Научная статья на тему 'Низкотемпературное хранение актиномицетов - представителей рода Streptomyces'

Низкотемпературное хранение актиномицетов - представителей рода Streptomyces Текст научной статьи по специальности «Биотехнологии в медицине»

CC BY
467
105
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
ДОЛГОСРОЧНОЕ ХРАНЕНИЕ / ЖИЗНЕСПОСОБНОСТЬ / АКТИНОМИЦЕТЫ / STREPTOMYCES / АНТИБИОТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ / LONG-TERM STORAGE / VIABILITY / ACTINOMYCETES / ANTIBIOTIC ACTIVITY

Аннотация научной статьи по биотехнологиям в медицине, автор научной работы — Синёва Ольга Николаевна, Иванкова Татьяна Дмитриевна, Терехова Лариса Петровна

Проведены исследования в области долгосрочного хранения актиномицетов представителей рода Streptomyces в условиях низких температур (-70°С). Установлено сохранение высокого уровня жизнеспособности исследуемых культур актиномицетов в течение 3 лет, отмечена стабильность морфологических характеристик данных культур и сохранение антибиотической активности в отношении тест-микроорганизмов в течение всего периода хранения. Споры стрептомицетов сохраняют высокий уровень жизнеспособности как с использованием 10% раствора глицерина в качестве криопротектора, так и без него. Показана эффективность консервирования спор актиномицетов рода Streptomyces методом низкотемпературного замораживания.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по биотехнологиям в медицине , автор научной работы — Синёва Ольга Николаевна, Иванкова Татьяна Дмитриевна, Терехова Лариса Петровна

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Low Temperature Storage of Actinomycetes - Members of the Genus Streptomyces

Studies have been carried out in the field of long-term storage of actinomycetes, representatives of the genus Streptomyces , at low temperatures (-70°C). It has been established that a high level of viability of the studied cultures of actinomycetes is maintained for 3 years the stability of the morphological characteristics of these cultures and the preservation of antibiotic activity against test microorganisms during the entire storage period are noted. Spores of streptomycetes retain a high level of viability, both with and without 10% glycerol solution as a cryoprotector. The effectiveness of spore preservation of genus Streptomyces actinomycetes by the method of low-temperature freezing is shown.

Текст научной работы на тему «Низкотемпературное хранение актиномицетов - представителей рода Streptomyces»

DOI: 10.24411/0235-2990-2019-10011

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

Низкотемпературное хранение актиномицетов — представителей рода Streptomyces

*О. Н. СИНЁВА, Т. Д. ИВАНКОВА, Л. П. ТЕРЕХОВА

НИИ по изысканию новых антибиотиков им. Г. Ф.Гаузе, Москва

Low Temperature Storage of Actinomycetes — Members of the Genus Streptomyces

*O. N. SINYOVA, T. D. IVANKOVA, L. P.TEREKHOVA Gause Institute of New Antibiotics, Moscow

Проведены исследования в области долгосрочного хранения актиномицетов — представителей рода Streptomyces в условиях низких температур (-70°С). Установлено сохранение высокого уровня жизнеспособности исследуемых культур актиномицетов в течение 3 лет, отмечена стабильность морфологических характеристик данных культур и сохранение антибиотической активности в отношении тест-микроорганизмов в течение всего периода хранения. Споры стрептоми-цетов сохраняют высокий уровень жизнеспособности как с использованием 10% раствора глицерина в качестве крио-протектора, так и без него. Показана эффективность консервирования спор актиномицетов рода Streptomyces методом низкотемпературного замораживания.

Ключевые слова: долгосрочное хранение, жизнеспособность, актиномииеты, Streptomyces, антибиотическая активность.

