CC BY
54
Морфометрические исследования желудка
I W W
кролика калифорниискои породы
К.А. Сидорова, д.б.н., профессор,
С.А. Веремеева, к.в.н, Тюменская ГСХА
Для успешного развития кролиководства необходимо знать биологические особенности кролика, физиологические процессы его питания, то есть усвоения и использования питательных веществ рациона, что поможет кролиководам найти рациональный путь применения кормов и снижения затрат при выращивании животных [11-
Цель исследования — выяснить гистологические особенности желудка кролика калифорнийской породы в норме и при применении кормовой добавки Био-Мос.
Задача исследования — изучить строение стенки различных отделов желудка кролика в норме и при дополнительном применении Био-Мос.
Материалом для исследования служили тушки от клинически здоровых самцов кроликов (убой в возрасте 4-х мес.). Животные контрольной группы получали основной рацион, состоящий из гранулированного комбикорма, рецепт которого разработан в хозяйстве и изготовлен на Тюменском мелькомбинате. Кролики опытной группы дополнительно к основному рациону получали кормовую добавку Био-Мос компании «АШесИ», предназначенную для повышения общей резистентности, увеличения продуктивности и сохранности кроликов (доза 2 г на один кг гранулированного комбикорма, с двухмесячного возраста).
Для определения особенностей тканевого состава стенок желудка использовали гистохи-
мические методы. Всего исследовано было 40 желудков. Фиксированные в растворе 5%-ного формальдегида кусочки желудка заливали в парафин по общепринятой методике [2].
Кролики относятся к животным с однокамерным желудком (подковообразной формы, объёмом около 200 см3), питающимся растительными кормами.
При морфометрическом исследовании покровно-ямочного эпителия слизистой оболочки желудка установлено, что в дне и теле между группами животных статистически значимых различий не обнаружено, а в пилорической части показатели глубины, ширины желудочной ямки и высоты клеток эпителия у кроликов опытной группы были выше, чем в контрольной группе, соответственно на 6,1; 4,6 и 6,8%. Различия небольшие, но они статистически значимы (табл. 1). Поэтому можно сделать вывод о положительном влиянии кормовой добавки на структурно-функциональное состояние покровно-ямочного эпителия слизистой оболочки желудка кролика.
Морфометрическое исследование желёз слизистой оболочки желудка животных контрольной и опытной групп выявило наличие статистически значимых различий по объёмной плотности желёз, по количеству главных и слизистых клеток в железах (табл. 2).
У животных опытной группы объёмная плотность желёз была выше на 11,7% и больше количество главных клеток на 18,9%, но меньше слизистых клеток на 27,7%, чем у животных контрольной группы (табл. 2). Это также свидетельствует о влиянии кормовой добавки на
1. Морфометрические показатели покровно-ямочного эпителия слизистой оболочки желудка кроликов калифорнийской породы контрольной и опытной групп, M±s
Показатель Группа
контрольная (n=17) опытная (n=17)
Дно и тело желудка
Глубина желудочной ямки, мкм 100,4±12,7 106,5±10,2
Ширина желудочной ямки, мкм 32,4±2,8 29,8±5,4
Высота клеток эпителия, мкм 22,1±1,8 23,4±2,5
Ширина клеток эпителия, мкм 7,2±0,9 7,4±0,8
Общая численная плотность клеток эпителия, на 1 мм 131±15 127±17
Пилорическая часть желудка
Глубина желудочной ямки, мкм 126,1±11,8* 131,3±12,6*
Ширина желудочной ямки, мкм 19,6±2,1* 20,5±4,3*
Высота клеток эпителия, мкм 16,1±1,2* 17,2±2,1*
Ширина клеток эпителия, мкм 7,3±0,8 7,5±0,9
Общая численная плотность клеток эпителия, на 1 мм 128±16 125±18
Примечание: * — статистически значимые различия между отделами желудка при p<0,05 (критерий Вилкоксона). Статистически значимых различий между группами не выявлено (критерий Манна-Уитни для парных сравнений независимых выборок). M±s — среднее ± стандартное отклонение (сигма)
2. Морфометрические показатели желёз слизистой оболочки желудка (дно, тело) кроликов калифорнийской породы контрольной и опытной групп, M±s
Показатель Группа
контрольная (n=17) опытная (n=17)
Объёмная плотность желёз, % 56,2±5,3 62,8±4,1
Наружный диаметр желёз, мкм 39,3±3,6 41,9±4,7
