CC BY
241
Журнал Алматинского государственного института усовершенствования врачей
71
Обнаружение Азалептина при химико-токсикологической
экспертизе
Захарченко Н.В.
РГКП Центра судебной медицины (директор М. А. Картов), Северо-Казахстанский филиал Зав. курсом судебной медицины Шанаева Г№С
Лекарственный препарат азалептин (клозапин, лепо-некс) по фармакологической классификации относится к психотропным лекарственным средствам, действующим на центральную нервную систему, к группе нейролептиков. Азалептин оказывает выраженное антипсихотическое и седативное действие. Препарат показан при острых и хранических формах шизофрении, психозах, и других пограничных состояниях [1,6].
Азалептин производное пиперазино-дибензодиазепина, по химической структуре является трициклическим соединением. Химическая формула:
^^^N^3]. Азалептин - порошок зеленовато-жёлтого цвета, практически нерастворим в воде, малорастворим в эфире, умеренно растворим в 95% этиловом спирте, легкорастворим в хлороформе. Промышленностью РФ выпускаются таблетки азалептина в дозировке 0,025 и 0,1г., хранение список Б [3].
Случай из практики. В марте 2011 года женщина 1961 г р. скончалась в реанимационном отделении 3-ей городской больницы Петропавловска СКО. Острое медикаментозное отравление тяжёлой степени тяжести. Суицид. Осложнения: токсическая энцефалопатия, отёк головного мозга, двухсторонняя гипостатическая пневмония. Проведено 9 койко-дней. Анамнез: в алкогольном опьянении с целью суицида после ссоры с мужем приняла 20 таблеток элениума, 50 таблеток азалептина.
Материал и метод. В литературе описан ряд случаев отравления азалептином и опубликованы отдельные методики судебно-химического исследования биологического материала [2,4,5]. С целью обнаружения сильнодействующих веществ, в частности азалептина (элениум определила по цветным реакциям, по соответствию Rf свидетелю в различных системах растворителей, УФ-спектру, дала количественную оценку содержания в крови методом УФ-спектрофотометрии), произведено исследование трупного материала (частей внутренних органов и биологических жидкостей). Изолирование из частей внутренних органов (ткани печени, стенки желудка) проводили по методу Стаса-Отто, для этого по 50г тканей органов настаивали с этанолом, после осаждения белков проводили изолирование эфиром из кислой среды при реакции среды 2,0, затем хлороформом из щелочной среды при при рН 9,0-10,0, после концентрирования органических фаз количественно переносили в мерные колбы на 25мл с соответствующей маркировкой. Изолирование из 10 мл крови, 10 мл мочи (после разбавления проб дистиллированной водой 1:1) проводили после подкисления раствором хлористоводородной кислоты.
Результаты исследования. Исследование объектов проводили путём скрининга методом ТСХ в системах органических растворителей различного состава и полярности с обработкой хроматографических пластин различными визуализирующими растворами. Идентификацию выделенного из биообъектов азалептина проводили по соответствию параметров Rf пятен стандартному раствору азалептина: по наблюдаемым пятнам зеленовато-жёлтого цвета при дневном свете, по поглощению тёмно-синего цвета в УФ-свете (254нм), цветным реакциям с реактивом
В статье приведены методы обнаружения и количественного определения азалептина в трупном материале при химико-токсикологической экспертизе с использованием тонкослойной хроматографии, УФ-спектрофотометрии.
Ключевые слова: азалептин, трупный материал, отравление, извлечение, хроматографическое исследование, УФ-спектрофотометрия.
N.V.Zaharchenko
Химия-токсикологиялыц сараптамада азалептиндi табу
Мацалада химия-токсикологиялыц сараптамада жуцацабаты хроматографияны, УК-спектрофотометрдi пайдалануымен, мэтт материалынан азалептиндi сандыц мелшерт аныцтау эдс корсетыген.
Негiзгi создер: азалептин мэйт материалы, улану, шыгару, хроматографиалыц зерттеу, УК-спектрофотометр.
Detection Of Azaleptine In Chemist-Toxicological Expert Operation Of Cadaverik Material
Azaleptine detection and guantitation in cadaveric material in chemist-toxicological expert using thin-layer chromatography, UF-spectrophotometry.
Key words: azaleptin, poisoning, cadaveric material, poisoning, extraction, chromatographic study, UV-spectrophotometria.
