Научная статья на тему 'Об использовании метода молекулярной диагностики для обнаружения энтеровирусов в вод, прошедшей обработку дезинфектантами'

Об использовании метода молекулярной диагностики для обнаружения энтеровирусов в вод, прошедшей обработку дезинфектантами Текст научной статьи по специальности «Биотехнологии в медицине»

CC BY
97
35
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ / ОТ-ПЦП / ЭНТЕРОВИРУС / ЭЛЮАТ / ЦИТОПАТИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ / КУЛЬТУРА КЛЕТОК / ИНФЕКЦИОННЫЕ ВИРУСЫ / OT ПЦП / POLYMERASE CHAIN REACTION METHOD / ENTEROVIRUS / ELUAT / ZITOTOCTIONS ACTION / CELL CULTURE / INFECTIOUS VIRUSES

Аннотация научной статьи по биотехнологиям в медицине, автор научной работы — Недачин А. Е., Дмитриева Р. А., Доскина Т. В., Долгин В. А., Лаврова Д. В.

Разработанный метод индикации вирусов в воде полностью отвечает современным требованиям даёт возможность для быстрого обнаружения инфекционных вирусов в воде источников, на этапах водоподготовки очистных сооружений, в питьевой воде.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по биотехнологиям в медицине , автор научной работы — Недачин А. Е., Дмитриева Р. А., Доскина Т. В., Долгин В. А., Лаврова Д. В.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

About USE OF A METHOD OF MOLECULAR DIAGNOSTICS FOR DETECTION ENTEROVIRUS IN WATERS, PAST PROCESSING DISINFECTIONS

The developed method of indication of viruses in water completely meets modern requirements enables for fast detection of infectious viruses in water of sources, at stages of water-preparation of clearing constructions, in potable water.

Текст научной работы на тему «Об использовании метода молекулярной диагностики для обнаружения энтеровирусов в вод, прошедшей обработку дезинфектантами»

Высокий уровень риска (особенно в летний период), полученный на основании расчета обобщенного показателя при прогнозировании заболеваемости населения г. Каттакургана кишечными инфекциями подтверждает водный фактор их передачи. В зимние месяцы оценка микробного риска характеризуется как повышенная (0,35-0,38), но значения С близки критическому уровню-0,4. Методика позволяет также вычленить из всех изученных санитарно-гигиенических факторов те факторы, фактический вклад которых в общий показатель оценки микробного риска наиболее значимый. Таким фактором в г. Каттакургане является состояние коммунального благоустройства. Остальные факторы имеют примерно одинако-

вое значение (по среднегодовым данным). Уровень достоверности прогноза составлял от 75 до 95%.

Впервые с использованием разработанной методики можно дать углубленную обобщенную оценку реальной бактериальной нагрузки, обусловленной водопользованием. Таким образом, разработанная методика оценки риска в зависимости от санитарно-гигиенических условий водопользования населения и реальной бактериальной нагрузки позволила не только прогнозировать изменение санитарно-эпидемической обстановки, но и вычленить основные факторы, которыми эти изменения обусловлены, обосновать противоэпидемические мероприятия, обеспечивающие безопасность водопользования.

Библиографический список

1. Рахманин, Ю.А. Итоги и перспективы научных исследований по проблеме экологии человека и гигиены окружающей среды / Ю.А. Рахманин, А.Е. Недачин, Ю.Г. Талаева [и др.]. - М., 2005

2. Craun, U.F. I.Environmental Haeif. - 2002. - № 65 (1).

З.Онищенко, Г.Г. Основы оценки риска для здоровья населения при воздействии химических веществ, загрязняющих окружающую среду / Г.Г. Онищенко, С.М. Новиков, Ю.А. Рахманин, С.Л. Авалиани, К.А. Буштуева / под ред. Рахманина Ю.А., Онищенко Г.Г. - М., 2002.

4. Руководство по питьевой воде. - Женева, 2004. - Т. 3. - Раздел 7.

