CC BY
72
Перспективы дальнейших исследований. В последующих исследованиях планируется изучение особенностей распределения меченых кМСК при экспериментальной дистрофии роговицы.
Ш
1.Грищенко В. I. Кттина i тканина тератя: сучасне i майбутне / В. I. Грищенко // Трансплантолопя. - 2000. - Т. 1, № 1. - С. 15-17.
2.Грищенко В.И. Трансплантация продуктов эмбрио-фетоплацентарного комплекса. От понимания механизма действия к повышению эффективности применения / В.И. Грищенко, А.Н. Гольцев // Пробл. криобиологии. - 2002. - № 1. - С. 54-85.
3.Говоруха Т. П. Структурная характеристика плаценты после инкубации с ДМСО / Т. П. Говоруха, Н. В. Репин, О. М. Щупиков // Пробл. криобиологии. - 2003. - № 2. - С. 91-97.
4.Грищенко В. И. Криоконсервирование стволовых клеток / В.И. Грищенко, А. Н. Гольцев, Е. А. Щегельская [и др.] // Достижения биологии и медицины. - 2006. - №1 (7). - С. 4-9.
5.Кухарчук А. П. Стволовые клетки: Эксперимент, теория, клиника. КРС / А. П. Кухарчук, В. В. Радченко, В. М. Сирман // Мед. Технологии. - Киев, - 2004.- С. 246-325.
6.Пятикоп В. А. Восстановление стуктурно-функциональных параметров у крыс с криогенной травмой головного мозга, индуцированных в нейробласты / В. А. Пятикоп, Е. А. Щегельская, Ю. Е. Микулинский [и др.] // Пробл. криобиологии. -2005. - Т. 15, № 3. - С. 449-451
7.Пат. 13724 Укра'ша, МПК С12Ш/08. Споаб одержання суправтльно забарвлених клтн рiзних титв бюлопчних тканин / (И.А. Боровой) Ю.В. Малюкин, В.П. Семиноженко, Е.А. Щегельская, Ю.Е. Микулинский, Ю.А. Демин, В.А. Пятикоп, (ИД). - № 13724; Заяв.: 17.10.2005; Опубл. 17.04.2006, Бюл. № 4. - 4 с
ВИВЧЕННЯ РОЗПОД1ЛУ КР1ОКОНСЕРВОВАНИХ
МЕЗЕНХ1МАЛЬНИХ СТРОМАЛЬНИХ КЛ1ТИН М1ЧЕНИХ ФЛУОРЕСЦЕНТНИМИ БАРВНИКАМИ У ДЕСТРУКТИВНО ЗМ1НЕН1Й РОГ1ВКИ КРОЛИКА
Дьомш Ю. А., Швненко А. В., Дьомша М. Ю., Скоробогатова Н. Г., Петренко Ю. А.
Наведен результати застосування кМСК при експериментальнш травмi роговию. Вивчена можливють марюрування кМСК барвником БЮС-18. Простежений розподш мiчених кМСК в ушкодженш роговиц тсля введення в зону лiмба. Показана перевага використання БЮС-18 для вивчення м^рацй кМСК в ушкодженш тканиш.
Ключовi слова: флуорецентна м™а, травма рогiвки, мезенхiмальнi стромальнi клтни.
Стаття надiйшла 05.02.2014р.
STUDY OF DISTRIBUTION CRYOPRESERVED MESENCHYMAL STROMAL CELLS LABELED WITH FLUORESCENT DYES IN DESTRUCTIVE CHANGES RABBIT CORNEA Demin A., Pivnenko A.V., Yu Demin M., Skorobogatov N.G., Petrenko A.
The results of application of cryopreserved MSC are resulted at the experimental trauma of cornea. Possibility of marking of MSC is studied with dye DiOC-18. Distributing of marked cryopreserved MSK is traced in the damaged cornea after introduction to the area of limb. Advantage of the use DiOC-18 is rotined for the study of migration of cryopreserved MSC in the damaged tissue.
Key words: fluorescent tag, corneal trauma, mesenchymal stromal cells.
Рецензент Шеттько B.I.
