CC BY
61
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ♦ п аразитология ♦
УДК 616.995.122.21
Некоторые биологические свойства возбудителя фасциолеза Fasciola hepatica в отношении малого прудовика Lumnaea truncatula
А.Н. Постевой, младший научный сотрудник лаборатории эпизоотологии паразитарных болезней и биологических основ профилактики ([email protected]), Р.А. Пешков, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник лаборатории эпизоотологии паразитарных болезней и биологических основ профилактики ([email protected]), О.Н. Андреянов, доктор ветеринарных наук, старший научный сотрудник проблемной лаборатории ([email protected]) ФАНО России Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Всероссийский научно-исследовательский институт фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений имени К.И. Скрябина» (117218, г. Москва, ул. Б. Черемушкинская, д. 28).
Реферат
Гельминтозные заболевания животных и человека остаются актуальными по настоящее время. Одним из массовых зоонозов считается фасциолез. В современных условиях дискуссионные вопросы в области биологии и экологии этого возбудителя инвазии изучают квалифицированные специалисты различных регионов нашей страны и зарубежья. Цель исследования. Нашей целью было выявить некоторые биологические свойства возбудителя фасциолеза F. hepatica в отношении паразитирования у промежуточного хозяина.
Материалы и методы. Работу проводили в период с 2011 по 2015 гг. в лаборатории эпизоотологии паразитарных болезней ВНИИП. Культуру беспозвоночных — промежуточных хозяев F. hepatica собирали в естественных биотопах Московской, Брянской и Рязанской областей и на территории научно-испытательного отделения ВНИИП (Московская область, Подольский район, п. Курилово). От экспериментально инвазированных морских свинок получали культуру яиц F. hepatica. Культивирование яиц проводили по методу Г.А. Котельникова (1991). Заключение. В результате поставленных опытов гибель моллюсков во время партеногенеза паразита отмечена с 10-х суток по 27-е, во время выхода церкариев — с 38-х по 51-е сутки. Наибольший процент инвазированных гельминтом моллюсков оказался в двух возрастных группах — 1 и 5 суток. ЭЭ прудовиков возбудителем фасциолеза составила 93,3 %. Срок выхода первых церкариев из моллюсков в разных возрастных группах прудовиков составил 34...38 суток. Окончание выхода церкариев из беспозвоночных наблюдали с 64-х по 80-е сутки. Массивный выход церкариев из экспериментально инвазированных прудовиков был выявлен во 2-й, 4-й и 8-ми недельных возрастных группах. У 36-ти недельных моллюсков выхода не наблюдали. На основании полученных результатов исследования рекомендуется разрабатывать профилактические мероприятия против молоди малого прудовика, массовый выход которого происходит в весенне-летний и осенний периоды.
Ключевые слова: адолескарий, возраст, моллюск, фасциолез, экспериментальное заражение, Ьутпаеа гтп-саш1а, Fascíola Ъераиса
Сокращения: ЭЭ — экстенсинвазированность
Введение
В последние годы, на фоне увеличивающегося общего потока информации по биологии, наблюдается заметное усиление интереса к изучению сухопутных моллюсков. Все более актуальными становятся проблемы борьбы с видами — переносчиками таких заболеваний человека и животных, как дикроцелиоз, описторхоз, шисто-сомоз. Фасциолез из этой группы паразитозов — давняя проблема. В настоящее время дискуссионные вопросы в области биологии и экологии возбудителя фасциолеза изучают квалифицированные специалисты как различных регионов нашей страны, так и зарубежья. Биологический цикл трематоды исследуют в естественных и моделированных условиях [2].
Из зараженного личинками фасциолы моллюска — малого прудовика (Ьутпаеа 1гипсаш1а) за пастбищный сезон выходит в среднем 200.. .500 адолескариев [3, 8]. Как показывают наблюдения, одновременно покидают моллюска лишь
несколько церкариев. При плотности 100 моллюсков на 1 м2 и 2.3%-й ЭЭ (наиболее часто встречающийся процент по-раженности моллюсков) число адолескариев паразита на растениях пастбища может составлять несколько тысяч [1]. Экспериментальные данные, полученные в условиях лаборатории, отличны от данных природного биоценоза [5, 6].