5. Артемова, Т.З. Гигиеническое изучение биологического загрязнения окружающей среды: материалы IX Всесоюзной конференции / Т.З. Арте-мова, Ю.Г. Талаева, Б.С. Киселева. - М., 1988.

6. СанПиН 2.1.4.1074-01. Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества. - М., 2002.

7. Методические указания по эпидемической оценке санитарно-гигиенических условий в целях профилактики кишечных инфекций // Министерство здравоохранения СССР. - М., 1986.

8. МУК 4.2.1884-04 Санитарно-микробиологический и санитарно-паразитологический анализ воды поверхностных водных объектов. - М., 2005.

9.СанПиН 2.1.4.1175-02 Гигиенические требования к качеству воды нецентрализованного водоснабжения. Санитарная охрана источников: Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы. - М., 2003.

10. СанПиН 2.1.5.980-00 Водоотведение населенных мест, санитарная охрана водных объектов. Гигиенические требования к охране поверхностных вод. - М., 2001.

Bibliography

1. Rakhmanin, Yu.A. Itogi i perspektivih nauchnihkh issledovaniyj po probleme ehkologii cheloveka i gigienih okruzhayutheyj sredih / Yu.A. Rakhmanin, A.E. Nedachin, Yu.G. Talaeva [i dr.]. - M., 2005

2. Sraun, U.F. I.Environmental Haeif. - 2002. - № 65 (1).

3.Onithenko, G.G. Osnovih ocenki riska dlya zdorovjya naseleniya pri vozdeyjstvii khimicheskikh vethestv, zagryaznyayuthikh okruzhayuthuyu sredu / G.G. Onithenko, S.M. Novikov, Yu.A. Rakhmanin, S.L. Avaliani, K.A. Bushtueva / pod red. Rakhmanina Yu.A., Onithenko G.G. - M., 2002.

4. Rukovodstvo po pitjevoyj vode. - Zheneva, 2004. - T. 3. - Razdel 7.

5. Artemova, T.Z. Gigienicheskoe izuchenie biologicheskogo zagryazneniya okruzhayutheyj sredih: materialih IX Vsesoyuznoyj konferencii / T.Z. Artemova, Yu.G. Talaeva, B.S. Kiseleva. - M., 1988.

6. SanPiN 2.1.4.1074-01. Pitjevaya voda. Gigienicheskie trebovaniya k kachestvu vodih centralizovannihkh sistem pitjevogo vodosnabzheniya. Kontrolj kachestva. - M., 2002.

7. Metodicheskie ukazaniya po ehpidemicheskoyj ocenke sanitarno-gigienicheskikh usloviyj v celyakh profilaktiki kishechnihkh infekciyj // Ministerstvo zdravookhraneniya SSSR. - M., 1986.

8. MUK 4.2.1884-04 Sanitarno-mikrobiologicheskiyj i sanitarno-parazitologicheskiyj analiz vodih poverkhnostnihkh vodnihkh objhektov. - M., 2005.

9.SanPiN 2.1.4.1175-02 Gigienicheskie trebovaniya k kachestvu vodih necentralizovannogo vodosnabzheniya. Sanitarnaya okhrana istochnikov: Sanitar-

no-ehpidemiologicheskie pravila i normativih. - M., 2003.

10. SanPiN 2.1.5.980-00 Vodootvedenie naselennihkh mest, sanitarnaya okhrana vodnihkh objhektov. Gigienicheskie trebovaniya k okhrane poverkhnostnihkh vod. - M., 2001.

Статья поступила в редакцию 20.07.11

УДК 614.777:576.8.078

Nedachin A.E. About USE OF A METHOD OF MOLECULAR DIAGNOSTICS FOR DETECTION ENTEROVIRUS IN WATERS, PAST PROCESSING DISINFECTIONS. The developed method of indication of viruses in water completely meets modern requirements enables for fast detection of infectious viruses in water of sources, at stages of water-preparation of clearing constructions, in potable water.