Количество главных клеток в железах, %# 51,2±4,8 60,9±3,7
Количество париетальных клеток в железах, % 28,2±2,2 23,1±2,9
Количество слизистых клеток в железах, % 13,7±1,6 9,9±2,7
Другие типы клеток (эндокриноциты) 6,9±1,6 6,2±0,8
Площадь сечения ядра главных клеток, мкм2 9,4±0,2 9,2±0,5
Площадь сечения цитоплазмы главных клеток (мкм2) 38,5±5,4 36,2±7,1
Ядерно-цитоплазматическое отношение (ЯЦО) главных клеток 0,24±0,01 0,25±0,02
Площадь сечения ядра париетальных клеток, мкм2 16,5±1,0 17,2±1,9
Площадь сечения цитоплазмы париетальных клеток, мкм2 124,5±9,9 121,1±10,5
ЯЦО париетальных клеток 0,13±0,01 0,14±0,02
Площадь сечения ядра слизистых клеток, мкм2 12,5±0,6 13,4±0,7
Площадь сечения цитоплазмы слизистых клеток, мкм2 25,5±2,0 26,4±2,1
ЯЦО слизистых клеток 0,49±0,04 0,51±0,04
Примечание: * — статистически значимые различия между группами при p<0,05 (критерий Манна-Уитни для парных сравнений независимых выборок); M±s — среднее ± стандартное отклонение (сигма); # — подсчёт на всем протяжении железы, главные клетки у обеих групп животных топографически располагаются преимущественно в фундальных отделах желёз
структурно-функциональное состояние эпителия желёз слизистой оболочки желудка. Некоторое увеличение количества главных клеток в железе может способствовать увеличению количества специфических ферментов и улучшению переваривания корма.
Таким образом, в гистологической картине стенок желудка кроликов опытной группы выявлены следующие особенности:
1) слизистая оболочка занимает 3/4 части стенки желудка; мышечная оболочка толще в пилорическом отделе, так как образует пилорический жом; характерно хорошо развитое соединительнотканно-сосудистое окружение;
2) в клетках слизистой оболочки желудка кроликов опытной группы ярко выражен митоз, что свидетельствует о хорошей регенерации оболочек этого органа.
На основании полученных данных можно заключить, что кормовая добавка Био-Мос изменяет гистологическую картину оболочек желудка кролика: у кроликов опытной группы площадь поперечного среза слизистой и мышечной оболочек увеличивается, а также возрастает и количество желёз в слизистой оболочке желудка кроликов. Кариокинез (митоз) лучше проявляется в клетках слизистой оболочки желудка кроликов опытной группы, это способствует самовоспроизведению клеток, то есть образуются молодые клетки. При делении количество клеток увеличивается, благодаря чему растёт организм, замещаются отмершие клетки и восстанавливаются повреждённые органы.
Для оценки клеточных составляющих стромы и возможной реакции слизистой на кормовые добавки проведён морфометрический анализ собственной пластинки слизистой оболочки тела желудка животных сравниваемых групп (табл. 3).
Установлено, что имеются статистически значимые различия клеточного состава эпителиального пласта и собственной пластинки слизистой оболочки желудка на уровне ямки, шейки и тела железы. Так, на уровне ямки больше межэпителиальных лимфоцитов и нейтрофилов. В собственной пластинке на уровне ямки больше лимфоцитов и макрофагов. Остальные морфометрические показатели клеточного состава эпителиального пласта и собственной пластинки слизистой оболочки тела желудка статистически значимо не различались. Не было выявлено статистически значимых различий между всеми изученными показателями контрольной и опытной групп (табл. 3).
Характер корреляционных связей между показателями клеточного состава эпителиального пласта и собственной пластинки слизистой оболочки тела желудка кроликов контрольной и опытной групп не отличался в обеих группах. Количество межэпителиальных лимфоцитов положительно коррелировало с количеством лимфоцитов стромы (г=0,62, р<0,05, Спирмен), количеством тучных клеток (г=0,73, р<0,01), фиброцитов (г=0,58, р<0,05), эндотелиоцитов (г=0,61, р<0,01) и нейтрофилов стромы (г=0,65, р<0,05). Количество лимфоцитов стромы положительно коррелировало с количеством ней-трофилов стромы (г=0,71, р<0,01), макрофагов стромы (г=0,52, р<0,05), фибробластов (г=0,76, р<0,01), эозинофилов (г=0,65, р<0,01). Количество плазмоцитов положительно коррелировало с количеством эозинофилов (г=0,67, р<0,01) и фибробластов (г=0,53, р<0,05).
