CC BY
30
Однонуклеотидные варианты гв6582147, гв10010305, ^2136810, гв17797829 как новые молекулярно-генетические маркеры внезапной сердечной смерти
1 12 2 12 3 1
Иванова А. А., Максимов В. Н.' , Моисеева Д. И. , Малютина С. К/ , Новоселов В. П. , Воевода М. И.
Цель. Подтверждение ассоциации с внезапной сердечной смертью (ВСС) однонуклеотидных полиморфизмов rs6582147, rs10010305, rs2136810, rs17797829, выявленных как наиболее вероятные кандидатные маркеры в собственном полногеномном ассоциативном исследовании. Материал и методы. Группа ВСС (n=360, средний возраст 53,0±9,2 лет, мужчины — 76,9%, женщины — 23,1%) сформирована с использованием критериев ВСС Европейского общества кардиологов. Контрольная группа (n=402, средний возраст 52,9±9,1 лет, мужчины — 69,7%, женщины — 30,3%) подобрана по полу и возрасту из банка ДНК международных исследований MONICA, HAPIEE. ДНК выделена методом фенол-хлороформной экстракции. Генотипирование выполнено методом полимеразной цепной реакции с последующим анализом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов.
Результаты. Генотип GT rs6582147 ассоциирован с протективным эффектом в отношении ВСС (ОШ =0,671, 95% ДИ 0,496-0,909, р=0,011), а генотип GG — с повышенным риском ВСС (ОШ =1,598, 95% ДИ 1,195-2135, р=0,002), с наибольшим развитием эффекта в группе мужчин старше 50 лет (р<0,05). Генотип СТ полиморфизма rs10010305 ассоциирован с ВСС в группе мужчин (ОШ =1,773, 95% ДИ 1,085-2,897, р=0,027), в группе мужчин старше 50 лет (р<0,05) и в группе лиц старше 50 лет без разделения по полу (ОШ =1,719, 95% ДИ 1,038-2,847, р=0,041). Генотип GG rs2136810 ассоциирован с повышенным риском ВСС (ОШ =1,372, 95% ДИ 1,005-1,871, р=0,049), в группе лиц старше 50 лет генотип GA rs2136810 ассоциирован с протективным эффектом в отношении ВСС (ОШ =0,642, 95% ДИ 0,422-0,976, р=0,045). В группе женщин генотип GG rs17797829 является протективным в отношении ВСС (ОШ =0,392, 95% ДИ 0,203-0,760, р=0,007), в группе женщин старше 50 лет кроме генотипа GG с ВСС ассоциирован генотип АА этого же полиморфизма (ОШ =2,739, 95% ДИ 2176-3,448, р=0,020).
Заключение. Однонуклеотидные полиморфизмы rs6582147, rs 10010305, rs2136810, rs17797829, выявленные в собственном полногеномном ассоциативном исследовании, подтвердили ассоциацию с ВСС по результатам реплицирующего исследования.
Российский кардиологический журнал. 2018;23(10):64-69
http://dx.doi.org/10,15829/1560-4071-2018-10-64-69
Ключевые слова: внезапная сердечная смерть, GWAS, rs6582147 rs10010305, rs2136810, rs17797829.
Финансирование. Исследование выполнено при поддержке стипендии Президента Российской Федерации для молодых ученых и аспирантов, осуществ-
ляющих перспективные научные исследования и разработки по приоритетным направлениям модернизации российской экономики (СП-625.2018.4).
Конфликт интересов: не заявлен.
Благодарности. Авторы выражают глубокую признательность академику РАН Юрию Петровичу Никитину за предоставленную возможность сформировать контрольную группу на материале когорт HAPIEE и MONICA.
1НИИ терапии и профилактической медицины — филиал ФГБНУ Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук, Новосибирск; 2фГБОУ ВО Новосибирский государственный медицинский университет Минздрава России, Новосибирск; Новосибирское областное клиническое бюро судебно-медицинской экспертизы, Новосибирск, Россия.
Иванова А. А.* — к.м.н., м.н.с. лаборатории молекулярно-генетических исследований терапевтических заболеваний, ORCID: 0000-0002-9460-6294, Максимов В. Н. — д.м.н., профессор, зав. лабораторией молекулярно-генетических исследований терапевтических заболеваний, профессор кафедры медицинской генетики и биологии медико-профилактического факультета, ORCID: 0000-0002-7165-4496, Моисеева Д. И. — ординатор, ORCID: 0000-0002-98142159, Малютина С. К. — д.м.н., профессор, профессор кафедры терапии, гематологии и трансфузиологии факультета повышения квалификации и профессиональной переподготовки врачей, зав. лабораторией этиопатогенеза и клиники внутренних заболеваний, ORCID: 0000-0001-6539-0466, Новоселов В. П. — д.м.н., профессор, начальник, ORCID: 0000-0002-6312-5543, Воевода М. И. — д.м.н., профессор, академик РАН, директор, ORCID: 0000-0001-9425-413X.