Key words: polymerase chain reaction method, OT - ПЦП, enterovirus, eluat, zitotoctions action, cell culture, infectious viruses.

А.Е. Недачин, канд. мед. наук; Д.В. Лаврова, канд. мед. наук; Р.А. Дмитриева, канд. биол. наук; Т.В. Доскина, канд. мед. наук, ст. н.с.; В.А. Долгин, мл. науч. сотрудник лаборатории санитарной микробиологии и паразитологии ФГБУ «НИИ ЭЧ и ГОС им. А.Н. Сысина» Минздравсоцразвития России, г. Москва, E-mail: microblab@list.ru

ОБ ИСПОЛЬЗОВАНИИ МЕТОДА МОЛЕКУЛЯРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ЭНТЕРОВИРУСОВ В ВОД, ПРОШЕДШЕЙ ОБРАБОТКУ ДЕЗИНФЕКТАНТАМИ

Разработанный метод индикации вирусов в воде полностью отвечает современным требованиям даёт возможность для быстрого обнаружения инфекционных вирусов в воде источников, на этапах водоподготовки очистных сооружений, в питьевой воде.

Ключевые плова: полимеразная цепная реакция, ОТ-ПЦП, энтеровирус, элюат, цитопатическое действие, культура клеток, инфекционные вирусы.

В связи с постоянным антропогенным загрязнением объектов окружающей среды, и в первую очередь водных, чрезвычайно важной является проблема вирусного загрязнения воды поверхностных водоёмов, служащих источниками централизованного водоснабжения. В настоящее время известно более 140 видов различных вирусов передаваемых водным путем, обладающих значительно большей устойчивостью, способных проходить барьеры водоподготовки, что определяет формирование спорадической, сезонной, а также вспышеч-ной заболеваемости населения.

Использование санитарно-вирусологических методов исследования воды источников, питьевой воды позволяет получить данные, свидетельствующие о циркуляции вирусов в поверхностных и подземных водах и о возможности попадания их в распределительную сеть. По данным ряда исследователей, современные способы обработки воды не полностью удаляют энтеровирусы. Это представляет чрезвычайную опасность, т.к. известно, что минимальной инфицирующей дозы для человека является одна вирусная частица, проникновение которой в организм человека с питьевой водой может привести к заболеванию.

в организм человека с питьевой водой может привести к заболеванию.

Одной из важных проблем является совершенствование методов индикации вирусного загрязнения в объектах окружающей среды в отношении их чувствительности, экспресс-ности, специфичности, что способствует быстрому определению возбудителя и разработке ответных профилактических мероприятий.

На протяжении последнего времени различными исследователями предпринимаются попытки использования моле-кулярно-биологических методов для быстрой диагностики вирусных агентов в водных объектах, в частности для исследования эффективности обеззараживания воды на водоочистных сооружениях [1]. Так, были проведены исследования для изучения возможности использования ОТ-ПЦР для оценки степени инактивации вирусов в воде и объяснения механизма инактивации ВГА при хлорировании.

Действительно, методика индикации вирусов с использованием ОТ-ПЦР отвечает большинству требований, предъявляемых к вирусологическим методам исследования. Однако важным является ответ на вопрос о инфекционности вирусов, определяемых с использованием ОТ-ПЦР, т.к. зачастую в некоторых случаях после обеззараживания при анализе вирусная нуклеиновая кислота продолжает определяться в пробах, при этом вопрос об инфекционности, по нашему мнению, остаётся открытым.

Аналогичная проблема отмечается и при определении инфекционности вирусов в воде при анализе иммунно-ферментным методом (ELISA).

Исходя из этого, ряд авторов придерживается мнения, что методы молекулярной диагностики не могут быть использованы для оценки эффективности и механизма обеззараживания [1-5].

Определение инфекционности вирусов - наиболее важный и прямой показатель для оценки её эпидемической безопасности при последующем хозяйственном и питьевом использовании. Ответ о инфекционной безопасности пробы методами как ОТ-ПЦР, так и ELISA может быть установлен только при отсутствии вирусных частиц и их маркеров в исследуемом элюате.