Studies have been carried out in the field of long-term storage of actinomycetes, representatives of the genus Streptomyces, at low temperatures (-70°C). It has been established that a high level of viability of the studied cultures of actinomycetes is maintained for 3 years, the stability of the morphological characteristics of these cultures and the preservation of antibiotic activity against test microorganisms during the entire storage period are noted. Spores of streptomycetes retain a high level of viability, both with and without 10% glycerol solution as a cryoprotector. The effectiveness of spore preservation of genus Streptomyces actinomycetes by the method of low-temperature freezing is shown.

Keywords: long-term storage, viability, actinomycetes, Streptomyces, antibiotic activity.

Введение

Актиномицеты — продуценты разнообразных по химическому строению биологически активных соединений, обладающих антибактериальным, противогрибковым и противоопухолевым действием. Большинство антибиотиков выделено из актиномицетов широко распространённого рода БиерОтусез. Стрептомицеты — грамполо-жительные бактерии, характеризующиеся наличием субстратного и воздушного мицелия и способностью формировать цепочки спор [1—4].

Несмотря на достижения в области открытия новых антибиотиков, а также развитие методов их производства, инфекционные заболевания по-прежнему остаются второй ведущей причиной смерти во всем мире, а бактериальные инфекции ежегодно приводят примерно к 17 млн случаев смерти, затрагивая главным образом детей и пожилых людей. Самолечение и чрезмерное использование антибиотиков является ещё одним

© Коллектив авторов, 2019

Адрес для корреспонденции: 119021, Москва, ул. Большая Пироговская, д. 11, стр. 1. НИИ по изысканию новых антибиотиков им. Г. Ф. Гаузе

важным фактором, который способствует развитию устойчивости, сокращая срок службы антибиотика, тем самым вызывая постоянную потребность в исследованиях и разработке новых антибиотиков [5—8].

Поиск новых антибиотиков включает в себя такие этапы, как поиск продуцентов, изучение химического строения вторичных метаболитов и их антибиотической активности в отношении тест-микроорганизмов. На всех этапах изучения очень важно сохранить жизнеспособность культур и их способность к синтезу антибиотиков. Известно, что в процессе хранения может наблюдаться дифференциация колоний, что в свою очередь может привести к сохранению колоний, не обладающих нужными свойствами.

В настоящее время в большинстве коллекций микроорганизмов используют методы длительного хранения, такие как лиофилизация, крио-консервация и низкотемпературное замораживание. Выбор способа хранения конкретного объекта основывается на сохранении микроорганизмами жизнеспособности, морфологических признаков, физиологических характеристик, биохимической и генетической стабильности. Нужно

Ц-э,

67 !-

93

54

0 005

97151гер1отусе5_МЬап(_1МА_01191 ' 51гер1отуо&5_Н Ьап1_зиЬ5р ._гиШ5_з1га1п_Шб_2ШВ7 Э гер1оппусеа_гндге$с-еп$_1 уре_йг£1(П_М К в |._В-12176Т 5(гер1о(П ус«_п1дге$сеп$_1МА_01194 31гер(отусе5 Ьудгозсфсиз 1МА 01199 51гер(отусе$_|1уд гозсор! п_М ВЯС_13472 51гер1оп(1усе$_ьудго5сор1сц$_$иь5р-_ьудго5сор1си$

1001-5йер1отусе$^1ус<ж>гэп$_1МА_01196

100

С

100

51гер1отусе5^1ус(М5гап5_1уре_йга1 п_У1М_М_10366 £1гер1отусе5_сЬгейотусе11сш_1МА_01192 51гер1отусе&_сЬгезЛолпусе1<си5_51га1п_АОР4 51гер1огп усе5_сЬге5{ап усейси5_5Ь-э1 п_ОЭМ_4&&45

юз | &гер1отусез_э1Ьодпзео1и5_1МА_01198

100

1 ЙгерИп усе8_а1Ь&дп5ео1и$_йга1п_Ы Я Р 306Т ■ Йгер! оту№5_э 1Ьодп$ео1и$_1ур е_з! гэ1п_05М_40003