*Автор, ответственный за переписку (Corresponding author): lvanova_a_a@mall.ru
HAPIEE — Health, Alcohol and Psychosocial factors In Eastern Europe, MONICA — Multinational MONItoring of trends and determinants in CArdiovascular disease, ВСС — внезапная сердечная смерть, ЛПВП — липопротеины высокой плотности, ЛПНП — липопротеины низкой плотности.
Рукопись получена 10.07.2018 Рецензия получена 05.09.2018 Принята к публикации 12.09.2018
Single nucleotide variants rs6582147, rs10010305, rs2136810, rs17797829 as new molecular genetic markers of sudden cardiac death
1 12 2 12 3 1
Ivanova A. A., Maksimov V. N.' , Moiseeva D. I. , Malyutina S. K.', Novoselov V. P. , Voevoda M. I.
Aim. To confirm association between sudden cardiac death (SCD) and single nucleotide polymorphisms rs6582147, rs10010305, rs2136810, rs17797829, identified as the most likely candidate markers.
Material and methods. The SCD group (n=360, mean age 53,0±9,2 years, men — 76,9%, women — 23,1%) was formed using the SCD criteria of the European Society of Cardiology. The control group (n=402, mean age 52,9±9,1 years, men — 69,7%, women — 30,3%) was selected by gender and age from the DNA bank of international studies MONICA, HAPIEE. DNA is separated by phenol-chloroform extraction. Genotyping was performed by polymerase chain reaction followed by analysis of restriction fragment length polymorphism.
Results. The GT rs6582147 genotype is associated with a protective effect on SCD (0R=0,671, 95% CI 0,496-0,909, p=0,011), and the GG genotype with an increased
risk of SCD (0R=1,598, 95% CI 1.195-2.135, p=0,002). The greatest effect was in the group of men over 50 years old (p<0,05). The CT rs10010305 genotype is associated with SCD in the group of men (0R=1,773, 95% CI 1,085-2,897 p=0,027), in the group of men over 50 years old (p<0,05) and in the group of people over 50 years old without separation according to sex (0R=1,719, 95% CI 1,038-2,847 p=0,041). The GG rs2136810 genotype is associated with an increased risk of SCD (0R=1,372, 95% CI 1,005-1,871, p=0,049); in the group of people over 50, the GA rs2136810 genotype is associated with a protective effect against SCD (0R=0,642, 95% CI 0,422-0,976, p=0,045). In the group of women, the GG rs17797829 genotype is protective for SCD (0R=0,392, 95% CI 0,203-0,760, p=0,007), in the group of women over 50, except for the GG genotype, the AA genotype of the same polymorphism is associated (0R=2,739, 95% CI 2176-3,448, p=0,020).
Conclusion. According to the results of study, single nucleotide polymorphisms rs6582147 rs 10010305, rs2136810, rs17797829 confirmed the association with SCD.
Russian Journal of Cardiology. 2018;23(10):64-69
http://dx.doi.org/10.15829/1560-4071-2018-10-64-69
Key words: sudden cardiac death, GWAS, rs6582147, rs10010305, rs2136810, rs17797829.
Funding. The study was carried out with the support of a scholarship of RF President for young scientists and postgraduates realizing advanced research and development works in priority areas for the modernization of the Russian economy (SP-625.2018.4).
Conflicts of Interest: nothing to declare.