Так, разными исследователями показано, что инактивация инфекционых вирусов при хлорировании наблюдается при содержании остаточного хлора в диапазоне 1,0-25,0 мг/л и времени воздействия 30 минут [2-4].

Jun Wen Li et al. [2] показано, что антиген вируса гепатита А, определяемый методом ELISA, перестаёт определяться при концентрации хлора 10 мг/л и времени воздействия 60 мин. Было высказано предположение, что отсутствие антигена вируса свидетельствует о потере его инфекционности. На наш взгляд это неверно, т.к. ИФА в тысячи раз менее чувствителен по сравнению с ОТ-ПЦР и РНК вируса определяется значительно дольше в пробе после удаления антигена [7]. Аналогичные данные получены Scarpino et al.. [3], что даёт возможность предположить, что мишень инактивации вирусов хлором может находиться не в капсидном белке, а скорее в нуклеиновой кислоте, определяемой в ОТ-ПЦР.

В работе Leveque et al [4] также для оценки механизмов обеззараживания вирусов была использована ОТ-ПЦР. Было показано, что при облучении УФ морской воды в течение 60 мин., вирус гепатита А (ВГА) не проявляет инфекционности при культуральном исследовании, но его РНК продолжает определяться в ОТ-ПЦР. В работе Han et al [5] опубликованы сходные результаты. Авторы этих работ также придерживаются мнения о некорректности использования только молекулярных методов для оценки эффективности обеззараживания воды от вирусов без определения их инфекционности. В сущности только традиционный «золотой стандарт» - культу-ральный метод позволяет сделать окончательный вывод о инфекционности и вирулентности определяемых вирусов, хотя для получения окончательного результата требуется от 1 до 3 недель.

Blackmer F. et al [6] сделана попытка применить интегрирование молекулярного и культурального методов для оценки эффективности обеззараживания воды (ИКК-ОТ-ПЦР). Стандартным культуральным методом показано, что полиовирус инактивируется 0,5мг/л свободного остаточного хлора через 2 минуты. Методом ИКК-ПЦР определяли вирусы на протяжении 8 мин. после начала воздействия этой концентрацией хлора. Для полной инактивации РНК требовалось 10 мин, и это свидетельствует, что время контакта с хлором необходимом для обеззараживания полиовирусов в 3-5 раз больше, чем при использовании только культурального метода. Цитопатиче-ское действие на культуре клеток наблюдали только через 14 дней, проводя при этом повторные пассажи вирусов для устранения неспецифичности цитопатического действия и подтверждающие их инфекционность.

Таким образом, данные различных исследователей свидетельствуют, что для получения положительных результатов методом ИКК-ПЦР необходимо всего 2 дня по сравнению с 14 днями при использовании культурального метода, причём было показано, что в большинстве случаев полная инактивация вирусов осуществлялась за 2-8 минут при содержании в воде 0,5 мг/л свободного остаточного хлора.

Интеграция культурального метода и ОТ-ПЦР даёт возможность объединить быстроту, чувствительность и специфичность ОТ-ПЦР с репрезентативностью культивирования вирусов в монослое атаптированных клеток, диагносцируя их инфекционность, что, в результате, позволяет быстро определить РНК патогенных энтеровирусов в низких концентрациях.

Исходя из приведенного можно сделать заключение, что ИКК ОТ-ПЦР более чувствительный и экспрессный метод для детекции инфекционных вирусов по сравнению с традиционным культуральным анализом, который можно применять при анализе воды после обеззараживания её хлором. Применение ИКК ОТ-ПЦР может оказаться более эффективным для определения минимального времени полной инактивации вирусов хлором, сводя также к минимуму количество ложноположи-тельных результатов, получаемых и при анализе на I-м пассаже в культуре ткани. Это является чрезвычайно актуальным

для практического использования, так как точное определение скорости инактивации вирусов в воде представляет особую важность для процесса водоподготовки на станциях и последующего обеспечения потребителей эпидемически безопасной водой.