Несмотря на то, что биологический цикл фасциолы был расшифрован много лет назад, неясными остаются еще многие вопросы развития паразита. Это касается, в частности, срока выхода церкариев гельминта, числа вышедших адолескариев в зависимости от дозы инвазирования промежуточного хозяина, характер размножения спо-роцист трематоды, феномена появления в процессе лар-вального развития дочернего поколения редий и др.
Цель исследований
Выявить некоторые биологические свойства возбудителя фасциолеза F. ЪераПса, циркулирующего в условиях Центральной России.
Материалы и методы
Работу проводили в период с 2011 по 2015 гг. в лаборатории эпизоотологии паразитарных болезней ВНИИП. Куль-
Некоторые биологические свойства возбудителя фасциолеза Fasciola hepatica в отношении малого прудовика Lumnaea truncatula
Рис. 1. Малый прудовик (Lymnaea truncatula): жизнеспособный моллюск (а), погибшие беспозвоночные (б)
Fig. 1. Small pond snail (Lymnaea truncatula): a viable mollusc (а), a dead invertebrates (b)
Рис. 2. Стадии партеногенеза возбудителя фасциолеза в организме промежуточного хозяина: а — материнская спороциста, ок. 10, об. 10, б — редия с церкариями, ок. 10, об. 4
Fig. 2. Parthenogenesis stages of the fasdolosis activator developing in the body of an intermediate host: a — a maternal sporocysta, eyepiece 10, lens 10, b — redia with cercarya, eyepiece 10, lens 4
туру беспозвоночных — промежуточных хозяев F. hepatica собирали в естественных биотопах Московской, Брянской и Рязанской областей. Прудовиков помещали в кристаллизаторы, содержащие глину и полевые растения. Грунт и полевые растения были собраны с территории научно-испытательного отделения ВНИИП (Московская область, Подольский район, п. Курилово). Для освещения «биотопов» в лаборатории использовали фитолампы типа «Flu-ora», а для аэрации водных участков на грунте — аквариумные компрессоры. Жизнеспособность моллюсков выявляли при исследовании под бинокулярным микроскопом «Levenhuk 3ST» во время нагревания беспозвоночных на столике Морозова в течение 5.. .10 минут, определяя при этом двигательную способность прудовиков (рис. 1).
От экспериментально инвазированных морских свинок (через 2,5 мес после инвазирования адолескариями) получали культуру яиц F. hepatica. Культивирование яиц проводили по методу Г.А. Котельникова (1991). Моллюсков заражали индивидуально в пластиковом планшете, предназначенном для серологических исследований. В лунки планшета вносили по 2,5 мл дистиллированной воды и подсаживали в каждую лунку по одному моллюску. После выхода мирацидиев из яиц подвижные личинки фиксировали пипеткой и вносили их по 2 экземпляра в каждую лунку. Инвазирование промежуточных хозяев происходило в течение 18 ч. Инвазированность промежуточных хозяев партенитными стадиями гельминта выявляли посредством микроскопии при наличии в организме моллюска дочерних, материнских спороцист и редий с церкариями (рис. 2). Выход инвазионных личинок определяли подсчетом адо-лескариев, инцистированных на листьях порея ползучего, полученных из группы экспериментальных моллюсков.