Согласно критериям Европейского общества кардиологов, внезапная сердечная смерть (ВСС) определяется, как нетравматический, неожиданный летальный исход, наступивший в течение 1 часа со времени манифестации симптомов у вероятно здорового индивида. При отсутствии свидетелей временной интервал увеличивается до 24 часов, с момента, когда умершего видели последний раз живым и в стабильном состоянии. Причиной ВСС может быть врожденное или приобретенное потенциально фатальное заболевание сердца, известное при жизни умершего; сердечная или сосудистая аномалия, выявленная в ходе аутопсии, и, вероятно, приведшая к летальному исходу. В случае если причина внезапной смерти не установлена после проведения качественного судебно-медицинского исследования, наиболее вероятной причиной ВСС считают аритмию [1]. Частота ВСС в США достигает уровня 250-300 тыс. смертей в год, средняя ежегодная частота ВСС в индустриально развитых странах рассчитана как 50-100 на 100 тыс. человек. Таким образом, эпидемиологические данные делают ВСС крупной проблемой современного здравоохранения [2]. Кроме того, проблема ВСС имеет и социальный аспект, поскольку среди молодых людей частота ВСС составляет 1,3-8,5 случаев на 100 тыс. молодых людей [3]. Причинами ВСС в возрасте до 35 лет являются миокардиты, заболевания клапанов сердца, врожденные аномалии коронарных артерий, кардиомиопатии, наследственные каналопатии [2, 4]. До 30% ВСС у молодых наступают из-за наследственных аритмий (синдром удлиненного, укороченного интервала QT, синдром Бругада, катехоламинергическая полиморфная желудочковая тахикардия). В старшем возрасте на первый план выходит ишемическая болезнь сердца. Выживаемость лиц с ВСС по-прежнему остается невысокой, даже при нахождении в лечебно-профилактическом учреждении [2].
С целью модернизации системы диагностики и профилактики ВСС активно изучаются молеку-лярно-генетические маркеры данной нозологии.
Acknowledgments. The authors express their deep gratitude to RAS academician Yuri P. Nikitin for the opportunity to form a control group based on the material of the HAPIEE and MONICA cohorts.
'SRI of Therapy and Prevention Medicine — branch of FSBSI Federal Research Center Institute of Cytology and Genetics of SD RAS, Novosibirsk; Novosibirsk State Medical University, Novosibirsk; 3Novosibirsk Oblast Clinical Bureau of Forensic Expertise, Novosibirsk, Russia.
Ivanova A. A. ORCID: 0000-0002-9460-6294, Maksimov V. N. ORCID: 0000-00027165-4496, Moiseeva D. I. ORCID: 0000-0002-9814-2159, Malyutina S. K. ORCID: 0000-0001-6539-0466, Novoselov V. P. ORCID: 0000-0002-6312-5543, Voevoda M. I. ORCID: 0000-000I-9425-4I3X.
Received: 10.07.2018 Revision Received: 05.09.2018 Accepted: 12.09.2018
Современные исследования проводятся высокотехнологичными новейшими методами молекулярно-генетического анализа, что позволяет получить большое количество новой информации в кратчайшие сроки. Однако полученные такими методами результаты сопряжены с необходимостью обязательной дальнейшей проверки с целью подтверждения полученных ассоциаций и связей.
По результатам собственного полногеномного ассоциативного исследования ВСС был получен перечень вероятных кандидатных полиморфизмов ВСС. Исследование проведено в центре "Биоинженерия" РАН на платформе Illumina Omni1S-8v1H12, содержащей 1,2 млн маркеров с использованием пулирован-ной ДНК 200 мужчин умерших ВСС и пулированной ДНК 200 мужчин — участников проекта Health, Alcohol and Psychosocial factors In Eastern Europe (HAPIEE) по схеме "случай-контроль" [5]. Полученные в ходе полногеномных ассоциативных исследований результаты требуют обязательной валидации в исследованиях дизайна "случай-контроль" с использованием рутинных методов молекулярно-генетического анализа для исключения ложноположительного включения в перечень кандидатных маркеров нозологии. Целью данного исследования является подтверждение ассоциации с ВСС однонуклеотидных полиморфизмов rs6582147, rs10010305, rs2136810, rs17797829, включенных в перечень наиболее вероятных кандидатных маркеров ВСС по результатам собственного полногеномного ассоциативного исследования.
Материал и методы
Дизайн исследования построен по принципу "случай-контроль".
Группа ВСС (n=360, средний возраст 53,0±9,2 лет, мужчины — 76,9%, женщины — 23,1%) сформирована с использованием критериев Европейского общества кардиологов [1]. В группу ВСС включены лица, умершие вне лечебно-профилактических учреждений на территории Октябрьского района г. Новосибирска, после проведения судебно-медицинского
исследования причиной смерти которых была признана сердечная патология. Основные патологоана-томические диагнозы лиц включенных в группу ВСС: острая коронарная недостаточность и острая недостаточность кровообращения, которые удовлетворяют критериям ВСС Европейского общества кардиологов. Из группы исключены лица, находящиеся в состоянии алкогольного и наркотического опьянения, которое могло спровоцировать развитие летального исхода. Также исключены лица с патологоанато-мическими диагнозами гипертрофическая кардио-миопатия, острый инфаркт миокарда. Поскольку инфаркт миокарда не относится к ВСС по МКБ-10, а ВСС, развившаяся по причине кардиомиопатии, является отдельной этиологической группой ВСС со своими кандидатными маркерами. В ходе проведения аутопсии у умерших забиралась ткань миокарда массой 5-10 г, которая хранилась в дальнейшем при температуре -20° С до этапа выделения ДНК.