100

51ге#отус«_са1Ш$_1М_01195

75

100

93

■ Ййе^от усе$_аигапАаси5_1730Ж_Е1Р670724

39

51гер1отусев_аи гапйао^Н В11М173139_Р ^2443 агер(отусе$_эигапКаси$_1К1А_СИ193

-Э1гер(отусе8_«1егепэ15_1уре_йга1п_053Р688

— 31гер(отусе5_е(1егепя5_1МА_01197 Эгер*о(пусе5_е(1е{ег1515_51га1п_ВССО_10_4Ба

100

Рис. 1. Филогенетическое дерево актиномицетов рода Б^ерОтусеБ, основанное на сиквенс-анализе нуклео-тидных последовательностей 16S рРНК. Дендрограмма построена с помощью алгоритма «ближайшего соседа» (neighbor-joining). Масштаб соответствует 5 нуклеотидным заменам на каждые 1000 нуклеотидов.

также учитывать максимально возможное время хранения культуры и надёжность данного метода. Состав среды, температура, условия аэрации и другие факторы оказывают существенное влияние на устойчивость микроорганизмов к стрессам, возникающим при длительном хранении. Для повышения устойчивости микроорганизмов к воздействию низких температур применяются защитные вещества — криопротекторы [9—17].

Жизнеспособность микроорганизмов во время замораживания и хранения также зависит от вида и штамма микроорганизма, размера клеток и их формы, состава клеточной стенки. Известно, что микроорганизмы, способные к формированию спор, хорошо переносят замораживание без применения криопротекторов, но в большинстве случаев добавление криопротекторов существенно увеличивает выживаемость микроорганизмов [13, 18, 19].

Низкотемпературная консервация по сравнению с другими методами хранения (лиофилиза-

ция и криоконсервация) микроорганизмов более универсальна в связи с наличием и доступностью низкотемпературных холодильников, способных надежно поддерживать низкие температуры в течение длительного времени. Кроме того, данный метод менее трудоёмкий и безопасный по сравнению с криоконсервацией в жидком азоте [10].

Материал и методы

Объектами исследования явились 9 культур актиномицетов рода 31гвр1отусв8, выделенные из почвы. Антибиотическую активность изучаемых актинобактерий в отношении ряда тест-организмов определяли методом штриха [20].

Штаммы актинобактерий выращивали в пробирках при температуре 28°С до стадии спороношения на овсяной ага-ризованной среде: овсяная мука — 20,0 г, вода — 1000 мл, агар — 20,0 г; рН 7,2—7,4 [21]. Для отделения спор от мицелия производили их смыв стерильной дистиллированной водой со скошенной агаризованной среды. Полученные суспензии отфильтровывали через стерильный бумажный фильтр «зелёная лента» ГОСТ 12026-76 ООО «МЕЛИОР» (Россия). Споровые суспензии были использованы в следу-

Таблица 1. Антибиотическая активность актиномицетов Streptomyces libani INA 01191, Streptomyces auranti-cus INA 01193, Streptomyces chrestomyceticus INA 01192, Streptomyces nigrescens INA 01194 в отношении тест-организмов

Тест-организм Антибиотическая активность (зона подавления роста, мм)

S.libani S.aurantiacus S.chrestomyceticus S.nigrescens

INA 01191 INA 01193 INA 01192 INA 01194

Staphylococcus aureus ИНА 00985 (209Р) 5 — — —

Staphylococcus aureus ИНА 00761 (MRSA) — — — —

Staphylococcus aureus ИНА 00762 (209Р/УФ-2) — — — —

Micrococcus luteus ATCC 9341 8 18 35 10

Bacillus subtilis ATCC 6533 — — — —

Esherichia coli ATCC 25922 — — — —

Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 — — — —

Saccharomyces cerevisiae ИНА 01042 — 20 — —

Примечание. Здесь и в табл. 2: «—» отсутствие зоны подавления тест-организма.

