CC BY
109
Чем выше скорость пули, тем выше коэффициент ее торможения, тем большая энергия расходуется на разрушение кости, тем больше объем повреждения Определенную роль в механизме формирования огнестрельного ранения конечности играет поток вторичных снарядов, являющихся осколками разрушенной кости. Они движутся в виде двух конусов, основанием обращенных как в сторону полета пули, так и в обратном направлении, причем соотношение «объема» конусов, направленных вперед и назад, составляет примерно 2:1. Благодаря дополнительному действию потока вторичных снарядов, при ранениях малоустойчивыми высокоскоростными пулями раневой канал может приобретать форму горизонтально ориентированных песочных часов. Объем разрушения костей конечностей зависит от энергии огнестрельного снаряда.
По результатам проведенных исследований были сделаны следующие выводы:
1. При выстрелах до 1 метра определяются следующие особенности:
— При выстрелах «в упор» и до расстояния 15 см вокруг раны на коже и в начале раневого канала имеются отложения СПБ.
— При выстрелах до 50-100 см вокруг раны имеются отложения СПБ.
— При выстрелах с дистанции до 1 метра в 25% случаев образуются сквозные или частично сквозные огнестрельные ранения бедер; в 75% образуются слепые ранения.
— Бо всех случаях имеются многооскльчатые переломы бедренных костей с округлыми дефектами в области «входа».
— При выстрелах в «упор» или близко к «упору» в области «входной раны» на кости образуется дефект ткани; в области «выходной раны» образуется многооскольчатый перелом, при сопоставлении осколков которого—дефекта ткани нет; в остальных случаях при выстрелах с близкой дистанции в области «выходной раны» на кости образуется многооскль-чатый перелом, при сопоставлении осколков которого определяются мелкие дефекты костей диаметром от 0,1 до 0,3 см, по-видимому, от деформированных фрагментов пули.
2. При выстрелах с дистанций от 1 до 20 метров определяются следующие особенности:
— При выстрелах с дистанции от 1 до 20 метров в 100% образуются слепые огнестрельные ранения бедер.
— Б 90% случаев имеются многооскльчатые переломы бедренных костей с округлыми дефектами в области «входной раны» Б 2 случаях при выстрелах с 20 метров образовывалось «вклинение» пули в кость, с образованием на передней поверхности дырчатого перелома, а на задней конст-рукционныхтрещин.
— При выстрелах с дистанции в указанном диапазоне в области «входной раны» образуется дефект кости диаметром около 0,7-1 см: с типичным расхождением трещин, в области «выходной раны» на кости образуется многооскль-чатый перелом, при сопоставлении осколков которого определяются мелкие дефекты костей диаметром от 0,1 до 0,3 см, по-видимому, от деформированных фрагментов пули.
Литература:
1. Петров В.П. О повреждениях из некоторых образцов пистолетов-пулеметов в судебно-медицинском отношении. — Л., 1953. — С. 10-11.
2. Устинов П.В. Морфология огнестрельных пулевых повреждений костей в судебно-медицинском отношении. — С.,
1945. — С. 10-11.
© Ю.А. Хомов, Е.Г. Говорова, В.П. Гаранин, Н.В. Кокшарова, 2003 УДК 340.67.615.212.7.074
Ю.А. Хомов, Е.Г. Говорова, В.П. Гаранин, Н.В. Кокшарова ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ НА НАЛИЧИЕ КЕТОТИФЕНА
Пермская государственная фармацевтическая академия (ректор — проф. Г.И. Олешко),
ГУЗОТ «Пермское областное бюро судебно-медицинской экспертизы» (нач. — В.И. Перминов)
При проведении анализа трупного материала для изолирования кетотифена использован способ настаивания с подкисленной водой. Предложены методики определения кетотифена на основе хроматографии в тонком слое сорбента,
ИК- и УФ-спектроскопии, ВЭЖХ/УФ, применимые в химико-токсикологическом анализе.
Ключевые слова: кетотифен, трупный материал, химико-токсикологический анализ.
Y.A. Chomov, E.G. Govorova, V.P. Garanin, N.V. Kokscharova CHEMICAL AND TOXICOLOGICAL ANALYSIS OF KETOTIFEN
Perm
A method for detecting ketotifen to cadaveric material has been developed. Isolation by acidified water is proposed. Thin-layer chromatography,spectrophotometry high-pressure liquid chromatography can be used for identification and measurements of this substance.
Key words: ketotifen, cadaveric material, chemical and toxicological analysis.
