CC BY
144
УДК 619:636.2.034:519.146
Ключевые слова: корова, альвеола, железистая ткань, соматические клетки
Key words: cow, alveolus, glandular tissue, somatic cells
Сулейманов С.М.1, Павленко О.Б.1, Миронова Л.П.2, Паршин П. А.1
МОРФОЛОГИЯ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ И КЛЕТОЧНЫЙ СОСТАВ МОЛОКА У ЗДОРОВЫХ КОРОВ В ПЕРИОД ЛАКТАЦИИ
MORPHOLOGY OF MAMMARY GLAND AND MILK CELLULAR COMPOSITION OF HEALTHY COWS IN THE LACTATION PERIOD
'ФГБОУ ВО «Воронежский государственный аграрный университет имени императора Петра I» Адрес: 394087, Россия, г. Воронеж, ул. Мичурина, д. 1
Voronezh State Agricultural University of a name of the emperor Peter I, Federal State Budget Institution of Higher Education Address: 394087, Russia, Voronezh, Michurin str., 1 2ФГБНУ «Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт» Адрес:346493, Россия, г. Новочеркасск, Ростовское шоссе, д. 0 The North Caucasian Zone Research Veterinary Institute, Federal State Budget Scientific Institution Address: 346493, Russia, Novocherkassk, Rostovskoye highway, 0
Сулейманов Сулейман Мухитдинович, д. в. н., профессор каф. анатомии и хирургии. E-mail: suleimanov@List.ru. Тел. +7 (473) 255-83-02
Suleymanov Suleyman M., Doctor of Veterinary Sciences, Professor of the Dept. of Anatomy and Surgery. E-mail: suleimanov@List.ru. Tel. +7 (473) 255-83-02 Павленко Ольга Борисовна, к. в. н., доцент каф. анатомии и хирургии Pavlenko Olga B., PhD in Veterinary Sciences, Associate Professor of the Dept. of Anatomy and Surgery Миронова Людмила Павловна, д. в. н., профессор, ведущий науч. сотрудник лаборатории паразитологии Mironova Lyudmila P.,Doctor of Veterinary Sciences, Professor, Leading Researcher of Laboratory of Parasitology Паршин Павел Андреевич, д. в. н., зав. кафедрой ветеринарно-санитарной экспертизы. Email: doctor.57@mail.ru. Тел. 8 (473) 253-91-82 Parshin Pavel A., Doctor of Veterinary Sciences, Head of the Dept. of Veterinary and Sanitary Examination.
Email: doctor.57@mail.ru. Tel. 8 (473) 253-91-82
Аннотация. Изучена структурная и ультраструктурная организация молочной железы у клинически здоровых коров в период лактации. Она характеризовалась развитой железистой тканью с неоднородной структурой и находилась на повышенном уровне функциональной активности. Паренхима ее состояла из различных по величине и форме альвеол, заполнялась на 50-70 % молочным секретом. Стенка альвеол преимущественно была выстлана плоскими и кубическими эпителиальными клетками, реже - цилиндрическими. Размеры и формы секреторных клеток находились в прямой зависимости от активности и стадии секреторного цикла, что подтверждают и ультраструктурные исследования молочной железы у коров в период лактации. Содержание соматических клеток в молоке у клинически здоровых коров в период лактации находилось в пределах 182-277 тыс. Соматические клетки в 58 % случаев являлись малыми эпителиальными клетками, а в 38,7 % - из лимфоцитами.
Summary. The structural and ultrastructural organization of a mammary gland of clinically healthy cows during lactation period was studied. It was characterized by the developed glandular tissue with non-uniform structure and with increased level of functional activity. It's parenchyma was consisted from alveoluses of various size and form, it was filled for 50-70 % with a milk secret. The wall of alveoluses was mainly covered by flat and cubic epithelial cells, is more rare -cylindrical ones. The sizes and forms of secretory cells were in direct dependence on activity and a stage of a secretory cycle that confirm also ultrastructural researches of a cows mammary gland at lactation period. The maintenance of somatic cells into milk of clinically healthy cows during lactation period had limits 182-277 thousand. About 58 % somatic cells were small epithelial cells and 38,7 % ones were lymphocytes.
Введение
Проблема мастита, особенно его субклиническое течение, продолжает оставаться актуальной. Ее решение может быть осуществлено на основе фундаментальных ис-
следований. Возникновение и развитие патологии в молочной железе у коров полностью согласуется с ее структурной организацией в период активного функционирования. Морфологические изменения в ткани вы-
мени коров имеют сложный характер. Для того, чтобы учитывать особенности ее организации при выполнении лечебных мероприятий, необходимо изучать структурные и ультраструктурные особенности молочной железы у коров в норме.
