CC BY
184
УДК 615.454.811.014.015 М. А. ОГАЙ
Э. Ф. СТЕПАНОВА И. С. ПОГОДИН Е. А. КОРОБКОВА А. А. ПАК В. В. ГАВРАСЬ А. В. ПАНТЮХИН
Омская государственная медицинская академия
Саратовский государственный медицинский университет им. В. И. Разумовского
МЯГКИЕ ЖЕЛАТИНОВЫЕ КАПСУЛЫ С РАСТОРОПШЕЙ ПЯТНИСТОЙ И ТАУРИНОМ_______________________________________________________
Проведено биотестирование гепатопротекторного средства, содержащего спиртоводное извлечение из шрота расторопши пятнистой и таурина. Выявлены антиокси-дантный и мембраностабилизирующий эффекты. Химическими методами анализа доказано присутствие флаволигнанов и таурина. Сконструирована технологическая схема получения мягких желатиновых капсул.
Ключевые слова: расторопша пятнистая, таурин, мягкие желатиновые капсулы, парамеции, силибинин, высокоэффективная жидкостная хроматография.
Одной из важнейших задач современной медицины и фармации являются поиск новых и совершенствование уже имеющихся путей создания эффективных препаратов с гепатозащитным действием. В связи с этим тема разработки действенных, безопасных и доступных по цене отечественных гепатопротекторных фитопрепаратов крайне актуальна и перспективна как в научном, так и в практическом отношении [1].
В России и за рубежом в качестве гепатопротек-торов растительного происхождения широко используют препараты плодов расторопши пятнистой ^ПуЬит тапапит ^.) Gaertn., сем. Asteraceae — Астровых), такие как легалон, карсил, силимар, которые отличаются терапевтической эффективностью и хорошей переносимостью [2]. Уникальность препаратов плодов расторопши пятнистой заключается в том, что их гепатозащитные свойства обусловлены новой группой биологически активных соединений (БАС) — флаволигнанами, в частности силибинином, силидианином и силикристином. Механизм действия указанных БАС включает торможение перекисного окисления фосфолипидов в ткани печени и повышение активности антиоксидант-ных ферментов каталазы и супероксиддисмутазы, а также стимуляцию регенерации клеток печени [3].
Второй компонент предложенной комбинации — таурин, в настоящее время широко использующийся в офтальмологии и кардиологии в качестве средства метаболического действия. Известно, что при длительном применении малых доз таурин оказывает гипогликемическое, гиполипидемическое, антиоксидантное и гепатопротекторное действие [4]. На основе комбинирования таурина с флаволиг-нанами расторопши пятнистой может быть создана новая лекарственная форма, обладающая активно-
стью, связанной со всеми перечисленными выше эффектами. Перспективность применения таурина в составе гепатопротекторного средства определяется не только его способностью к нормализации функций клеточных мембран [5], оптимизацией энергетических и обменных процессов, сохранением электролитного состава цитоплазмы (за счет накопления ионов калия и кальция), но и участием в образовании парных желчных кислот (таурохоле-вой, тауродезоксихолевой) и репаративной активностью [3].
Цель исследования — разработка и экспериментальное обоснование новой лекарственной формы на основе расторопши пятнистой и таурина в виде мягких желатиновых капсул.
Для получения спиртоводного извлечения из шрота расторопши пятнистой использовали метод бисмацерации. Сырье (шрот расторопши) заливали 5-кратным объемом 70%-го спирта этилового и оставляли на 6—12 часов при периодическом перемешивании. Затем вытяжку сливали, шрот вновь заливали 3-кратным количеством экстрагента и оставляли на 4 — 6 часов. Обе вытяжки объединяли. Спирт удаляли вакуумированием до густой консистенции. Оболочку капсул готовили традиционно методом «погружения» из желатина, глицерина и воды.