C увеличением рынка лекарственный: средств, расширя- ми явлениями (потенцирование действия снотворных, седа-
ется круг судебно-химически и токсикологически значимых тивных, других антиаллергических средств, алкоголя) кето-
соединений, которые при определенных условиях могут тифен может быть использован в немедицинскихцелях, апри
быть причиной осложнений и интоксикаций, что требует передозировке приобретает токсикологическое значение [ 19,
разработки методик изолирования, идентификации, коли- 20]. Однако в доступной литературе информация о его хи-
чественного определения в биологических объектахи вклю- мико-токсикологическом анализе крайне недостаточна.
чения ихв скрининг токсических веществ [5,8,10]. В связи с необходимостью разработки методики выде-
Кетотифен, обладающий антианафилактической актив- ления и определения кетотифена в биологических объектах,
ностью, широко используется в медицинской практике в ка- нами избрано направление комплексного использования
честве антигистаминного средства [6,9]. В связи с побочны- физико-химических методов анализа, обладающих высоки-
ми разрешающими возможностями, с традиционными химическими исследованиями на различных этапах химикотоксикологического анализа кетотифена. Разработаны методики доказательства с помощью реакций с осадительными реактивами, реакций окрашивания и методов ХТС, ВЭЖХ/ УФ,ГХ/МС,ИК-иУФ-спектроскопии [2,3,4,16,17,18].Теорети-чески обоснованы и экспериментально подтверждены оптимальные условия экстракции кетотифена в зависимости от рН среды и природы органического растворителя. Максимум экстракции из водных растворов 99,85% достигается хлороформом при рН 10-11 и именно его следует считать оптимальным экстрагентом для изолирования кетотифена при химико-токсикологическом анализе [ 15]. При определении константы ионизации показано, что показатель ионизации кетотифена равен 8,58 характеризует ионизацию аминогруппы и подтверждает основные свойства соединения [ 13]. Разработанная методикаУФ-спектрофотометрическо-го анализа применена для количественного определения его в биологических жидкостях. Процент изолирования в условиях модельного эксперимента для крови и мочи после экстракционного выделения составляет в среднем 76 и 85% соответственно [11,12,14].
Экспериментальная часть
В настоящем сообщении представлены результаты определения кетотифена в трупном материале. Нами, при отсутствии в доступной литературе данных по изолированию кетотифена использованы приемы, которые находят применение в практике химико-токсикологического анализа для веществ кислотно-основного характера [7]. С целью выяснения возможности изолирования кетотифена из биосубстратов (печень) были проведены модельные опыты по выделению его водой, подкисленной щавелевой кислотой. Для очистки кетотифена от сопутствующих соэкстрактивных веществ использовали сочетание коагуляции белков электролитом с хроматографией в тонком слое сорбента, которая служила и тестом для предварительной идентификации. Для хроматографического исследования выбраны пластины Merk или другие стандартные, в качестве подвижной фазы хлороформ — 25% раствор аммиака 25:15 (раствор аммиака ставится в камеру отдельно в бюксе). Rf0,58-0,60. Идентификацию выделенного кетотифена проводили по сопоставлению его УФ-, ИК-спектров и параметров ВЭЖХ и ГХ/МС с этими же параметрами стандартного раствора ке-тотифена в соответствующем растворителе, а также реакциями окрашивания с реактивами Марки (сиреневато-фиолетовое), Манделина (розовато-фиолетовое), Фреде (желтовато-зеленое) и концентрированной серной кислотой (желтое). УФ-спектры поглощения 0,0016% растворов кетотифена в 95% этаноле, 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной и хлороформе, снятые в интервале длин волн 220400 нм на Specord-40M характеризуются одной полосой поглощения с одним максимумом 300-301 нм и одним минимумом 260-262 нм. ИК-спектр кетотифена на UR-71 в диске калия бромида имел максимум абсорбции при следующих частотах: 720,770,1290,1410,1480,1660,1720,2950,3310 см'.ВЭЖХ анализ кетотифена проводили на хроматографе «Милих-ром-4» сУФ-детектором на стандартной колонке 64x2 мм с обращенно-фазным сорбентом Lichrosorb RP-18 (5мкм). В качестве подвижной фазы выбрана смесь ацетонитрила с раствором 0,05 М кислоты хлористоводородной рН 3. Скорость элюирования 100мкл/мин. Детектирование при длине волны 300 нм, объем вводимой пробы на анализ 5 мкл, Скорость диаграммной ленты 10 мм/мин. Время удерживание кетотифена 5,06. Линейная зависимость наблюдается
в интервале концентраций 0,1-0,5 мкг кетотифена в подвижной фазе при вводе пробы 1-5 мкл. ГХ/МС исследование проведено на хроматографе HP-5890 серии 11с МСД HP-5972. Колонка капиллярная HP-5MS, внутренний диаметр 0,25 мм, длина 20 м. Г аз-носитель—гелий, скорость —1,0 мл/ мин. Температура инжектора и интерфейса 250 и 280 С, температура колонки— градиент 70 С (2 мин.)—270 С, скорость программирования 20 С в минуту. Ввод пробы ручной, без деления потока газа-носителя. Объем введенной пробы 1 мкл в 95% этаноле при концентрации в растворе 10 мкг/мл. Полученахроматограмма (время удерживания 12,95 мин.) и проведена регистрация масс-спектров в режиме полного сканирования. Характеристические ионы для кетоти-фена 309,96,208,221 m/z (приведены в порядке уменьшения интенсивности).