Материалы и методы
Материалом для исследования гистоархи-тектоники молочной железы служили гистологические образцы размером (10,0*1,0x1,0) см3, затем иссекались образцы (0,05-1,0) см3 срединной части органа от 3-х здоровых лак-тирующих коров, убитых на убойных пунктах по производственной необходимости. Взятие материала производилось в течение первого часа после убоя животного. Образцы ткани обрабатывали общепринятыми методами для электронно-микроскопического исследования [5, 6, 7]. После промывки в фосфатном буфере (не менее 15-ти минут) фрагменты ткани дополнительно постфик-сировали в 1 %-м растворе OsO4 на фосфатном буфере в течение 1,5 часов. Далее все образцы ткани обезвоживались в спиртах восходящей концентрации, обрабатывались в ацетоне и были заключены в эпоксидную смолу на основе Эпон-812. Заливка осуществлялась плоскопараллельным методом [8, 9]. Блоки с заключенными в них фрагментами тканей молочной железы далее затачивали на фрезе Leica или обычным лезвием под стере-олупой. С полученных блоков изготавливали полутонкие срезы, которые окрашивали то-луидиновым синим или азуром II (основным фуксином) и изучали в световом микроскопе для прицельной заточки пирамиды перед приготовлением ультратонких срезов. Ультратонкие срезы толщиной 50 нм изготавливали на ультрамикротоме Ultracut-E (Leica, Германия) с использованием алмазного ножа Diamont (Швейцария), контрастировали ура-нилацетатом и цитратом свинца и просматривали в трансмиссионном электронном микроскопе Jem 1011 (Jeol, Япония).
Результаты исследований
У лактирующих коров железистая ткань вымени представляла систему многократно ветвящихся трубчатых альвеол (рис. 1а), вну-
тридольковых выводных протоков и связывающей их внутридольковой соединительной ткани (рис. 1б).
Структура железистой ткани была неоднородной и состояла из крупных, средних и мелких альвеол, диаметр которых варьировал от 90,20 до 198,80 мкм. Крупные альвеолы плотно примыкали друг к другу (рис. 1а).
Альвеолы встречались различной формы: овальной и неправильной, просветы которых на 50-70 % были заполнены секретом. Стенка альвеол была выстлана плоским, кубическим и цилиндрическим эпителием. У основания лактоцитов четко определялись миоэпители-альные клетки. Внешний контур молочных альвеол был сформирован базальной мембраной. Высота клеток в среднем составляла (6,20±0,30) мкм, ширина - (8,20±0,30) мкм.
В альвеолах, переполненных секретом, эпителий был плоским. Высота лактоцитов колебалась от 6,0 до 7,10 мкм, ширина - от 7,0 до 8,90 мкм. Клетки плоского эпителия характеризовались наличием овального ядра, расположенного параллельно базаль-ной мембране (рис. 1в).
В альвеолах, содержащих незначительное количество секрета, лактоциты преимущественно имели кубическую форму. Они имели одинаковую высоту и ширину в пределах (8,90±0,20) мкм, а ядро - овальную форму (рис 1г).
В альвеолах с расширенными просветами внутренняя выстилка состояла из плоского однорядного железистого эпителия, а миоэ-пителиоциты не дифференцировались. Просветы альвеол местами были переполнены секретом (вероятно, вследствие нарушения оттока). Строма таких долек была скудной, с очаговыми лимфоидными инфильтратами. Протоки их местами были спавшимися, на других участках — кистозно-расширенны-ми.
В целом молочная железа у лактирующих коров характеризовалась развитой железистой тканью, а структура долек была неоднородной, т.к. отражала различную степень функциональной активности молочной железы. Размеры и формы секреторных клеток находились в прямой зависимости от активности и стадии секреторного цикла (рис. 1е) [3].
Рис. 1. а) Структурная организация молочной железы у лактирующей коровы. Ветвящееся трубчато-альвеоляр-ное строение. Окр. гематоксилин и эозин, ок. х 7, об. х 10. б) Внутридольковый выводной проток, примыкающий к соединительнотканной перегородке четверти вымени. Окр. гематоксилин и эозин, ок. х 7, об. х 10. в) Неоднородная железистая ткань молочной железы, состоящая из крупных, средних и мелких альвеол различной формы. Окр. гематоксилин и эозин, ок. х 7, об. х 10. г) Переполненные молочным секретом альвеолы с кубическими и цилиндрическими лактоцитами. Окр. гематоксилин и эозин, ок. х 7, об. х 20. д) Гиперемия межальвеолярной стенки с миоэпителиальными клетками. Окр. гематоксилин и эозин, ок. х 7, об. х 40. е) Многочисленные альвеолы с секретирующими эпителиями. Полутонкий срез. Окр. Фуксин основной, ув. х 400.
