Научная статья на тему 'Обеспечение сохранности антигенных и генетических свойств штаммов возбудителей бруцеллёза'

Обеспечение сохранности антигенных и генетических свойств штаммов возбудителей бруцеллёза Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

CC BY
243
57
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
БРУЦЕЛЛЁЗ / ШТАММ / ГЕНЕТИЧЕСКИЕ / ОСВЕЖЕНЫ / КУЛЬТИВИРОВАНИЕ / BRUCELLOSIS / STRAIN / GENOTYPING / RECULTIVATED / CULTIVATION

Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Панкова Е. В.

Изучены жизнеспособность, тинкториально-морфологические, культурально-биохимические и агглютинабильные свойства 16 штаммов бруцелл, эти штаммы освежены, размножены и лиофилизированы.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по ветеринарным наукам , автор научной работы — Панкова Е. В.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

STORAGE CONDITION SUPPLY OF BRUCELLOSIS STRAIN’S ANTIGENIC AND GENETIC FEATURES

16 brucella strains were studied for their livibility, tinctorial and morphological, culture and biochemical and agglutinational features. The strains were recultivated multiplied and lyophilized.

Текст научной работы на тему «Обеспечение сохранности антигенных и генетических свойств штаммов возбудителей бруцеллёза»

предприятия / Кожемяка Н.В., Кудрявцев Ф.С., Грошева Г.А. и др. - М.: Колос, 1982. - 303 с.

ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНЫЕ МЕРОПРИЯТИЯ В ИНДЕЙКОВОДСТВЕ

Николаев Н. В.

Резюме

Рассмотрены основные ветеринарно-санитарные мероприятия, проводимые в индейководческом хозяйстве с целью обеспечения его эпизоотического благополучия.

VETERINARY AND SANITARY MEASURES IN TURKEY FARMING

Nikolaev N.V.

Summary

The basic veterinary and sanitary measures carried out in the turkey farm for its epizootic wellbeing are considered.

УДК 619:576.807.7

ОБЕСПЕЧЕНИЕ СОХРАННОСТИ АНТИГЕННЫХ И ГЕНЕТИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ШТАММОВ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ БРУЦЕЛЛЁЗА

Панкова Е.В.

ФГБУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных, г. Казань

Ключевые слова: бруцеллёз, штамм, генетические, освежены, культивирование.

Key words: brucellosis, strain, genotyping, recultivated, cultivation.

Бруцеллез - зоонозная инфекция, вызываемая бактериями, объединёнными под общим родовым названием Brucella, которые передаются человеку от больных животных (2). По различиям некоторых биологических свойств и способности паразитировать преимущественно в организме определённых видов животных (главным образом по эпизоотологическим и эпидемиологическим признакам) род «Brucella» подразделён на 6 видов: B. melitensis, B. abortus, B. suis, B. neotome, B. ovis, B. canis .(1)

Бруцеллёз является одной из особо опасных инфекционных болезней, наносящих значительный экономический ущерб животноводству и представляющих большую угрозу здоровью человека. В России

бруцеллёз регистрируется у сельскохозяйственных и домашних животных (крупный рогатый скот, овцы, козы, северные олени и др.).

На сегодняшний день установлено, что основная передача возбудителя от больных животных здоровым происходит при контаминации бруцеллами объектов окружающей среды за счёт выделений больных животных (3, 4).

Важнейшим и перспективным методом борьбы с инфекционными болезнями является иммунопрофилактика. Опыт 50-летней борьбы с бруцеллёзом в РФ также доказывает исключительную роль специфической профилактики (6).

Известно, что при формировании противобруцеллёзного иммунитета антителам принадлежит не ведущая, а вспомогательная роль, которые в создании противобруцеллёзного иммунитета никакого участия не принимают(5).

Одним из важнейших противобруцеллёзных мероприятий является диагностика болезни.

Производство диагностических и вакцинных препаратов требует сохранять стабильность антигенных и генетических свойств эталонных, производственных и музейных штаммов возбудителей бруцеллеза.

В этих целях необходимо периодическое освежение, оценка антигенных и генетических свойств согласно методикам, рекомендованным ФАО/ВОЗ (1993 г.).