Таблица 2. Антибиотическая активность актиномицетов Streptomyces canus INA 01195, Streptomyces glycovo-rans INA 01196, Streptomyces ederensis INA 01197, Streptomyces albogriseolus INA 01198, Streptomyces hygro-scopicus INA 01199 в отношении тест-организмов

Тест-организм Антибиотическая активность (зона подавления роста, мм)

S.canus S.glycovorans S.ederensis S.albogriseolus S.hygroscopicus

INA 01195 INA 01196 INA 01197 INA 01198 INA 01199

Staphylococcus aureus HHA 00985 (209P) 5 20 5 3 20

Staphylococcus aureus HHA 00761 (MRSA) — 10 11 3 20

Staphylococcus aureus HHA 00762 (209P/Y0-2) — 3 12 14 20

Micrococcus luteus ATCC 9341 12 15 8 — >25

Bacillus subtilis ATCC 6533 — 5 8 15 5

Esherichia coli ATCC 25922 — — 8 — 5

Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 — — 3 — —

Saccharomyces cerevisiae HHA 01042 — — — 10 10

ющих концентрациях — 10—108 КОЕ/мл. В качестве крио-протектора применяли глицерин («Реахим», РФ) в концентрации 10%. Для заморозки споровых суспензий использовали криопробирки («Greiner bio-one», Германия). Замораживание и хранение образцов проводилось в низкотемпературном морозильнике Revco («Thermo Scientific», США) при —70°С. Процесс восстановления замороженный: клеток осуществляли путём оттаивания при комнатной температуре. Высев культур производили на агаризованную среду 2 Гаузе (модификация): триптон — 3,0 г, пептон — 5,0 г, глюкоза — 10,0 г, NaCl — 5,0 г, агар — 20,0 г, вода 1000 мл; рН 7,2—7,4 [21]. Процент выживших КОЕ актинобактерий рассчитывали относительно числа КОЕ до криоконсервации. Высев проб проводили каждый месяц в течение 1,5 лет, далее каждые 6 мес. до 3 лет хранения.

Антибиотическую активность определяли методом штриха до заморозки и в течение всего периода хранения. В качестве тест-организмов для определения антибиотической активности использовали следующие культуры: Staphylococcus aureus ИНА 00985 (FDA 209P), Staphylococcus aureus ИНА 00761 (MRSA), Staphylococcus aureus ИНА 00762 (209Р/УФ-2), Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Saccharomyces cerevisiae ИНА 01042.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием компьютерной программы Microsoft Office Excel 2010.

Результаты и обсуждения

В течение трёх лет проводилось изучение выживаемости культур стрептомицетов, свежевыде-ленных из образцов дерново-подзолистой почвы г. Москвы и чернозёма Оренбургской области. Выделенные культуры были отнесены на основании морфологических, фенотипических и гено-

систематических признаков к следующим видам: Streptomyces libani INA 01191, Streptomyces chrestomyceticus INA 01192, Streptomyces aurantiacus INA 01193, Streptomyces nigrescens INA 01194, Streptomyces canus INA 01195, Streptomyces glycovo-rans INA 01196, Streptomyces ederensis INA 01197, Streptomyces albogriseolus INA 01198, Streptomyces hygroscopicus INA 01199 (рис 1).

Все культуры обладали антибиотической активностью в отношении тест-микроорганизмов (табл. 1, 2). В течение 3 лет проводилась оценка выживаемости культур стрептомицетов и сохранения ими антибиотической активности при хранении в условиях низких температур (-70°С).

Одной из задач наших исследований было оценить действие криопротектора — 10% раствора глицерина на выживаемость стрептомицетов и сохранение ими антибиотической активности.