Контрольная группа (n=402, средний возраст 52,9±9,1 лет, мужчины — 69,7%, женщины — 30,3%) подобрана по полу и возрасту из банка ДНК международных исследовательских проектов Multinational MONItoring of trends and determinants in CArdiovascular disease (MONICA) и Health, Alcohol and Psychosocial factors In Eastern Europe (HAPIEE). В ходе проведения исследований у участников забиралась венозная кровь в пробирки с ЭДТА, которая хранилась в дальнейшем при температуре -20° С до этапа выделения ДНК.
Выделение ДНК выполняли методом фенол-хлороформной экстракции из ткани миокарда и венозной крови [6].
Генотипирование по исследуемым однонуклео-тидным полиморфизмам выполняли методом поли-меразной цепной реакции с последующим анализом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов. Детекцию продуктов амплификации и рестрикции осуществляли методом электрофореза в 5% полиа-криламидном геле с последующим окрашиванием бромистым этидием (EtBr).
Для генотипирования по rs6582147 использовали праймеры: 5'-ATCCTAATAACCTTGGAATC-3'(F) и 5'-TGGCCTGAATTCTTATAAA-3'(R). Смесь для ПЦР объемом 25 мкл включала: Трис-HCI (pH 9,0) 75 мМ, (NH,) SO. 20 мМ, Tween-20 0,01%, 3,0 мМ
' v 4 2 4 ' ' ' '
MgCl2, по 0,8 мМ каждого праймера, 0,2 мМ смеси dNTP, 2 мкг ДНК, 1 единицу активности Taq-ДНК-полимеразы ("СибЭнзим", Новосибирск). Амплификацию проводили в следующем температурном режиме: 33 цикла, включающих денатурацию 95° С 30 сек, отжиг праймеров 46° С 30 сек и элонгацию 72° С 30 сек. Рестрикцию проводили с 10 единицами активности рестриктазы TaqI ("СибЭнзим", Новосибирск). Размер продукта амплификации 97 п.н. После проведения рестрикции при генотипе TT детектировался продукт 97 п.н., при GG генотипе — продукты
78 п.н. и 19 п.н., при гетерозиготном генотипе TG все перечисленные продукты: 97 п.н., 78 п.н., 19 п.н.
Для генотипирования по rs10010305 использовали праймеры: 5'- ATTGTGTGTAATGTAGAGTA-3'(F) и 5'-ATTCCCATCAACAGA-3'(R). Смесь для ПЦР объемом 25 мкл включала: 10 мкл 2,5 кратной смеси для ПЦР-РВ №М-428 (ЗАО "Синтол"), 3,0 мМ MgCl2, по 0,8 мМ каждого праймера. Амплификацию проводили в следующем температурном режиме: 35 цикла, включающих денатурацию 95° С 30 сек, отжиг праймеров 58° С 30 сек и элонгацию 72° С 30 сек. Рестрикцию проводили с 10 единицами активности рестриктазы RsaI ("СибЭнзим", Новосибирск). Размер продукта амплификации 93 п.н. После проведения рестрикции при генотипе TT детектировался продукт 93 п.н., при CC генотипе — продукты 74 п.н. и 19 п.н., при гетерозиготном генотипе TC все перечисленные продукты: 93 п.н., 74 п.н., 19 п.н.
Для генотипирования по rs2136810 использовали праймеры: 5'- CACAAGTTTCCTTAAAATCG-3'(F) и 5'-CTTTCTTCTTCCTTCTCTCT-3'(R). Смесь для ПЦР объемом 25 мкл включала: 10 мкл БиоМастер HS-Taq ПЦР-Color (2х) (ООО БИОЛАБМИКС, Новосибирск), 1,0 мМ MgCl2, по 0,6 мМ каждого праймера. Амплификацию проводили в следующем температурном режиме: 35 цикла, включающих денатурацию 95° С 30 сек, отжиг праймеров 50° С 30 сек и элонгацию 72° С 20 сек. Рестрикцию проводили с 10 единицами активности рестриктазы TaqI ("СибЭн-зим", Новосибирск). Размер продукта амплификации 96 п.н. После проведения рестрикции при генотипе GG детектировался продукт 96 п.н., при AA генотипе — продукты 78 п.н. и 18 п.н., при гетерозиготном генотипе AG все перечисленные продукты: 96 п.н., 78 п.н., 18 п.н.
