CC BY
8УДК 616.992_____________________________
НЕЙТРОФИАЗАВИСИМАЯ ВОСПАЛИТЕЛЬНАЯ РЕАКЦИЯ НА ФОНЕ ВНУТРИСОСУДИСТОЙ ДЕСТАБИЛИЗАЦИИ КРОВИ, ИНДУЦИРОВАННОЙ CANDIDA ALBICANS
М.И. Заславская, А.Н. Маянский
Нижегородская государственная медицинская академия, Нижний Новгород, Россия
© М.И. Заславская, А.Н. Маянский, 2004
Исследовали зффекторные ресурсы экссудативных ней-трофилов крыс, мобилизованных в очаг острого воспаления на фоне внутрисосудистой дестабилизации крови, индуцированной Candida albicans. Пептон-индуцированная миграция нейтрофилов в перитонеальную полость умень-ишлась после внутривенной инъекции клеток С. albicans. Мобилизационная блокада нейтрофилов сопровождалась усилением кислород-зависимой реактивности клеток в очаге воспаления.
Ключевые слова: воспаление, интерлейкины, Candida albicans, нейтрофилы, экстравазальная миграция
NEUTROPHIL-DEPENDENT INFLAMMATORY REACTION ON THE BACKGROUND OF CANDIDA ALBICANS INDUCED BLOOD DESTABILIZATION
M.l. Zaslavskaja, A.N. Mayanskij
State Medical Academy, Nigjnij Novgorod, Russia
© M.I. Zaslavskaja, A.N. Mayanskij, 2004
The effector resources of rat exudative neutrophils mobilized in the acute inflammation focus on the background of Candida albicans induced blood destabilization were investigated. Pepton-induced neutrophil migration into abdominal cavity decreased after the intravenous injection of C. albicans. The mobilization blockage of neutrophils was accompanied by augmentation of cell oxygen-dependent reactivity in the inflammatory site.
Keywords: Candida albicans, extravasal migration, inflammation, interleukins
ВВЕДЕНИЕ
Candida albicans (Robin) Berlchout, являясь условно-патогенным микроорганизмом, часто вызывает инфекции слизистых оболочек открытых полостей и выступает одной из наиболее частых причин оппортунистических микозов [1]. При этом у иммунокомп-рометированных пациентов локальный инфекционный процесс может перерасти в генерализованную инфекцию — системный кандидоз. Имеются данные о том, что одним из главных эффекторов, обеспечивающих защиту против кандидозной инвазии, служат нейтрофилы, действующие в кооперации с антителами и комплементом [2,3]- Наличие генерализованного кандидозного процесса может приводить к концентрированию нейтрофилов [4] внутри кровяного русла и оказывать влияние на развитие местной воспалительной реакции.
В связи с этим, целью настоящей работы было изучение эффекторных ресурсов очага острого ней-трофилозависимого воспаления в условиях внутрисосудистой дестабилизации (активации) крови, вызванной С. albicans.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
В работе использовали С. albicans штамм 601 (из коллекции кафедры микробиологии и иммунологии Нижегородской государственной медицинской академии); культуру получали в дрожжевой фазе на агаре Сабуро через 20-22 ч (ЗФР), применяли 0,15 М фосфатный буфер, трижды отмывали и доводили до концентрации 108 кл/мл.
Эксперименты проводили на белых беспородных крысах-самцах весом 150-200 г. Суспензию С. albicans (0,3 мл) вводили животным внутривенно под легким эфирным наркозом; контрольной группе животных — такой же объем ЗФР.
Модель локального воспаления воспроизводили путем введения в брюшную полость 5 мл 10% изотонического стерильного раствора пептона через 1 час после внутривенной инъекции клеток патогена. Перитонеальный экссудат с максимальным содержанием нейтрофилов [5] получали через 4 ч после инъекции пептона. Для этого животных декапитировали под эфирным наркозом, брюшную полость промывали ЗФР (20 мл). В экссудате подсчитывали количество нейтрофилов.