В эксперименте на культуре клеток РагатеИит caudatum выбирали эффективное соотношение полученного извлечения из шрота расторопши пятнистой и таурина, а также его оптимальную концентрацию для жизнедеятельности парамеций (табл. 1). Удлинение времени остановки движения парамеций под воздействием 14%-го спирта этилового характеризует мембраностабилизирующую активность исследуемого комплекса, чьи компоненты препятствуют повреждению белковой части биомембра-
ОМСКИЙ НАУЧНЫЙ ВЕСТНИК № 2 (114) 2012 МЕДИЦИНСКИЕ НАУКИ
МЕДИЦИНСКИЕ НАУКИ ОМСКИЙ НАУЧНЫЙ ВЕСТНИК № 2 (114) 2012
Определение экологически благоприятной среды обитания для парамеций
Образец Количество комплекса спиртоводного извлечения с таурином на 1 мл культуры простейших, мл Размер парамеций спустя двое суток, мкм Характер движения парамеций спустя двое суток
Контроль 0,00 1,24 ± 0,34 активны
№ 1 0,05 1,24 ± 0,34 активны
№ 2 0,10 1,44 ± 0,17 активны
№ 3 0,15 1,76 ± 0,34 очень активны
№ 4 0,20 1,78 ± 0,28 малоподвижны
№ 5 0,25 1,76 ± 0,29 вялы
Таблица 2
Изучение степени защиты парамеций от действия токсикантов по времени остановки
Наименование объекта Время остановки парамеций в 14%-м этаноле, мин Время остановки парамеций в 1%-м растворе пероксида водорода, мин
Контроль 3,83 ± 0,24 3,23 ± 0,10
Спиртоводное извлечение из шрота расторопши пятнистой с таурином 40,58 ± 1,95 26,37 ± 1,95
mAU
Рис. 1. Хроматограмма анализа пробы рабочего стандартного образца силибинина
mAU
Рис. 2. Хроматограмма анализа пробы спиртоводного извлечения из шрота плодов расторопши пятнистой
ны. Антиоксидантную активность устанавливали по удлинению времени движения парамеций под воздействием 1%-го раствора перекиси водорода (табл. 2).
Присутствие флаволигнанов в разработанной лекарственной форме подтверждали методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (хроматограф Shimadzu LC-20 Prominence). Были получены две хроматограммы (рис. 1 и 2). Как видно из представленных хроматограмм, основные пики совпадают, что подтверждает наличие флаволигнанов.
Идентификацию аминокислот проводили с применением хроматографии в тонком слое сорбента (ТСХ) на пластинках «Силуфол» в системе растворителей бутанол:диэтиловый эфир:уксусная кислота:вода (соответственно 9:6:3:1). Хроматографическая камера насыщалась в течение часа. При достижении системой линии финиша пластинку вынимали из камеры, высушивали и опрыскивали 1%-м раствором нингидрина. После нагревания при 60°С в течение 30 минут на пластинке проявлялись сине-фиолетовые и пурпурные пятна (табл. 3).
Waveleiigtli
Рис. 3. УФ-спектр спиртового раствора РСО (силибинин) и спиртоводного извлечения из шрота плодов расторопши пятнистой
ВР 1.1 Санитарная обработка помещений
ВР 1.2 Санитарная подготовка технологической одежды
ВР 1.3 Подготовка воздуха
ВР 2.1 Отмеривание
и отвешивание
ингредиентов
ВР 1 Санитарная подготовка производства
- ВР 2 Подготовка сырья
ТП 3.1 Настаивание со спиртом этиловым
ТП 3.2 Слив вытяжек
ТП 3.3 Вакуумирование
ТП 4.1 Добавление таурина и гомогенизация
ТП 3
Получение комплексного извлечения с таурином
ТП 4.2 Формирование капсул
ТП 4.3 Дозирование и запайка капсул
УМО 5.1 Фасовка продукта
УМО5.2 Упаковка продукта
ТП 4 Получение мягких желатиновых капсул
УМО 5 Фасовка и упаковка
1
На склад
Рис. 4. Технологическая схема получения желатиновых капсул со спиртовым извлечением из шрота расторопши пятнистой с добавлением таурина.
ВР — стадии вспомогательных работ,
ТП — стадии основного технологического процесса,
УМО — стадии упаковывания, маркирования и отгрузки готового продукта
Следовательно, в спиртоводном извлечении из шрота расторопши пятнистой были идентифицированы следующие аминокислоты: гистидин, аргинин, треонин, валин и метионин.
Сумму флаволигнанов определяли спектрофотометрическим методом (СФ Юнико 2802S). Спиртоводное извлечение имело максимум поглощения при длине волны 289 нм, причем характер УФ-спектра практически совпадал с таковым раствора
рабочего стандартного образца (РСО) силибинина (рис. 3). Таким образом, УФ-спектр исследуемого спиртоводного извлечения из расторопши пятнистой определяется в основном флаволигнанами: их концентрация в спиртоводном извлечении составила 3,12±0,07%.
