CC BY
12
УДК 616.151.5:612.115.13-572.7:616.36-001:612.085.1
МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ПОСЛЕДСТВИЯ СИСТЕМНОГО
ПРИМЕНЕНИЯ ФИБРИН-МОНОМЕРА В УСЛОВИЯХ ПОДАВЛЕНИЯ ГЕМОСТАТИЧЕСКОГО И УСИЛЕНИЯ ФИБРИНОЛИТИЧЕСКОГО ПОТЕНЦИАЛОВ ПРИ ДОЗИРОВАННОЙ ТРАВМЕ ПЕЧЕНИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
1Алтайский государственный медицинский университет, г. Барнаул
2Алтайский филиал ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Минздрава России, г. Барнаул
Вдовин В.М.1, Бобров И.П.1, Шахматов И.И.1, Момот А.П.12
Цель исследования. Сопоставить морфологические проявления в месте дозированной травмы печени при введении низкой дозы (0,25 мг/кг) фибрин-мономера (ФМ) на фоне снижения коагуляционного потенциала, связанного с применением гепарина или стрептокиназы.
Материалы и методы. В плацебо-контролируемых исследованиях на кроликах-самцах изучали морфологические последствия применения экзогенного, введенного внутривенно ФМ на моделях с подавлением свертывания крови (нефракционированный гепарин - НГ) или активацией фибринолитических реакций (стреп-токиназа). В отдельных сериях экспериментов изучались такие же последствия при дополнительном использовании известных системных гемостатиков: протамина сульфата (ПС) - в случаях гепаринизации, и транексамовой кислоты (ТК) - при введении стрептокиназы.
Результаты и выводы. Выявлены и описаны межгрупповые морфологические отличия в области раневой поверхности печени на моделях кровоточивости, связанных с подавлением свертывания крови гепарином или активацией фибринолиза стрептокиназой. Гепаринизация животных сопровождалась уменьшением толщины тромботических масс в зоне травмы в 4,9 раза, а в случаях применения стрептокиназы - в 1,8 раза, в сравнении с аналогичным показателем в контрольной группе (плацебо). Использование ПС или ТК у животных с фармакологически обусловленным снижением гемостатического потенциала способствовало увеличению толщины тромботических масс в 15,1 и 2,6 раза соответственно. Применение ФМ на аналогичных моделях приводило к увеличению толщины тромботических масс в 4,1 раза (при введении гепарина) и в 9,0 раза - при применении стрептокиназы. Сделано предположение о существовании определенной связи между экзогенно введенным ФМ и дополнительным стимулированием тромбоцитов к участию в остановке локального паренхиматозного кровотечения. Очевидно, что место приложения действия ФМ находится на уровне микроциркуляции в зоне травмы, а не в системном кровотоке.
Ключевые слова: фибрин-мономер, фибрин, кровопотеря, нефракционированный гепарин, протамина сульфат, стрептокиназа, транексамовая кислота, морфология.
MORPHOLOGICAL CONSEQUENCES OF SYSTEMIC APPLICATION OF FIBRIN MONOMER IN CONDITIONS OF HEMOSTATIC POTENTIAL SUPPRESSION AND FIBRINOLYTIC POTENTIAL AMPLIFICATION IN DOSED LIVER INJURY IN EXPERIMENT
1 Altai State Medical University, Barnaul
2Altai branch of FGBU National Medical Research Center of Hematology of the Ministry of Health of the Russian Federation, Barnaul
V.M. Vdovin1, I.P. Bobrov1, I.I. Shakhmatov1, A.P. Momot12
Research objective. To compare morphological manifestations at the site of dosed liver injury at the introduction of low dose (0.25 mg/kg) of fibrin-monomer (FM) against the background of coagulation potential reduction associated with application of heparin or streptokinase.
Materials and methods. In placebo-controlled studies on male rabbits, morphological consequences of using exogenous, intravenously administered FM on models with blood clotting suppression (unfractionated heparin - UH) or activation of fibrinolytic reactions (streptokinase) were studied. In separate series of experiments, the same effects were studied with additional use of known systemic hemostatics: protamine sulfate (PS) - in cases of heparinization, and tranexamic acid (TA) - when introducing streptokinase.
