CC BY
8Мультицентровое лабораторное исследование высокоразбавленных водных растворов NaCl методом
хемилюминесценции
В. Иванов1
1- Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН (ФГБУН ИТЭБ РАН), 142290 Пущино, Московская область, Россия iwe88@rambler. ru
Ранее было показано, что ряд активных форм кислорода, в том числе пероксид водорода, супероксидный радикал, синглетный кислород и другие образуются под действием вибрационного воздействия в водных растворах [1]. Кроме того, есть данные, свидетельствующие о том, что высокоразбавленные растворы водные растворы (ВРВР), полученные путем последовательного разбавления в сочетании с внешней вибрационной механической обработкой, способны оказывать бесконтактное воздействие на водные растворы [2]. В настоящем исследовании мы решили оценить, может ли такое бесконтактное воздействие ВРВР приводить к изменению в содержании АФК в растворах-сенсорах.
С целью проверки данной гипотезы с использованием метода люминол-зависимой хемилюминесценции было проведено исследование одновременно в лабораториях 5 различных научных институтов по одному протоколу с использование одних и тех же реактивов и образцов. В лаборатории был поставлен водный раствор NaCl (AppliChem, 10 мкг/мл) в качестве анализируемого сенсорного раствора, и в качестве эффекторных растворов - ВРВР NaCl (последовательное разведение NaCl с исходной концентрацией 10 мкг/мл в 1024 раз в воде I класса с интенсивным вибрационным воздействием на промежуточных этапах), а также контрольные образцы воды очищенной и воды, подвергнутой аналогичной процедуре разведения с вибрационным воздействием (ВРВР воды). Все образцы поставлялись в лаборатории в зашифрованном виде. Для устранения возможного влияния внешних факторов образцы-эффекторы были дополнительно разделены на шесть зашифрованных подгрупп для обеспечения равномерного тестирования разных образцов в течение дня. Растворы-сенсоры поставлялись в абсолютно идентичных флаконах, и конкретный флакон сенсора для тестирования выбирался исследователем случайным образом из всех поставленных для исследования. Закрытые флаконы образцов-сенсоров инкубировались в течение одного часа внутри флаконов с образцами-эффекторами, после чего в каждой из лабораторий на хемилюминометрах одного типа (Lum-1200, «ДИСофт» Россия) проводилась оценка интенсивности хемилюминесценции данных образцов-сенсоров, индуцированной окислением люминола в присутствии пероксидазы хрена. По изменению показателя светосуммы (площади под кривой) хемилюминесценции за 10 минут была проведена оценка свойств раствора-сенсора NaCl. Суммарно было проанализировано 1440 индивидуальных кривых хемилюминесценции. Результаты одной из лабораторий были исключены из анализа, т.к. все детектируемые значения были на порядок выше, чем в других лабораториях, что, по-видимому, связано с особенностями калибровки прибора. Для каждой кривой применена процедура нивелирования задержки внесения пероксидазы в пробу, а также определены временные границы расчета светосуммы под кривой хемилюминесценции. Для сравнения образцов на основе их хемилюминесценции производился подсчет площади под кривой зависимости интенсивности люминесценции от времени по методу трапеции для всех повторов с определением разброса значений. Полученные значения сравнивали попарно z-тестом с поправкой на множественность Холма. В результате показано, что интенсивность хемилюминесценции образца-сенсора (раствора NaCl), окруженного ВРВР NaCl статистически значимо (p<0,001) снижалась относительно образца-сенсора, окруженного контролями на 6,5% (vs вода) и 16,0% (vs ВРВР воды) . Таким образом, в результате мультицентрового исследования была подтверждена способность ВРВР, полученных с использованием технологии интенсивного вибрационного воздействия, оказывать бесконтактное воздействие. Данный феномен является важным с точки зрения понимания физических свойств ВРВР и требует проведения дальнейших исследований.
[1] S.V. Gudkov, N.V. Penkov, I.V. Baimler, G.A. Lyakhov, V.I. Pustovoy, A.V. Simakin, R.M. Sarimov, I.A. Scherbakov, Effect of Mechanical Shaking on the Physicochemical Properties of Aqueous Solutions, International Journal of Molecular Sciences, 21, 8033, (2020)
[2] N. Penkov, Antibodies Processed Using High Dilution Technology Distantly Change Structural Properties of IFNy Aqueous Solution, Pharmaceutics, 13, 1864, (2021).