Далее разработана технологическая схема получения мягких желатиновых капсул с извлечением из шрота расторопши пятнистой с добавлением та-
ОМСКИЙ НАУЧНЫЙ ВЕСТНИК № 2 (114) 2012 МЕДИЦИНСКИЕ НАУКИ
МЕДИЦИНСКИЕ НАУКИ ОМСКИЙ НАУЧНЫЙ ВЕСТНИК № 2 (114) 2012
Результаты ТСХ-анализа аминокислот в спиртоводном извлечении расторопши пятнистой
Амино- кислота Величина Rf, см Окраска раствором нингидрина
Гистидин 0,18 сине-фиолетовая
Аргинин 0,24 сине-фиолетовая
Треонин 0,48 пурпурная
Валин 0,57 пурпурная
Метионин 0,65 сине-фиолетовая
Примечание. Rf — отношение расстояния, пройденного веществом, к расстоянию, пройденному фронтом растворителя.
урина (рис. 4). Схема включала в себя следующие этапы: вспомогательные мероприятия (санитарная обработка помещения, оборудования, одежды персонала, отмеривание и отвешивание ингредиентов), основной технологический процесс (получение спиртоводного извлечения из шрота расторопши пятнистой, гомогенизация с таурином, формирование мягких желатиновых капсул и их заполнение), упаковку и маркировку.
Таким образом, с помощью высокоэффективной жидкостной и тонкослойной хроматографий и спектрофотометрии в спиртоводном извлечении из расторопши пятнистой обнаружены флаволигнаны и аминокислоты. При исследовании комбинации полученного извлечения из расторопши пятнистой с таурином в биотесте на культуре клеток Рагате^ит са^аШт установлено наличие антиоксидантного и мембраностабилизирующего эффектов. Сконструирована технологическая схема получения мягких желатиновых капсул, содержащих извлечение рас-торопши пятнистой с таурином.
Библиографический список
1. Акопов, И. Э. Важнейшие отечественные лекарственные растения и их применение / И. Э. Акопов. — Томск : Медицина, 2000. - 113 с.
2. Современные тенденции в области создания и использования гепатопротекторных препаратов на основе сырья расторопши пятнистой / В. А. Егоров [и др.] // Фармация. — 2003. — Т. 48, № 6. — С. 23 — 25.
3. Растительные флаволигнаны. Биологическая активность и терапевтический потенциал / С. В. Луценко [и др.]. — Москва, 2006. — 236 с.
4. Нефёдов, Л. И. Таурин (биохимия, фармакология и медицинское применение) / Л. И. Нефёдов. — Гродно, 1999. — 140 с.
5. Антиоксидантный и мембраностабилизирующий эффект таурина / М. А. Огай [и др.] // Вестник Воронежского гос. ун-та. Сер. Химия, биология, фармация. — 2011. — № 1. — С. 186 — 191.
ОГАЙ Марина Алексеевна, кандидат фармацевтических наук, доцент кафедры фармацевтической технологии с курсом биотехнологии Омской государственной медицинской академии (ОмГМА). СТЕПАНОВА Элеонора Фёдоровна, доктор фармацевтических наук, профессор кафедры фармацевтической технологии с курсом биотехнологии ОмГМА.
ПОГОДИН Илья Сергеевич, ассистент кафедры фармации ОмГМА.
КОРОБКОВА Елена Владимировна, студентка группы 576 5-го курса фармацевтического факультета ОмГМА.
ПАК Анастасия Артуровна, соискатель по кафедре фармацевтической технологии с курсом биотехнологии ОмГМА
ГАВРАСЬ Василий Владимирович, соискатель по кафедре фармацевтической технологии с курсом биотехнологии ОмГМА.
ПАНТЮХИН Андрей Валерьевич, кандидат фармацевтических наук, доцент (Россия), заведующий кафедрой фармацевтической технологии Саратовского государственного медицинского университета имени В. И. Разумовского.
Адрес для переписки: e-mail: [email protected]
Статья поступила в редакцию 12.09.2012 г.
© М. А. Огай, Э. Ф. Степанова, И. С. Погодин, Е. В. Коробкова, А. А. Пак, В. В. Гаврась, А. В. Пантюхин
Книжная полка
Петрухин, В. А. Нарушение ритма сердца и проводимости у беременных : рук. / В. А. Петрухин, С. Р. Мра-вян, С. И. Фёдорова. - М. : Миклош, 2011. - 128 с. - ISBN 978-5-91746-058-1.
В представленном руководстве на основании литературных данных и многолетних наблюдений в Московском областном научно-исследовательском институте акушерства и гинекологии отражены современные взгляды на ведение беременных с различными видами аритмий и нарушений проводимости сердечной мышцы. Представлены основные электрофизиологические механизмы возникновения аритмий, их прогностическое значение и электрокардиографические характеристики, ведение беременности и родов у этого контингента больных, а также современные подходы к необходимости назначения беременным антиарит-мических препаратов. Для акушеров-гинекологов, терапевтов, кардиологов и реаниматологов-анестезиоло-гов, работающих в акушерских стационарах.