В развитие этой проблемы нами были проведены исследования по изучению процессов обеззараживания вирусного загрязнения воды под воздействием различных доз УФ-облучения (УФО) и свободного остаточного хлора, используя предварительное концентрирование вирусов на поляризованных мембранных фильтрах ММК с последующим анализом на культуре клеток BGM, в ОТ-ПЦР и в ИКК ОТ-ПЦР.

Исследования проводили с использованием вирусов полиомиелита I типа LSc2ab и РНК-содержащих фагов MS-2 в качестве дополнительной модели вирусного загрязнения.

Пробы дехлорированной водопроводной воды, содержащей вирусы, облучали УФ в дозах 16, 25, 23, 40, 50 и 60 мДж/см2. После проведения УФО воды, заражение культуры клеток выявило инактивацию полиовируса во всех пробах, подвергавшихся облучению. Было показано, что даже доза УФО в 16 мДж/см2 вызывает инактивацию вирусов (табл. 1). В то же время методом ОТ-ПЦР было выявлено наличие РНК вирусов полиомиелита во всех пробах с дозами облучения от 16 до 60 мДж/см2.

Вирусологический анализ, проведенный методом ИКК-ОТ-ПЦР после 2-х суток инкубирования, показал наличие вирусов в пробах при облучении УФ от 16 до 40 мДж/см2. На 4-е сутки результат в этих вариантах опыта был также положительным в каждой второй повторности, что подтвердило наличие инфекционных вирусов, тогда как в пробах, облученных дозами 50 и 60 мДж/см2 в культуральной жидкости на 2 и

4 сутки РНК вирусов не было обнаружено. Это свидетельствует об отсутствии размножения вирусов в культуре клеток в этих пробах.

Данные об отсутствии инфекционных вирусов при облучении 60мДж/см2 были подтверждены анализом фагов MS-2, которые, являясь наиболее адекватными индикаторами вирусного загрязнения, так как имеют равную с энтеровирусами устойчивость к обеззараживающим агентам, отражают эффективность очистки воды и ее обеззараживания в отношении кишечных вирусов, не были обнаружены в этих пробах. Методом корреляционного анализа установлена статистически достоверная связь (Р=95%) между обнаружением колифагов и РНК инфекционных энтеровирусов, определяемых методом ИКК ОТ-ПЦР (к=0,63), в пробах воды, обработанных УФО.

Во второй серии аналогичных исследований были подтверждены закономерности, полученные в предыдущем опыте. Также, пробы воды подвергали комбинированной обработке: обрабатывали дозами 0,5мг/л свободного остаточного хлора (время контакта 30 минут), облучали УФ в дозах 16, 25 и 45 мДж/см2. В третьей серии экспериментов пробы водопроводной воды обрабатывали только хлором в дозах 0,5; 1,0 и 1,5мг/л свободного остаточного хлора (время контакта 30 минут).

Результаты исследования представлены в 2 и 3 таблицах. При заражении монослоя культуры клеток цитопатическое действие проявилось в I пассаже (при исключении неспецифической дегенерации клеток культуры) при дозе облучения 16 мДж/см2 и в III пассаже при дозах 25 и 45 мДж/см2. При дозе облучения 60 мДж/см2 наблюдается инактивация инфек-ционности вирусных частиц (Табл.2).

