapy) has direct cytolytic effect on tumoral cells. Secondly, the virus can strengthen anti-neoplastic immune reactions by modulation of an immune response of the tumour host. Thus, role of the host’s immune response on therapy by oncolytic viruses cannot be considered unequivocally. The data available in the literature on this question is rather inconsistent. On the one hand, virus-neutralizing antibodies interfere with the further expansion of viruses, thus limiting the therapeutic effect. On the other hand, a high enough activity of immune system is necessary for development of antineoplastic immune reactions. Accordingly, immuno-supressive therapy strengthens direct cytolytic action, but cancels the prolonged effect caused by anti-neoplastic immune reactions. In order to overcome this contradiction various approaches have been developed, such as: selection of the viruses possessing necessary activity, local application of viruses, genetic updating of virus vectors, and so forth. However, the role of the immune system in therapy by oncolytic viruses still remains an area of intensive research.

A new approach in cancer immuno-therapy was developed in recent studies which use RNA as a source of antigen to vaccinate against the tumor. The observation that RNA can be injected and expressed by cells in vivo with great efficiency has stimulated efforts to develop RNA - based vaccines.

We proposed the following basic approach to study a possibility of increased efficiency of therapy by oncolitic

viruses - Isolation of ribonucleic acids from malignant tissue infected by oncolytic viruses and purified from unwanted components using subtractive hybridization techniques, and then using this purified RNA for vaccination.

УРОВЕНЬ СЫВОРОТОЧНОГО ЛАКТОФЕРИНА У БОЛЬНЫХ С ПРЕДРАКОВЫМИ СОСТОЯНИЯМИ И РАКОМ ГУБЫ

Толченипин И. А.. Махов В.А., Мингалёв Н.В., Поленичкин В.К., Мальцева Н.В.

Государственный институт усовершенствования врачей, Новокузнецк, Россия

Среди опухолей головы и шеи доля рака губы достаточно велика, достигая, по данным мировой статистики, 26% (Пачес И.А., 2000).

Несмотря на успехи, достигнутые в решении проблемы лечения рака губы, недостаточно освещены вопросы, касающиеся ранней диагностики и оценки патологических процессов, предшествующих развитию злокачественной опухоли.

В связи с этим актуальным является поиск маркеров, которые в диагностическом плане позволили бы своевременно установить диагноз злокачественной опухоли, а в прогностическом плане - осуществлять контроль эффективности проводимого лечения.

Наше внимание привлёк сывороточный лактоферрин (ЛФ), который является одним из маркеров селективно связанных с опухолевым ростом. Ряд авторов отмечает повышение ЛФ в сыворотке крови при злокачественных новообразованиях лимфоидной ткани, молочной железы, яичников, пищевода, желудка, кишечника (Архипова

С.В.,1999; Баженова Л.Г., Промзелев Е.Г. и соавт.,1997; Сухарев А.Е., Николаев А.А. и соавт., 1990). Сведений об уровне ЛФ в сыворотке крови при злокачественных новообразованиях и предраках губы мы не обнаружили.

Целью нашего исследования было изучение уровня сывороточного лактоферрина у больных с длительно текущими патологическими процессами (хроническая язва, хроническая травма губы), предраками и раком губы, определение взаимосвязи между количественными показателями ЛФ и типом патологического процесса.

Материалы и методы. Проведено исследование содержания лактоферрина в сыворотке крови больных раком губы (п=35) и предраковыми и длительно текущими патологическими процессами губ (п=28). Контрольную группу (п=40) составили клинически здоровые доноры. Все доноры являлись жителями г. Новокузнецка Кемеровской области.

Определение концентрации ЛФ проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием тест-систем «Лактоферрин - стрип» (ЗАО «Век-тор-Бест», Россия) по инструкции изготовителя.

Результаты и обсуждение. Концентрация ЛФ в сыворотке крови здоровых доноров составила 530±80 нг/ мл. Уровень ЛФ в сыворотке крови у больных раком губы составил 1365±42 нг/мл, что в 2,6 раза больше чем в контрольной группе. Концентрация сывороточного Л Ф у больных с предраковыми заболеваниями губ составила 1106±53 нг/мл. Концентрация ЛФ в сыворотке крови у больных с длительно текущими патологическими процессами на слизистой губы в среднем составила 1037±57 нг/мл.

При этом концентрация сывороточного ЛФ у больных раком губы статистически значимо отличается от

уровня ЛФ в сыворотке группы контроля и группы больных предраковыми и вялотекущими патологическими процессами губы (р<0,05). Также статистически значимо различается концентрация ЛФ в сыворотке здоровых доноров и пациентов с предраковыми заболеваниями губы.

Таким образом, представленные данные свидетельствуют о целесообразности дальнейшего изучения сывороточного лактоферрина как онкомаркера в комплексной диагностике злокачественных новообразований челюстно-лицевой области.

РОЛЬ АП0ПТ03А И АНЕРГИИ Т-КЛЕТОК В РАЗВИТИИ ИММУННОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ ПРИ ИНФЕКЦИОННОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ И ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ

Черных Е.Р.. Леплина О.Ю., Сахно Л.В., Тихонова М.А., ШевелаЕ.Я., Фридлянд И.Ф., Ступак В.В., Центнер М.И., Никонов С.Д., Соловьева И.Г., Стрельцова Е.И., Останин А.А.

ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, Новосибирск, Россия

Введение. Апоптоз и анергия являются проявлениями негативного исхода клеточной активации и играют важную роль, поскольку участвуют в формировании толерантности к аутоантигенам и ограничении иммунного ответа. Однако их избыточная выраженность может быть причиной иммунодефицитных состояний, как, например, при ВИЧ-инфекции. В то же время причастность апоп-тоза и анергии Т-клеток к иммунной недостаточности при других формах вирусной инфекции, а также бактериальной инфекции и опухолевом росте практически не исследованы.

Цель. Изучить проявления, механизмы развития и биологическую значимость апоптоза и анергии лимфоцитов при инфекционных процессах и опухолевом росте и разработать на этой основе новые подходы к коррекции иммунной недостаточности.

Материалы и методы. Уровень апоптоза определяли методом проточной цитометрии с использованием двойного окрашивания клеток пропидиум иодидом и флуо-рисцеин диацетатом, либо пропидиум иодидом с последующей оценкой гиподиплоидного пика. О наличии анергии судили по снижению пролиферативной активности лимфоцитов при стимуляции через Т-клеточный рецептор, ассоциированной с блоком прохождения клеточного цикла.

Результаты. Течение инфекционно-воспалительных (гнойно-септические заболевания (ГСЗ) у хирургических больных, туберкулез легких, вирусный гепатит С и В, клещевой энцефалит) и онкологических заболеваний (рак желудка, злокачественные глиомы головного мозга) сопряжено с усилением спонтанного и активационного апоптоза Т-клеток, а также с анергией не вовлеченных в апоптоз Т-лимфоцитов. При этом выраженность апоптоза и анергии, формы их проявления и субпопуляционная принадлежность Т-клеток существенно варьируют в зависимости от типа патологии. Наиболее выраженное усиление апоптоза лимфоцитов наблюдается при острых формах бактериальной и вирусной инфекции. При ГСЗ апоптозу в большей степени подвержена субпопуляция СЭ4 Т-лимфоцитов. В то же время при туберкулезе (в том числе у больных с туберкулиновой ареактивностью)

CD4+ и CD8+ Т-клетки в равной степени подвержены апоп-тозу и анергии. Апоптоз Т-клеток и угнетение их функциональной реактивности при ГСЗ вызваны влиянием инфекционного фактора, в то время как усиление спонтанного апоптоза - факторами оперативного стресса. При этом важную роль в реализации апоптоза при инфекционных процессах играют Fas/FasL взаимодействия, активация свободнорадикальных процессов и усиление продукции N0, а также дефицит IL-2. В свою очередь усиление апоптоза при онкологических заболеваниях в большей степени детерминировано действием нейроэндокринных медиаторов. Усиление апоптоза и индукция анергии Т-клеток имеют прямое отношение к формированию иммунной недостаточности, поскольку сопряжены с лим-фопенией и снижением относительного содержания Т-клеток при ГСЗ и туберкулезе легких и повышенной частотой развития инфекционных осложнений в послеоперационном периоде у больных раком желудка. Кроме того, апоптоз и анергия Т-клеток сопряжены с характером течения и исходом заболевания, в частности с тяжестью общего состояния и уровнем летальности при ГСЗ, клинической формой и лекарственной резистентностью при туберкулезе легких и гистологическим вариантом опухоли при злокачественных глиомах. При этом за исключением острого периода инфекции, когда апоптоз и анергия Т-клеток представляют механизм ограничения системного воспалительного ответа и, возможно, аутоиммунных реакций, в остальных случаях негативный исход активации Т-клеток является фактором формирования иммунной недостаточности и неблагоприятного течения/исхода заболевания. Следовательно, подавление апоптоза и выведение клеток из состояния анергии является новым патогенетическим подходом к коррекции иммунной недостаточности при инфекционно-воспалительных и онкологических заболеваниях. Исследования in vitro показали, что провоспалительные и Thl цитокины - IL-2, IL-1 и IFN-y снижают уровень активационного апоптоза Т-клеток у больных с гнойно-септическими заболеваниями. При этом IL-2 частично восстанавливает функциональную реактивность энергичных Т-клеток. Таким образом, иммунокорригирующий эффект IL-2 может быть связан с протекцией Т-клеток от апоптоза и преодолением анергии. Подтверждением данного предположения являются результаты рандомизированных плацебо-контро-лируемых клинических испытаний IL-2 (Ронколейкина) в лечении больных с гнойно-хирургической патологией.

РЕГУЛЯТОРНЫЕ ВАРИАНТЫ ГЕНОВ ММР-1, PAI-1, MDR-1 И MTHFR: ПОТЕНЦИАЛЬНЫЕ ФАКТОРЫ ОСЛОЖНЕНИЙ ПРИ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ КЛЕТОК (ТГК)

ЧухловинА.Б.. Забелина Т.С., Зубаровская Л.С., Богданов К.В., Крегер Н., Афанасьев Б.В., Цандер А., Фезе Б.

Санкт -Петербургский государственный медицинский университет им. ИЛавлова М3 РФ, Россия; Центр трансплантации костного мозга, Гамбургский университет, Германия

Введение. Многие мутации генома человека затрагивают регуляторные области физиологически активных генов. Эти мутации (полиморфизм генов) часты в популяции и определяют склонность к иммунопатологии и инфекционным заболеваниям. Так, известна связь меж-

ду регуляторными вариантами генов цитокинов и частотой возникновения острой реакции «трансплантат против хозяина» (ОРТПХ) при алло-ТГК. Целью нашей работы была оценка связей между полиморфизмом ряда «неиммунных» генов и развитием ОРТПХ.

