CC BY
75
Экология и биология паразитов
УДК 619:616.995.132.6
ОБЕЗВРЕЖИВАНИЕ ЛИЧИНОК ТРИХИНЕЛЛ В МЫШЕЧНОЙ ТКАНИ ЖИВОТНЫХ МЕТОДОМ ГЛУБОКОГО ЗАМОРАЖИВАНИЯ
О.Н. АНДРЕЯНОВ кандидат ветеринарных наук
Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им.
К.И. Скрябина, г. Москва, Б. Черемушкинская, 28, e-mail: [email protected]
При глубоком замораживании (- 70 оС) в течение 1-16 ч мышц животных разных видов (обыкновенная лисица, белая крыса, мышь) достигается потеря двигательной активности мышечных личинок трихинелл Trichinella spiralis spp., гибель личинок происходит через 32 ч. При этом у личинок отмечают признаки отслоения кутикулы, нарушение целостности кишечной и половой систем.
Ключевые слова: Trichinella spiralis, мышца, жизнеспособность, замораживание, лисица, Рязанская область.
Дикие животные, особенно хищные млекопитающие, часто бывают заражены генетически устойчивыми к низким температурам видами трихинелл Trichinella spiralis spp. При замораживании и хранении в бытовых холодильниках мяса плотоядных и свиней личинки отдельных видов и изолятов трихинелл длительное время сохраняют жизнеспособность и инвазионность [4]. Резистентность к замораживанию является определяющим фактором в распространении трихинелл в разных географических зонах [8, 10]. Для идентификации видов трихинелл Боев [2] и Бритов [3] используют метод замораживания при температуре минус 10-12 °С, при которой Т. nativa в мышцах крыс сохраняет инвазионность в течение 9-14 мес.
Имеются различные данные о выживаемости личинок трихинелл в свинине при различных режимах замораживания от минус 10 до минус 50 °С [1]. Это связано с тем, что различные виды и изоляты трихинелл различаются устойчивостью к низким температурам в зависимости от возраста личинок и физиологического состояния хозяина, а также режима замораживания и размера кусков мяса[6, 8].
Международная комиссия по трихинеллезу (МКТ) в качестве профилактики рекомендует инактивировать личинки в свинине при минус 17,8 °С в течение 106 ч, при минус 23,3 °С - 63 ч, а при минус 28,9 °С - 35 ч (при условии достижения этой температуры внутри куска мяса). Замораживание свинины при минус 15 °С в зависимости от величины кусков рекомендуется проводить в течение не менее 3-4 нед [5].
Известно, что наиболее устойчивы к длительному действию низкой температуры личинки T. spiralis, паразитирующие у диких животных, особенно плотоядных. Личинки трихинелл, выделенные из мышц волка методом переваривания после хранения при минус 20 оС в течение 6 мес, продолжали заражать мышей, в то же время эти личинки погибали в мышцах через 5 сут при замораживании при минус 10 °С [12].
Следовательно, с точки зрения проведения профилактических мероприятий трихинеллеза практический интерес представляет устойчивость к замораживанию личинок трихинелл, локализованных в мышечной ткани плотоядных.
Материалы и методы
Изолят T. spiralis spp. получали методом переваривания в искусственном желудочном соке (ИЖС) мышц обыкновенных лисиц, добытых в Рязанской области (рис. 1). Для опыта использовали 7 естественно инвазированных тушек лисиц. Размножение этих изолятов проводили на десяти белых беспородных крысах и десяти мышах.
Рис. 2. Мышечный срез диафрагмы под компрессорием (оригинал, объектив х 8, окуляр х 3)
Изолят T. spiralis от свиньи (Белорусский) в течение многих лет поддерживали в ВИГИСе на белых беспородных мышах и крысах. Он обладает невысокой устойчивостью к замораживанию в тушках лабораторных животных [7, 9], нами использовался для сравнения.
Беспородных мышей и крыс инвазировали природным и лабораторным изолятом личинок трихинелл в дозе 10 личинок на 1 г массы животного. Тушки неошкуренных животных, инвазированные трихинеллами, помещали в морозильник при минус 70 °С. В опыте был использован Био-Медицинский морозильник MDF-U537D фирмы SANIO (Япония). Исследования проводили в течение двух с половиной месяцев.
