CC BY
82
Экспериментальная
медицина
IVh
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
УДК 577.1:612.014.1:617.711-001.17-08
ОКСИД АЗОТА И ГОРДОКС ПРИ ЛЕЧЕНИИ ОЖОГОВОЙ ИШЕМИИ КОНЪЮНКТИВЫ (БИОХИМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ)
О.И. Кваша, Н.Б. Чеснокова, В.П. Быков, О.В. Безнос,
Е.П. Столярова, И.В. Синельшикова, А.Х. Борханов,
ФГБУ «Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им. Гельмгольца»
Кваша Ольга Ивановна - e-mail: [email protected]
Цель работы: установить зависимость между воздействием NO-терапии на глаз и изменением протеиназно-ингибиторного баланса в слезе при ишемии конъюнктивы, а также изменение его под влиянием сочетанного действия оксида азота и Гордокса, применяемого в лечении ожогов глаз. У животных моделировали дозированный по плошади и глубине щелочной ожог III степени. После ожога глаза животных 1-й опытной группы (4 кролика) подвергали воздействию NO-терапии с концентрацией 300 ppm, экспозицией 15 сек., лечение 2-й опытной группы (4 кролика) проводили препаратом «Гордокс» («Гедеон Рихтер», Венгрия) в виде инстилляций ампульного раствора (100 000 КИЕ в 10 мл) 4 раза в день в течение 14 дней. Для определения взаимодействия NO-терапии и препарата «Гордокс» в 3-й опытной группе (4 кролика) лечение проводилось одновременно двумя методиками. В 4-й, контрольной, группе (4 кролика) в послеоперационном периоде лечение не проводили. 5-я группа (3 кролика) - интактная, для исследования слезы. В качестве источника NO-терапии использовали медицинский воздушно-плазменный аппарат «Плазон» (Москва). В элюате определяли активность трипсиноподобных сериновых протеиназ, ингибитора протеиназ а2-макроглобулина и суммарную антитриптическую активность. Определение проводили ферментативным методом с использованием синтетического субстрата -^бензоил-ОЬ-аргинин-р-нитроанилида (БАПНА). Концентрацию белка в слезной жидкости определяли по методу Лоури. Полученные биохимические данные позволяют сделать вывод о том, что лечение щелочного ожога глаз методом NO-терапии и Гордоксом целесообразно проводить следующим образом: в течение первых трех суток после травмы следует применять NO-терапию по отработанной схеме, а затем в течение 10-14 дней проводить лечение Гордоксом.
Ключевые слова: оксид азота, NO-терапия, Гордокс, ожоговая ишемия конъюнктивы.
The purpose of this paper was to determine the relationship between the NO-therapy effect on an eye and the change of proteinase-inhibition balance in tear in case of conjunctiva ischemia and its change under influence of the combined action of nitric oxide and Gordox used for treatment of eye burns. The third-degree alkali burn of a controlled area and depth was simulated in animals. After burn the eyes of animals from the 1st experimental group (of 4 rabbits) were subjected to NO-therapy with the concentration of 300 ppm, the exposure of 15 s, the 2nd experimental group (of 4 rabbits) was treated with Gordox (Gedeon Richter, Hungary) by ampule solution instillation (100 000 KIU in 10 ml) 4 times a day within 14 days. To determine the NO-therapy-Gordox relationship, in the 3rd experimental group (of 4 rabbits) the treatment was carried out simultaneously by the said two methods. In the 4th control group (of 4 rabbits) no treatment was carried out in the post-operation period. The 5th control group (of 3 rabbits) was intact to study a tear. As a source of NO-therapy Plazon, a medical air-plasma device, (Moscow) was used. In eluate the activity of trypsin-like serine proteinases, a2-macroglobulin proteinase inhibitor and total anti-tryptic activity was tested. The testing was performed by an enzyme method with using synthetic substrate N-benzoyl-DL-Arginin-p-nitroanilide (BAPNA). The protein concentration in tear fluid was determined by Lowry's method. Biochemical data obtained enable to draw a conclusion that the treatment of alkali burn of the eyes by using NO-therapy and Gordox is reasonable to perform as follows: within the first three days after injury NO-therapy should be used under well-proven scheme and further within 10-14 days the treatment with Gordox is to be carried out.
