Новый метод определения активности системы комплемента Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

НОВЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ СИСТЕМЫ КОМПЛЕМЕНТА

Черемных Е.Г., Кулешина О.Н., Фандеева Е.М.

МГУ Пищевых производств

Система комплемента играет важную роль во многих патологиях, связанных с иммунитетом. Она является важнейшим звеном иммунитета, активирует катаболизм циркулирующих иммунных комплексов и участвует в регуляции защитных функций организма. В эту систему входит около 30 взаимодействующих между собой белков сыворотки крови. Излишняя активация комплемента может приводить к катастрофическим последствиям, таким как анафилактический шок, а недостаточность снижает общий иммунный статус.

Определение активности комплемента и отдельных ее компонентов основано на гемолизе эритроцитов барана и/или кролика. Это достаточно сложный метод, связанный с необходимостью иметь регулярное снабжение свежими эритроцитами, или содержать лабораторных животных. Но еще в 1958 году было показано, что сыворотка крови человека вызывает гибель простейших - инфузорий Tetrahymena pyriformis и Paramecium caudatum. Выдвинуто предположение, что этот факт связан с активацией комплемента.

С целью обоснования возможности использования инфузорий для контроля активности комплемента был проведен ряд исследований с помощью прибора БиоЛаТ - инструмента для подсчета живых подвижных клеток. На основании произведенных подсчетов инфузорий по каждой пробе программа управления прибором строит график зависимости количества клеток от времени (рис.1).

Исследования проводились на синхронизированной культуре инфузорий Tetrahymena pyriformis. Объекты исследования - сыворотка крови животных (предоставлена Шайтановым В. М. из ветклиники ООО «ТИГРЕНОК») и сыворотка собственной капиллярной крови. В настоящем исследовании критерием оценки воздействия сыворотки на инфузорий служит время, за которое погибают 50% тест-организмов (Т5о). На графике (рис. 1.) видно, что для разных животных одного вида характерна различная активность комплемента сыворотки крови.

№ 345 № 348 № 411 № 213 № 565 № 354

минуты

Рис. 1. Изменение количества клеток Те^аИутепа pyriformis в сыворотке крови кошек с различными патологиями

В таблице указано время Т50 для образцов сывороток крови 6 разных кошек при концентрации

при

№ образца сыворотки крови 0 .) 5н

213 20,4

345 11,9

348 24,1

354 16,0

411 21,8

565 17,5

Интересно, что почти у всех кошек активность комплемента ниже, чем у среднем у людей, а у коров -существенно выше. На уровень токсического действия сыворотки на инфузорий помимо межвидовых различий влияет физиологическое состояние конкретного животного или человека. Например, активность сыворотки резко уменьшается наличии инфекции у человека (рис.2). Возможно, это связано с расходованием активных белков комплемента.

Материалы XIVмеждународного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке» РУДН, Москва, 2012

Рис.2. Разная активность комплемента в сыворотке крови одного и того же человека, 1- практически здорового, Т50 = 5,6мин; 2 - в остром периоде респираторного заболевания, Т50= 10,8мин.

Технология этого исследования очень простая и за 2011 год нами накоплено около 100 результатов различных вариантов исследований. Мы оценивали активность комплемента с известными ингибиторами, в том числе с ЭДТА и гепарином, изучали действие сыворотки крови разных животных и разных людей, а также зависимость уровня активности комплемента от физиологического состояния человека. Анализ полученных результатов доказывает объективность этого метода оценки активности комплемента, а технологичность его проведения позволяет надеяться на его внедрение.

Литература.

1. The Role of Complement in the Immune Reactions of Paramecium aurelia and Tetraiymena pyriformis// Immunology, 1958, X, 291.

2. А.Ройт, Дж.Бростофф, Д.Мейл Иммунология// А. Ройт, Пер. с англ. - М.: Мир, 2000 - 592 с.

3. В.А.Долгов, С.А.Лавина, Е.Г.Черемных, Е.И.Симбирева, А.В.Кулешин Автоматизированный метод оценки токсичности продовольственного сырья и кормов, объектов окружающей среды на инфузориях Paramecium caudatum и Tetrahymena pyriformis //Методические рекомендации. - М.: ГНУ ВНИИВСГЭ, 2009. - 12 с.

4. Сборник научных тезисов и статей «Здоровье и образование в XXI веке» РУДН, Москва, 2010г.

5. Сборник научных тезисов и статей «Здоровье и образование в XXI веке» РУДН, Москва, 2009г.

6. Сборник научных тезисов и статей «Здоровье и образование в XXI веке» РУДН, Москва, 2008г.

7. Сборник научных тезисов и статей «Здоровье и образование в XXI веке» РУДН, Москва, 2007г.

8. Сборник научных тезисов и статей «Здоровье и образование в XXI веке» РУДН, Москва, 2006г.

9. Сборник научных тезисов и статей «Здоровье и образование в XXI веке» РУДН, Москва, 2005г.

10. Сборник научных тезисов и статей «Здоровье и образование в XXI веке» РУДН, Москва, 2004г.

11. Сборник научных тезисов и статей «Здоровье и образование в XXI веке» РУДН, Москва, 2003г.

12. Сборник научных тезисов и статей «Здоровье и образование в XXI веке» РУДН, Москва, 2002г.

13. Сборник научных тезисов и статей «Здоровье и образование в XXI веке» РУДН, Москва, 2001г.

14. Сборник научных тезисов и статей «Здоровье и образование в XXI веке» РУДН, Москва, 1999г.

Материалы XIVмеждународного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке» РУДН, Москва, 2012