Для генотипирования по rs17797829 использовали праймеры: 5'- CCCGCTTCAGAGGGAGTGTAAACT-3'(F) и 5'-TGGGAGGCCCAAGCTCTGAAT-3'(R). Смесь для ПЦР объемом 25 мкл включала: Трис-HCI (pH 9,0) 75 мМ, (NH4)2SO4 20 мМ, Tween-20 0,01%, 3,5 мМ MgCl2, по 0,8 мМ каждого праймера, 0,2 мМ смеси dNTP, 2 мкг ДНК, 1 единицу активности Taq-ДНК-полимеразы ("СибЭнзим", Новосибирск). Амплификацию проводили в следующем температурном режиме: 33 цикла, включающих денатурацию 95° С 30 сек, отжиг праймеров 48° С 30 сек и элонгацию 72° С 30 сек. Рестрикцию проводили с 10 единицами активности рестриктазы Hinfl ("СибЭнзим", Новосибирск). Размер продукта амплификации 135 п.н. После проведения рестрикции при генотипе AA детектировался продукт 135 п.н., при GG генотипе — продукты 117 п.н. и 18 п.н., при гетерозиготном генотипе GA все перечисленные продукты: 135 п.н., 117 п.н., 18 п.н.
Полученные результаты статистически обработаны с помощью пакета программ SPSS 16.0, опреде-
Таблица 1
Частоты генотипов rs6582147, rs2136810, rs10010305, rs17797829 в группе ВСС и контрольной группе
Генотип Группа ВСС Контрольная группа
n % n %
rs6582147 TT 29 8,2 43 10,7
GT* 106 29,9 156 38,8
GG* 220 62,0 203 50,5
rs2136810 GG* 255 70,8 239 63,9
GA 90 25,0 118 31,6
AA 15 4,2 17 4,5
rs10010305 TT 1 0,3 6 1,5
CT* 68 19,1 56 14,4
CC 287 80,6 326 84,0
rs17797829 AA 12 3,4 11 2,8
GA 87 24,9 79 20,2
GG 251 71,7 302 77,0
Примечание: n — число индивидов, * — указывает на статистически значимые различия.
лены частоты генотипов, изучаемых однонуклеотид-ных полиморфизмов в группе ВСС и контрольной группе, в контрольной группе с использованием критерия хи-квадрат оценено соответствие частот генотипов равновесию Харди-Вайнберга. Сравнение групп по частотам генотипов выполнено с помощью таблиц сопряжённости с использованием критерия хи-квадрат по Пирсону. В случае четырёхпольных таблиц применен точный двусторонний критерий Фишера с поправкой Йетса на непрерывность. Относительный риск ВСС по конкретному аллелю или генотипу вычислен как отношение шансов (ОШ) с использованием точного двухстороннего критерия Фишера и критерия хи-квадрат по Пирсону. В качестве уровня значимости использовали p<0,05.
С целью оценки вклада однонуклеотидных полиморфизмов в развитие ВСС в контрольной группе изучена ассоциация с выбранными полиморфизмами ряда антропометрических (систолическое, диастоли-ческое, пульсовое артериальное давление, частота сердечных сокращений, индекс массы тела, окружность талии) и биохимических параметров (концентрация липопротеинов низкой (ЛПНП) и высокой плотности (ЛПВП), триглицеридов, общего холестерина, глюкозы). В группе ВСС проверена ассоциация полиморфизмов с данными морфологического исследования (масса сердца, толщина межжелудочковой перегородки, левого и правого желудочка). Нормальность распределения параметров проверена с помощью теста Колмогорова-Смирнова. При нормальном распределении дальнейшие расчеты проведены с использованием теста ANOVA, при отклонении от нормального распределения использован тест Крускалла-Уоллиса. В качестве уровня значимости также использовали p<0,05.
Таблица 2
Толщина межжелудочковой перегородки в группе ВСС в зависимости от генотипа rs6582147
Генотип Толщина межжелудочковой перегородки Me (Q25-Q75), см
GT 1,5 (1,2-1,875)
TT + GG 1,25 (11-1,475)
Примечание: Me — медиана, Q25 — 25-й процентиль, Q75 — 75-й процен-тиль.