Либермана (пятна жёлто-коричного цвета), с концентрированной азотной кислотой (пятна с переходом от жёлтого через красноватый до коричневого), с реактивом Эрдмана (пятна жёлтого цвета). С реактивами Марки, Фреде, концентрированной серной кислотой, раствором хлорида окисного железа окрашиваний не наблюдали. Хроматографическое исследование осуществляли восходящим способом на хроматографических пластинках «Сорбфил» (тип сорбента-силикагель СТХ-1 А) с пробегом фронта растворителей 10см, в качестве подвижной фазы использовали следующие системы:
№ Системы Rf
I этилацетат:хлороформ:25%раствор аммиака(85:10:5) 0,72
II толуол:ацетон:25%раствор аммиака(50:50:1) 0,52
III диоксан:хлороформ:ацетон:25%раствор аммиака(47,5:45:5:2,5) 0,77
В качестве реактивов по проявлению хроматографических пластинок использовали модифицированный реактив Драгендорфа (пятна ярко-оранжевого цвета на жёлтом фоне), подкисленный раствор перманганата калия (пятна жёлто-коричневого цвета на фиолетовом фоне). При хроматографическом исследовании обнаруженное вещество располагалось параллельно стандартному образцу азалептина и проявлялось соответствующими реактивами с аналогичными окрасками в системах. После проведения изолирования действующего вещества из средней пробы трупного материала в щелочных извлечениях печени, почки, крови при исследовании методом ТСХ наблюдали пятна, совпадающие по значениям Rf с веществом азалептином, который был использован в
72
Вестник АГИУВ №4, 2012
качестве «свидетеля». Подтверждающее исследование проводили методом УФ-спектрофотометрии. Выделенный из трупного материала азалептин идентифицировали по соответствию его УФ-спектра параметрам стандартного образца. УФ-спектры исследуемых образцов из биообъектов и раствора азалептина (10мкг/мл) в 0,1М растворе хлористоводородной кислоты имели аналогичный характер спектральной кривой (рис.1). При проведении спектрофо-тометрического исследования на спектрофотометре марки «Спекорд205» в диапазоне длин волн220-320нм, в кювете с длиной оптического пути10мм отмечались максимумы абсорбции при длинах волн240 и Л=300нм (плато), минимум при длине волны 227 нм раствор сравнения 0,1 М раствор хлористоводородной кислоты).
Количественную оценку азалептина в трупном материале (внутренниие органы и биологические жидкости) определяли по калибровочному графику спектрофо-тометрическим методом на «Спекорд205», раствором сравнения служила 0,1 М хлористоводородная кислота. Определение их проводили после предварительной хро-матографической очистки на пластинке покрытой слоем силикагеля. Элюировали 10 мл 0,1 М хлористоводородной кислоты. Для приготовления стандартного раствора 0,1 г азалептина растворяли в мерной колбе емкостью 100 мл в 0,1 М хлористоводородной кислоты. 10мл полученного раствора переносили в мерную колбу на 100мл, объем доводили до метки 0,1 н раствором серной кислоты (100мкг/ мл). По 20, 10 и 5мл полученного раствора переносили в мерные колбы на 100мл, объемы доводили до метки 0,1 М хлористоводородной кислоты. В 1мл полученных стандартных растворов содержится 0,02мг, 0,01 мг и 005мг азалептина. Расчет содержания азалептина производили по стандартному раствору, содержащему 100мкг азалептина в 1мл 0,1 М хлористоводородной кислоты при длине волны 240нм. Формула для расчета азалептина:
Duucc.xCcm.x50 х100 * " Dcc .х¥х10х1000
где Х - содержание азалептина в 100г биологического материала (в мг);
Dct. - оптическая плотность стандартного раствора; Dиссл. - оптическая плотность исследуемого раствора;
V - объём хлороформного извлечения, взятый для анализа, мл;
Сст. - концентрация азалептина в стандартном растворе (100мкг/мл);
50 - общий объём хлороформного извлечения, мл; 100/10 - пересчет на 100г биологического материала; 1000 - перевод мкг в мг
Выводы:
При использовании метода изолирования азалептина из трупного материала подкисленным спиртом получаются хорошо очищенные извлечения, которые можно исследовать при химико-токсикологической экспертизе. Из мочи азалептин изолируется после подкисления соляной кислотой достаточно полно. Из крови азалептин изолируется плохо по причине связывания с белками плазмы на 95%(1).
Азалептин обнаруживается по цветным реакциям, по соответствию Rf «свидетелю» в различных системах растворителей, УФ - спектру.
Количественную оценку содержания азалептина, выделенного из биологического объекта, можно проводить с помощью УФ - спектрофотомерии.
Литература:
1.Государственный реестр РФ лекарственных средств.-М.,2004-Т.2.-С.729-730.
2.Козлов И.С., Ефимов А.П., Симонова Н.С., Тарасова В.Н.//Суд.-мед.эксперт.-1986.-С.43- 44.
3.Машковский М.Д.Лекарственные средства: Пособие для врачейюХарьков,1997.-Т.1.-.68-69.
4.Мелентьев А.Б., Курочкин И.В.//Суд.-мед.эксперт.-1999.-№4.-С.27-29.
5.Невинный В.И., Вольерам Б.Н. Суд.-мед.эксперт.-1987.№2.-59-61.
6.Справочник Видаль (Лекарственные препараты в России).-М.,2000.-С.Е84-Е85.
7.Clarke s Isolation and Identification of Drugs.-London,1986.-P.488-489.