УДК 615.218.2-085:577.15
НАРУШЕНИЕ НОРМАЛЬНОЙ МИКРОФЛОРЫ КИШЕЧНИКА КРЫС НА ФОНЕ ПИЩЕВОЙ АНАФИЛАКСИИ И ИХ КОРРЕКЦИЯ
В опытах на белых крысах на фоне экспериментальной модели пищевой анафилаксии наблюдались в заметной степени дисбиотические нарушения в нормальной микрофлоре тонкого и толстого кишечниках. Фенкарол и задитен, введенные с лечебной целью после анафилаксии, оказывали заметное корригирующее действие на отмеченные нарушения. Выявлено, что по лечебному эффекту фенкарол незначительно превосходит задитен. Но, они не смогут в достаточной степени восстановить наблюдаемые нарушения в кишечной микрофлоре, вызванные анафилаксией
Ключевые слова: пищевая анафилаксия, микрофлора кишечника, фенкарол, задитен.
Работа является фрагментом НИР «Изучение влияния нейролептиков, транквилизаторов и антигистаминных средств на активность гидролитических ферментов тонкого кишечника и поджелудочной железы в норме и при некоторых патологических состояниях», номер госрегистрации 01910006234.
Известно, что при различных аллергических заболеваниях организма происходит изменение состояния разных органов и систем, а пищеварительный тракт относится именно к таким системам. Вследствие имеющегося соприкосновения большей площади желудочно-кишечного тракта с внешней средой ее слизистая оболочка образует микроэкологическую систему, состоящую из множества видов микроорганизмов. Кишечная микрофлора из-за своего антагонистического свойства не только защищает организм от воздействия патогенных и условно-патогенных бактерий, но и широко участвует в синтезе витаминов, в ферментативных процессах, в обмене веществ и в обеспечении иммунобиологической активности. Поэтому, изменения этой системы могут привести к нарушению обмена веществ, к дефициту микронутриентов, как минералы, витамины и микроэлементы, и к снижению иммунологического статуса организма [6, 7]. Как известно, в повседневной практике для профилактики и лечения аллергических © Исмоилов С. Р., Каримова Д. Ш. и др., 2014 119
заболеваний наряду с другими лекарственными веществами широко применяются антигистаминные препараты [2, 3]. Однако остается малоизученным разностороннее влияние этих препаратов на микробиоценоз кишечника при различных аллергических состояниях организма.
Целью работы было изучение нарушения нормальной микрофлоры кишечника при пассивных анафилактических реакциях и стремились разумно оценить влияние фенкарола и задитена на наблюдаемые нарушения при этой патологии.
Материал и методы исследования. Эксперименты проводились на 50 белых беспородных крысах обоего пола массой тела 120-200 г, которые содержались в стандартных условиях лабораторного вивария и находились на обычном пищевом рационе. Для микробиологического исследования после декапитации и вскрытия брюшной полости крыс взяли по 1 мл материала из нижней части тонкого и толстого кишечника и доставили в бакпечатках в бактериологическую лабораторию в течение 2 часов. Бактериологическое исследование взятого материала проводили по методике Ф.Ю.Гариба и др. [1]. Идентификацию высеянных микроорганизмов проводили по «Краткому определителю бактерий Берги» [4]. Количество бактерий в каждом виде выражали в Ь§ КОЕ/мл.
Экспериментальную модель пищевую анафилаксию вызывали по методу В.А.Шатерникова [5]. На фоне пищевой анафилаксии состояния микрофлоры тонкого и толстого кишечника изучали через 24 и 48 часов после нее. Пищевую анафилаксию вызывали также на фоне фенкарола и задитена, которые вводили в утренние часы ежедневно перорально с первого дня кормления животных яичным белком. Для выяснения влияния этих препаратов на наблюдаемые нарушения со стороны микрофлоры тонкой и толстой кишки на фоне пищевой анафилаксии, опыты проводили на 24-ый и 48-ой часы анафилаксии и на 3-ий и 7-ой дни после нее. Белок в гомогенате поджелудочной железы определяли по методу О.Н.Ьошу е! а1. [8]. Концентрацию белка выражали в миллиграммах на 1 грамм массы поджелудочной железы (мг/г), общее содержание белка (мг) перерассчитывали на всю массу поджелудочной железы.