Результаты
В начале исследований проверяли чувствительность промежуточных хозяев на инвазированность мирацидиями F. hepatica по эффекту гибели. Затем определяли про-
1. Динамика гибели моллюсков за период партеногенеза и выход церкариев фасциолы
1. Dynamics of snails death during a parthenogenesis and an exit cercaries of fasciola
Возраст Срок наблюдения, сутки Общее
период партеногении период выхода церкариев
10 14 18 27 38 45 49 51 моллюсков
1 день 28/30 - - - - - - - 28/30
5 дней - 3/30 6/27 7/21 12/14 - - - 28/30
7 дней - - - 12/30 11/18 4/7 - - 27/30
2 недели - - - 6/30 3/24 7/21 5/14 4/9 25/30
4 недели - - - 3/30 6/27 4/21 8/17 1/9 22/30
8 недель - - - - - 4/30 6/26 3/20 13/30
16 недель - - - - - 3/30 2/27 3/25 8/30
36 недель - - - - - - - - 0/30
Примечание: числитель — число погибших моллюсков, знаменатель — общее число моллюсков в группе
2. Зараженность мирацидиями фасциолы малого прудовика разного возраста
2. Infectiousness of a small pond snail of different age with fasaola miracidya
В Общее число Число зараженных Количество
моллюсков моллюсков моллюсков инвазированных
в опыте мирацидиями фасциолы моллюсков, %
1 день 30 28 93,3
5 дней 30 28 93,3
7 дней 30 27 90,0
2 недели 30 27 90,0
4 недели 30 27 90,0
8 недель 30 24 80,0
16 недель 30 13 43,3
36 недель 30 0 0
цент зараженности прудовиков после экспериментального заражения и одновременно учитывали период начала и окончания выхода церкариев из беспозвоночных.
Динамика гибели малого прудовика при экспериментальном заражении мирацидиями фасциолы приведена в таблице 1. Гибель моллюсков во время партеногенеза отмечали с 10-х суток по 27-е, во время выхода церкариев — с 38-х по 51-е сутки. Основная часть однодневных прудовиков погибла до 10-х суток исследований (28 из 30 особей). В период партеногенеза личинок фасциолы гибель отмечена у прудовиков в возрасте 5 и 7 дней, 2 и 4 недели. В период выхода церкариев из организма прудовика гибель промежуточных хозяев наблюдали с 38-х по 51-е сутки в возрастных группах 5 и 7 дней, 2...16 недель. Не восприимчивы к возбудителю фасциолеза оказались моллюски в возрасте 36 недель.
Инвазированность моллюска возбудителем фасциолеза представлена в таблице 2. Наибольший процент инва-зированных моллюсков оказался в двух возрастных группах — 1 и 5 суток. ЭЭ прудовиков возбудителем фасциолеза составила 93,3 %. Несколько менее инвазированны-ми (90,0 %) были промежуточные хозяева в возрасте от 1 до 4 недель. Зараженность личинками трематоды 8- и 16-недельных прудовиков составила 80,0 % и 43,3 %, соответственно. Взрослые прудовики (возраст 36 недель) оказались не восприимчивы к возбудителю фасциолеза.
Срок выхода первых церкариев из моллюсков в разных возрастных группах моллюсков составил 34.38 суток (рис. 3). Окончание выхода церкариев из беспозвоночных наблюдали с 64-х по 80-е сутки.
Количественный выход адолескариев трематоды каждой возрастной группы малых прудовиков был также различным (рис. 4, 5). Суточные прудовики после экспериментального инвазирования погибли на 10-е сутки, выход церкариев не наблюдали из-за возможной смерти личиночных форм паразита во время партеногонии. Среди 5-ти, 7-ми суточных и 16-ти недельных моллюсков выход
А.Н. Постевой, Р.А. Пешков, О.Н. Андреянов
1 лень S дней 7 дней 2 недели 4 недели S недель 16 недель недель
Рис. 3. Период выхода церкариев Fasciola hepatica из прудовика различных возрастных групп
Fig. 3. The exit period of cercaries Fasciola hepatica from a pond snail's body of different age groups
Рис. 5. Вышедшие адолескарии Fasciola hepatica на фрагментах растения, х4
Fig. 5. The left adolescaries of Fasciola hepatica on plant fragments, х 4
церкариев F. hepatica составил 304, 903 и 1256 экземпляров, соответственно. Массивный выход церкариев из экспериментально инвазированных прудовиков был выявлен во 2-й, 4-й и 8-ми недельных возрастных группах. У 36-ти недельных моллюсков выхода не наблюдали.