Results and conclusions. Intergroup morphological differences in the area of wound surface of the liver on models of bleeding associated with blood clotting suppression with heparin or fibrinolysis activation by streptokinase were revealed and described. Heparinization of animals was accompanied by a decrease in the thickness of thrombotic masses in the injury zone by 4.9 times, and in cases of streptokinase use by 1.8 times compared to the same indicator in the control group (placebo). The use of PS or TA in animals with pharmacologically induced decrease in hemostatic potential contributed to an increase in the thickness of thrombotic masses by 15.1 and 2.6 times respectively. The use of FM on similar models led to an increase in the thickness of thrombotic masses by 4.1 times with the introduction of heparin and 9.0 times with the use of streptokinase. The assumption is made about the existence of a certain connection between exogenously introduced FM and additional stimulation of platelets to participate in the stop of local parenchymatous bleeding. Obviously, the place of application of FM action is at the level of microcirculation in the injury zone, not in the systemic blood flow.
Keywords: fibrin monomer, fibrin, haemorrhage, unfractionated heparin, protamine sulfate, streptokinase, tranexam-ic acid, morphology.
Современный взгляд на систему гемостаза с точки зрения клеточной модели гемокоагу-ляции [1] и исследования особенностей пространственной регуляции тромбино- и фибри-ногенеза [2] в последнее время создают предпосылки для поиска новых подходов к разработке более эффективных и безопасных системных гемостатических средств. Ранее считалось, что главная функция производного фибриногена -фибрин-мономера (структурно - дезААВВ-фи-бриноген, ФМ) - заключается в формировании структурной основы тромба путем аутополи-меризации с последующей стабилизацией сгустка XIIIa фактором [3, 4, 5]. Исследования, проведенные нами в последние годы, впервые продемонстрировали наличие у ФМ собственного регулирующего действия на процессы свертывания крови в условиях in vivo. Так, было показано, что ФМ в дозе 0,25 мг/кг обладает выраженной кровоостанавливающей активностью без изменения гемостатического потенциала крови, а высокие дозы ФМ (2,5 мг/кг) - схожим эффектом, но достижимым через повышение тромбогенности плазмы, что представляется логичным [6, 7]. Кроме того, был установлен новый, до настоящего времени не изученный феномен низких доз экзогенного ФМ оказывать гемостатический эффект на фоне прямого ин-гибирования тромбина (с помощью дабигатра-на этексилата) [8], при гепаринизации [9], при подавлении выработки витамин К-зависимых факторов свертывания крови с помощью вар-фарина [10] и при стимуляции фибринолиза стрептокиназой [11]. Учитывая изложенное, по нашему мнению, ФМ можно рассматривать в качестве инновационного, универсального кровоостанавливающего средства системного действия, эффекты которого не зависят от состояния гемостатического баланса. При таких многообещающих предположениях остается вопрос, связанный с не до конца изученным механизмом гемостатического действия вводимой парентерально дозы ФМ, сопоставимой с физиологическим уровнем данного производного фибриногена в крови практически здоровых
людей (не более 8,0 мкг/мл) [12]. Предполагается, что гемостатические реакции экзогенно введенного ФМ локализуются в месте повреждения паренхиматозного органа на уровне зоны микроциркуляции. Таким образом, сопоставление морфологической картины в области раны печени после применения ФМ на фоне введения гепарина или стрептокиназы позволит приблизиться к выяснению причин купирования кровотечения в условиях сниженного коагуляционного потенциала. Данное обстоятельство послужило мотивом для проведения данной научной работы.
Цель исследования - сопоставить морфологические проявления в месте дозированной травмы печени при введении низкой дозы ФМ на фоне снижения коагуляционного потенциала, связанного с применением гепарина или стрептокиназы.