Статистическую обработку полученных результатов проводили по критериям Стьюдента с вычислением средних арифметических величин (М), их стандартных ошибок (т), показателей достоверности различий сравниваемых величин (Р). Величину Р < 0,05 рассматривали как показатель достоверных различий.
Результаты исследования и их обсуждение. Анализ результатов исследований показал, что на фоне экспериментальной модели пищевой анафилаксии наблюдались выраженные дисбиотические нарушения в микрофлоре кишечника (табл. 1). На 24-ом часе после анафилаксии в тонком кишечнике отмечалось достоверное понижение анаэробной флоры, соотношение анаэробной флоры тонкого кишечника к аэробной равнялось 1:1,9. В толстом кишечнике выявилось понижение анаэробной флоры за счет лактобактерий и повышение аэробной флоры за счет протея. Кроме этого, содержание грибов в толстом кишечнике повышалось в 1,3 раза. На 72-ом часе после нее соотношение анаэробной флоры тонкого кишечника к аэробной равнялось 1:2,5. Наблюдалось возрастание стрептококков на 36%
Таблица 1
Влияние фенкарола и задитена на кишечную микрофлору при пищевой анафилаксии (Lg КОЕ/мл)
(М±т, п=7)
Группы Микрофлора тонкого кишечника
Об. кол-во анаэробов Об. кол-во аэробов 81арЬу1а- СоССИЙ 81гер! ГесаНй Е.СоН Ргс^еий Грибы Лактоза (-) Е.СоН
Контроль 3,16±0,14 3,78±0,14 2,54±0,37 3,36±0,33 3,24±0,08 1,01±0,16 1,88±0,32 0,98±0,05
ПА, 24 ч 2,21±0,58 4,27±0,18* 2,58±0,15 3,57±0,62 3,60±0,16* 1,94±0,14* 2,22±0,11 1,61±0,16*
Ф+ПА,24 ч 2,00±0,14* 5,03±0,37* 2,94±0,15 4,30±0,72 4,23±0,31* 1,95±0,37* 2,24±0,43 1,81±0,06*
З+ПА,24 ч 2,26±0,18* 4,94±0,21* 2,81±0,54 4,50±0,36* 4,37±0,17* 2,66±0,17* 2,76±0,20 2,07±0,15*
ПА, 72 ч 1,97±0,10* 5,01±0,22* 2,91±0,14 4,56±0,30* 4,36±0,22* 2,13±0,40* 2,35±0,66 1,83±0,10*
Ф+ПА,72 ч 2,41±0,16* 4,54±0,29* 2,45±0,51 2,96±0,56 4,19±0,19* 1,60±0,31 1,86±0,51 1,54±0,16*
З+ПА,72 ч 2,26±0,11* 4,60±0,31* 2,75±0,34 3,01±0,57 4,10±0,18* 1,62±0,30 1,89±0,51 1,57±0,19*
Микрофлора толстого кишечника
Об.кол. анаэр-в Бифидо-бактерии Лактобак-терии Об.кол-во аэробов 81арЬу1о- СОССИЙ ЕйегоСоС-СИЙ Е.СоН Ргс^еий Грибы Лакоза (-) Е.СоН
9,29±0,32 8,39±0,18 8,56±0,19 6,21±0,19 4,83±0,22 5,26±0,20 5,33±0,14 2,67±0,38 2,64±0,39 1,24±0,12
8,21±0,39 8,01±0,17 7,44±1,28 6,80±0,30 4,79±0,30 5,30±0,23 4,62±0,29* 3,47±0,26 3,56±0,30 2,72±0,18*
7,66±0,24* 6,53±0,28* 7,33±0,26* 6,66±0,26 5,51±0,31 4,17±0,22* 6,07±0,27* 3,10±0,23 3,16±0,13 2,14±0,14*
7,77±0,18* 6,64±0,26* 7,63±0,19* 6,34±0,44 5,54±0,20* 3,72±1,03 5,52±0,19 3,21±0,23 3,21±0,12 2,16±0,27*
7,84±0,33* 6,61±1,12 7,30±0,19* 6,77±0,32 4,59±0,22 4,04±0,12* 5,26±0,16 3,25±0,21 3,50±0,60 2,51±0,16*
8,35±0,20 7,36±0,16* 7,35±0,33* 6,81±0,44 4,53±0,81 4,34±0,76 5,43±0,26 3,40±0,18 2,62±0,71 2,02±0,20*
8,24±0,28* 7,39±0,18* 7,13±0,38* 6,79±0,48 4,59±0,82 4,38±0,77 5,49±0,29 3,43±0,17 2,59±0,69 1,93±0,18*
Примечание: ПА - пищевая анафилаксия; Ф+ПА, З+ПА - группы животных, получавшие в процессе вызывания пищевой анафилаксии соответственно фенкарол и задитен; знак * - различия, статистически достоверные по отношению к контрольной группы.