Жизнеспособность личинок трихинелл рассчитывали отношением подвижных личинок к общему числу выделенных [11]. После переваривания в ИЖС и промывания осадка от каждой пробы проверяли двигательную активность личинок методом инкубирования в термостате при 37 оС в течение 20 мин в подогретом до той же температуре физиологическом растворе, и изучали морфологические изменения в структуре гельминтов. Учитывали физиологическое состояние выделенных личинок: целостность покровов, форму и подвижность. Для уточнения минимального времени инактивации трихинелл при замораживании заражали белых мышей выделенными личинками (100 личинок на голову). Учет биопробы проводили через 45 сут после заражения методом переваривания в ИЖС целой тушки животного.
Результаты и обсуждение
Результаты исследований приведены в таблицах 1 и 2. Во время глубокого замораживания тушек исследованных животных в морозильнике жизнеспособность личинок трихинелл была различной. Так, при замораживании тушки обыкновенной лисицы, инвазированной трихинеллами естественным способом, жизнеспособность личинок T. spiralis сохранялась на протяжении 4 ч без изменений и составляла 100 %. Затем жизнеспособность личинок стала снижаться и через 8 ч она составила 80 %. К 16 ч жизнеспособных личинок 48
трихинелл природного изолята выделилось 15 %. Через 32 ч все личинки в мышечной ткани плотоядного погибли. У выделенных личинок трихинелл наблюдали признаки отслоения кутикулы, вакуолизацию, нарушение целостности кишечной и половой систем.
1. Жизнеспособность (%) личинок трихинелл в мышечной ткани тушек _животных после замораживания при минус 70 °С_
Время нахо- Природный изолят трихинелл (ли- Лабораторный изолят
ждения ма- сица обыкновенная) трихинелл (белорус-
териала в ский)
морозильной лисица крыса бе- мышь крыса мышь бе-
камере, ч обыкновен- лая Vistar (1 белая (1 белая лая беспо-
ная пассаж) пассаж) Vistar родная
1 100 96,1 24 81 5,2
2 100 65,7 0 26,3 0
4 100 7,6 0 0 0
8 80 0 0 0 0
16 15 0 0 0 0
32 0 0 0 0 0
Контроль(без 100 99,2 100 98,7 99,1
заморозки)
2. Число выделенных ^ личинок трихинелл от белой мыши (биопроба)
Изолят трихинелл Время нахождения инвазионного материала в
морозильнике, ч
0(контроль) 1 2 4 8 16
Природный лисица 315 274 291 97 117* 108*
(лисица обык- крыса 281 163 89 122* - -
новенная) мышь 290 95* - - - -
Лабораторный крыса 798 682 291* - - -
(белорусский) мышь 824 302* - - - -
* - доза личинок трихинелл - 20-50 на мышь.
В тушках белых крыс природный изолят T. spiralis в течение 1, 2 и 4 ч выделялся с жизнеспособностью 96,1; 65,7 и 7,6 % соответственно (рис. 2, 3). После дальнейшей экспозиции в морозильнике тушки крыс оказались обезврежены.
Рис. 2. Мышечные личинки трихинелл природного изолята в мышечной ткани контрольных животных (беспородная белая мышь, объектив х 9, окуляр х 2)
Рис. 3. Мертвая и жизнеспособная личинки трихинелл после глубокого замораживания мышечной ткани (оригинал, объектив х 9, окуляр х 4)
В тушках мышей личинки дикого изолята трихинелл выдержали глубокое замораживание только 1 ч (жизнеспособность 24 %), после 2 ч все личинки в тушках грызунов погибли.
Лабораторный (белорусский) изолят мышечных личинок T. spiralis имел другие свойства. В крысах личинки трихинелл сохраняли жизнеспособность на 81 и 26,3 % после 1 и 2-часовой экспозиции в морозильной камере. В мышах через 1 ч глубокого замораживания жизнеспособность личинок составила 5,2 %. При дальнейшем нахождении тушек при минусовой температуре мышечная ткань лабораторного изолята гельминта оказалась обезвреженной.
При исследовании инвазионной активности личинок трихинелл после глубокого замораживания в тушках исследуемых животных на белых мышах оказалось, что жизнеспособные личинки также были инвазионными. Трихинеллы от лисицы на протяжении 2 ч воспроизводили продуктивность от 100 введенных личинок через рот одинаково, по сравнению с контролем (табл. 2). Далее продуктивность снижалась и составила 97 и 117 личинок на 4 и 8 ч замораживания. Природный изолят личинок трихинелл от лисицы через 16 ч смог воспроизвести только 108 мышечных личинок. В тушках крыс репродуктивная способность личинок снизилась после глубокого замораживания: через 1, 2 и 4 ч после пребывания тушки животного в морозильнике воспроизводство личинок трихинелл сильно снизилось в 1,7; 3,1 и 2,3 раза (281 личинка - в контрольной мыши). В мышечной ткани мыши через 1 ч было менее 100 личинок гельминта. После экспонирования на контрольную мышь мороженный изолят воспроизвел 95 мышечных личинок трихинелл.