Материалы и методы
Исследования выполнены на 129 здоровых кроликах-самцах породы Шиншилла массой 3,0-4,5 кг. Методом блочной рандомизации были сформированы 7 экспериментальных групп (рисунок 1).
Введение всех препаратов животным осуществлялось в краевую вену уха. Группе № 1 (п=21) вводили раствор плацебо (3,75 М раствор мочевины, соответствующий ее концентрации в растворе ФМ) в объеме 0,5 мл и через 60 минут наносили травму печени.
Животным группы № 2 (п=17) и № 4 (п=25) вводили плацебо (в объеме 0,5 мл) и ФМ (в дозе 0,25 мг/кг) (производства фирмы «Технология-Стандарт», Россия) соответственно. Через 45 минут в/в болюсно вводили раствор НГ в дозе 150 ед/кг (1,5 мг/кг) (фирма «Синтез», Россия), и далее через 10 минут наносили травму печени.
Животным группы № 3 (п=14) болюсно вводили раствор НГ в дозе 150 ед/кг (1,5 мг/кг), после чего через 15 минут медленно вводили ПС в дозе 1,5 мг/кг (фирма «Эллара», Россия). По истечении 10 минут осуществляли нанесение травмы печени.
Время эксперимента (минуты)
Рисунок 1 - Дизайн исследований гемостатического эффекта фибрин-мономера в эксперименте на фоне сниженного гемостатического потенциала. ПС - протамина сульфат, ТК - транексамовая кислота, ФМ - фибрин-
мономер.
Животным групп со 5-й по 7-ю для активации фибринолиза в начале эксперимента вводился водный раствор стрептокиназы (РУП «Белмедпрепараты», Республика Беларусь) в дозе 150 000 МЕ/кг. Через один час этим же животным осуществляли введение водных растворов следующих препаратов: в группе № 5 (п=16)
- плацебо, в группе № 6 (п=12) - транексамо-вой кислоты (Транексам®, ФГУП «Московский эндокринный завод», Россия) в дозе 15 мг/кг, в группе № 7 (п=24) - ФМ в дозе 0,25 мг/кг. Спустя один час после введения плацебо и ФМ животным групп № 5 и № 7, а животным группы № 6
- через 30 мин, выполняли стандартную травму печени.
Всем животным перед хирургическим вмешательством проводили анестезию препаратом «Телазол» (фирма «Зоэтис», Россия) в/в в дозе 10 мг/кг.
После остановки кровотечения для гистологического исследования у животных забиралась ткань печени, включая всю раневую часть и фрагмент неповрежденной поверхности, с последующей фиксацией в 10% растворе нейтрального формалина по Лилли. Проводку материала осуществляли по изопропиловому спирту с помощью автомата проводки карусельного типа TISSUE-TEK VI РТМ6 (фирма Sakkura, Япония). Парафинизацию проводили при помощи станции парафиновой заливки TISSUE-TEK ТЕС 5 (фирма Sakkura, Япония). Гистологические срезы толщиной 4-5 мкм получали с использованием полуавтоматического роторного микротома Асси-Си SRM (фир-
ма Sakkura, Япония), препараты окрашивали гематоксилином и эозином в автомате для автоматической окраски микропрепаратов TISSUE-TEK Prisma (фирма Sakkura, Япония) и заключали под пленку в автомате для автоматического заключения микропрепаратов TISSUE-TEK Film (фирма Sakkura, Япония). Для определения морфологической структуры фибрина в тканях окраску подготовленных срезов проводили методом оранжевый-красный-голубой (ОКГ) по Д.Д. Зербино и Л.Л. Лукасе-вич [13] с применением набора реагентов для определения возраста фибрина (фирма ООО «БВС», Россия). Подсчет количества тромбоцитов при морфологических исследованиях осуществляли в крупных сосудах венозного или артериального типа, в пяти полях зрения при увеличении *1000, под масляной иммерсией микроскопа с последующим расчетом среднего числа клеток. Микрофотографирование проводили при помощи микроскопа Leica DM 750 E200 с цифровой видеокамерой Leica EC3 (фирма Leica Microsystems CMS GmbH, Германия). Морфометрические измерения проводили с помощью лицензионного пакета морфометри-ческих программ «ВидеоТесТ-Морфология 5.2» (фирма «ВидеоТест», Россия).