Материалы и методы. Нами была проведена проверка условий хранения штаммов возбудителей бруцеллеза, пересчет количества ампул с лиофилизированной микробной массой. При этом обращали внимание на целостность ампул и сохранность этикеток. Все штаммы хранятся в металлических контейнерах в холодильниках при температуре + 4 + 60 С, проверенные ампулы сохранили целостность.

Изучение культурально-морфологических, тинкториальных, биохимических и агглютинабельных свойств штаммов бруцелл проводили по методикам, рекомендованным ФАО/ВОЗ, 1993 г.

Для изучения были взяты следующие штаммы бруцелл:

- B. abortus: 163, 316, 15, 208 и НИВИ Казань-86;

- B. melitensis: 498-Т, 356, 2503 и Кожевников;

- B. rangiferi: 0277, 030, 0315;

- B. suis: 1908, 12, 002, 4;

Культивирование бруцелл проводили с использованием мясо-пептонного печеночного глюкозо-глицеринового бульона (ППГГБ), мясо-пептонного печеночного глюкозо-глицеринового (ППГГА) и триптозного агара.

Взятые для изучения ампулы с возбудителями бруцеллеза вскрывали, суспендировали содержимое в 1 мл ППГГБ и проводили посев в пробирки с агаром. Для изучения соответствия свойств бруцелл

паспортным данным использовали 2-х суточные культуры бруцелл 2 и 3 генерации.

Штаммы возбудителя бруцеллеза проверяли на диссоциацию в реакции агглютинации на стекле со специфическими сыворотками, термоагглютинацией, пробой с акрифлавином и методом Уайт-Вилсона. Результаты исследований приведены в таблице 1.

1. Диссоциация штаммов бруцелл

№ п/п Наименование штамма РА с сывортками Проба с акрифла вином Термо- агглютинация

S - сыворотка R - сыворотка

1 B. abortus 163 + - - -

2 B. abortus 316 + - - -

3 B. abortus 15 + - - -

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

4 B. abortus 208 + - - -

5 B. abortus НИВИ Казань - 86 +

6 B. melitensis 498-Т + - - -

7 B. melitensis 356 - + - +

8 В. melitensis 2503 + - - -

9 B. melitensis Кожевников +

10 B. rangiferi 0277 + - - -

11 B. rangiferi 030 + - - -

12 B. rangiferi 0315 + - - -

13 B. suis 1908 + - - -

14 B. suis 12 + - - -

15 B. suis 002 + - - -

16 B. suis 4 + - -

Из таблицы 1 видно, что все штаммы бруцелл, кроме штамма В. шеШе^Б 356, не имеют признаков диссоциации, находятся в Б-форме. Штамм В. шеШе^Б 356 имеет такие реакции согласно паспортным данным и является Я-формой.

Дальнейшие исследования проводили, отбирая Б-формы колоний бруцелл методом Уайт-Вилсона. Для этого готовили 1 млрд. взвесь бруцелл на стерильном физиологическом растворе согласно отраслевому стандартному образцу мутности ГИСК им. Тарасевича с последующим разведением до 10 6 и 105 м.к., которую рассевали по 0,2 мл на чашки Петри с триптозным агаром. Четырех -, пяти - суточные колонии заливали раствором кристаллического фиолетового на 30 сек, затем краситель сливали в дезинфицирующий раствор, а колонии просматривали под микроскопом. Б-колонии - краситель не воспринимают или имеют только ободок красителя, а колонии находящиеся в Я-форме - окрашиваются в фиолетовый цвет. Колонии Б-форм отсевали на пробирки с ППГГА, в

случае со штаммом В. шеШе^Б 356, отсевали Я-формы колоний.

Агглютинабельные свойства штаммов бруцелл исследовали в РА с антибруцеллезными «Б», «Я» и моноспецифическими «А», «М»

сыворотками.

Для проверки видоспецифических признаков штаммов бруцелл были проведены посевы на питательные среды с анилиновыми красителями: фуксином (в разведении 1:50 тыс.; 1:100 тыс.) и тионином (1:25 тыс.; 1:50 тыс.; 1:100 тыс.).