Результаты, полученные в научно-исследовательской работе, согласуются с данными литературных источников [1, 2, 5___8].
Заключение
Таким образом, при лабораторном заражении малого прудовика L. truncatula различных возрастных категорий отмечена значительная гибель молодых особей беспозвоночных от инвазирования мирацидиями F. hepatica. Основная гибель промежуточных хозяев трематоды в период партеногенеза отмечается в возрасте 5 и 7 дней, 2 и 4 недели. Основной восприимчивый возраст малого прудовика к паразиту — от 5 дней до 8 недель. Не восприимчивы к возбудителю трематодоза оказались беспозвоночные в возрасте 36 недель и старше. Начало выхода мезоцеркариев фасциолы из моллюсков в условиях лаборатории наблюдали с 34-х по 38-е сутки, окончание — с 64-х по 80-е сутки с момента ин-вазирования мирацидиями. Основной выход церкариев гельминта из промежуточного хозяина отмечен в возрасте 2_16 недель.
Выход адолескариев из моллюсков
Рис. 4. Количественный выход церкариев Fasciola hepatica из малого прудовика различных возрастных групп
Fig. 4. A quantitative exit of cercaries Fasciola hepatica from a small pond snail's body of different age groups
Анализируя полученные результаты, можно рекомендовать при разработке профилактических мероприятий против моллюсков в качестве мишени молодь малого прудовика, которая появляется в весенне-летний (май-июнь) и летне-осенний (август-сентябрь) периоды. Библиография
1. Азимов, Ш.А. К вопросу о жизненном цикле развития фасциол в организме промежуточных хозяев / Ш.А. Азимов //Тезисы докладов межреспубликанской научной конференции «Гельминты пищевых продуктов», 22-25 декабря, Самарканд,1972. — С. 82-83.
2. Астафьев, Б.А. Экспериментальные модели паразитозов в биологии и медицине / Б.А. Астафьев, Л.С. Яроцкий, М.Н. Лебедева. — М.: Наука, 1989. — 279 с.
3. Здун, В.И. Материалы экологии личинок возбудителей фасциолеза и парамфистоматоза. В кн. Паразиты, промежуточные хозяева и переносчики / В.И. Здун. — Киев, 1966. — С. 75-77.
4. Котельников, Г.А. Гельминтологические исследования окружающей среды / ГА. Котельников. — М.: Росагропро-миздат, 1991. — 144 с.
5. Круглов, Н.Д. Моллюски семейства прудовиков Европы и Северной Азии / Н.Д. Круглов. — Смоленск: СГПУ, 2005. — 507 с.
6. Соколина, Ф.М. Эксперименты по заражению лимнеид мирацидиями печеночной двуустки. В кн. Вопросы малакологии Сибири. / Ф.М. Соколина. — Томск, 1969. — С. 155-159.
7. Соколина, Ф.М. Пути проникновения мирацидиев Fasciola hepatica (Linne, 1758) в гепатопанкреас Lymnaea tuncatula (Muller, 1774) и Lymnaea cubensis (Pfeifer, 1839) и возникающие патологии. / Ф.М. Соколина и др. // Материалы докладов научной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями».—2010. — Вып. 11.—С. 445-448.
8. Тернопольская, Л.Д. Развитие трематод Fasciola hepatica Linne, 1758 и Fasciola gigantica (Cobbold, 1855) в промежуточном хозяине. / Л.Д. Тернопольская // Труды Всероссийского ордена Красного Знамени института гельминтологии им. К.И. Скрябина. — 1971. — Т. 18. — С. 265-269.
References
1. Azimov Sh. A. K voprosu o zhiznennom cikle razvitija fasciol v organizme promezhutochnyh hozjaev (To a question of life cycle of development fasciola in an intermedia owners). Proceedings of the interrepublican scientific conference Helminths of Foodstuff, on December 22-25, Samarkand, 1972, P. 82-83.