Таким образом, в обеих группах животных количественные соотношения разных типов клеток собственной пластинки слизистой оболочки желудка тесно сопряжены. Это, как и
3. Морфометрические показатели клеточного состава эпителиального пласта и на различной глубине собственной пластинки слизистой оболочки тела желудка кроликов калифорнийской породы контрольной и опытной групп, M±s
Показатель Уровень собственной пластинки ANOVA Фридмана (df=2,)
Ямка Шейка Железа
Межэпителиальные лимфоциты, %
Контрольная (n=17) 10,4±2,2 6,2±1,2 3,7±0,8 x2=12,3,/p<0,01*
Опытная (n=17) 11,3±3,1 5,8±1,1 3,3±0,7 x2=10,1,/p<0,01*
Межэпителиальные нейтрофилы, %
Контрольная (n=17) 0,9±0,2 0,3±0,3 0,05±0,03 Х2=9,4, p<0,05*
Опытная (n=17) 0,8±0,1 0,4±0,2 0,06±0,02 Х2=8,2, p<0,05*
Межэпителиальные эозинофилы, %
Контрольная (n=17) 0,1±0,05 0,07±0,04 0±0 Х2=4,3, p>0,08
Опытная (n=17) 0,14±0,04 0,08±0,02 0±0 Х2=5,1, p>0,07
Общая численная плотность клеток собственной пластинки слизистой оболочки, на 1 мм2
Контрольная (n=17) 4681±920 4327±899 4124±888 Х2=4,8, p>0,1
Опытная (n=17) 4699±860 4422±787 4282±564 Х2=3,6, p>0,1
Лимфоциты собственной пластинки слизистой оболочки, на 1 мм2
Контрольная (n=17) 469±97 365±75 305±64 Х2=9,8, p<0,01*
Опытная (n=17) 443±56 338±66 313±79 Х2=7,8, p<0,05*
Нейтрофильные лейкоциты собственной пластинки слизистой оболочки, на 1 мм2
Контрольная (n=17) 135±37 124±26 129±28 Х2=3,2, p>0,1
Опытная (n=17) 143±45 131±31 118±59 Х2=2,7, p>0,1
Эозинофильные лейкоциты собственной пластинки слизистой оболочки, на 1 мм2
Контрольная (n=17) 84±22 79±15 81±17 Х2=2,5 , p>0,1
Опытная (n=17) 89±17 76±12 87±19 Х2=2,3 , p>0,1
Плазматические клетки собственной пластинки слизистой оболочки, на 1 мм2
Контрольная (n=17) 342±98 298±79 279±67 Х2=3,7, p>0,05
Опытная (n=17) 331±87 254±42 294±88 Х2=3,1, p>0,05
Тучные клетки собственной пластинки слизистой оболочки, на 1 мм2
Контрольная (n=17) 183±48 212±59 202±91 Х2=4,2, p>0,05
Опытная (n=17) 178±55 205±48 211±50 Х2=3,9, p>0,05
Макрофаги собственной пластинки слизистой оболочки, на 1 мм2
Контрольная (n=17) 88±12 64±11 58±9 Х2=7,8, p<0,05*
Опытная (n=17) 85±17 71±13 62±11 Х2=6,9, p<0,05*
Фибробласты собственной пластинки слизистой оболочки, на 1 мм2
Контрольная (n=17) 1412±198 1255±205 1126±220 Х2=2,8, p>0,05
Опытная (n=17) 1488±221 1300±222 1188±198 Х2=3,2, p>0,05
Фиброциты собственной пластинки слизистой оболочки, на 1 мм2
Контрольная (n=17) 778±115 802±115 819±200 Х2=2,4, p>0,05
Опытная (n=17) 743±122 831±127 825±188 Х2=2,2, p>0,05
Эндотелиоциты сосудов собственной пластинки слизистой оболочки, на 1 мм2
Контрольная (n=17) 1190±115 1128±132 1125±120 Х2=0,9, p>0,05
Опытная (n=17) 1111±223 1099±162 1127±215 Х2=0,9, p>0,05
Примечание: * — статистически значимые различия между отделами желудка и p<0,05 (однофакторный дисперсионный анализ Фридмана). M±s — среднее ± стандартное отклонение (сигма). Статистически значимых различий между группами не выявлено — p>0,05 (критерий Манна-Уитни)
непосредственные результаты морфологического исследования, свидетельствует об отсутствии воспалительных изменений слизистой оболочки желудка на фоне использования кормовой добавки.
Литература
1. Есенбаева К.С., Сидорова К.А. Физиологические особенности кроликов. Тюмень, 2004. С. 12—15.
2. Семченко В.В., Артемьев В.Н. Гистологическая техника. Омск: Омская медицинская академия, 2006. 152 с.