Кроме того, проводились тесты на образование сероводорода. Приготавливали 2-х млрд. взвесь двухсуточной культуры, которую засевали на поверхность скошенного агара (ППГГА). В пробирки с испытуемыми культурами поместили подсушенные полоски фильтровальной бумаги с насыщенным раствором уксуснокислого свинца.

Результаты исследований. Результаты биохимических исследований штаммов представлены в таблице 2.

2. Биохимические и серологические свойства изучаемых культур

№ п/п Наименование штаммов Brucella Обра зов. H2S РА с сыворотками Рост на средах с красками

антбруцел лезные моноспе- цифические фуксин тионин

S R A M 1:50 1:100 1:25 1:50 1:100

1 B. abortus 163 - + - + - + + - - -

2 B. abortus 316 + + - + - + + - - -

3 B. abortus 15 + + - + - + + - + +

4 B. abortus 208 + + - + - + + - - -

5 B. abortus НИВИ Казань-86 + + - + - + + + + +

б B. melitensis 498Т - + - - + + + + + +

7 B. melitensis 356 - - + - - + + + + +

В В. melitensis 2503 - + - - + + + + + +

9 B. melitensis Кожевников + + + + + + +

10 B. rangiferi 0277 + + - + + - + - - +

11 B. rangiferi 030 + + - + + + + + + +

12 B. rangiferi 0315 + + - + + + + + + +

13 B. suis 1908 + + - + - + + + + +

14 B. suis 12 - + - + + - + + + +

15 B. suis 002 - + - + + - + + + +

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

1б B. suis 4 - + - + + - + + + +

Обозначение «+»указывает на очень слабый рост. Все изученные свойства, приведенные в таблице 2, соответствуют паспортным данным.

По окончании исследований нами проведена лиофилизация микробной массы бруцелл в сахарозо-желатиновой среде. После лиофилизации каждый штамм проверили на жизнеспособность и чистоту популяции. Все ампулы запаяли, этикетировали и заложили на хранение согласно описи.

Выводы. Изучены жизнеспособность, тинкториально-морфологические, культурально-биохимические и агглютинабильные свойства 16 штаммов бруцелл, установлено соответствие их паспортным данным. Эти штаммы освежены, размножены, лиофилизированы, вновь проверены на жизнеспособность и однородность популяции и заложены на хранение.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Вершилова, П. А. Бруцеллёз/ П.А. Вершилова. -М., 1972. 2.Вершилова, П.А. Патогенез и иммунология бруцеллёза/ П.А.Вершилова, М.И.Чернышева, Э.Н Князева. - М., 1974. - 6 с. 3. Григорьева, Г.И. Бруцеллы и бруцеллёз/ Г.И.Григорьева, В.В Сочнев, Н.П.Бацанов, Н.В Филиппов и др // Микробиология, иммунология, биотехнология. - Н. Новгород: Нижегородская гос. с.-х. академия, 1998, 10

- с. 4. Иванов, Н.П. Бруцеллёз животных и меры борьбы с ним/ Н.П. Иванов/ 2-е изд. Испр., доп. - Алматы, 2007, 11 - с. 5. Плотникова, Э.М. Разработка тест - систем на основе био- и нанотехнологий при бруцеллёзе/ Э. М. Плотникова, Е. В. Панкова. Материалы Международной научно -практической конференции «От теории - к практике: вопросы современной ветеринарии, биотехнологии и медицины». - Саратов, 2011, 221 - 225 - с. 6.Триленко, П.А. Бруцеллёз сельскохозяйственных животных/ П.А. Триленко.- Л., 1976, 96 - с.

ОБЕСПЕЧЕНИЕ СОХРАННОСТИ АНТИГЕННЫХ И ГЕНЕТИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ШТАММОВ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ БРУЦЕЛЛЁЗА

Панкова Е. В.

Резюме

Изучены жизнеспособность, тинкториально-морфологические, культурально-биохимические и агглютинабильные свойства 16 штаммов бруцелл, эти штаммы освежены, размножены и лиофилизированы.

STORAGE CONDITION SUPPLY OF BRUCELLOSIS STRAIN’S ANTIGENIC AND

GENETIC FEATURES

Pankova E.V.

Summary

16 brucella strains were studied for their livibility, tinctorial and morphological, culture and biochemical and agglutinational features. The strains were recultivated multiplied and lyophilized.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.