CC BY
20
УДК 618.344-06:577.175.632]578.825.12:616-036.65
DOI: 10.12737/article_59acba4a9aebc9.37532870
НАРУШЕНИЕ АКТИВНОСТИ 20а-ГИДРОКСИСТЕРОИДДЕГИДРОГЕНАЗЫ В СИНЦИТИОТРОФОБЛАСТЕ ВОРСИНЧАТОГО ХОРИОНА ПРИ ОБОСТРЕНИИ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ ВО ВРЕМЯ БЕРЕМЕННОСТИ
И.В.Довжикова1, М.Т-Луценко1, К.К.Петрова1, Л.Ф.Шолохов2
1Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания», 675000, г. Благовещенск, ул. Калинина, 22 2Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека», 664003, г. Иркутск, ул. Тимирязева, 16
РЕЗЮМЕ
Цель работы - оценка характера влияния цито-мегаловирусной инфекции на активность 20а-гид-роксистероиддегидрогеназы в
синцитиотрофобласте ворсинчатого хориона в первом триместре беременности. Материалом для исследования послужили 48 ворсинчатых хорионов, взятых при самопроизвольных абортах в срок 8-10 недель от женщин с реактивацией хронической ци-томегаловирусной инфекции во время беременности (основная группа). Контрольную группу составили 35 ворсинчатых хорионов беременных с хронической цитомегаловирусной инфекцией в латентной стадии, взятых при проведении медицинских абортов на том же сроке гестации. Результаты обследования беременных женщин анализировали с позиции активности цитомегаловирусной инфекции иммуноферментным методом по наличию антител IgM или по величине четырехкратного и более нарастания титра антител IgG в парных сыворотках в динамике через 10 дней. Активность 20а-гидроксистероиддегидрогеназы оценивали гистохимическим методом. Количественная оценка продуктов реакции на срезах проводилась под микроскопом МТ (Япония), связанным с программно-аппаратным комплексом SCION Corporation (США). На гистохимических препаратах ворсинчатого хориона беременных основной группы, перенесших обострение хронической цитомегало-вирусной инфекции, отмечалось снижение цитофо-тометрического показателя активности 20а-гидро-ксипрогестерондегидрогеназы до 30,1±2,12 пик-селей/мкм2 (р<0,001) по сравнению с контрольной группой. Снижение активности реакции в синци-тиотрофобласте ворсинок плаценты указывало на уменьшение содержания 20а-дигидропрогестерона в плаценте, что способствовало, по нашему мнению, прерыванию беременности.
Ключевые слова: цитомегаловирус, ворсинчатый хорион, беременность, прогестерон, 20а-дигидропро-гестерон.
SUMMARY
DISTURBANCE OF 20a-HYDR0XYSTER0ID DEHYDROGENASE ACTIVITY IN VILLOUS CHORION SYNCIOTHYTHROPHOBLAST AT REACTIVATION OF CYTOMEGALOVIRUS INFECTION DURING PREGNANCY
I.V.Dovzhikova1, M.T.Lutsenko1, K.K.Petrova1, L.F.Sholokhov2
1Far Eastern Scientific Center of Physiology and
Pathology of Respiration, 22 Kalinina Str., Blagoveshchensk, 675000, Russian Federation 2Scientific Center of Family Health Problems and Human
Reproduction, 16 Timiryazeva Str., Irkutsk, 664003, Russian Federation
The aim of the work is to assess the effects of cytomegalovirus infection on the 20a-hydroxysteroid de-hydrogenase activity in the villous chorion syncytiotrophoblast in the first trimester of pregnancy. The materials for the study included 48 villous chorions samples taken during spontaneous abortions at 8th-10th weeks of gestation from women with reactivation of cytomegalovirus infection (the main group). The control group included 35 villous chorions samples from pregnant women with chronic cytomegalovirus infection in the latent stage taken at medical abortions at the same stage of gestation. The results of women's examination were studied taken into account the activity of cytomegalovirus infection by immunoassay by detection of IgM antibodies or by 4 times and more increase of IgG antibody titers in the paired serums in dynamics in 10 days. The activity of 20a-hydroxysteroid dehydro-genase was assessed by the histochemical method. Quantitative evaluation of the reaction products was carried out on sections under the microscope MT (Japan) connected to software-hardware complex «SCION Corporation» (USA). At histochemical specimen of villous chorion of pregnant women who had a reactivation of cytomegalovirus infection during pregnancy (main group), there was a decrease of cytopho-tometric parameter of 20a-hydroxysteroid dehydrogenase activity till 30.1±2.12 pixels/^m2 (p<0.001) compared with the control group. The decrease in the reaction activity in syncytiotrophoblast indicated a decrease in the contents of 20a-dihydroprogesterone in placenta, which contributed, in our opinion, to spontaneous abortion.