Лабораторный изолят трихинелл на крысах через 1 ч после глубокого замораживания воспроизвел 682 личинки. Через 2 ч нахождения тушки при минус 70 оС выпало в осадок всего 291 мышечная личинка трихинеллы (798 личинок в контроле). На инвазированных трихинеллами мышах уже через 1 ч замораживания выделилось менее 100 мышечных личинок.
Таким образом, трихинеллы в мышечной ткани устойчивы к низким температурам. При обычной температуре замораживания инвазированного мяса (минус 8 °С) личинки T. spiralis северных изолятов выживают месяцы. Глубокое замораживание при минус 70 °С тушек лисицы, беспородной белой крысы и мыши природного изолята T. spiralis spp. из Рязанской области показало высокую резистентность мышечных личинок к низким температурам. Жизнеспособность личинок в мышечной ткани сохранялась на протяжении 16 ч в лисице, 4 ч в крысе и 1 ч в мыши. Репродуктивная способность трихинелл природного изолята после замораживания сократилась в 2,3 раза. Лабораторный изолят личинок трихинелл в мышечной ткани тушек лабораторных животных сохранял жизнеспособность не более одного часа в мышах и двух часов в крысах.
Литература
1. Бессонов А.С. Обезвреживание свинины, мясных боенских отходов и тушек пушных зверей при обнаружении трихинелл // Науч. тр. ВАСХНИЛ «Трихинеллез». - М.: Колос, 1976. - 274 с.
2. Боев С.Н., Бритов В.А. Трихинеллы и трихинеллез. - Алма- Ата, 1978.
- С. 17-35.
3. Бритов В.А. Возбудители трихинеллеза. - М.: Наука, 1982. - 271 с.
4. Гаркави Б.Л. Трихинеллез, вызываемый Trichinella pseudospiralis (морфология и биология возбудителя, эпизоотология и эпидемиология, диагностика, меры борьбы и профилактика) // Рос. паразитол. журн. - 2007. - № 2.
- С. 35-116.
5. Рекомендации международный комиссии по трихинеллезу (МТК) по методам борьбы с трихинеллезом домашних и диких животных, мясо которых употребляется в пищу человеком // Ветеринария. - 2001. - № 8. - С. 5763.
6. Скворцова Ф.К. Устойчивость личинок T. spiralis и T. pseudospiralis во внешней среде // Матер. докл. науч. конф. Всерос. о-ва гельминтол. РАН «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - 2003. - Вып. 4. -С.414-415.
7. Скворцова Ф.К. Методика получения инвазионного материала для наработки антигена трихинелл // Тр. Всерос. ин-та гельминтол. - 2006. - Т. 42. -С.599-605.
8. Скворцова Ф.К. Резистентность Trichinella spiralis и Trichinella pseudospiralis в мышцах домашней свиньи к низким температурам // Матер. докл. науч. конф. Всерос. о-ва гельминтол. РАН «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - 2007. - Вып. 8. - С. 335-337.
9. Скворцова Ф.К. Резистентность к низким температурам изолятов трихинелл как признак характеристики видов // Матер. докл. науч. конф. Всерос. о-ва гельминтол. РАН «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - 2009. - Вып. 10. - С. 374-376.
10. Скворцова Ф.К., Андреянов О.Н. Резистентность к низким температурам трихинелл от лисицы обыкновенной // Матер. докл. науч. конф. Всерос. о-ва гельминтол. РАН «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - 2009. - Вып. 10. - С. 377-379.
11. Скворцова Ф.К., Андреянов О.Н., Гребенкина Л.А. Методика определения жизнеспособности и инвазионности личинок трихинелл. - М., 2009. - 8 с.
12. Pozio E.G, Rossi La Rosa P., Murrel K.D. Biological characterization of Trichinella isolates from various host species and geographical regions // J. Parasi-tol. - 1992. - V. 78. - P. 647-653.
Neutralization of Trichinella spiralis larva in muscular tissue of animals by the method of deep freezing
O.N. Andrejanov
At deep freezing (- 70 оС) during 1-16 h muscles of animal (the ordinary fox, a white rat, the mouse) is reached loss of impellent activity and reproductive ability of muscular larva Trichinella spiralis spp., the destruction of larvae occurs through 32 h. Thus at larvae infringement of integrity of intestinal and sexual systems is observed signs of peeling of a cuticle.
Keywords: trichinella, muscular tissue, impellent activity, deep freezing, fox, Ryazan region.