Как известно, применение криопротекторов снижает воздействие повреждающих факторов, что существенно увеличивает выживаемость бактерий при замораживании, хранении и оттаивании. Общими свойствами криопротекторов является наличие в их структуре полярных молекул, способных взаимодействовать как с молекулами Н2О, металлами и солями, так и с компонентами мембран и биополимерами. Важным свойством криопротекторов является также их способность влиять на процессы кристаллизации, способствуя формированию мелкокрис-

S.Iibani S.chrestomyceticus S.aurantiacus S.nigrescens S.canus S.glycovorans S.ederensis S.albogriseolus S.hygroscopicus INA01191 1NA01192 INA0Í193 INA01194 INA01195 INA01196 1NA01197 INA01198 ¡NA01199

Рис. 2. Выживаемость споровых суспензий культур стрептомицетов после 3 лет хранения при температуре -70°С без использования криопротектора.

таллического льда, который не обладает сильными полями напряжения. Изменение структуры льда под влиянием криопротекторов снижает степень механического воздействия на цито-плазматическне структуры и мембраны [9, 18, 22]. В тоже время, изучение механизмов устойчивости к низким температурам у психрофиль-ных и мезофильных микроорганизмов, часть жизненного цикла которых может проходить в условиях низких температур, показало, что защитные функции у этих микроорганизмов выполняют белки, полисахариды, меланинопо-добные вещества и др. [23—27].

В результате проведённых исследований установлено, что споры стрептомицетов, суспендированные в дистиллированной воде в концентрации 107—108 КОЕ/мл, хорошо переносят процесс низкотемпературного замораживания с последующим оттаиванием при комнатной температуре. Выживаемость культур стрептомицетов составила 93—97% (рис. 2). Выживаемость культур стрептомицетов в вариантах без использования крио-протектора, так и с применением 10% раствора глицерина, на протяжении всего периода хранения оставалась на одном уровне. Таким образом, данные культуры можно хранить и без применения криопротектора.

Ранее нами было показано [28], что коллекционный штамм стрептомицета Streptomyces hygroscopicus RIA 1433T полностью сохраняет жизнеспособность и антибиотическую активность в течение 1,5 лет хранения при температуре -70°С как в присутствии криопротектора, так и без него. Кроме того, снижение концентрации споровых суспензий до 102 КОЕ/мл не вызывало снижения количества выживших колоний при

замораживании в дистиллированной воде, хотя культуры актиномицетов других родов погибали при данных концентрациях. Исследования фа-зово-структурной организации фосфолипидных фракций Streptomyces hygroscopicus RIA 1433T [29] показали стабильность ламеллярной конфигурации доминирующих фосфолипидов данной культуры, что могло способствовать сохранению бислойной упаковки клеточных мембран, в результате штамм полностью сохранял жизнеспособность даже при низких концентрациях споровых суспензий.

Таким образом, можно предположить, что мембраны исследуемых стрептомицетов обладают повышенной устойчивостью к действию повреждающих факторов консервации.

Выжившие после криоконсервации колонии каждой культуры были проверены на антибиотическую активность в отношении тест-микроорганизмов методом штриха. Сравнительный анализ антибиотической активности до замораживания и в течение всего периода хранения (как в присутствии криопротектора, так и без него) показал, что споры стрептомицетов обладают не только высокой устойчивостью к замораживанию, но и сохраняют высокий уровень антибиотической активности (95—97%) по отношению к каждому тест-микроорганизму, к которым была установлена антибиотическая активность до замораживания. Следует отметить, что при регулярных пересевах в обычных условиях также наблюдалась небольшая дифференциация колоний на более и менее активные, таким образом, появление менее активных колоний не является следствием замораживания и/или хранения.