Методика УФ-спектрофотометрического определения (максимум абсорбции при 300 нм в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной, экстинкция 333,5. Линейная зависимость в интервале концентраций 5-32 мкг/мл) использована для количественной оценки содержания кетотифена, выделенного из трупного материала.
Методика исследования
Изолирование проводили водой, подкисленной щавелевой кислотой (по методике A.A. Васильевой). Водное извлечение вместе с объектом помещали в центрифужный стакан и центрифугировали (2,5 тыс. об/мин — 25 мин.). Надосадочную жидкость сливали и добавляли кристаллический аммония сульфат до насыщения. Через 20 мин. выпавший осадок отделяли центрифугированием. Экстракцию из водного извлечения осуществляли хлороформом при рН 10-11 (добавлением 25% раствора аммиака по универсальному индикатору) дважды по 25 мл на электровстряхи-вателе по 10 мин. Хлороформные извлечения объединяли, фильтруя через мелкопористый стеклянный фильтр с безводным натрия сульфатом. Объем доводили в мерной колбе хлороформом до 50 мл (V;). 5 мл (1/10 часть извлечения — V2) концентрировали и количественно наносили на стартовую линию хроматографической пластинки в виде полосы длиной 1,5-2 см. Одновременно наносят внешний метчик — стандартный раствор кетотифена 1 мкг/мл в хлороформе и внутренний метчик 2мл (1/25 часть) полученного извлечения в виде точек. Хроматографируют в указанных выше условиях. Кетотифен детектируется в виде фиолетовых пятен при экспонировании в УФ — 254 нм.
Зоны метчиков для подтверждающего исследования обрабатывают реактивом Драгендорфа (пятна приобретают желто-оранжевую окраску). Зону кетотифена, выделенного из биообъекта для количественного определения снимают и элюируют 10 мл 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной 2 раза по 5 мл (V3). Измеряют оптическую плотность элюата при длине волны 300 нм в 1 см кювете. Раствор сравнения — элюатв0,1 М растворе кислоты хлористоводородной с контрольного участка хроматограммы. Количество вещества в пробе рассчитывали по формуле: X _ DxV1 xV2 x1000x 1000 _ x l x100 x V
X—количество вещества в пробе, мкг;
D — значение оптической плотности;
ES — удельный показатель поглощения; l —толщина поглощающего слоя, см;
V1 — объем 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной, взятый для количественного определения, мл;
V2 — общий объем хлороформного извлечения, мл;
V — объем хлороформного извлечения, взятого для
количественного определения, мл.
Полученные результаты представлены в таблице 1.
Таблица 1.
Метрологические характеристики результатов количественного определения кетотифена в печени
58,38
S
1,64
Sx
0,73
1,56
2,67
После измерения оптической плотности элюата снимают УФ-спектр. Затем раствор из коветы подщелачивают 25% раствором аммиака до рН 10-11 и извлекают 5 мл хлороформа. Снимают спектр полученного хлороформного экстракта, раствор сравнения — хлороформ. Далее раствор из кюветы переносят в выпарительную чашку, хлороформ
испаряют досуха. Остаток растворяют в 5 мл 95% этанола и вновь снимают спектр — раствор сравнения 95% этанол.
Для проведения подтверждающего исследования методами ИК-спектроскопии, ВЭЖХ и ГХ/МС элюаты по 5 мл 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной с пластинки после хроматографирования аликвот (по 5 мл хлороформного экстракта) реэкстрагируют равным объемом хлороформа при рН 10-11. Хлороформный слой отделяют и выпаривают досуха. Сухой остаток исследуют в ИК-области спектра. Для ВЭЖХ сухой остаток растворяют в 1 мл элюента и 5 мкл этого раствора исследуют. Для ГХ/МС—в 100 мкл 95% этанола и 1 мкл берут на исследование.
Заключение
Предложенная методика изолирования и доказательства позволяет выделить из ткани печени до 61% кетотифена из 50 г органа при содержании в нем от 5 до 10 мг анализируемого вещества.
Литература:
1. Балткайс Я.Я., Фатеев В.А. Взаимодействие лекарственных веществ. — М.: Медицина, 1991. — 304 с.