Показатель считался достоверным при Р < 0,05.Также, содержание грибов в 1,3 раза превышало контрольные показатели. В толстом кишечнике анаэробная флора понижалась на 16%, из аэробной флоры энтерококки - на 21%, протеи - на 22%. Грибы повышались в 1,3 раза. Как видно из приведенных данных, на 72-ом часе после анафилаксии отмечались более глубокие дисбиотические нарушения в кишечной микрофлоре по сравнению с 24-ым часом, это у отдельных особей привело и к диареи.
Естественное восстановление кишечной микрофлоры после пищевой анафилаксии изучалось на 3-ий и 7-ой дни экспериментов. На 3-ий день анафилаксии не наблюдалось признаков восстановления микрофлоры кишечника, а на ее 7-ой день со стороны тонкой кишки отмечалась тенденция к повышению аэробов, что составляло 12% и понижение анаэробов на 30%, грибы повышались на 21%. Со стороны толстой кишки - анаэробы на 12% ниже контрольных показателей, а аэробы - на уровне. Снижение содержания лактобактерий составляло 15%. Необходимо отметить, что произошло значительное восстановление показателей кишечной флоры на 7-ой день после анафилаксии по сравнению с 3-им днем, которое еще осталось полностью не восстановленным.
Антигистаминные препараты при пищевой анафилаксии оказывали выраженный корригирующий эффект на отмеченные дисбиотические нарушения со стороны кишечной микрофлоры, обусловленные анафилаксией (табл. 1). На фоне фенкарола через 24 часа после анафилаксии в микрофлоре тонкого кишечника наблюдалось снижение содержания анаэробов на 37%, повышение аэробов на 33%, стрептококков - на 28%, кишечной палочки - на 31% и грибов - на 19%. В микрофлоре толстого кишечника определялось понижение анаэробов на 18%, бифидобактерий - на 22%, энтерококков - на 21%, возрастание грибов на 20%, лактоза негативных форм Б.соН - на 73% случаев. Через 72 часа после анафилаксии в микрофлоре тонкого кишечника определялось снижение анаэробов на 24%, повышение аэробов на 20%, кишечной палочки - на 29%, протея - на 58%, лактоза негативные формы Б.соН - на 57%. В микрофлоре толстого кишечника содержание анаэробов нормализовалось на 37% по сравнению с контрольными данными. Также наблюдалось повышение содержания протея на 27%, лактоза негативных форм Б.соН - на 63%. На фоне задитена через 24 часа после пищевой анафилаксии в микрофлоре тонкого кишечника обнаруживалось снижение анаэробов на 28%, повышение аэробов на 31%, стрептококков - на 34%, кишечной палочки - на 35%, грибов - на 47%. В микрофлоре толстого кишечника - снижение анаэробных бактерий на 16%, бифидобактерий - на 21%, энтерококков - на 29%, повышение протея на 20%, грибов - на 22% и лактоза негативных форм Б.соН - на 74%. Через 72 часа после анафилаксии в микрофлоре тонкого кишечника определялось снижение анаэробов на 28%, повышение аэробов на 22%, кишечной палочки - на 26%, протея - на 60%, лактоза негативных форм Б.соН - на 60%. Во флоре толстого кишечника тенденция к понижению анаэробов на 11%, понижение лактобатерий и энтерококков на 17%, возрастание содержания протея на 28% и лактоза негативных форм Б.соН - на 56%. Как видно из приведенных данных, на фоне антигистаминных препаратов произошло заметное протективное действие на микрофлору кишечника, т.к. на 72-ом часе анафилаксии на фоне фенкарола и задитена со стороны микрофлоры тонкого кишечника анаэробные бактерии нормализовались на 37% и 24%, а со стороны толстого кишечника - 37% и 28%, соответственно.