Материалы и методы. Под нашим наблюдением находились 140 больных с онко-гематологическими заболеваниями, которым была проведена трансплантация ге-мопоэтических клеток от семейных (п=71) или неродственных доноров (п=69). Регуляторные варианты генов плазминоген-активатор-ингибитора (РА1-1'675 5С/4С ), интерстициальной коллагеназы (ММРТ |6071С/2С), ме-тилен-тетрагидрофолатредуктазы (МТНРЯ), а также гена множественной лекарственной устойчивости (МБК-1 С3435Т ) исследовали с помощью аллель-специфичес-кой ПЦР ДНК.

Результаты исследования. Распределение исследованных пар аллелей в популяции было, в целом, сходным для групп реципиентов и доноров гемопоэтических клеток. Высокая частота различий по аллельным вариантам (кроме МТГФР) в парах «донор-реципиент» давала возможность оценки генетического химеризма после ТГК более чем в 30% случаев. Разработанный на этой основе метод полуколичественной ПЦР позволяет контролировать наличие в крови остаточных клеток реципиента после ТГК. Далее, нами подтвержден факт, что более индуцибельный генотип ММР-11607 (0/2С) встречается гораздо реже у больных с ОРТПХ (р=0,02), а присутствие этого генотипа у донора сочетается с большим риском ОРТПХ, что говорит о его существенной роли при данном иммунном осложнении. При мини-ТГК (немие-лоаблативный режим терапии) показана достоверная связь между наличием 2в/20 у больных и отсутствием у них ОРТПХ ПТУ степеней, что позволяет использовать этот маркер в качестве прогностического признака при ТГК. Гиперактивный генотип 20/2С также имел тенденцию к связи с ранней гибелью больных после ТГК вследствие ОРТПХ или тяжелых инфекций (р=0,07). Кроме того, предварительные данные (38 случаев ТГК) геноти-пирования гена МОЯ-1 (С3435Т) показали, что вариант С (большая активность р-гликопротеина) у больных или наличие гиперактивного РА1-14С-аллеля связаны с большим риском цитомегаловирусной инфекции (г=0,29; р=0,03).

Заключение. Полученные результаты свидетельствуют об участии гиперактивных аллелей генов РА1-1, ММР-1 и МВИ-1, не имеющих прямого отношения к иммунному ответу, в развитии иммунных и инфекционных осложнений после ТГК. Прогностическое значение отдельных аллело- и гаплотипов подлежит дальнейшему уточнению в больших выборках, с применением различных схем иммуносупрессивной и антивирусной терапии.

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГИ ПРИМЕНЕНИЕ ИММУННЫХ ПРЕПАРАТОВ ПРИ ОНКОПАТОЛОГИИ

Шабашова Н.В., Фролова Е.В.

Медицинская академия последипломного образования. Санкт-Петербург, Россия

Основной функцией иммунной системы (ИС) является иммунобиологический надзор - контроль за постоянством внутренней среды организма, за возникновением злокачественно трансформировавшихся клеток, их элиминацией с развитием иммунного ответа на образую-

щуюся опухоль. При онкологическом заболевании иммунобиологический надзор не справляется с этой своей основной задачей. Учитывая это положение, в медицинской практике издавна применяют различные иммунные препараты в комплексном лечении онкологических больных. Эффективность этих средств зависит от вида и распространенности опухолевого процесса, а также от тех методов традиционного лечения, которые используются у конкретного пациента.

Целью работы явилось наблюдение за больными с онкопатолгией с применением иммунологического мониторинга для оценки значимости иммунотропной терапии на предоперационном, раннем (1 месяц) и позднем послеоперационном (5 лет) этапах. Было сформулировано 2 задачи: 1 - оценить значение иммунотерапии для профилактики инфекционно-воспалительных осложнений и облегчения течения послеоперационного периода; 2 - изучить значение иммунологических показателей для оценки течения позднего послеоперационного периода на фоне лечения иммунотропными препаратами.

Материалы и методы. Для решения 1-й задачи наблюдалась группа пациентов с операбельными онкологическими заболеваниями желудочно-кишечного тракта, преимущественно раком прямой кишки, которые получали иммунотропные препараты (ликопид, лейкинферон, неовир, беталейкин) на до- и послеоперационном раннем этапах (всего 80).

Для решения 2-й задачи в течение 6 лет нами наблюдаются 42 пациента с онкологическими заболеваниями. Из них 18 женщин в возрасте от 32 до 62 лет с раком молочных желез без дальних метастазов. Остальные больные с онкозаболеваниями разной локализации (желудка -6, матки -3, предстательной железы -3, прямой кишки -2, почки -2, головного мозга - 2 больных и по 1 - ангиосаркома, меланома глаза, рак бронхов). Среди указанных пациентов 38 были прооперированы и взяты нами под наблюдение в течение 1-6 месяцев после операции. На первом году получали 4 курса иммунотропных препаратов (лейкинферон, имунофан, полиоксидоний, рекомбинантные интерфероны, гепатопротекторы в разных сочетаниях по 2 месяца, в последующие годы (до 5 лет) подобные курсы лечения пациенты получали дважды в год.