Таблица 1

Инактивация вирусов полиомиелита I типа LSc2ab и фагов MS-2 в воде при различных дозах УФ излучения

№ Доза облучения Врусы рт 1 РНК полиовируса Концентра-ция

пробы мДж/см2 LSc2ab на ОТ-ПЦР ИКК ОТ-ПЦР фагов MS-2

к-ре клеток ТЦД50/100мл 2-е сутки 4-е сутки БОЕ/100мл

1 0 1,4х103 + + + 100

2 1,1х103 + + + 80

3 16 - + + + 2

4 - + + - 3

5 25 - + + + 5,6

6 - + + - 0

7 30 - + + + 0

8 - + + - 3,2

9 40 - + + - 0

10 - + + + 3,6

11 50 - + - - 0

12 - + - - 0

13 60 - + - - 0

14 - + - - 0

Таблица 2

Инактивация фага MS-2 и вируса полиомиелита I типа LSc2ab при различных дозах УФ излучения и свободного остаточного хлора

№ п/п Доза УФО в мДж/см2 фаги MS-2 в БОЕ/ 100мл PV*-1 в ТЦД50/ 100мл PV*-1 в пассажах РНК PV

I II III ОТ-ПЦР ИКК ОТ-ПЦР

1 контроль 203 9,8х102 + - - + +

2 415 8,1х102 + - - + +

3 16 16 69 + - - + +

4 18,3 43 + - - + +

5 25 0 - - - + + +

6 6 - - - + + +

7 45 0 - - - + + +

8 0 - - - + + +

9 60 0 - - - - - -

10 0 - - - - - -

При проведении ОТ-ПЦР-анализа в стандартной постановке с пробами, обработанными 60 мДж2, положительный сигнал продуктов амплификации специфической последовательности кДНК энтеровирусов отсутствовал. Для проб, обработанных 16-45 мДж/см2 наблюдался положительный сигнал продуктов амплификации, то есть было выявлено отсутствие инактивации РНК данными дозами облучения, что подтверждается результатами других исследователей. Но опираясь только на эти данные нельзя сделать вывод об эпидемической опасности проб, положительных на РНК энтеровирусов, поэтому был проведен ИКК ОТ-ПЦР-анализ, результаты которого подтвердили наличие инфекционных энтеровирусов в пробах, обработанных дозами УФО 16-45 мДж/см2. Используя эти данные, можно говорить о присутствии в пробах РНК энтеровирусов, опасных в эпидемическом отношении. В пробах, облученных 60 мДж/см2 в культуральной жидкости РНК энтеровирусов не была обнаружена, то есть была выявлена инактивации РНК данной дозой облучения.

Данные свидетельствуют, что во всех вариантах эксперимента с использованием хлора (табл.3), как в сочетании с УФО, так и при изолированном его действии (УФО+С12; С12 в различных дозах) и использовании вирусологических культу-

ральных, молекулярных и интегрированного методов (ИКК-ОТ-ПЦР) были получены результаты, свидетельствующие о полной инактивации вирусов в этих пробах. Пробы, прошедшие обеззараживание в вышеуказанных комбинациях УФО и хлора не содержали ни инфекционных вирусов, ни РНК вирусов, ни РНК инфекционных вирусов (таблица 3).

На Рисунке 9 представлена динамика снижения концентрации полиовирусов и колифагов при обработке воды разными дозами УФО. Инактивация колифагов наблюдается при меньшей дозе УФО (45 мДж/см2), чем полиовирусов (60

мДж/см2).

Данные об отсутствии инфекционных вирусов при облучении УФО в дозе 60мДж/см2 были подтверждены результатами инактивации фагов MS-2, которые, являясь наиболее адекватными индикаторами вирусного загрязнения, отражают эффективность очистки воды и ее обеззараживания в отношении кишечных вирусов, не были обнаружены в этих пробах. Методом корреляционного анализа установлена статистически достоверная связь (Р=95%) между обнаружением колифа-гов и РНК инфекционных энтеровирусов, определенных методом ИКК ОТ-ПЦР (к=0,64), в пробах воды, обработанных УФО.