При изучении естественного восстановления кишечной микрофлоры после анафилаксии на фоне фенкарола и задитена на 3-ий день экспериментов сохранялись вышеотмеченные нарушения, наблюдавшиеся у крыс в стадии пищевой анафилаксии без применения лекарств. На фоне фенкарола на 7-ой день лечения в микрофлоре тонкого кишечника выявилось повышение протея в 2,1 раза и лактоза негативных форм Б.соН в 2,2 раза. Со стороны флоры толстого кишечника - снижение лактобактерий на 14%, повышение протея на 29% и лактоза негативных форм Б.соН на 48%. На фоне задитена на 7-ой день экспериментов со стороны микрофлоры тонкого кишечника определялось повышение протея на 66%. Во флоре толстой кишки - понижение лактобактерий на 14%, повышение протея на 31% и лактоза негативных форм Б.соН на 24%.
1. На фоне экспериментальной модели пищевой анафилаксии наблюдаются выраженные дисбиотические нарушения в микрофлоре кишечника.
2. При использовании фенкарола и задитена на фоне вызывания пищевой анафилаксии они в значительной степени оказывают протективное действие на кишечную микрофлору и при этом задитен незначительно превалирует фенкарол. А при применении с лечебной целью этих препаратов они оказывают в определенной степени корригирующий эффект и при этом фенкарол нивелирует задитен.
3. Фенкарол и задитен не смогут достаточно восстановить наблюдаемые нарушения в кишечной микрофлоре, вызванные анафилаксией.
Перспективы дальнейших исследований. Учитывая важную патогенетическую роль нарушений микробиоценоза кишечника при пищевой анафилаксии в следующих исследованиях будет проводиться изучение комплексного лечения пищевой анафилаксии с включением антигистаминных препаратов и лекарственных средств, восстанавливающих дисбиотические сдвиги в кишечнике.
1.Гариб Ф. Ю. Микробиологическая диагностика дисбактериоза кишечника и его коррекция при помощи бактерийных препаратов «Ором» и «Бифидумбактерин-L» / Ф. Ю. Гариб, И.Э. Норбаева, А.М-Т. Бектемиров [и др.]. - Методическая рекомендация.- Ташкент. - 1994. - 13 с.
2.Исмоилов С.Р. Нарушение активности пищеварительных ферментов поджелудочной железы на фоне сенсибилизации и их коррекция антигистаминными препаратами / И.Р. Исмоилов // Здобутки клтачно! i експериментально! медицины. - 2006. №1. - С 54-58.
3.Полосьянц О.Б. Антигистаминные препараты: от димедрола к телфасту. / О.Б. Полосьянц, Е.Г. Силина, Л.С. Намазова // Лечащий врач. - 2001. - №.3, С.32-37.
4.Хоулт Дж. Краткий определитель бактерий Берги / Дж. Хоулт. - М.: «Мир». - 1994. - 496 с.
5.Шатерников В.А. Экспериментальное воспроизведение анафилаксии / В.А. Шатерников, И.Н. Марокко, Н.Н. Пятницкий [и др.] // Вопросы Питания. - 1982. №2. - С. 27-31.
6. Шахмарданов М.З. Важность ликвидации очага и синхронизации коррекции нарушений микрофлоры кишечника у больных шигеллезом / М. З. Шахмарданов, В. М. Бондаренко, Н. П. Исаева // Журнал микробиологии - 1998. -№ 6 - С. 71 -73.
7.Hunter J.O. A review of the role of the gut microflora in irritable bowel syndrome and the effects of probiotics. / J. O. Hunter, J.A. Madden // Br. J. Nutr., - 2002. - Vol. 88 (suppl. 1). - 6 C.
8.Lowry O. H. Protein measurement with the folin phenol reagent. / O.H. Lowry, N. J. Rosenbrough, A. L. Farr [et al.] // J. Biol. Chem., - 1951. Vol.193. № 1. P.265-275.