Заключение

Проведённое исследование показало, что споровые суспензии стрептомицетов: Streptomyces libani INA 01191, Streptomyces chrestomyceticus INA 01192, Streptomyces auranticus INA 01193, Streptomyces nigrescens INA 01194, Streptomyces canus INA 01195, Streptomyces glycovorans INA 01196, Streptomyces ederensis INA 01197, Streptomyces albo-griseolus INA 01198, Streptomyces hygroscopicus INA

ЛИТЕРАТУРА

1. Waive M.G., Tickoo R, Jog M.M., BholeB.D. How many antibiotics are produced by the genus Streptomyces? Arch Microbial 2001; 176: 386—390.

2. Berdy J. Bioactive Microbial Metabolites. J Antibiot 2005; 58: 1: 1—26.

3. Khanna M, Solanki R, Lal R. Selective isolation of rare actinomycetes producing novel antimicrobial compounds. Intern J Advan Biotechnol Res 2011; 2: 357—375.

4. Tivari K, Gupta R.K. Rare actinomycetes: a potential storehouse for novel antibiotics. Crit Rev Biotechnol 2012; 32: 2: 108—132.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

5. de Lima Procopio R.E., da Silva I.R., Martins M.K., de Azevedo J.L., de Araujo J.M. Antibiotics produced by Streptomyces. Brazil J Infect Dis 2012; 16: 5: 466—471.

6. Davies J., Davies D. Origins and evolution of antibiotic resistance. Microbiol Mol Biol Rev 2010; 74: 417—433.

7. Okeke I.N.Antibiotic use and resistance in developing countries, in: S. Knobler, S. Lemon, M. Najafi, T. Burroughs (Eds.),The Resistance Phenomenon in Microbes and Infectious Disease Vectors: Implications for Human Health and Strategiesfor Containment-workshop Summary, Institute of Medicine,National Academy of Science, Washington DC. 2003; 132—139.

8. Spellberg B, Guidos R, Gilbert D, Bradley J., Boucher H.W., Scheld W.M. et al. The epidemic of antibiotic — resistance infection: a call to action for the medical community from the infection diseases society of America. Clin Infect Dis 2008; 46: 155—164.

9. Похиленко В.Д., Баранов A.M., Детушев K.B. Методы длительного хранения коллекционных культур микроорганизмов и тенденции развития. Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Медицинские науки. — 2009. Т. 4. — № 12. — С. 99—121. / Pokhilenko V.D., Baranov A.M., Detushev K.V. Metody dlitelnogo khra-neniya kollektsionnykh kultur mikroorganizmov i tendentsii razvitiya. Izvestiya vysshikh uchebnykh zavedeniy. Povolzhskiy region. Meditsinskie nauki 2009; 4: 12: 99—121. [in Russian]

10. Малахаева A.H., Ляшова О.Ю., Плотников О.П., Осин A.B. Хранение штаммов Francisella tularensis 15 НИИЭГ и Brucella abortus 19BA в жизнеспособном состоянии путём их глубокого замораживания. Проблемы особо опасных инфекций. — 2015. — № 1. — С. 63—66. / MalakhaevaA.N., Lyashova O.Yu, Plotnikov O.P., OsinA.V. Khranenie shtammov Francisella tularensis 15 NIIEG i Brucella abortus 19BA v zhiznesposobnom sostoyanii putem ikh glubokogo zamorazhivaniya. Problemy osobo opasnykh infektsiy 2015; 1: 63—66. [in Russian]

11. Грачева И.В, Осин A.B. Низкотемпературная консервация коллекционных штаммов холерных вибрионов. Проблемы особо опасных инфекций. — 2014. — 4. — С. 39—42. / Gracheva I.V., Osin A.V. Nizkotemperaturnaya konservatsiya kollektsionnykh shtammov kholernykh vibrionov. Problemy osobo opasnykh infektsiy 2014; 4: 39—42. [in Russian]

12. Ryan M.J., Smith D. Cryopreservation and freeze-drying of fungi employing centrifugal and shelf freeze-drying. Metod Molecul Biol 2007; 368: 127—140.