Таблица 3

Инактивация фага MS-2 и вируса полиомиелита I типа LSc2ab при различных дозах УФ излучения и свободного остаточного хлора

№ Доза УФО в мДж/см2, Фаги MS-2 PV*) PV*) в пассажах РНК PV

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

п/п и хлора в мг/л в Б0Е/100мл в ТЦД50/100мл I II III ОТ-ПЦР ИКК ОТ-ПЦР

1 16+С105 0 0 - - - - -

2 -30™ 0 0 - - - - -

3 25+С105 0 0 - - - - -

4 -30™ 0 0 - - - -

5 45+С1о,5 0 0 - - - -

6 -30™ 0 0 - - - - -

7 8 С10,5 -30™ 0 0 0 0 - - - - -

9 С11,0 0 0 - - - - -

10 -30™ 0 0 - - - - -

9 С11,5 -30™ 0 0 - - - - -

10 0 0 - - - - -

Примечание: *) PV - полиовирус;

0

полиовирусы колифаги

60

16 25 45

мДж/смл2

Рис. 9. Динамика убывания концентрации полиовирусов и колифагов при обработке воды разными дозами УФО

Приведенные данные свидетельствуют о высокой экс- По данным лабораторных исследований комбинирован-

прессности метода ИКК-ОТ-ПЦР по сравнению с культураль- ный метод является более чувствительным примерно на поря-

ным методом при определении полиовирусов в пробах воды, док, по сравнению с методом обнаружения вирусов на куль-

облученной УФ. Показано, что после обработки проб воды туре ткани [9].

УФ методом ИКК ОТ-ПЦР можно определить РНК инфекци- При анализе проб воды на наличие вируса гепатита А, ро-

онных энтеровирусов в пробах воды в течение 3 суток, а куль- тавирусов и других некультивируемых вирусов, нами разра-

туральным методом - только в течение 21 суток. ботан и рекомендуется для повышения надёжности контроля

Установлена воспроизводимая в повторностях статисти- эпидемической безопасности обработанной воды, выполнение

чески достоверная связь (Р=95%) обнаружения полиовирусов метода ОТ-ПЦР в комплексе с определением колифагов, что

методом ИКК ОТ-ПЦР и колифагов в пробах воды, обрабо- позволяет уже через 24 часа с большей достоверностью су-

танной УФО. дить о присутствии в воде живого вируса.

Таким образом, исследования показали, что чувствитель- Использование на первом этапе эффективных быстрых

ность метода ПЦР при определении вируса в воде, являющая- методов концентрирования вирусов, основанных на фильтро-

ся в тысячи раз выше по сравнению с ИФА, позволяет быстро вании воды через поляризованные мембраны, и на втором -

(в течение 12-24 часов) обнаружить в исследуемом материале методов ОТ-ПЦР в комплексе с колифагами и ИКК-ОТ-ПЦР

вирусную РНК, а также обладает высокой специфичностью и позволяет в короткие сроки (24-72 часа соответственно) опре-

чувствительностью, что чрезвычайно важно, учитывая низкую делять вышеперечисленные вирусы по сравнению с методом

концентрацию вирусов в воде [7]. прямого выделения вирусов на клеточных культурах ткани (3-

Для вирусов, размножающихся в чувствительных клеточ- 4 недели). ных культурах ткани, можно использовать комбинированную В соответствии с этими разработками, для практической

методику культивирования вирусов в перевиваемых клетках и службы страны предложены комплексные схемы определения

ПЦР [8]. Комбинированная методика с применением культу- вирусов в различных водах до и после обеззараживания,

ральных клеток и ПЦР позволяет в течение 48-72 часов опре- включающие анализ воды на наличие индикаторов вирусного

делить наличие вирусов в пробах воды, даже если они содер- загрязнения (колифагов) и РНК энтеровирусов с использова-

жатся в низких концентрациях, что во много быстрее, чем нием методов ПЦР и комбинированного с культуральными

традиционный культуральный метод. клетками ИКК-ОТ-ПЦР [10].

Библиографический список

1. Yoneyama, Li J. Genetic basis of the neurovirulence of type 1 polioviruses isolated from vaccine-associated paralytic patients. Arch. - Virol. - 1996.

2. Li, Jun Wen. Mechanism of Inactivation of Hepatitis A Virus by Chlorine. Appled and Environmental Microbiology. - Vol. 68. - № 10.