Key words: nitric oxide, NO-therapy, Gordox, burn ischemia of conjunctiva.
В регуляции сосудистого тонуса и гемостаза большую р оль отводят биорегулятору - оксиду азота.
При тяжёлых ожогах повреждение сосудов конъюнктивы, особенно краевой петлистой сети, приводит к образованию симблефарона, помутнению роговицы с угрозой перфорации, иридоциклиту, вторичной глаукоме, развитию инфекции и т. д. Ожоговая ишемия конъюнктивы предшествует некрозу конъюнктивы. В настоящее время поиски эффективных методов лечения ожоговой ишемии конъюнктивы продолжаются [1, 2, 3].
Цель настоящей работы: установить зависимость между воздействием ЫО-терапии на глаз и изменением протеиназно-ингибиторного баланса в слезе при ишемии конъюнктивы, а также изменение его под влиянием сочетанного действия оксида азота и Гордокса, применяемого в лечении ожогов глаз.
Материалы и методы
В работе использовали 19 кроликов (38 глаз) породы шиншилла весом 2,5-3,0 кг. У животных моделировали дозированный по площади и глубине щелочной ожог III степени. Для моделирования ожога части роговицы,
54
№ 3 (27) август 2013 МЕДИЦИНСКИЙ АЛЬМАНАХ
части конъюнктивы и фрагмента лимба использовали круги 0=7 мм, из тонкой хлопчатобумажной ткани, пропитанные 10%-ым раствором ЫаОН, которые наносили на переднюю поверхность глаза так, что примерно 1/3 круга приходилась на часть роговицы и фрагмент лимба, а 2/3 - на конъюнктиву. Круги наносили на 40 секунд, затем удаляли и промывали глаза 20 мл физиологического раствора. Для общей анестезии подкожно вводили 5%-й раствор кетамина (1 мл/кг). Одновременно проводили местную анестезию путем инстилляции на роговицу 1%-го раствора дикаина.
После ожога глаза животных 1-й опытной группы (4 кролика) подвергали воздействию ЫО-терапии с концентрацией 300 ррт, экспозицией 15 сек., лечение 2-й опытной группы (4 кролика) проводили препаратом «Гордокс» («Гедеон Рихтер», Венгрия) в виде инстилляций ампульного раствора (100 000 КИЕ в 10 мл) 4 раза в день в течение 14 дней. Для определения взаимодействия ЫО-терапии и препарата Гордокс в 3-й опытной группе (4 кролика) лечение проводилось одновременно двумя методиками. В 4-й, контрольной, группе (4 кролика) в послеоперационном периоде лечение не проводили. 5-я группа (3 кролика) - интактная, для исследования слезы.
В качестве источника ЫО-терапии использовали медицинский воздушно-плазменный аппарат «Плазон» (Москва). Принцип действия аппарата основан на электрохимической реакции, когда под действием электрической дуги из атмосферного воздуха образуется плазма. Охлаждение плазмы до 35-45°С приводит к образованию газового потока, специфической составляющей которого является оксид азота (N0).
Воздействие ЫО-терапии в 1-й и 3-й группах проводили с расстояния 200 мм экспозицией 15 сек.3 раза в течение заживления - через сутки после ожога конъюнктивы, через 2-е и 3-е суток. Лечение препаратом «Гордокс» проводили во 2-й и 3-й группе, начиная с первых суток после ожога 4 раза в день в виде инстилляций в течение 14 дней.
Слезную жидкость забирали у интактных животных до начала эксперимента и на 1-, 3-, 7-, 14-, 21- и 28-е сутки после ожога роговицы с помощью кружков фильтровальной бумаги, которые помещали в нижний свод конъюнктивального мешка на 5 мин. Компоненты слезы элюировали физиологическим раствором (1 кружок - 50 мкл). Элюат центрифугировали и надосадочную жидкость использовали для исследования.