13. Hubalek Z. Protectants used in the cryopreservation of microorganisms. Criobiology 2003; 6: 205—229.

14. Бланков Б.И., Клебанов Д.Л. Применение лиофилизации в микробиологии. М.: Медгиз. 1961. — 263 с. / Blankov BI, Klebanov D.L. Primenenie liofilizatsii v mikrobiologii. M.: Medgiz, 1961; 263. [in Russian]

15. Шендеров Б. A., Гахова Э. H, Манвелова М. A, Пиорунский Д. A, Карнаухов В. Н. Способ длительного хранения естественных сим-биотических ассоциаций микроорганизмов человека и животных. РФ Пат. 2123044, 10.12.1998. / Shenderov B. A., Gakhova E. N, Manvelova M. A, Piorunskiy D. A, Karnaukhov V. N. Sposob dlitelnogo khraneniya estestvennykh simbioticheskikh assotsiatsiy mikroorganiz-mov cheloveka i zhivotnykh. RF Pat. 2123044, 10.12.1998. [in Russian]

16. Каменских Т.Н., Калашникова E.A., Ившина И.Б. Особенности крио-консервации алканотрофных актинобактерий рода Rhodococcus. Вестник Пермского университета. — 2010. — № 1. — С. 15—20. / Kamenskikh T.N., Kalashnikova E.A., Ivshina I.B. Osobennosti kriokon-servatsii alkanotrofnykh aktinobakteriy roda Rhodococcus. Vestnik Permskogo universiteta 2010; 1: 15—20. [in Russian]

01199, замороженные при температуре -70°С, хорошо переносят длительное хранение в течение 3 лет, не теряя при этом способности к синтезу антибиотиков. Применение в качестве защитной среды 10% раствора глицерина не оказало влияния на хранение спор исследуемых стрептомице-тов. Простота и доступность данного метода позволяют рекомендовать данный метод для хранения культур стрептомицетов.

17. ЧукпароваА.У. Оценка сохранения жизнеспособности штаммов микроорганизмов при низкотемпературной консервации. Материалы Всероссийского симпозиума с международным участием «Биологически активные вещества микроорганизмов — прошлое, настоящее, будущее. К 90-летию заслуженного профессора Московского университета Н.С. Егорова. М.: 2011. — 131 с. / Chukparova A.KOtsenka sokhraneniya zhiznesposobnosti shtammov mikroorganizmov pri nizkotemperaturnoy konservatsii. Materialy Vserossiyskogo simpoziuma s mezhdunarodnym uchastiem «Biologicheski aktivnye veshchestva mikroorganizmov — proshloe, nastoyashchee, budushchee. K 90-letiyu zasluzhennogo professora Moskovskogo universiteta N. S. Egorova. M.: 2011; 131. [in Russian]

18. Бекер M.E, Рапопорт А.И., Калакуцкий Л.В., Звягинцев Д.Г., Абызов С.С., Аксенов С.И. и др. Торможение жизнедеятельности клеток. Под ред. Бекера М.Е. Рига: Зинатне, 1987. — 240 с. / Beker M.E., Rapoport A.I., Kalakutskiy L.V., Zvyagintsev D.G., Abyzov S.S., Aksenov S.I. i dr. Tormozhenie zhiznedeyatelnosti kletok. Pod red. Bekera M.E. Riga: Zinatne, 1987; 240. [in Russian]

19. Filippova S.N., Surgucheva N.A., Kuznetsov V.D., El'-Registan G.I., Gal'chenko V.F. Optimization of protective media for actinomycetes storage in liquid nitrogen. Microbiology 2007; 76: 4: 506—509.

20. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках. М.: Наука, 2004. — 528 с. / Egorov N.S. Osnovy ucheniya ob antibiotikakh. M.: Nauka, 2004; 528. [in Russian]

21. Гаузе Г.Ф., Преображенская Т.П., Свешникова М.А., Терехова Л.П., Максимова Т.С. Определитель актиномицетов. М.: Наука, 1983. — 245 с. / Gauze G.F., Preobrazhenskaya T.P., Sveshnikova M.A., Terekhova L.P., Maksimova T.S. Opredelitel aktinomitsetov. M.: Naukaб 1983; 245. [in Russian]

22. Грачева И.В., Осин А.В. Механизмы повреждений бактерий при лиофилизации и протективное действие защитных сред. Проблемы особо опасных инфекций. — 2016. — № 3. — С. 5—12. / Gracheva I.V., Osin A.V. Mekhanizmy povrezhdeniy bakteriy pri liofilizatsii i pro-tektivnoe deystvie zashchitnykh sred. Problemy osobo opasnykh infekt-siy 2016; 3: 5—12. [in Russian]

23. Chattopadhyay M.K. Bacterial cryoprotectants. Resonance 2002; 7: 11: 59—63.

24. Kim S.J., Yim J.H. Cryoprotective properties of exopolysaccharide (P-21653) produced by antarctic bacterium Pseudoalteromonas arctica KOPRI 21653. J Microbiology 2007; 45: 6: 510-514.

25. Marx J.G., Carpenter S.D., Deming J.W. Production of crioprotectant extracellular polycaccharide substances (EPS) by the marine psy-chrophilic bacterium Colwellia psychrerythraea strain 34H under extreme conditions. Canad J Microbiol 2009; 55: 1: 63—72.

26. Ewert M., Deming J.W. Selective retention in saline ice of extracellular polysaccharidesproduced by the cold-adapted marine bacterium Colwellia psychrerythraea strain 34H. Annal Glaciol 2011; 52: 111—117.

27. Абызов С. С. Микроорганизмы в леднике центральной Антарктиды. Успехи микробиологии. — 1992. — № 25. — С. 27—49. / Abyzov S. S. Mikroorganizmy v lednike tsentralnoy Antarktidy. Uspekhi mikrobiologii. 1992; 25: 27—49. [in Russian]

28. Синева О.Н., Куликова Н.Г., Филиппова С.Н., Терехова Ё.П.Хране-ние культур актинобактерий — представителей родов Streptomyces и Nonomuraea методом низкотемпературной консервации. Антибиотики и химиотер. — 2014. — Т. 59. — № 11—12. — С. 11—15. / Sineva O.N., Kulikova N.G., Filippova S.N., Terekhova L.P. Khranenie kultur aktinobakteriy — predstaviteley rodov Streptomyces i Nonomuraea metodom nizkotemperaturnoy konservatsii. Antibiotiki i khimioter 2014; 59: 11—12 : 11—15. [in Russian]

29. Филиппова С.Н., Сургучева Н.А., Ермакова Е.В., Киселев М.А., Терехова Л.П., Синева О.Н. и др. Изучение фазово-структурного состояния фосфолипидных фракций актинобактерий в связи с условиями их хранения. Микробиология. — 2013. — Т. 82. — № 3. — С. 335—343. / Filippova S.N., Surgucheva N.A., Ermakova E.V., Kiselev M.A., Terekhova L.P., Sineva O.N. i dr. Izuchenie fazovo-strukturnogo sostoyaniya fosfolipidnykh fraktsiy aktinobakteriy v svyazi s usloviyami ikh khraneniya. Mikrobiologiya 2013; 82: 3: 335—343. [in Russian]

СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ:

Синева Ольга Николаевна — н. е., лаборатория таксономического изучения и коллекции культур микроорганизмов, Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе», Москва Иванкова Татьяна Дмитриевна — н. с., лаборатория таксономического изучения и коллекции культур микроорганизмов, Федеральное государственное бюджетное науч-

ное учреждение «Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе», Москва Терехова Лариса Петровна — д. б. н., профессор, Заслуженный деятель науки РФ руководитель отдела микробиологии, лаборатория таксономического изучения и коллекции культур микроорганизмов, Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе», Москва

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.