CC BY
16
УДК 616.091:615.9-099:636.085/.087:636.4
Ключевые слова: микотоксины, поросята, селезенка, лимфоциты, лейкоциты, плазматические клетки
Key words: mycotoxins, piglets, spleen, lymphocytes, leucocytes, plasmocytes
Ганкина Ю. В., Кудряшов А. А.
МОРФОМЕТРИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СЕЛЕЗЕНКИ ПОРОСЯТ
ПРИ ПОЛИМИКОТОКСИКОЗЕ
MORPHOMETRY OF SPLEEN IN PIGLETS WITH POLYMYCOTOXICOSIS
ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины», Санкт-Петербург Адрес: 196084, Санкт-Петербург, ул. Черниговская, д. 5, СПбГАВМ, каф. патанатомии. Тел. (812) 388-13-78
Saint-Petersburg State Academy of Veterinary Medicine, Saint-Petersburg Address: 196084, Russia, Saint-Petersburg, Chernigovskaya street, 5, Saint-Petersburg State Academy of Veterinary Medicine, Pathologic Anatomy Dept. Tel. +7 812 388-13-78
Ганкина Юлия Владимировна, ассистент каф. патологической анатомии
Gankina Julia V., Assistant of the Dept. of Pathologic Anatomy Кудряшов Анатолий Алексеевич, д. в. н., проф., зав. каф. патологической анатомии
Kudryashov Anatoly A., Doctor of Veterinary Science, Professor, Head of the Dept. of Pathologic Anatomy
Аннотация. Проведено морфометрическое исследование селезенки у 9 поросят в возрасте 3-4 месяцев, павших от полимикотоксикоза. Определены изменения клеточного состава, свидетельствующие о воспалении и иммуно-супрессии в этом органе.
Summary. The results of morphometry of spleen in 9 piglets with polymycotoxicosis are described. Inflammatory changes and elements of immunosupression are determined.
Введение
Микотоксикозы часто встречаются в свиноводческих хозяйствах как в России, так и в зарубежных странах [4, 5], и это позволяет обосновать актуальность избранной тематики. В ходе патогистоло-гического исследования [2] были получены результаты, указывающие на супрессию органов иммуногенеза. Для подтверждения и уточнения этого умозаключения потребовалось провести морфометрическое исследование центральных (тимус) и периферических (селезенка и лимфатические узлы) органов иммунной системы. Исследования, посвященные морфометрической характеристики тимуса, были проведены нами ранее [3].
Материалы морфометрического исследования селезенки, изложенные в этой статье, являются фрагментом комплексного патоло-гоанатомического исследования внутренних органов, в том числе органов иммуногенеза у поросят при полимикотоксикозе [1, 2, 3].
Цель работы - дать морфометрическую характеристику селезенки у поросят для уточнения патогенеза и прогноза болезни.
Материалы и методы
Для исследования использована селезенка, отобранная при вскрытии поросят в возрасте 3-4 месяцев, павших от полими-котоксикоза, из крупного свиноводческого хозяйства. В хозяйстве хронический полими-котоксикоз у свиней был вызван токсинами при поедании контаминированных кормов. Количество микотоксинов определено в пробах кормов и сравнено с предельно допустимой их концентрацией (ПДК).
При анализе результатов микотоксиколо-гического исследования кормов сделан вывод о наличии в них микотоксинов. Содержание афлатоксина, охратоксина и дезоксиваленона значительно превышало ПДК, что и привело к токсикозу при длительном поедании корма.
Для контроля отобрана селезенка от 3 здоровых поросят в возрасте около 4 месяцев.
Пробы фиксировали в 10%-м растворе нейтрального формалина, уплотнены в парафине, от каждого животного изготовлено 10 гистосрезов. Гистологические срезы окрашивали гематоксилин-эозином. Препараты изучали с помощью светового микроскопа при увеличении 40*60. В процессе исследо-
вания подсчитывали количество лимфоцитов, макрофагов, ретикулярных и плазматических клеток, нейтрофильных лейкоцитов, эритроцитов, а также количество митозов. Подсчет проводили в 10 полях зрения. Толщину микроструктур селезенки определяли с помощью окулярного микрометра.
Статистическая обработка данных, полученных в эксперименте, была реализована с помощью программного пакета STATIS-Т1СА 6.0. Прежде всего, с целью определения закона распределения исследуемых величин были выполнены расчеты асимметрии и эксцесса для каждой выборки. Было доказано, что полученные данные подчиняются нормальному распределению Гаусса. Для описательной статистики внутри каждой группы вычислялись среднее арифметическое и стандартная ошибка среднего для р < 0,05.
Поскольку выборки являются независимыми, для опровержения нулевой гипотезы о принадлежности разных выборок к одной генеральной совокупности, были рассчита-
ны параметрические (^-критерий Стьюдента) и непараметрические (критерий Колмогорова-Смирнова и и-критерий Манна-Уитни).