В элюате определяли активность трипсиноподобных сериновых протеиназ, ингибитора протеиназ а2-макроглобулина (а2-МГ) и суммарную антитриптиче-скую активность (АТА). Определение проводили ферментативным методом с использованием синтетического субстрата - Ы-бензоил-Э1_-аргинин-р-нитроанилида (БАПНА) [4]. Концентрацию белка в слезной жидкости определяли по методу Лоури [5].
Результаты и их обсуждение
I. Трипсиноподобная активность.
Более раннее повышение ТПА в слезе животных после ЫО-терапии можно считать благоприятным фактором, так
Экспериментальная
медицина
как трипсиноподобные протеиназы принимают активное участие в удалении некротизированных тканей, что является необходимым условием успешной дальнейшей регенерации.
Наиболее низкие значения ТПА на протяжении всего эксперимента наблюдались в группе, получавшей Гордокс, что объясняется ингибирующим действием апротинина на трипсиноподобные протеиназы.
II. Антитриптическая активность.
В группе, получавшей Гордокс, значения АТА в течение всего эксперимента были ниже, чем в других группах, что соответствует столь же низким значениям ТПА в слезе этих животных.
В группе, получавшей лечение одновременно гордоксом и NO, значения АТА незначительно отличались от значений АТА в группе нелеченных животных.
Таким образом, в период с 7-е по 21-е сутки в группе, получавшей NO-терапию, отмечены самые высокие значения АТА, при лечении гордоксом - самые низкие, а при совместном применении гордокса и NO-терапии уровень АТА в слезе занимал промежуточное положение и не отличался от уровня АТА у нелеченных животных.
III. Уровень а2-макроглобулина.
Во всех группах животных отмечен заметный подъем активности а2-МГ в слезе на 3-и сутки после ожога.
Полученные данные свидетельствуют о разнонаправленном действии оксида азота и ингибитора сериновых протеиназ апротинина (действующее начало препарата Гордокс) на воспалительную реакцию, развивающуюся после ожога роговицы.
Оксид азота NO способствует ускорению макрофагаль-ной реакции на ожог и расширению сосудов. Апротинин, напротив, замедляет миграцию макрофагов в зону воспаления и снижает проницаемость сосудов.
Заключение
Полученные нами биохимические данные позволяют сделать вывод о том, что лечение щелочного ожога глаз
методом NO-терапии и Гордоксом целесообразно проводить следующим образом: в течение первых трех суток после травмы следует применять NO-терапию по отработанной схеме, а затем в течение 10-14 дней проводить лечение Гордоксом.
Такая схема лечения обеспечит быстрое и эффективное протекание первой фазы раневого процесса, направленной на очищение раны. Применение Гордокса после NO-терапии позволит снизить активность протеиназ, гиперактивация которых в эти сроки может способствовать расширению зоны некроза.
ЛИТЕРАТУРА
1. Гундорова Р.А., Бордюгова Г.Г., Чеснокова Н.Б., Илатовская Л.В. Гордокс в лечении ранних стадий ожогов глаз. Офтальмол. журн. 1987. № 3. С. 130-135.
2. Пучковская Н.А., Шульгина Н.С., Непомнящая В.М. Патогенез и лечение ожогов глаз и их последствий. М.: Медицина, 1973. 193 с.
3.Тартаковская А.И. Патогенез, клиника и лечение тяжелых химических
ожогов глаз: Автореф. дис.д-ра мед.наук. М. 1969. 32 с.
4. Биохимические методы исследования в клинике / под ред. А.А. Покровского. М. 1969. С. 206-210.
5. Lowry O.H. et. al. J. Biol. Chem. 1951. № 193. Р. 265-275.
55
№ 3 (27] август 2013 МЕДИЦИНСКИЙ АЛЬМАНАХ