Таблица 3 Индекс массы тела в контрольной группе в зависимости от генотипа гэ2136810
Генотип Индекс массы тела, Me (Q25-Q75), кг/м2
АА 30,02 (28,26-32,40)
GG+GA 26,42 (23,74-29,91)
Примечание: Me — медиана, Q25 — 25-й процентиль, Q75 — 75-й процен-тиль.
До начала исследований участниками проектов (MONICA, HAPIEE) были подписаны информированные согласия, в том числе, на молекулярно-гене-тическое исследование. Исследование выполнено с разрешения Локального Этического Комитета.
Результаты
В контрольной группе эмпирическое распределение частот генотипов однонуклеотидных полиморфизмов rs6582147 и rs2136810 соответствуют ожидае-
2
мому согласно равновесию Харди-Вайнберга (х =2,43; 0,25, соответственно, р>0,05). Критерий хи-квадрат для однонуклеотидных полиморфизмов rs10010305,
rs 17797829 выходит за границы уровня статистиче-
2
ской значимости (х =3,68; 4,09, соответственно, р<0,05).
По частотам генотипов однонуклеотидного полиморфизма rs6582147 обнаружены статистически значимые различия между группой ВСС и контрольной группой (табл. 1). Доля носителей генотип GT однонуклеотидного полиморфизма rs6582147 значимо меньше в группе ВСС по сравнению с контрольной группой (ОШ =0,671, 95% ДИ 0,496-0,909, р=0,011), а доля носителей генотипа GG полиморфизма значимо больше в группе ВСС по сравнению с контрольной группой (ОШ =1,598, 95% ДИ 1,195-2,135, р=0,002). Статистическая значимость полученных результатов сохраняется в старшей возрастной группе (старше 50 лет) (GT vs GG+TT: ОШ =0,598, 95% ДИ 0,405-0,883, р=0,011; GG vs GT+TT: ОШ =1,732, 95% ДИ 1,193-2,513, р=0,005), группе мужчин (GT vs GG+TT: ОШ =0,632, 95% ДИ 0,439-0,909, р=0,013; GG vs GT+TT: ОШ =1,918, 95% ДИ 1,289-2,565, р=0,001), группе мужчин старше 50 лет (GT vs GG+TT: ОШ =0,550, 95% ДИ 0,344-0,880, р=0,014;
аа уя ат+тт: ош =1,925, 95% ди 1,231-3,008,
р=0,005).
Кроме того, в группе ВСС найдена ассоциация полиморфизма гя6582147 с толщиной межжелудочковой перегородки (р=0,013) (табл. 2). У носителей генотипа ат толщина межжелудочковой перегородки больше, чем у носителей генотипа ТТ и аа (р=0,004).
Частота генотипа аа однонуклеотидного полиморфизма гя2136810 выше в группе ВСС по сравнению с контрольной группой (ОШ =1,372, 95% ДИ 1,005-1,871, р=0,049) (табл. 1), у лиц старше 50 лет частота генотипа аА в группе ВСС значимо ниже, чем в контрольной группе (ОШ =0,642, 95% ДИ 0,422-0,976, р=0,045).
У носителей генотипа АА полиморфизма гя2136810 в группе контроля индекс массы тела больше, чем у носителей генотипа аа и аА (р=0,011) (табл. 3).
Носители генотипа СТ однонуклеотидного полиморфизма гя10010305 статистически чаще встречаются в группе ВСС по сравнению с контрольной группой (ОШ =1,773, 95% ДИ 1,085-2,897, р=0,027) (табл. 1). Данная закономерность также значима в группе лиц старшего возраста (ОШ =1,719, 95% ДИ 1,038-2,847, р=0,041) и в группе мужчин старше 50 лет (ОШ =2,169, 95% ДИ 1,114-4,224, р=0,023).
В группе женщин вероятность встретить носительниц генотипа аа однонуклеотидного полиморфизма гя 17797829 меньше в группе ВСС по сравнению с контрольной группой (ОШ =0,392, 95% ДИ 0,203-0,760, р=0,007). В группе женщин старше 50 лет кроме статистической значимости по частотам генотипа аа зафиксировано статистически значимое различие по частотам генотипа АА (ОШ =2,739, 95% ДИ 2,176-3,448, р=0,020).
В группе ВСС отмечено статистически значимое различие между носителями разных генотипов полиморфизма гя 17797829 по величине значения массы сердца (р=0,042). У носителей генотипа АА масса сердца значимо меньше (299,2+31,79 г) по сравнению с носителями генотипов аА и аа (420,25+105,95 г).