На полутонких срезах были видны концевые отделы долек молочной железы, протоки, выстланные секретирующим эпителием (рис. 2).
В ультраструктурной организации молочной железы у коров в период лактации наблюдались как эпителиальные клетки паренхимы, так и клетки стромы в различных функциональных состояниях, что представлено на рисунке 2.
Морфологию клеточного состава секрета молочной железы у здоровых лактиру-ющих коров, количественное содержание соматических клеток в 1,0 мл секрета определяли по методу Прескотта-Брида [2], морфологический состав молока - по методике Сысоева А. А., Рязанского М. П. [4]. Окраску мазков молока проводили по Паппенгейму в модификации Хижняко-вой К. И.
д
Рис. 2. а) Ультраструктура молочной железы коровы в период лактации. Эпителиальные клетки. Секреторные гранулы. Ув. 10000. б) В центре сосуд с перицитами. Ворсинки эпителиальных клеток слева и вверху. Ув. 20000. в) Сосуд с эритроцитом (справа). Лимфоцит (слева внизу). Ув. 12000. г) Слева вверху моноцит (в цитоплазме визуализируются пиноцитозные микровизикулы). Справа вверху - часть новообразованного сосуда. Ув. 30000. д) Апикальная поверхность эпителиальных клеток с ворсинками, секреторные гранулы. Ув. 15000. е) Плазматические клетки с хорошо развитым ШЕРом (шероховатым эндоплазматическим ретикулумом). Ув. 20000.
г
е
В секрете молочной железы, полученном от здоровых коров, содержание соматических клеток в 1,0 мл варьировало от 182 тыс. до 277 тыс., при этом преобладали малые эпителиальные клетки (58,0 %) и лимфоциты (38,7 %). Фагоциты отсутствовали. Результаты подсчета соматических клеток в секрете вымени и их видовой состав у здоровых коров приведены ниже (табл. 1).
За период наблюдения произошло снижение содержания средних эпителиальных клеток и повышение нейтрофилов с 22,5 до 42,0 %. Повысилось (Р<0,05) относительное содержание разных клеток. На протяжении опыта содержание лимфоцитов в секрете долей вымени оставалось на одном уровне. Эти изменения были недостоверны.
Заключение
При изучении гистоструктуры молочной железы у лактирующих здоровых коров мы установили, что она характеризуется развитой железистой тканью, структура долек была неоднородна, т.к. отражает различную степень функциональной активности молочной железы. Размеры и формы секреторных клеток находились в прямой зависимости от активности и стадии секреторного цикла. Альвеолы были различной формы: овальной и неправильной, просветы альвеол которых на 50-70 % были заполнены секретом. Стенка альвеол выстлана плоским,
кубическим и цилиндрическим эпителием. У основания лактоцитов четко определялись миоэпителиальные клетки. Высота клеток в среднем составляла 6,20±0,30 мкм, ширина - 8,20±0,30 мкм. В альвеолах, переполненных секретом, эпителий был плоским. Высота лактоцитов колебалась от 6,0 до 7,10 мкм, ширина - от 7,0 до 8,90 мкм. В альвеолах, содержащих незначительное количество секрета, лактоциты преимущественно были кубической формы. Они имели одинаковую высоту и ширину в пределах 8,90±0,20 мкм, а ядро - овальную форму. В ультраструктурной организации клетки имели хорошо выраженные контакты - дес-мосомы. В них превалировали секреторные гранулы и гранулярная эндоплазматическая сеть, а на апикальной поверхности - множественные короткие ворсинки. Продолговатые ядра примыкали к базальной мембране клеток и содержали умеренное количество гетерохроматина на периферии кариолем-мы. Содержание соматических клеток в молоке у клинически здоровых коров в период лактации находилось в пределах 182-277 тыс. Соматические клетки в 58,0 % случаях являлись малыми эпителиальными клетками, а в 38,7 % - лимфоцитами.
Список литературы
1. Архангельская, Т. Н. Сравнительное строение разных четвертей молочной железы коров [Текст] / Т. Н. Архангельская, А. П. Береснева // Анато-
Таблица 1.
Количество и видовой состав соматических клеток молока у здоровых лактирующих коров (в млн)
№ п/п Клеточный состав Количество клеток в 1,0 мл молока (млн)
здоровые доли вымени
1-й день 3-й день 5-й день 7-й день 10-й день
1 Кол-во клеток 0,277±0,138 0,212±0,039 0,217±0,117 0,238±0,069 0,182±0,003
2 Малые э. кл. 0,16±0,095 0,043±0,013 0,095±0,056 0,065±0,021 0,034±0,013
3 Средние э. кл. 0,03±0,021 0,008±0,001 0,013±0,002 0,008±0,004 0,008±0,001
4 Большие э. кл. - - - - -
5 Нейтрофилы 0,017±0,002 0,047±0,03 0,082±0,069 0,060±0,04 0,043±0,017
6 Лимфоциты 0,108±0,099 0,79±0,021 0,86±0,008 0,106±0,017 0,113±0,002
7 Моноциты 0,004 - - - -
8 Разные 0,030±0,026 0,013±0,004 0,021±0,013 0,008±0,002 0,013±0,004
9 Фагоциты - 0,008 0,004 0,004 -
мия молочной железы с.-х. животных в состоянии нормы и при патологии. - Свердловск, 1985. -С. 33-37.