Для иммунологического мониторинга применяются фенотипирование лимфоидных клеток моноклональными антителами, включая число естественных киллеров, клеток с рецепторами к 1Ь-2, СБ95 антигеном, естественная киллерная цитоткосичность, содержание 1РЫ в сыворотке, способность клеток к синтезу 1РЫ-а и 1РЫ-у, уровень иммуноглобулинов, исследование функции ней-трофильных гранулоцитов, в части случаев исследовали уровень и способность к синтезу ТКР-а, 1Ь-1. Иммунологическое обследование проводится перед каждым курсом иммуномодулирующей терапии.

Установлено, что применение иммуномодуляторов значительно облегчало течение раннего послеоперационного периода, укорачивало лихорадочный период, заживление раны, пребывание в стационаре, уменьшало (ликопид, неовир) или полностью предотвращало (лейкинферон, беталейкин) развитие гнойно-воспалительных осложнений в послеоперационном периоде. Клиническая картина сопровождалась более быстрой положительной динамикой иммунологических показателей у наблюдаемых пациентов по сравнению с контрольной группой.

В группе длительного наблюдения все пациенты, даже не оперированные, или на фоне химио- и радиотерапии

после операции отмечали быстрое улучшение самочувствия, настроения, повышение активности, большинство быстро вернулись к работе. Исчезали признаки анемии, если она имела место в начале наблюдения. Кроме того, отмечено снижение частоты респираторных вирусных инфекций и обострений хронических воспалительных процессов. Снято с учета после пятилетнего наблюдения

3 человека. Отмечена стабильно положительная динамика иммунологических показателей у всех прооперированных больных.

Т-КЛЕГОЧНЫЕ ДИСФУНКЦИИ У БОЛЬНЫХ ЛИМФОМАМИ НА ПРОГРАММНОЙ ПОЛИХИМИОТЕРАПИИ

Шевела Е.Я.. Тихонова М.А.. СизиковаС.А., Крючкова И.В., Лисуков И. А., Останин А. А., Черных Е.Р.

ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, Новосибирск, Россия

Введение. Нейтропения и выраженная иммунодепрессия являются ведущими факторами развития инфекционных осложнений у больных гематологического профиля при проведении программной полихимиотерапии (ПХТ). Механизмы формирования этих нарушений могут быть связаны как с прямым токсическим эффектом цитостатических препаратов, так и с опосредованным действием последних на иммунокомпетентные клетки.

Цель. Охарактеризовать Т-клеточные дисфункции и изучить возможную роль моноцитов в их развитии у больных лимфомами при проведении полихимиотерапии.

Материалы и методы. Исследуемую группу составили 35 больных (19 мужчин и 16 женщин в возрасте 16-62 лет) с лимфогранулематозом (п=17), неходжкинскими лимфомами (п=18). Исследования проводили по окончании очередного курса ПХТ, до развития критической ней-тропении. Контрольную группу составили 30 практически здоровых доноров. Оценивали: 1) пролиферативную активность МНК в присутствии конканавалина А (КонА), анти-СБЗ-антител (анти-СБЗ), 1Ь-2, анти-РазЬ-нейтрализующих антител; 2) уровень апоптоза и распределение клеток по фазам клеточного цикла в субпопуляциях СБ4+ и СБвТ-клеток; 3) продукцию N0 моноцитами; 4) экспрессию РавЬ моноцитами и лимфоцитами.

Результаты. Оценка КонА-стимулированной пролиферации показала, что у 77% больных отмечалось снижение ответа ниже порога нормативного диапазона. Угнетение пролиферации ассоциировалось с усилением активационного апоптоза лимфоцитов. При этом у 50% пациентов удаление моноцитов приводило к снижению апоптоза и усилению пролиферативного ответа. Наряду с угнетением митогенной реактивности у больных регистрировался низкий уровень пролиферативного ответа при стимуляции через Т-клеточный рецептор анти-СВЗ-аптителами. Анализ субпопуляционной принадлежности Т-клеток, подверженных апоптозу, показал, что у больных лимфомами отмечается значимое усиление как спонтанного, так и активационного апоптоза в популяции СБ4+ клеток. В то же время уровень апоптоза в популяции С08+Т-клеток не менялся. Анализ клеточного цикла в популяциях не вовлеченных в апоптоз лимфоцитов показал, что в отличие от доноров, у которых стимуляция анти-СОЗ приводит к достоверному увеличению количества СБ41 и СВ8' клеток в 5,С2/М фазах цикла, у больных количество цик-

лирующих клеток значимо не увеличивалось ни во фракции СБ4+, ни среди С08*Т-лимфоцитов, что свидетельствует о блоке их прохождения по клеточному циклу. Таким образом, можно полагать, что снижение уровня анти-СБЗ-стимулированной пролиферации обусловлено не только усилением апоптоза, но также и индукцией анергии Т-клеток. Особенностью анергии Т-лимфоцитов у больных лимфомами является низкая чувствительность к действию экзогенного 1Ь-2. Так, усиление анти-СБЗ ответа в присутствии 1Ь-2 выявлялось лишь у 23% больных. Важно также отметить, что анергия Т-клеток при лимфомах не была связана с увеличением относительного содержания естественных супрессорных СВ4+С025+Т-лимфоцитов. Исследование роли моноцитов в развитии Т-клеточных дисфункций показало, что супернатанты интактных и ЛПС-стимулированных моноцитов больных лимфомами обладали супрессорной активностью и снижали интенсивность КонА-индуцированной пролиферации в культурах МНК здоровых доноров. Учитывая, что супрессорная активность моноцитов может быть обусловлена усиленной продукцией N0, повышенной экспрессией и продукцией РаэЬ, продукцией простагландина Е2 (ПГЕ2) и другими факторами, дальнейшие исследования были направлены на выяснение возможных механизмов супрессорного влияния моноцитов. Было показано, что моноциты периферической крови обследуемых пациентов характеризовались повышенным уровнем спонтанной и ЛПС-стиму-лированной продукции N0 (р<0,05). Кроме того, эксперименты с предобработкой МНК индометацином показали, что в 27% случаев супрессорная активность моноцитов была обусловлена продукцией ПГЕ2. При этом мы не выявили увеличения экспрессии РавЬ на моноцитах больных лимфомами.