Key words: cytomegalovirus, villous chorion, pregnancy, progesterone, 20a-hydroxyprogesterone.
В последние годы возросла значимость проблемы цитомегаловирусной инфекции в связи с широким распространением ее возбудителя, обусловленным снижением иммунологической резистентности у населения, ухудшением социально-экономических условий жизни
людей, широким применением в клинической практике антибиотиков, гормонов, иммунодепрессантов. Период беременности характеризуется наличием неспецифической депрессии иммунной системы, что способствует обострению хронической инфекции. В большинстве случаев цитомегаловирусная инфекция протекает бессимптомно или в виде субклинической, инаппарантной, хронической формы, которая не вызывает никаких субъективных или объективных клинических проявлений. Об активизации хронического процесса в этом случае свидетельствуют высокие показатели титров антител [3].
Приблизительно у 15% женщин с обострением ци-томегаловирусной инфекции на ранней стадии беременности регистрируется самопроизвольный аборт [6]. При этом наличие инфекции регистрируется в плаценте, но не у плода, что привело к выводу о важной роли этого органа для исходов беременности при обострении цитомегаловирусной инфекции. Одной из функций плаценты является синтез стероидных гормонов для поддержания беременности. Большое значение имеют гестагены: прогестерон и его метаболиты. Основным метаболитом прогестерона в плаценте является 20а-дигидропрогестерон [2], который обладает токолитическим эффектом [8], заключающимся в поддерживании миометрия в состоянии покоя [7]. Реакция превращения прогестерона в 20а-дигидропрогестерон катализируется 20а-гидроксистероиддегидрогеназой [1].
Целью нашего исследования была оценка характера влияния цитомегаловирусной инфекции на активность 20а-гидроксипрогестерондегидрогеназы в синцитиот-рофобласте ворсинчатого хориона в первом триместре беременности.
Материалы и методы исследования
Материалом для исследования послужили 38 ворсинчатых хорионов, взятых при самопроизвольных абортах в срок 8-10 недель от женщин с диагнозом обострение хронической цитомегаловирусной инфекции (основная группа), а также 32 ворсинчатых хориона, взятых при проведении медицинских абортов на том же сроке гестации от женщин с обострением хронической цитомегаловирусной инфекции (группа сравнения). Контрольную группу составили 35 ворсинчатых хорионов беременных с хронической цитомегалови-русной инфекцией в латентной стадии, взятых при проведении медицинских абортов в срок 8-10 недель.
Исследования проводили с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2008 г. и нормативных документов «Правила надлежащей клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом №200 от 01.04.2016 МЗ РФ.
Клинический диагноз обострения хронической ци-томегаловирусной инфекции устанавливался по результатам комплексного исследования периферической крови на наличие ДНК цитомегаловируса, ^М или увеличение титра антител IgG в парных сыворотках (в
4 раза и более) в динамике через 10 суток, а также индекса авидности (более 65%).
Верификацию ЦМВ, определение типоспецифиче-ских антител, индекса авидности осуществляли методами ИФА на спектрофотометре Stat Fax-2100 с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), ДНК ЦМВ выявляли методами ПЦР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).
Активность 20а-гидроксистероиддегидрогеназы определяли на криостатных срезах свежезамороженной нефиксированной ткани гистохимическим методом по прописи Лойда [4]. Полученные данные анализировали с помощью программы Scion (США) на цифровом микроскопе MEIJI (Япония).
Статистическая обработка и анализ данных осуществлялась с использованием стандартного пакета прикладных программ Statistica 6.1. Анализируемые в работе количественные данные имели нормальное распределение, поэтому рассчитывалась достоверность различий значений по Стьюденту - вычисление средней арифметической (М), средней ошибки (m). Во всех процедурах статистического анализа критический уровень значимости нулевой статистической гипотезы p принимался равным 0,05.
Результаты исследования и их обсуждение
На гистохимических препаратах ворсинчатого хориона беременных основной группы, перенесших обострение хронической цитомегаловирусной инфекции отмечалось снижение цитофотометрического показателя активности 20а-гидроксипрогестерондегидроге-назы до 30,1±2,12 пикселей/мкм2 (р<0,001) по сравнению с группой сравнения, в которой средние значения составляли 39,9±3,01 пикселей/мкм2. В контрольной группой активность фермента была значительно выше - 47,1±2,57 пикселей/мкм2 (рис.). Данный факт свидетельствовал об уменьшении интенсивности преобразования прогестерона при начавшемся самопроизвольном аборте на фоне обострения цитомегало-вирусной инфекции.