2. Astaf'ev B.A., Jarockij L.S., Lebedeva M.N. Jeksperimental'nye modeli parazitozov v biologii i medicine (Experimental models of parasitosises in biology and medicine), Moscow, Nauka, 1989, pp. 279.
3. Zdun V.I. Materialy jekologii lichinok vozbuditelej fascioleza i paramfistomatoza (Materials of ecology of the fasciolia-sis and paramphistomatosis activator larvae). In Problemy parazitologii (Problems of parasitology), Kiev, 1966, P. 75-77.
4. Kotel'nikov G.A. Gel'mintologicheskie issledovanija okruzhajushhej sredy (Helmintological researches of environment), Moscow, Rosagropromizdat, 1991, pp. 144.
5. Kruglov N.D. Molljuski semejstva prudovikov Evropy i Severnoj Azii (Mollusks of family of pond snails of Europe and Northern Asia), Smolensk. SGPU, 2005, pp. 507.
6. Sokolina F.M. Jeksperimenty po zarazheniju limneid miracidijami pechenochnoj dvuustki (Experiments on infection of the limneid miracidia with a hepatic fluke). V kn. Voprosy malakologii Sibiri (In Questions of malacology of Sibiria), Tomsk, 1969, P. 155-159.
7. Sokolina F.M., Ignat'ev G., Villasenor O.C., Sanchez-Vega J.T. Teorija i praktika bor'by s parazitarnymi boleznjami (Scientific Conference Theory and practice of struggle against parasitic diseases), Аbstracts of Papers, 2010, Is. 11, P. 445-448.
8. Ternopol'skaja L.D. Trudy Vserossijskogo ordena Krasnogo Znameni instituta gel'mintologii im. K.I. Skrjabina, 1971, Vol. 18, P. 265-269.
ABSTRACT
A.N. Postevoy, R.A. Peshkov, O.N. Andreyanov
All-Russian research institute of fundamental and applied parasitology of animals and plants of name K.I. Scriabina (117218, Moscow, B. Cheremushkinskaya St., 28).
Some Biological Properties of the Fasciolosis Activator F. hepatica in attitude to the Small Pond Snail of Lumnaea truncatula. Animal and human helmintozis diseases remain actual at present. Fasciolosis is one of widespread zoonozes. Nowdays the biology and ecology of this invasion activator are studied by Russian and foreign qualified specialists.
Purpose. Our purpose was to study some biological properties of the activator of fasciolosis F. hepatica.
Materials and methods. The research was carried out from 2011 till 2015 in laboratory of an epizootology of parasitic diseases of VNIIP. The culture of invertebrates — intermediate hosts of F. hepatica were collected in natural biotopes of Moscow, Bryansk and Ryazan regions and area of scientific and test office of VNIIP (The Moscow region, the Podolsk area, Kurilovo). The culture of F. hepatica eggs were obtained from experimentally invasion guinea pigs. Cultivation of eggs was performed by the method of G.A. Kotelnikov (1991).
Conclusion. A result of our experiences was the mollusc shellfish snails death during the parthenogenetic development of the parasite (from the 10th on till 27th days), during the exit cercaries (from the 38th till the 51st days). The highest percent of the invasioned snails by helminth were in two age groups — 1 and 5 days. EE of pond snails by the activator of facsiolosis was 93.3 %. In different age groups of snails the period of an exit of the first cercaries from snail's body was 34...38 days. The end of exit cercaries from invertebrates was observed from 64th till the 80th days. The massive exit cercaries from experimentally invasioned pond snails was revealed in the two-, four- and eight- weeks-old groups of snails. At 36-weeks-old snails an exit of cercaries was not observed. As a result of researches we recommend to develop preventive actions against juvenile small pond snail, a massive exit of them takes place in spring-summer and autumn periods. Keywords: adolescaria, age, mollusc, fasciolozis, experimental infection, Lymnaea truncatula, Fasciola hepatica.