Заключение. Таким образом, полученные данные свидетельствуют о выраженном дефекте Т-лимфоцитов у больных лимфомами на курсах ПХТ и важной роли моноцитов в развитии Т-клеточных дисфункций.

ПРОГНОСТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ЭКСПРЕССИИ АКТИВАЦИОННЫХ МАРКЕРОВ НА ЛИМФОЦИТАХ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХСОПУХОЛЯМИ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА

Шибаев М.И.. Олейник Е.К.,

Олейник В.М., Толстогузова Т.И.

Институт биологии Карельского научного центра РАН, г. Петрозаводск, Россия

Опухоли желудочно-кишечного тракта составляют большую долю всех онкологических заболеваний. Карелия относится к регионам, где рак желудка и рак толстой кишки входят в число наиболее часто встречающихся злокачественных новообразований. Необходимо отметить, что при этих видах опухолей показатели заболеваемости и смертности различаются весьма незначительно, что свидетельствует о неблагоприятном течении и неудовлетворительных результатах лечения. В связи с этим назрела необходимость изучения особенностей функционирования иммунной системы у онкологических пациентов, что позволит определить подходы для более ранней диагностики и последующего мониторинга больных раком желудка и колоректальным раком.

Целью настоящей работы явилось изучение прогностической значимости экспрессии активационных мар-

керов лимфоцитов периферической крови больных раком желудка и колоректальным раком.

Материалом исследования служили лимфоциты периферической крови 81 больного с опухолями желудочно-кишечного тракта (66 больных раком желудка, 15 -колоректальным раком) и 38 здоровых доноров. Уровень экспрессии активационных маркеров оценивали методом непрямой иммунофлюоресценции с помощью моноклональных антител.

В результате исследования было выявлено значительное усиление экспрессии СБ25 и СБ71 на лимфоцитах периферической крови больных раком желудка и колоректальным раком (С025: 19,81±2,30% и 19,40+5,63%; СВ71; 18,64±1,93% и 19,87±3,98%) по сравнению с контрольной группой (СБ25:9,80±0,90%; СБ71:8,55±4,06%) (р<0,05).

По прошествии трех лет от начала исследований нами была предпринята попытка установить зависимость исхода заболевания от особенностей экспрессии активационных маркеров лимфоцитов. У тех больных раком желудка, у кого в последующем отмечена стабилизация процесса, при первичном обращении выявляется более высокий уровень экспрессии СБ25 и СЭ71 (23,32±3,40% и 21,52±3,31%) по сравнению с группой пациентов, в которой при последующем мониторинге наблюдается прогрессирование заболевания (17,41±2,18% и 16,83±2,22%). Уровень экспрессии СБ95 в обеих группах больных был выше, чем в контроле (16,20±2,31, 15,36±2,58% против 8,00±4,60%).

Подобная закономерность отмечалась и у больных колоректальным раком. Выявлен высокий уровень экспрессии СБ25 и СБ71 у больных колоректальным раком с благоприятным прогнозом заболевания. В то же время при первичном обращении у пациентов, у которых наблюдалось прогрессирование заболевания, эти показатели существенно не отличались от контрольных. Значительных различий в количестве лимфоцитов, несущих другие активационные маркеры (СБ95, СБ98 и НЬЛ-БЯ), между этими группами не отмечено. Уровень экспрессии дифференцировочных маркеров СБ8, СБ16 и С019, был несколько выше у пациентов с благоприятным прогнозом заболевания.

Таким образом, на лимфоцитах периферической крови больных с опухолями желудочно-кишечного тракта выявлен высокий уровень экспрессии СБ25 и СБ71. При этом количество СВ25* и СВ71+-лимфоцитов существенно больше у больных с благоприятным прогнозом по сравнению с пациентами, у которых в последующем выявляется прогрессирование заболевания. Это может свидетельствовать о том, что высокий уровень экспрессии СБ25 и СБ71 на лимфоцитах крови отражает более адекватное функционирование иммунной системы у части онкологических больных, что, вероятно, повлияло на течение и исход заболевания.

ЗНАЧЕНИЕ ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОГО МЕТОДА ИССЛЕДОВАНИЯ ГАСТРИНА, СЕРОТОНИНА И МЕЛАТОНИНА В ДИАГНОСТИКЕ ПРЕДРАКОВЫХ СОСТОЯНИЙ

ШимчукС.Ф.