Функциональные параметры экссудативных нейтрофилов определяли по уровню спонтанной и индуцированной люминолозависимой хемилюминес-ценции (ХЛ) [6,7]. Оценивали активность клеток в пересчете на один нейтрофил (удельная активность). ХЛ нейтрофилов измеряли в имп/мин на жидкостно-стинцилляционном счетчике «Бета-2» (Украина). Для изучения спонтанной ХЛ в силиконированных флаконах смешивали 1 мл перитонеального экссудата и
0,1 мл люминола (начальная концентрация — 10'2 М). Для измерения индуцированной ХЛ в тест-систему добавляли дополнительно 0,1 мл латекса (диаметр частиц — 1,77 мкм; 3-108 частиц/мл, НПО («Каучук»,
С.-Петербург). Измерение ХА проводили в течение 6 с через каждые 5 мин и заканчивали через 15-20 мин после достижения максимального уровня.
Способность нейтрофилов синтезировать интерлейкин-8 (IL-8) и интерлейкин-6 (IL-6) после контакта с С. albicans (штамм 601) оценивали в системе in vitro. Для этого использовали первичную культуру нейтрофилов человека. Нейтрофилы крови человека, полученной из локтевой вены доноров-доброволь-цев, выделяли центрифугированием при использовании двойного градиента плотности фиколл-верогра-фина [8]. Клетки (4 млн/мл) культивировали в среде ДМЕМ (НИИ полиомиелита и вирусных энцефалитов, Москва ) с глутамином и гентамицином, содержащей 5% фетальной телячьей сыворотки. В качестве индуктора синтеза интерлейкинов к 0,8 мл клеточной взвеси добавляли живую культуру С. albicans штамм 601 (0,04 мл, 107 кл/мл), в контроле использовали среду ДМЕМ. Пробы инкубировали 36 часов, затем отбирали надосадочную жидкость, в которой определяли количество IL-8 и IL-6 при помощи стандартных диагностических наборов для иммунофер-ментного анализа (НПО «Цитокин», С.-Петербург) и согласно рекомендациям фирмы-изготовителя. Все пробы ставили в трех повторностях. Учитывали средний результат в пкг/мл.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Нами установлено значительное сокращение числа нейтрофилов, мобилизуемых в очаг воспаления в экссудате животных экспериментальной группы, по сравнению с контролем: 22,6-10s ± 3,2-10s кл/мл и 78,3-10s ± 14,4-10s кл/мл (р<0,05) соответственно. Сокращение числа нейтрофилов в очаге воспаления не сопровождалось изменением общего уровня спонтанной (сХА) и латекс-индуцированной ХЛ (иХЛ) перитонеального экссудата, так как удельная активность нейтрофилов в экссудате резко усиливалась в экспериментальной группе животных по сравнению с контрольной (табл. 1). Наличие различий в показаниях удельной сХЛ нейтрофилов для экспериментальной и контрольной групп животных служит доказательством нейтрофилодестабилизирующей способности клеток С.albicans внутри кровяного русла. В то же время увеличение уровня удельной иХЛ нейтрофилов, отражающей реактивность фагоцитов [4], подтверждает тот факт, что присутствие С. albicans в крови способно оказывать стимулирующий эффект на фагоцитарные клетки и, тем самым, поддерживать элиминационные ресурсы очага острого воспаления.
В предварительных исследованиях нами было показано, что снижение мобилизационных ресурсов нейтрофилов на фоне внутрисосудистой дестабилизации не было связано со снижением количества числа нейтрофилов в кровяном русле. В этой связи мы предполагаем, что феномен «мобилизационной блокады» мог быть следствием нарушения механизмов, обеспечивающих выход нейтрофилов в экстра-
вазальное пространство, в частности, из-за избыточной продукции цитокинов (хемокинов) [9,10]. В пользу этого предположения свидетельствуют данные о том, что гиперпродукция некоторых цитокинов, в частности IL-8, образуемых активированными клетками сосудистого русла, может проявиться в ингибировании адгезии нейтрофилов к эндотелио-цитам [11,12].
Таблица 1.