2. Ивашура, А. И. Система мероприятий по борьбе с маститами коров : монография [Текст] / А. И. Ивашура. - Москва : Росагропромиздат, 1991. - 240 с.
3. Павленко, О. Б. Структурная организация молочной железы у лактирующих коров [Текст] / О. Б. Павленко // Ветеринарная патология. - 2012. -Т. 40. - № 2. - С. 15-17.
4. Сысоев, А. А. Физиологические особенности воспроизводительной функции коров [Текст] / А. А. Сысоев, М. П. Рязанский. - М. : Колос, 1971. - 350 с.
5. Bozzola, J. J., Russell L. D. Electron Microscopy. Principles and Techniques for Biologists [Текст] / J. J. Bozzola, L. D. Russel. - Boston : Jones and Bartlett Publishers, 1992.
го s
6. Dabbs, D. Diagnostic Immunohistochemistry (2nd edit.) [Текст] / D. Dabbs. Philadelphia, - Churchill Livingstone, Elsevier, 2006.
7. Genoud, Ch., Knott, G. W., Sakata, K., Lu, B., Welker, E.. Altered synapse formation in the adult somatosensory cortex of Brain-Derived Neurotrophic Factor heterozygote mice [Текст] / Ch.Genoud, G. W. Knott, K. Sakata, B. Lu, E. Welker // J. Neurosci., 2004. - № 24. - 10. - P. 2394-2400.
8. Potts, M. A. Method for location specific histological features for electron microscopy [Текст] /J. Roy //Micr. Soc., 1965. - № 85. - 1. - P. 97-102.
9. Robinson, G., Gray, T. Electron microscopy 2: Tissue preparation, sectioning and staining in: Theory and practice of histological techniques. (eds. Bancroft JD, Stevens A.) [Текст] / G. Robinson, T. Gray // Churchill livingstone, New York. - 1990. - P. 525-562.
АППАРАТ ДЛЯ ИМПУЛЬСНОИ ЭЛЕКТРОМАГНИТНОЙ ТЕРАПИИ «УМИ-05»
На протяжении многих лет клиника БНПЦ ЧИН и Институт Ветеринарной Биологии (Санкт-Петербург) используют в своей практике уникальный прибор — генератор низкочастотного магнитного импульсного излучения большой мощности «УМИ-05» (ранее «УИМТ-2», «УИМТ-3»). Данный прибор применяется для моно-или комплексной терапии целого ряда заболеваний, которые ранее считались неизлечимыми или очень тяжело поддавались лечению.
Основные направления применения «УМИ-05»
• Заболевания мочевой системы: мочекаменная болезнь, пиелонефрит, поликистоз, цистит.
• Желчекаменная болезнь.
• Заболевания опорно-двигательного аппарата: остеохондроз позвоночника, дископатия, артрозо-артриты, бурсит, растяжение связок, ушибы, контрактуры суставов, миозит.
• Купирование эпилептических приступов и эпилептического статуса.
• Гипертензия.
• Отит гнойный.
• Отит аллергический.
Стандартный курс лечения
• 10 сеансов по 30—50 импульсов на одну патологическую область. Мощность 50—80 %. Курс можно повторить с перерывом в 10 дней.
• Профилактический курс для животных группы риска (остеохондроз, МКБ и пр.) — 7—10 сеансов с интервалом 6 месяцев.
• Применение прибора не вступает в противоречие с использованием фармакологических и хирургических методов лечения.
• Магнитотерапию не следует проводить на области тела, содержащей металлоконструкции (например, штифты или пластины для остеосинтеза).
Экономика
• Быстрая окупаемость прибора.
• Минимальная затрата рабочего времени: длительность одного сеанса на одну патологическую зону — 2—3 минуты.
• Высокая эффективность лечения, полное излечение или введение животного в стойкую ремиссию по всем перечисленным заболеваниям гарантируют значительное увеличение рейтинга клиники в целом и приток новых клиентов.
Стоимость прибора 27000 рублей!
Заказать УМИ - 05 можно по телефаксу: (812) 927-55-92 доб 208; (812) 612-13-34 доб.
208 или по е-таб ivb-info@man.ru. подробности на сайте: wvww.invetbio.spb.ru