2. Говорова Е.Г., Хомов Ю.А, Кокшарова Н.В. Аналитическое изучение кетотифена с применением методов ВЭЖХ, ИК- и УФ-спектроскопии // Актуальные проблемы медицины и фармации. — Курск: КГМУ, 1999. — С. 289-291.
3. Говорова Е.Г., Хомов Ю.А., Кокшарова Н.В. ВЭЖХ-метод определения кетотифена // Науки о человеке. Матер. III конгресса молодых ученых и специалистов. — Томск, 2002. — С. 212.
4. Говорова Е.Г., Хомов Ю.А., Кокшарова Н.В. Хроматографическое обнаружение кетотифена в моче // Науки о человеке. Матер. I конгресса молодых ученых и специалистов. — Томск, 2000. — С. 135.
5. Кригер О.В., Могутов С.В., Бутовский Д.И. и др. Судебно-медицинская экспертиза смертельных отравлений наркотическими веществами // Суд.-мед. эксперт. — 2001. — №2. — С. 9-14.
6. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: ООО «Издательство Новая Волна», 2000. — Т.1. — Изд. 14. — С. 289.
7. Саломатин Е.М., Николаева Э.Г. Судебно-химический анализ трупного материала на наличие лекарственных и наркотических соединений // Суд.-мед. эксперт. — 1999. — №3. — С. 21-22.
8. Соседко Ю.И., Богомолов Д.В., Николкина Ю.А., Пиголкин Ю.И. Диагностика смертельных отравлений некоторыми веществами, используемыми токсикоманами // Суд.-мед. эксперт. — 2000. — №6. — С. 15-16.
9. Справочник. Лекарственные средства, применяемые в медицинской практике в СССР / Под ред. М.А.Клюева. М.: Медицина, 1989. — 512 с.
10. Томилин В.В., Саломатин Е.М. Современное состояние и перспективы развития химико-токсикологических (судебнохимических) исследований в Российской Федерации // Суд.-мед. эксперт. — 2001. — №3. — С. 28-33.
11. Хомов Ю.А., Говорова Е.Г., Кокшарова Н.В. Количественное определение кетотифена в моче // VIII Росс. национ. конгресс «Человек и лекарство» Москва, 2001. — С. 499.
12. Хомов Ю.А., Говорова Е.Г., Кокшарова Н.В. Определение кетотифена в крови // IX Росс. национ. конгресс «Человек и лекарство» Москва, 2002. — С. 716.
13. Хомов Ю.А., Говорова Е.Г., Кокшарова Н.В. Определение константы ионизации кетотифена спектрофотометрическим методом // Лабораторное дело. Организация и методы исследований. Матер. Всерос. н.-п. конф. Пенза, 2001. — С. 15-16.
14. Хомов Ю.А., Говорова Е.Г., Кокшарова Н.В. УФ-спектрофотометрический метод анализа кетотифена в биологических субстратах // Молодые ученые Волго-Уральского региона на рубеже веков. Матер. юб. науч. конф. — Уфа, 2001. — С. 219-220.
15. Хомов Ю.А., Говорова Е.Г., Кокшарова Н.В., Бенкиб Ф. Изучение степени экстракции кетотифена в зависимости от рН среды и природы органического растворителя // Актуальные проблемы фарм. науки и образования: итоги и перспективы. Матер. межвуз. юб. н.-п. конф. посвящ. 85-лет. высш. образ. на Урале. — Пермь, 2001. — С. 85-86.
16. Хомов Ю.А., Кокшарова Н.В., Говорова Е.Г. Исследования по обнаружению кетотифена при химико-токсикологических анализах// Матер. юб. межвуз. конф. «Актуальные вопросы подготовки фармацевтических кадров». — Томск, 2000. — С. 96-101.
17. Хомов Ю.А., Кокшарова Н.В., Говорова Е.Г. К анализу кетотифена // Фармация в XXI веке. Инновации и традиции. — С.-Петербург. — 1999. — С. 252.
18. Хомов Ю.А., Кокшарова Н.В., Говорова Е.Г. Обнаружение кетотифена в моче. // Актуальные проблемы теории и практики фармации. Сб. науч. статей. — Барнаул: Изд-во Алт. ун-та, 2000. — С. 53-56.
19. Энциклопедия лекарств / Под ред. Ю.Ф. Крылова. — М.: изд. «РЛС-2000». — 2000. — Изд. 7. — С. 426.
20. Clarkes isolation and identification of drugs in pharmaceuticals, body fluids and post-mortem material. Second Edition / Ed. A.C. Moffat. — London: The pharmaceutical prese. — 1986. — Vol. 1, 2. — 1173 p.