3. Scarpino, P.V. A comparative study of the inactivation of viruses in water by chlorine. - Water Res. - № 6.

4. Leveque, L. Virucidal effect of UV light on hepatitis A virus in seawater: evaluation with cell culture and RT-PCR. Water Sci. Technol. - № 31.

5. Han, Y.Q. Study of the relationship between PCR detection results and infectivity of HAV. Chin. J. Disinfect. - № 13.

6. Blackmer, F. Use of Integrated Cell Culture-PCR to Evaluate the Effectiveness of Poliovirus Inactivation by Chlorine. Applied and Environmental Microbiology, 2000. - Vol. 66. - № 5.

7. Материлы конференции 90-летия М.П. Чумакова. - М., 1999.

8. // Гигиена и санитария. - 2002. - № 1.

9. Материалы ВНПК «Окружающая среда и здоровье». - М., 2005.

10. Недачин, А.Е. Основы эпидемической безопасности питьевого водопользования населения России / А.Е. Недачин, Т.З.Артемова, Р.А. Дмитриева [и др.] // Сб., посвященный 80-летию НИИЭЧ и ГОС им. А.Н. Сысина РАМН. - М., 2006.

Bibliography

1. Yoneyama, Li J. Genetic basis of the neurovirulence of type 1 polioviruses isolated from vaccine-associated paralytic patients. Arch. - Virol. - 1996.

2. Li, Jun Wen. Mechanism of Inactivation of Hepatitis A Virus by Chlorine. Appled and Environmental Microbiology. - Vol. 68. - № 10.

3. Scarpino, P.V. A comparative study of the inactivation of viruses in water by chlorine. - Water Res. - № 6.

4. Leveque, L. Virucidal effect of UV light on hepatitis A virus in seawater: evaluation with cell culture and RT-PCR. Water Sci. Technol. - № 31.

5. Han, Y.Q. Study of the relationship between PCR detection results and infectivity of HAV. Chin. J. Disinfect. - № 13.

6. Blackmer, F. Use of Integrated Cell Culture-PCR to Evaluate the Effectiveness of Poliovirus Inactivation by Chlorine. Applied and Environmental Microbiology, 2000. - Vol. 66. - № 5.

7. Materilih konferencii 90-letiya M.P. Chumakova. - M., 1999.

8. // Gigiena i sanitariya. - 2002. - № 1.

9. Materialih VNPK «Okruzhayuthaya sreda i zdorovje». - M., 2005.

10. Nedachin, A.E. Osnovih ehpidemicheskoyj bezopasnosti pitjevogo vodopoljzovaniya naseleniya Rossii / A.E. Nedachin, T.Z.Artemova, R.A. Dmitrieva [i dr.] // Sb., posvyathennihyj 80-letiyu NIIEhCh i GOS im. A.N. Sihsina RAMN. - M., 2006.

Статья поступила в редакцию 20.07.11

УДК 614.7-07

Ponomareva O.Y., Budarina O.V., Belyaeva N.N. CELLULAR PARAMETERS OF RESPIRATORY SYSTEM FOR HYGIENIC EVALUATION OF AIR POLLUTION BY ODOROUS SUBSTANCES. The work presents the research results of cytological status of the mucous membranes of the nose and mouth of children living in areas where companies whose emissions have a smell, located; with the estimation of possible impact of air pollution by odorous substances on human health.

Key words: odorous substances, air pollution, cytological status, cellular parameters, organoleptic research.

О.Ю. Пономарева, врач по общей гигиене, ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии», г. Москва, E-mail: xenia_ponomareva@mail.ru; О.В. Бударина, ведущий научный сотрудник, канд. мед. наук, ФГБУ НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н. Сысина Минздравсоцразвития России, г. Москва, E-mail: vozduch2002@mail.ru; Н.Н. Беляева, руководитель лаборатории цитогистологии, д-р мед. наук, проф., ФГБУ НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н. Сысина Минздравсоцразвития России, г. Москва, E-mail: belnatnik@mail.ru

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.