Государственный медицинский университет, Саратов, Россия

Известно, что злокачественная опухоль в желудке развивается очень медленно. Диагностировать рак желудка

чаще удается уже на поздних стадиях, когда опухоль считается некурабельной. Изучение предопухолевых состояний позволит предупредить формирование злокачественной опухоли. Одними из наиболее частых состояний, предшествующих образованию аденокарциномы, являются атрофический гастрит и полипы желудка.

Цель и задачи: определить значение иммуногистохи-мического метода исследования гастрина, серотонина и мелатонина в диагностике хронического атрофического гастрита и полипов желудка.

Материалы и методы: обследовано 46 больных с хроническим Нр-ассоциированным гастритом, 36 больных с полипами желудка, 30 больных раком желудка, в контрольной группе - 40 клинически здоровых лиц. Во всех случаях диагностика соответствовала рекомендуемым стандартам и базировалась на клинико-эндоскопических и морфологических методах исследования. У всех обследованных оценивалось состояние общей популяции апу-доцитов (по количественному критерию аргирофильных клеток). Количество апудоцитов в антральном отделе желудка определяли на площади 0,1 см3 слизистой оболочки в зоне локализации нижней и средней трети желудочных желез. Для изучения в иммуноморфологии использовали световую и электронную микроскопию, им-муногистохимические методы коммерческими антисыворотками фирм Amersham, UK; CID research Inc., Canada; Dakopats, Denmark.

Основные результаты: выявлена единая тенденция изменения функциональной морфологии и численности нейроэндокринных клеток антрального отдела желудка у больных с хроническим гастритом, полипами и раком желудка, заключающаяся в гиперплазии и гиперфункции EC-клеток, синтезирующих серотонин и мелатонин, и гипоплазия и гипофункция гастрин-продуцирующих клеток, при сохранении общего количества AG-клеток. По мере распространения процесса, пролиферативных изменений, появления очагов метаплазии и дисплазии, данные показатели становились более выраженными.

Заключение: полученные результаты свидетельствуют о высокой информативности иммуногистохимичес-кого метода исследования EC-s, ЕС-m и G-клеток антрального отдела желудка в диагностике предраковых состояний желудка. Серотонин и мелатонин играют важную роль в регуляции злокачественной трансформации. Своевременная диагностика и правильная тактика ведения хронического гастрита являются одной из практических сторон в профилактике рака желудка.

ОСОБЕННОСТИ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНТНОЙ АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ КРОВИ БОЛЬНЫХ ПОЧЕЧНОКЛЕТОЧНЫМ РАКОМ

Шкапова Е.А.. Куртасова Л.М., Савченко А.А., Зуков Р. А.

Красноярский государственный университет, Красноярская государственная медицинская академия, Краевой онкологический диспансер, Красноярск, Россия

Одной из актуальных проблем современной онкологии является высокий уровень заболеваемости почечноклеточным раком (ПКР), на долю которого приходится 97% всех опухолей почек (Заридзе Д.Г. и соавт., 2001). Ведущая роль в лечении локализованного ПКР принадлежит хирургическому методу, но определенные успехи в

консервативном лечении метастазов ПКР связаны с применением иммунотерапии (Negrier S. et al. 2000). Как известно, нейтрофильные гранулоциты характеризуются выраженным цитотоксическим действием на опухолевые клетки, а также высокой мобилизационной активностью, способностью отражать изменения гомеостаза (Zhend Н. et al. 1990; Song J. et al 1997).

Обследованы больные ПКР (III стадия заболевания) до хирургического лечения (N=110) и через 14 дней после оперативного вмешательства (N=32) в возрасте 35-55 лет. В качестве контрольной группы были обследованы 25 здоровых доноров аналогичного возраста. Хемилюминес-центный анализ функциональной активности нейтро-фильных гранулоцитов производился по методу De Sole P. et al. в модификации.

При сравнительном исследовании параметров хеми-люминесцентного ответа нейтрофильных гранулоцитов крови здоровых людей и больных ПКР до хирургического лечения установлено снижение времени выхода на максимум, при повышении максимальной интенсивности и площади спонтанной хемилюминесцентной кривой. Это свидетельствует об исходно повышенных энергетических затратах гранулоцитов крови лиц с исследуемой патологией. При изучении параметров зимозан-индуцированной хемилюминесценции нейтрофильных гранулоцитов обнаружено увеличение площади хемилюминесцентной кривой и снижение величины индекса активации у больных ПКР до операции по сравнению с показателями здоровых доноров. Так, на фоне базовой повышенной функциональной активности дополнительная стимуляция «дыхательного взрыва» нейтрофилов опсонизированным зи-мозаном не приводит к соответствующему увеличению продукции активных форм кислорода, что отражает пониженные резервные метаболические возможности данной клеточной популяции.

Результаты исследований фоновой хемилюминесценции нейтрофильных гранулоцитов у больных ПКР после хирургического лечения показали увеличение времени выхода на максимум относительно соответствующего показателя неоперированных больных, и увеличение площади хемилюминесцентного ответа относительно соответствующих параметров контрольной группы. При изучении параметров зимозан-индуцированной хемилюминесценции нейтрофильных гранулоцитов у больных ПКР после операции обнаружено увеличение интенсивности и площади хемилюминесцентной кривой по сравнению с показателями как больных до хирургического лечения, так и здоровых доноров. Величина индекса активации в данной группе обследуемых пациентов в 2 раза превышает соответствующий показатель у больных до хирургического лечения. Следовательно, у больных ПКР через 14 дней после оперативного вмешательства фоновый уровень функционального ответа нейтрофильных гранулоцитов остается повышенным относительно контрольного диапазона. Однако при дополнительной стимуляции клеток in vitro получены данные, позволяющие констатировать нормализацию адаптационных возможностей нейтрофильных гранулоцитов к мобилизации резервной метаболической активности.