Реакция преобразования прогестерона имеет значение для сохранения и поддержания беременности, так как 20а-дигидропрогестерон, наряду с другими геста-генами, обладает токолитическим эффектом. Изучение влияния других метаболитов прогестерона при обострении цитомегаловирусной инфекции позволило сделать тот же вывод [5]. Токолитический эффект гестагенов осуществляется посредством влияния на концентрацию внутриклеточного кальция и уровень простагландинов, блокирования действия окситоцина и а- адренергической стимуляции. Под влиянием ге-стагенов замедляется передача нервного возбуждения с одного мышечного волокна на другое, в результате снижается активность нервно-мышечного аппарата матки [7, 8]. Обнаруженное нами снижение интенсивности преобразования прогестерона в 20а-дигидропро-гестерон раскрывает возможный механизм возникновения выкидыша в первом триместре геста-ции.
В
Таким образом, снижение активности гистохимической реакции на 20а-гидроксипрогестерондегидро-геназу в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты указывало на уменьшение содержания 20а-гидрокси-прогестерондегидрогеназы в плаценте, что способствовало прерыванию беременности.
ЛИТЕРАТУРА
1. Довжикова И.В. Ферменты стероидогенеза (обзор литературы) // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2010. Вып.37. С.60-64.
2. Довжикова И.В., Луценко М.Т. Современные представления о роли прогестерона (обзор литературы) // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2016. Вып.60. С.94-104. doi: 10.12737/20128
3. Кузьмин В.Н. Цитомегаловирусная инфекция у беременных и новорожденных // Лечащий врач. 2001. №10. С.55-58.
4. Лойда З., Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы: пер. с англ. М.: Мир, 1982. 272 с.
5. Луценко М.Т., Довжикова И.В. Гормональная функция плаценты при обострении цитомегаловирус-ной инфекции в период гестации // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2014. Вып.52. С.62-67.
6. Fisher S., Genbacev O., Maidji E., Pereira L. Human cytomegalovirus infection of placental cytotrophoblasts in vitro and in utero: implications for transmission and patho-
Рис. Синцитиотрофобласт ворсинчатого хориона. 10 недель беременности. Гистохимическая реакция на 20а-гидроксипрогестерондегидрогеназу. Увеличение: 15x40.
А - контрольная группа. Интенсивная гистохимическая реакция (47,1±2,57 пикселей/мкм2).
Б - основная группа. Гистохимическая реакция резко ослаблена (30,1±2,12 пикселей/мкм2).
В - группа сравнения. Гистохимическая реакция ослаблена (39,9±3,01 пикселей/мкм2).
genesis // J. Virol. 2000. Vol.74, №15. P.6808-6820.
7. Graham J.D., Clarke C.L. Physiological action of progesterone in target tissues // Endocrine Reviews. 1997. Vol.18, №4. P.502-519.
8. Perusquía M. Nongenomic action of steroids in my-ometrial contractility // Endocrine. 2001. Vol.15, №1. P.63-72.
REFERETOES
1. Dovzhikova I.V. Steroidogenesis enzymes (review). BüHeten'fiziologii ipatologii dyhanid 2010; 37:60-64 (in Russian).
2. Dovzhikova I.V., Lutsenko M.T. Modern concepts of progesterone role (review). Bülleten' fiziologii i patologii dyhanid 2016; 60: 94-104 (in Russian). doi: 10.12737/20128
3. Kuz'min V.N. Cytomegalovirus infection in pregnant and newborns. Lechashchiy vrach 2001; 10:55-58 (in Russian).
4. Lojda Z., Gossrau R., Schiebler T. Enzyme histochemistry: a laboratory manual. Moscow: Mir; 1982 (in Russian).
5. Lutsenko M.T., Dovzhikova I.V. Hormonal function of placenta at the exacerbation of cytomegalovirus infection in the gestation period. Bülleten' fiziologii i patologii dyhanid 2014; 52:62-67 (in Russian).
6. Fisher S., Genbacev O., Maidji E., Pereira L. Human cytomegalovirus infection of placental cytotrophoblasts in
18(4):502-519.
8. Perusquia M. Nongenomic action of steroids in my-ometrial contractility. Endocrine 2001; 15(1):63-72.
Поступила 25.04.2017
Контактная информация Инна Викторовна Довжикова, доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории механизмов этиопатогенеза и восстановительных процессов дыхательной системы
при неспецифических заболеваниях легких, Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания,
675000, г. Благовещенск, ул. Калинина, 22.
E-mail: dov_kova100@rambler.ru Correspondence should be addressed to Inna V. Dovzhikova,
PhD, DSc, Leading staff scientist of Laboratory of Mechanisms of Etiopathogenesis and Recovery
Processes of the Respiratory System at Non-Specific Lung Diseases, Far Eastern Scientific Center of Physiology and Pathology of Respiration, 22 Kalinina Str., Blagoveshchensk, 675000, Russian Federation.
E-mail: dov_kova100@rambler.ru
vitro and in utero: implications for transmission and pathogenesis. J. Virol. 2000; 74(15):6808-6820.
7. Graham J.D., Clarke C.L. Physiological action of progesterone in target tissues. Endocrine Reviews 1997;