Поскольку ^критерий Стьюдента является самым робастным показателем из вышеперечисленных и исследуемые варианты представлены в достаточно богатой количественной шкале, этот метод можно считать основополагающим в данном исследовании. Непараметрические методы применялись с учетом того, что контрольная и опытная группы значительно отличались по количеству вариант.
Результаты исследования
Результаты морфометрии селезенки сведены в таблицах 1-5.
1. Сравнение толщины микроструктур селезенки.
Как представлено в таблице, при сравнении толщины капсулы, параартериальной зоны, маргинальной зоны и сосудов достоверной разницы между животными здоровы-
Таблица 1.
Толщина микроструктур селезенки у поросят в норме и при полимикотоксикозе
толщина, мкм, больные толщина, мкм здоровые р
Капсула 4,8±0,2 5,4±0,5 > 0,05
Трабекулы 6,2±0,2 8,9±0,7 < 0,05
Параатериальная зона 4,2±0,1 4,8±0,4 > 0,05
Фолликулы с центром Нет в срезах 16,3±0,9
Фолликулы без центра 20,3±0,8 15,1±1,5 < 0,05
Маргинальная зона 4,5±0,3 5,1±0,5 > 0,05
Красная пульпа 84,9±4,2 43,3±5,6 < 0,05
Сосуды 3,6±0,1 3,9±0,3 > 0,05
больные здоровые р
Малые лимфоциты 90,1±2,0 135±4 < 0,05
Средние лимфоциты 10,1±0,6 14,9±1,1 < 0,05
Большие лимфоциты 0,7±0,1 0,2±0,1 > 0,05
Макрофаги 1,2±0,1 1,6±0,2 > 0,05
Ретикулярные клетки 16,3±0,9 12,3±0,5 > 0,05
Эритроциты 41,1±4,0 23,5±3,9 < 0,05
Плазматические клетки 1,0±0,1 0,6±0,2 > 0,05
Нейтрофилы 0,6±0,2
Таблица 2.
Клеточный состав лимфатических фолликулов селезенки у поросят в норме и при полимикотоксикозе
ми и больными не выявлено. В то время как различия в толщине трабекул, фолликулов без центров и красной пульпы носили достоверно значимый характер. Толщина трабекул была больше у здоровых поросят, чем у больных полимикотоксикозом в 1,4 раза. Толщина красной пульпы и размер фолликулов без центров была больше у больных животных в 1,9 и в 1,3 раза соответственно. Также отмечено, что в группе животных, больных полимикотоксикозом, не встречается фолликулов с центром. Кроме того, среднее количество лимфатических фолликулов у здоровых животных также достоверно отличалось от больных и составляло соответственно 7,3±0,3 и 3,3±0,2.
2. Сравнение клеточного состава лимфатических фолликулов селезенки.
При сравнении клеточного состава лимфатических фолликулов у больных и здоровых животных такие показатели, как большие лимфоциты, макрофаги, ретикулярные клетки и плазматические клетки, не имели достоверных различий. В то время как при сравнении количества малых и средних лимфоцитов и эритроцитов наблюдалась значимая разница между группой здоровых поросят и больных миксоматозом. У здоровых животных количество лимфоцитов было в 1,5 раза больше, а количество эритроцитов в 1,7 раз меньше, чем у больных. Ней-трофильные лейкоциты встречались только у больных животных.
3. Сравнение клеточного состава пара-артериальной зоны.
Как представлено в таблице, при сравнении количества макрофагов, ретикулярных клеток и эритроцитов в параартериальной зоне селезенки у здоровых и больных животных достоверной разницы не выявлено. В то время как количество малых, средних и больших лимфоцитов достоверно отличалось в группе здоровых и больных животных. Малых и средних лимфоцитов было в 1,6 и 1,4 раза соответственно больше у здоровых животных, а больших лимфоцитов - у больных в 5 раз больше, чем у здоровых. Плазматических клеток было больше у больных поросят в 3,6 раза. Нейтрофильные лейкоциты и митозы встречались только у больных.
4. Сравнение клеточного состава маргинальной зоны.
Различия между количеством больших лимфоцитов, макрофагов, эритроцитов и плазматических клеток у животных исследуемых групп носили не достоверный характер, в то время как по количеству малых и больших лимфоцитов, ретикулярных клеток и нейтрофильных лейкоцитов наблюдалась достоверная разница между больными и здоровыми животными. Так, количество малых и средних лимфоцитов было в 1,7 и в 1,5 раза соответственно больше у здоровых животных. Ретикулярных клеток и нейтрофильных лейкоцитов было больше у больных в 2,3 и 5 раз соответственно.
5. Сравнение клеточного состава красной пульпы.
При сравнении количественных показателей различных групп клеток достоверные
Таблица 3.