Таким образом, результаты проведенных исследований установили у больных ПКР изменение функционального состояния нейтрофильных гранулоцитов. Очевидно, что обнаруженные нарушения функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов у больных ПКР до операции могут, в определенной мере, привести к сни-

жению цитотоксических эффектов нейтрофилов. Следует также отметить, что у обследованных больных ПКР в послеоперационном периоде не наблюдается полного восстановления функциональной активности нейтрофиль-ных гранулоцитов, хотя изменения кинетики и уровня хемилюминесцентного ответа сопровождаются увеличением компенсаторных возможностей кислородзависимо-го метаболизма в данной клеточной популяции, что, безусловно, является оптимизирующим фактором противоопухолевой резистентности организма.

УСТОЙЧИВЫЙ ПЕРИОДИЗМ КООПЕРАТИВНЫХ ИЗМЕНЕНИЙ СУБПОПУЛЯЦИОННОГО СОСТАВА ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ ПРИ РАЗВИТИИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОГО ПРОЦЕССАУ ЧЕЛОВЕКА

Шутко А.Н.. Екимова Л.П., Юркова Л.Е, Шумский И.А., Лыткина И.Ю.

Центральный научно-исследовательский рентгено-радиологический институт М3 РФ, Санкт-Петербург, Россия

Введение. Ранее у первичных (до лечения) онкологических больных были статистически выявлены стандартные состояния субпопуляционного состава мононукле-аров крови (ССМК), характеризирующие активирование (А), ингибицию (И) или квазинормальный (КН) статус лимфопоэза. Выявлены характеристики кратковременных (до 1 месяца) реакций ССМК на курсы цитоста-тической терапии, типичные для указанных трех состояний лимфопоэза. [Гранов А.М., Шутко А.Н., 2002].

Цель. Изучить кинетическую стабильность исходных А-, И- и КН- статусов ССМК на протяжении длительного (несколько лет) периода развития опухоли с момента регистрации заболевания вплоть до смерти.

Задачи. Используя ретроспективные данные по продолжительности жизни (ПЖ) и по индивидуальному ССМК до лечения, а также данные индивидуального прижизненного мониторинга на протяжении лечения, характеризовать кинетику лимфопоэза больного по мере эволюции злокачественного процесса.

Объекты и методы. Больные из клиники ЦНИРРИ М3 РФ (общая п=81 человек, рак яичников III-IV стадий и рак почки IV стадии), длительность наблюдений -до 5 лет, лечение - комбинированное (оперативное : удаление опухоли или эндоваскулярная эмболизация, лучевое : локальное или субтотальное воздействия редкоионизи-рующим излучением от внешнего источника, химиотерапия : курсами различных цитостатических агентов). Определение ССМК - с помощью меченных флюорох-ромами МКАТ, на флуоресцентном микроскопе “Opton” с цифровой регистрацией спектров свечения. Обработка данных в программе Excel.

Основные результаты. Анализ кинетики был произведен по параметрам CD4 Leu8 /CD2+, CD4 Leu8 /CD8+,l lb+ и ССхРБТ (произведение спонтанного синтеза на индуцированный ФГА, радиометрически) и ряду других. На шкале ПЖ от 0 до 56 месяцев выявлено 5 зон с однотипным кинетическим процессом в каждой зоне для параметров, определенных до начала лечения(Х): X=f (ПЖ). Сущность процесса в каждой зоне общей зависимости - смена участка зоны с относительно стабильными параметрами на ее участок с кинетической нестабильностью параметров, проявляющейся в быстром чередовании (2-4 раза) А- и И- состояний, с превалированием A-компонентов. Таким образом,

на протяжении жизни больного происходит от 3 (рак почки) до 7 (рак яичника) циклов смены активности лимфопоэза. Средняя продолжительность цикла составляет 8,7±1,4 месяца (р=0,009). Периоды активности и относительного покоя в каждом 8-9-месячном цикле находятся в соотношении примерно 1:1, кратности изменения величины показателей в сторону уменьшения достигают 2-3-х раз, в сторону увеличения - порядка.

Прямой индивидуальный мониторинг параметров у пациентов, получающих курсовую терапию, показал, что

8-9 месячный периодизм флюктуаций показателей ССМК сохраняется независимо от вида и объема получаемого лечения, курсы которого в исследовании не превышали полутора месяцев.

Ряд дополнительно изученных параметров (СБ8 ,11Ь /СБ2, МохСБ2/СЕ)4 Ьеи8 ) кинетически находятся в противофазе, а С021 /СБ2 совпадает по фазе с основными вышеперечисленными.

Заключение. У онкологических больных обнаружен периодизм активности лимфопоэза с постоянной длительностью цикла 8-9 месяцев, превышающей известные временные характеристики (1-1,5 месяца) быстрого переходного процесса, обычно индуцируемого гематоксическими терапевтическими агентами. Периодизм не связан с объемом лечебного воздействия (количеством циклов), может обеспечивать сходство данных цитоиммунологического анализа у пациентов, различающихся по терапевтической перпективе продолжительности жизни, а последняя, в свою очередь, не определяется только рамками клинического диагноза. Полученные данные существенны для обоснования прогноза лечения и его планирования.