Показатели спонтанной и латекс-индуцированной хемилюминесценции нейтрофилов перитонеального экссудата на фоне внутрисосудистой дестабилизации крови, индуцированной Candida albicans
Реагент для внутривенного введения сХЛДЮ4 имп/мин) иХЛ, (104мип/ мин) Удельная сХЛ нейтрофилов (103 уел. ед) Удельная иХЛ нейтрофилов (103 уел. ед)
ЗФР (контроль) 11,4 ±4,8 135,6± 37,2 2,88± 0,1 36,87 ±13,2
С. albicans 12,7 ±6,3 159,5 ±49,9 11,14±4,91* 151,9 ±69,8*
Достоверные отличия относительно контроля (р <0,05)
Экспериментально установлено, что С. albicans штамм 601 обладает выраженным IL-8- и IL-6-инду-цирующим эффектом в системах с нейтрофилами. Так, после инкубации клеток С. albicans с фагоцитами количество IL-8, продуцируемое нейтрофилами, существенно возрастало: 256,5 ± 109,89 пкг/мл (контроль) и 735,7 ± 260,2 пкг/мл ( опыт) (р<0,05). Аналогичные данные получены и для IL-6: 66,85 ± 22,2 пкг/мл и 141,32 ± 32,6 пкг/мл соответственно (р<0,05). Очевидно, что изменения метаболической активности нейтрофилов под влиянием С. albicans, проявляющиеся в продукции цитокинов, могут быть задействованными в торможении экстравазальной миграции нейтрофилов при одновременном усилении кислородозависимой реактивности клеток в очаге воспаления.
ВЫВОДЫ
1. Внутрисосудистая дестабилизация, индуцированная С. albicans, выражается в сокращении притока нейтрофилов из крови в очаг воспаления.
2. Эффекторные ресурсы очага воспаления на фоне С а п d ida -: s а в и с и м о г о генерализованного процесса поддерживаются за счет усиления реактивного кислородозависимого потенциала нейтрофилов.
ПРОБЛЕМЫ МЕДИЦИНСКОЙ МИКОЛОГИИ. 2004. Т.6. №4
ЛИТЕРАТУРА
1. Cannon R.D., Chaffin W.L. Oral colonization by Candida albicans 11 Crit. Rev. Oral. Biol.-1999.- Vol.10.- №3.- P.359-383.
2. Challacombe S. J. Immunological aspects of oral candidiasis // Oral. Surg. Oral. Med.Oral.Pathol.-1994.-Vol.78.-№2.-P.202-
3. Сергеев А.Ю., Сергеев Ю.В. Кандидоз. Природа инфекции, механизмы агрессии и защиты, лабораторная диагностика, клиника и лечение. — М: Триада-Х, 2000. — 472 с.
4. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге.- Новосибирск: Наука, 1989.-344с.
5. Заславская М.И., Маянский А.Н. Особенности нейтрофилозависимой воспалительной реакции на фоне внутрисосудистой активации крови //Нижегород. мед. журн.- 1992.- №4. С. 29-33.
6. Маянский А.Н., Пикуза О.И. Клинические аспекты фагоцитоза. — Казань: Из-во Казан, ун-та, 1993.- 122.С.
7. Horan T.D., English D., McPherson T.A. Association of Neutrophil Chemiluminscence with microbicidal activity // Clin. Immunol. Immunopathol.- 1982.-Vol.22.-P.259-269.
8. Подосинников И.С., Нилова А.Г.,Бабиченко И.В. u dp. Метод определения хемотаксической активности лейкоцитов //Лаб. дело,- 1981,- №8,- С.468-470.
9. Coenjaerts F.E., Walenkamp A.M., Mwinzi P.N etal. Potent inhibition of neutrophil migration by cryptococcal mannoprptein-4-induced desensitization II]. Immunol. — 2001. -Vol.167. -№7,- P.3988-95.
10. Cuschieri /., Gourlay D., Garcia I., Jelacic S., Maier R.V. Modulation of endotoxin-induced endothelial activity by microtubule depolymerization// Trauma.- 2003.-Vol.54.-№1.-P.104-12.
11. Hechtman D.H., Cybulsky M.I., Fuchs H. J. et al. Intravascular IL-8. Inhibitor of polymorphonuclear leukocyte accumulation at sites of acute inflammation //J.Immunol.-1991.-Vol.l47.-№3.-P.883-92.
12. Xythalis D., Frewin M.B., Gudewicz PW. Inhibition of lL-8-mediated МАРК activation in human neutrophils by betal integrin ligands// Inflammation. -2002,- Vol.26.- №2.-P.83-8.
Поступила в редакцию журнала 22.06.2004 Рецензент: Н.П.Елинов
210.