Клеточный состав параартериальной зоны селезенки у поросят в норме и при полимикотоксикозе
больные здоровые р
Малые лимфоциты 81±2 133±6 < 0,05
Средние лимфоциты 9,1±0,5 12,9±0,6 < 0,05
Большие лимфоциты 1,2±0,2 0,2±0,1 < 0,05
Макрофаги 1,1±0,1 1,5±0,3 > 0,05
Ретикулярные клетки 14,5±0,6 14,3±0,7 > 0,05
Эритроциты 38,8±3,7 35,4±4,7 > 0,05
Плазматические клетки 1,1±0,1 0,3±0,1 < 0,05
Нейтрофилы 0,5±0,1
Митозы 0,1±0,1
Таблица 5.
Клеточный состав красной пульпы селезенки у поросят в норме и при полимикотоксикозе
Таблица 4.
Клеточный состав маргинальной зоны селезенки у поросят в норме и при полимикотоксикозе
больные здоровые р
Малые лимфоциты 81,6±2,4 135±5 < 0,05
Средние лимфоциты 9,5±0,6 14,3±0,9 < 0,05
Большие лимфоциты 0,5±0,1 0,5±0,2 > 0,05
Макрофаги 3,7±0,8 0,9±0,2 > 0,05
Ретикулярные клетки 31,3±4,9 13,8±0,6 < 0,05
Эритроциты 72,7±10,0 64,6±5,6 > 0,05
Плазматические клетки 0,9±0,2 0,4±0,1 > 0,05
Нейтрофилы 0,5±0,1539 0,1±0,1 < 0,05
опыт контроль р
Малые лимфоциты 56,3±1,8 128±5 < 0,05
Средние лимфоциты 7,4±0,5 11,4±1,1 < 0,05
Большие лимфоциты 2,2±0,4 0,9±0,5 > 0,05
Макрофаги 1,6±0,2 0,6±0,2 > 0,05
Ретикулярные клетки 15,4±0,9 12,4±0,8 > 0,05
Эритроциты 127±10 88,3±4,9 > 0,05
Плазматические клетки 1,3±0,2 0,4±0,1 < 0,05
Нейтрофилы 0,9±0,2 0,3±0,2 > 0,05
различия были обнаружены в показателях: малые и средние лимфоциты, плазматические клетки. Количество малых и средних лимфоцитов было больше у здоровых в 2,3 и 1,5 раза соответственно, плазматических клеток было больше у больных животных в 3,1 раза. Достоверных различий при сравнении количества больших лимфоцитов, макрофагов, ретикулярных клеток, эритроцитов и нейтро-фильных лейкоцитов выявлено не было.
Таким образом, при полимикотоксикозе поросят в селезенке, являющейся одним из периферических органов иммунной системы, происходит редукция лимфоидных элементов, а также воспалительный процесс в виде миграции нейтрофильных лейкоцитов, плазмоцитарной реакции и пролиферации ретикулярных клеток. Редукцию лим-фоидных клеток логично рассматривать как признак иммуносупрессии, которая предрасполагает организм поросенка при полимико-токсикозе к вторичным болезням. Подобные
изменения были установлены и в тимусе [3], который относится к центральным органам иммунной системы, что дает основание утверждать о системном действии микоток-синов на органы иммуногенеза с атрофи-ческими изменениями лимфоидной ткани, воспалительной реакцией в виде слабо выраженной экссудации и пролиферации.
Выводы
1. Толщина трабекул больше у здоровых поросят, толщина красной пульпы и размер лимфатических фолликулов без центра размножения больше у больных животных. Фолликулы с центром встречаются только у больных.
2. Количество лимфатических фолликулов у здоровых поросят больше, чем у больных полимикотоксикозом.
3. Количество малых и средних лимфоцитов у здоровых поросят больше, чем у больных во всех исследуемых зонах селезенки.
4. Количество больших лимфоцитов в па-раартериальной зоне больше у больных животных.
5. Количество ретикулярных клеток в маргинальной зоне больше у больных поросят.
6. Количество эритроцитов в параартери-альной зоне больше у больных.
7. Количество плазматических клеток в параартериальной зоне и в красной пульпе больше у больных поросят.
8. Нейтрофильные лейкоциты в лимфатических фолликулах и параартериальной зоне встречаются только у больных животных. В маргинальной зоне их больше.
Список литературы
1. Ганкина, Ю. В. Патоморфология полимикоток-сикоза поросят / Ю. В. Ганкина // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. - 2010. -№ 4. - С. 166-168.
2. Ганкина, Ю. В. Патоморфологические изменения у поросят при микотоксикозе / Ю. В. Ганкина, А. А. Кудряшов // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. - 2009. - № 3. - С. 28-30.
3. Ганкина, Ю. В. Морфометрическая характеристика тимуса поросят при полимикотоксикозе / Ю. В. Ганкина, А. А. Кудряшов // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. - 2011. - № 2. - С. 41-44.
4. Кузнецов, А. Ф. Ветеринарная микология / А. Ф. Кузнецов. - СПб. : Лань, 2001. - 416 с.
5. Пейсак, З. Микотоксикозы / З. Пейсак // В кн. : Болезни свиней. - Брест : Брестская типография, 2008. -С. 299-302.