Обсуждение
Однонуклеотидные полиморфизмы гя6582147, гя10010305, гя2136810, гя17797829 являются новыми молекулярно-генетическими маркерами ВСС, которые были выявлены при проведении собственного полногеномного ассоциативного исследования.
Согласно результатам проведенного подтверждающего исследования "случай-контроль", генотип ат однонуклеотидного полиморфизма гя6582147 связан с протективным эффектом в отношении ВСС, а генотип аа полиморфизма ассоциирован с повышенным риском ВСС. При этом полученная ассоциация при разделении групп по полу и возрасту сохраняется в группе старше 50 лет, группе мужчин и группе мужчин старше 50 лет. Кроме того, в группе ВСС найдена
ассоциация генотипа ат полиморфизма гя6582147 с большей толщиной межжелудочковой перегородки по сравнению с носителями генотипов ТТ и аа. Толщина межжелудочковой перегородки не является единственным и строго специфичным критерием какого-либо патологоанатомического диагноза, поэтому делать вывод об ассоциации полиморфизма гя6582147 с гипертрофической кардиомиопатией или гипертрофией миокарда другого генеза пока преждевременно, тем более, учитывая факт, что лица с патологоанатомическим диагнозом "гипертрофическая кардиомиопатия" были исключены из группы ВСС.
Генотип СТ однонуклеотидного полиморфизма гя10010305 выявлен как генотип риска ВСС в группе мужчин, группе лиц старшего возраста и группе мужчин старше 50 лет.
Генотип аа однонуклеотидного полиморфизма гя2136810 ассоциирован с повышенным риском ВСС, генотип аА полиморфизма ассоциирован с протек-тивным эффектом в отношении ВСС в группе лиц старше 50 лет. Генотип АА полиморфизма гя2136810 в группе контроля ассоциирован с более высоким индексом массы тела, чем у носителей генотипа аа
и аА.
В группе женщин генотип аа однонуклеотидного полиморфизма гя17797829 является протективным в отношении ВСС. В группе женщин старше 50 лет кроме генотипа аа с ВСС ассоциирован генотип АА полиморфизма, который является генотипом риска ВСС. У носителей генотипа АА полиморфизма гя17797829 масса сердца значимо меньше по сравнению с носителями генотипов аА и аа. Группа женщин, включенная в исследование, является малочисленной, поэтому ассоциация варианта гя17797829 с ВСС, полученная исключительно в женской группе, требует дополнительных исследований на выборках большей численности.
Изученные однонуклеотидные полиморфизмы гя6582147 (£.73760514т>а), к>10010305 (е.12047294С>т), гя17797829 ^.689660ба>А) локализованы в межгенных пространствах 4 (гя10010305, гя17797829) и 12 (гя6582147) хромосом. Многочисленные мировые исследования показали, что генетические варианты в РНК-некодирующих регионах ассоциированы с заболеваниями человека. Однако до сих пор определить точный механизм вклада интронных и межгенных однонуклеотидных полиморфизмов в развитие заболеваний не представляется возможным. Уровень экспрессии некодирующих РНК транскриптов во многих исследованиях показал тканевую и временную специфичность, что подтверждает существование строгой регуляции экспрессии данных участков. Доказано, что аномальная экспрессия некоторых РНК-некодирующих регионов тесно коррелирует с формированием злокачественных новообразова-
ний, метастатической активностью. Кроме того, многие межгенные и интронные однонуклеотидные полиморфизмы локализованы рядом или непосредственно в регуляторных регионах. То есть, такие полиморфизмы могут быть связаны с регуляторными элементами и влиять на патогенез заболеваний [7].
Однонуклеотидный полиморфизм rs2136810 (g.36007345A>G) локализован в гене ARAP2 (4p14). Ген ARAP2 (ArfGAP with RhoGAP domain, ankyrin repeat and PH domain 2, 4p14) кодирует протеин centaurin-delta-1, который играет роль в локальной адгезии и регуляции динамики местной адгезии [8].
С точки зрения полученной ассоциации параметров судебно-медицинского исследования (масса сердца, толщина межжелудочковой перегородки), антропометрических параметров (индекс массы тела) с изучаемыми однонуклеотидными полиморфизмами необходимо продолжить исследование в отношении связи полиморфизмов с нозологиями, имеющими отношение к данным параметрам. Поскольку на данный момент полученные ассоциации, вероятнее всего, не имеют отношения к ВСС, а являются случайной находкой. Например, гипертрофия миокарда является фактором риска ВСС [9], но согласно полученным данным, генотип GT одно-нуклеотидного полиморфизма rs6582147 является одновременно и протективным в отношении ВСС, и ассоциирован с большей толщиной межжелудочковой перегородки.