ДИНАМИКА ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ В ПРОЦЕССЕ АКТИВНОЙ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ИММУНОТЕРАПИИ БОЛЬНЫХ СОЛИДНЫМИ ОПУХОЛЯМИ

ШёкинаЛ.А.*. Балду ева И. А., Моисеенко В.М., Данилов А.О., Данилова А.Б., УлейскаяГ.И.*, Хансон К.П.

НИИ онкологии им.проф. Н.Н.Петрова;

* Городская больница №31,

Санкт-Петербург, Россия

Введение. Актуальным направлением в современной клинической онкологии является разработка методов активной специфической иммунотерапии. Для оценки эффективности необходимо определение их влияния на отдельные звенья иммунной системы в процессе лечения онкологических больных.

Цель исследования. На основе комплексного подхода к оценке иммунной системы выявить особенности изменений иммунологических показателей в процессе противоопухолевой активной специфической иммунотерапии у больных солидными опухолями.

Материалы и методы. Обследовано 164 больных (81 женщина и 83 мужчины в возрасте от 18 до 76 лет) с меланомой кожи, раком почки и предстательной железы. 32 пациента имели высокий риск рецидива заболевания и получили вакцинотерапию с адъювантной целью, 99 пациентов -с лечебной целью по поводу диссеминированной формы заболевания.

Вакцинотерапия проводилась с использованием не-модифицированных аутологичных опухолевых клеток

(п=149) и генетически модифицированных опухолевых клеток (п=15).

Исследовали субпопуляции лимфоцитов периферической крови с применением моноклональных антител производства “Сорбент” (Россия) и “DAKO” (Дания) методом непрямой иммунофлюоресценции. Оценивалась экспрессия Т-клеточных CD3, CD4, CD8, В-клеточных CD20,NK-toieTO4Hbix CD 16, активированных и линейно-неристриктированных антигенов CD25, CD30, CD38, CD71, HLA DR и CD95. Определяли сывороточные иммуноглобулины классов G, А и М методом радиальной иммунодиффузии; циркулирующие иммунные комплексы методом осаждения с полиэтиленгликолем; фагоцитарную активность нейтрофилов и моноцитов с частицами латекса с расчетом фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа; метаболическую активность нейтрофилов и моноцитов в НСТ-тесте.

Результаты. Изучены показатели клеточного и гуморального иммунитета, а также неспецифической резистентности у больных солидными опухолями до начала лечения, перед каждой вакцинацией, спустя 1, 3, 6 и 12 месяцев после окончания программы.

В настоящее время проводится статистическая обработка и анализ полученных данных. Результаты будут представлены в докладе.

ЭКСПРЕССИЯ МОЛЕКУЛЯРНЫХ БИОМАРКЕРОВ У БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ Т N М СТАДИЕЙ 12 °'2 °

Юшкова А.В., Нечушкин М. И., Дбар Ж.Н., Степанова Е.В., Барышников А.Ю.,

Личиницер М.Р.

Начиная с 1990 года, в России показатели качества онкологической помощи больным раком молочной железы, в том числе доля выявления ранних стадий, практически не менялись. Общепризнанно, что основными фак-

торами, влияющими на продолжительность жизни онкологических больных, являются распространенность опухолевого процесса и гистологическая структура первичного очага. Однако, используя традиционные факторы прогноза, часто невозможно предсказать вероятность и сроки появления рецидивов и метастазов в каждом конкретном случае. Изучение молекулярно-биологических маркеров ангиогенеза и апоптоза в ткани опухоли позволит расширить возможности прогнозирования и лечения рака молочной железы.

Нами была изучена экспрессия молекулярно-биологических при раке молочной железы, таких как - р53, Вс1-

2, Вах, тимидилат синтетаза, тимидин фосфорилаза, тромбоспондин (ТСП), УЕвЕ, НЕК-2/пеи, рецепторов эстрогена и прогестерона. В исследование было включено 50 больных раком молочной железы в постменопаузе, с Т,.Д.2М0 стадиями. Адъювантное антиэстрогенное лечение тамоксифеном получали 49,0% больных; 63,3% получали полихимиотерапевтическое лечение и 26,5% прошли локальную лучевую терапию. У 42,9% пациенток в течение 5-ти лет были выявлены метастазы.

В результате установлено, что экспрессия Вс1-2 была значительно выше в эстроген-положительных опухолях, но не в прогестерон-положительных опухолях. Уровень р53 находится в обратной зависимости с уровнем рецепторов эстрогена. Анализ данной группы показал, что у Вс1-2+ пациенток 5-летняя безрецидивная выживаемость была выше (79,0%, медиана не достигнута), по сравнению с Вс1-2- пациентками (46,0%, медиана - 53 месяца; р=0,01). Также Нег-2/пеи+ пациентки имели тенденцию к снижению выживаемости. УЕСЕ+ТСП+ больные имеют риск раннего появления метастазов (5-летняя безрецидивная выживаемость - 33%, медиана -3 месяца).

Таким образом, полученные результаты предпола гают влияние маркеров ангиогенеза и апоптоза на безреци-дивную выживаемость больных раком молочной железы. В дальнейшем планируется изучение прогностической значимости маркеров у больных с Т,_2М3М0 стадией.