ПОРУШЕННЯ НОРМАЛЬНО1 М1КРОФЛОРИ КИШЕЧНИКУ ЩУР1В НА ТЛ1 ХАРЧОВО1 АНАФИЛАКСИИ I IX КОРЕКЦ1Я 1смошов С. Р., Карiмова Д. Ш., Ахмедова Н. М., 1бадуллаев
Б.
У дослщах на бших щурах на тта експериментально! моделi харчово! анафшаксп спостерталися в помто! ступеня дисбютичш порушення в нормальнш мiкрофлорi тонкого i товстого кишечника. Фенкарол та задитен, введет з лжувальною метою тсля анафшаксп, справляли помтий коригуючий дто на зазначеш порушення. Виявлено, що по лжувальному ефекту фенкарол незначно перевершуе задитен. Але, вони не зможуть достатньою мiрою вiдновити спостережуван порушення в кишково! мiкрофлори, викликан анафiлаксiею
Ключовi слова: харчова анафшакЫя, мiкрофлора кишечника, фенкарол, задитен .
Стаття надiйшла 18.02.2014 р.
DISTURBANCE OF NORMAL INTESTINAL FLORA OF RATS ON A BACKGROUND OF FOOD ANAPHYLAXIS AND THEIR CORRECTION Ismoilov S.R., Karimova D.SH., Ahmedova N.M., Ibadullaev B.
In experiments with white rats against experimental model of food anaphylaxis observed a marked degree disbiotic violations in the normal flora of the small and large intestines. Fencarole and zaditen, introduction for therapeutic purposes after anaphylaxis, had a notable effect on correctiny the violations. Revealed, that the effect of the treatment on fencarole slightly exceed zaditen. But, they can not sufficiently restore the observed irregularities in the intestines microflora induced anaphylaxis.
Key words: food anaphylaxis, intestinal microflora, fencarole, zaditen.
Рецензент Лобань Г. А.
УДК 611.814.1+616.379-008.64
МОРФОФУНКЦ1ОНАЛЬН1 ЗМ1НИ ДУГОПОД1БНОГО ЯДРА Г1ПОТАЛАМУСА НА РАНН1Х СТАД1ЯХ РОЗВИТКУ СТРЕПТОЗОТОЦИНОВОГО Д1АБЕТУ
На 14-у добу розвитку стрептозотоцинового дiабету в дугоподiбному ядрi гiпоталамуса спостерiгалися компенсаторно-пристосувальнi процеси у вщповщь на гiперглiкемiю, якi характеризувалися морфолопчними ознаками пiдвищення функцюнально! активност його нейронiв, а саме, збшьшенням площi нейронiв, !х ядер, гiпертрофiею бшок-синтезуючого апарату i зростанням об'емно'! щiльностi в них нейросекреторних гранул. На 28-у добу проткання експериментального цукрового дiабету в нейронах вiдмiчались дистрофiчно-деструктивнi змiни, якi розвивались на тлi дiабетичноl мкроанпопатп i явищ сателiтозу. Все це призводило до зменшення функционально! активностi нейрошв, що пiдтверджувалося достовiрним зменшенням об'емно! щшьносп в них нейросекреторних гранул.
Ключовi слова: дугоподiбне ядро, стрептозотоциновий цукровий дiабет.
Робота е фрагментом НДР "Морфофункцюналъна характеристика деяких оргашв та функщоналъних систем при цукровому дiабетi в постнаталъному перiодi онтогенезу" (номер держреестрацХ 0109и001106) та "Оптимiзацiя комплексного л^вання морфологiчнихушкодженъ травноI, ендокринноХ та сечостатевоХ систем при цукровому дiабетi" (номер держреестрацХ 0113и000769).
Цукровий д1абет (ЦД) е одшею 1з важливих медико-сощальних проблем у цшому свт та першим серед ендокринних захворювань, де частота його сягае 70 %. У пошуках нових ефективних метод1в лшування [ проф1лактики даного захворювання останшм часом велику увагу досл1дник1в зосереджено на вивченн1 рол1 нейропептид1в гшоталамуса та !хньо! участ1 в регулящ! функцй' панкреатичних остр1вц1в [7]. Так, нейрогормони середнього г1поталамуса, зокрема дугопод1бного ядра (ДЯ), впливають на екзо- I
©Жураювська О.Я., 2014
122