Так как изучаемые нами однонуклеотидные полиморфизмы ранее не были включены по данным научной литературы в какие-либо научно-исследовательские проекты, можно сделать вывод, что впервые
Литература/References
1. Priori SG, Aliot E, Bl0mstrom-Lundqvist C, et al. The Task Force for the Management of Patients with Ventricular Arrhythmias and the Prevention of Sudden Cardiac Death of the European Society of Cardiology (ESC). Europace. 2015;17(11):1601-87. Doi:101093/ europace/euv319.
2. Garcia-Elias A, Benito B. Ion Channel Disorders and Sudden Cardiac Death. Int J Mol Sci. 2018;19(3). Pii:E692. Doi:10.3390/ijms19030692.
3. White JL, Chang AM, Cesar S, et al. Can sudden cardiac death in the young be predicted and prevented? Lessons from autopsy for the emergency physician. Emergencias. 2018;30(3):194-200.
4. Razuin R, Nurquin F, Shahidan MN, et al. Sudden cardiac death with triple pathologies: A case report. Egypt Heart J. 2017;69(2):157-60. Doi:101016/j.ehj.2017.02.001.
5. Babenko VN, Maksimov VN, Kulakova EV, et al. Genome-wide snp allelotyping of human cohorts by pooled DNA samples. Vavilovskij zhurnal genetiki I selekcii. 2014;18(4-2):847-55. (In Russ.) Бабенко В.Н., Максимов В.Н., Кулакова Е.В. и др. Полногеномный анализ пулированных выборок ДНК когорт человека. Вавиловский журнал генетики и селекции. 2014;18(4-2):847-55.
изучена ассоциация rs6582147, rs10010305, rs2136810, rs17797829 с ВСС и показано, что исследуемые одно-нуклеотидные полиморфизмы действительно являются молекулярно-генетическими маркерами ВСС.
Заключение
Однонуклеотидные полиморфизмы rs6582147, rs10010305, rs2136810, rs17797829, выявленные как наиболее вероятные кандидатные полиморфизмы в собственном полногеномном ассоциативном исследовании, подтвердили ассоциацию с ВСС по результатам проведенного исследования "случай-контроль".
Найдена ассоциация однонуклеотидного полиморфизма rs6582147 с толщиной межжелудочковой перегородки в группе ВСС, rs2136810 — с индексом массы тела в контрольной группе, rs17797829 — с массой сердца в группе ВСС.
Благодарности. Авторы выражают глубокую признательность академику РАН Юрию Петровичу Никитину за предоставленную возможность сформировать контрольную группу на материале когорт HAPIEE и MONICA.
Финансирование. Исследование выполнено при поддержке стипендии Президента Российской Федерации для молодых ученых и аспирантов, осуществляющих перспективные научные исследования и разработки по приоритетным направлениям модернизации российской экономики (СП-625.2018.4).
Конфликт интересов: все авторы заявляют об отсутствии потенциального конфликта интересов, требующего раскрытия в данной статье.
6. Sambrook J, Russell DW. Purification of nucleic acids by extraction with phenol:chloroform. CSH Protoc. 2006;2006(1). Pii:pdb.prot4455. doi:10.1101/pdb.prot4455.
7.Marki S, Goblos A, Szlavicz E, et al. The rs13388259 Intergenic Polymorphism in the Genomic Context of the BCYRN1 Gene Is Associated with Parkinson's Disease in the Hungarian Population. Parkinsons Dis. 2018;2018:9351598. Doi:101155/2018/9351598. eCollection 2018. Doi:101155/2018/9351598.
8. Chaudhari A, Haversen L, Mobini R, et al. ARAP2 promotes GLUT1-mediated basal glucose uptake through regulation of sphingolipid metabolism. Biochim Biophys Acta. 2016;1861(11):1643-51. Doi:101016/j.bbalip.2016.07.009.
9. Shljahto EV, Arutjunov GP, Belenkov JuN, et al. Recommendations for risk assessment and prevention of sudden cardiac death Archive of internal medicine. 2013;(4):5-15. (In Russ.) Шляхто Е.В., Арутюнов Г. П., Беленков Ю.Н. и др. Национальные Рекомендации по определению риска и профилактике внезапной сердечной смерти. Архивъ внутренней медицины. 2013;(4):5-15.