Работы на животных, одобренные локальным Этическим комитетом ФГБОУ ВО АГМУ Минздрава России (протокол № 12 от 12.11.2015 г.), проводили в соответствии с Директивой 86/609/ ЕЕС, Хельсинкской декларацией и «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных».
Распределение признаков в выборках оценивали по критерию Шапиро-Уилка. В зависимости от распределения признаков применяли t-критерий Стьюдента, U-критерий Ман-на-Уитни. Различия считались статистически значимыми при p<0,05. Обработка результатов проводилась программой MedCalc Version 17.9.7 (лицензия BU556-P12YT-BBS55-YAH5M-UBE51). Данные представлены в виде медианы
(Ме), 25-го и 75-го перцентилей (Ме ^25^75]).
Результаты и обсуждение
Показатели кровопотери и летальности в группах животных, получавших ФМ или антидоты к гепарину стрептокиназе (протамина сульфат и транексамовую кислоту), представлены в сводной таблице 1.
Таблица 1
Показатели посттравматической кровопотери у животных в разных группах
Показатели Объем кровопотери, % от ОЦК Летальность,
Группы количество особей
Группа № 1 (плацебо) 10,1 [4,3-16,3] 0 из 21 (0 %)
Группа № 2 (гепарин и плацебо) 18,9 [8,5-21,8] р1 =0,028, Дх1,9 6 из 17 (35,3 %) р1 =0,054
Группа № 3 (гепарин и ПС) 4,7 [3,0-8,5] р1_3=0,126; р2 =0,0002, Дх4,0 1 из 14 (7,1 %) р1_3=0,560 рм=0,094
Группа № 4 (гепарин и ФМ) 3,7 [2,5-5,2] р =0,011, Дх2,7; р2 ==0,00003, Дх5,1; рзГ0,341 1 из 25 (4,0 %) р14=0,694 р2 4=0,012 р3_=0,595
Группа № 5 (стрептокиназа и плацебо) 15,4 [12,8-19,2] р15=0,040; Дх1,5 5 из 16 (31,3 %) р1-5=0,010
Группа № 6 (стрептокиназа и ТК) 1,0 [0,7-2,3] р1 =0,0005; Дх10,1 р5 =0,00004; Дх15,4 1 из 12 (8,3 %) рм=0,363; р5-6=0,197
^г г, 1,4 [0,7-4,4] 1 из 24 (4,2 %)
ГРУппа № 7 р =0 0004-Ах7 2 Р =0 999'
(стрептокиназа и ФМ) р"=0,001; Дхц;0 р1;=0,029;
Р-Г0,421 Р6_7=0,998
Примечания: ПС - протамина сульфат, ТК - транексамовая кислота, ФМ - фибрин-мономер, Д -
разница показателей. Данные приведены по результатам ранее опубликованных работ [9, 11].
Из данной таблицы можно видеть, что увеличение кровопотери соответствовало частоте случаев гибели животных, причем применение ФМ по своей системной гемостатической активности не уступало известным антидотам - ПС (в случае гепаринизации) и ТК (при активации фибринолиза стрептокиназой).
Для формирования исходного представления о морфологических изменениях в области раны печени были изучены срезы препаратов у интактных животных, получивших плацебо за 1 час до начала эксперимента (группа № 1) без какого-либо фармакологического вмешательства.
В соответствии с полученными данными в данной группе в области операционной раны определялись тонкие, гладкие, розоватого цвета, блестящие тромботические массы (таблица 2, рисунок 2А), что соответствовало физиологической реакции на травму.
Тромботические образования содержали тонкие нити фибрина волокнистой структуры (рисунок 2В), располагающиеся главным образом параллельно раневой поверхности, образуя редкие анастомозы, а также неизмененные эритроциты. Наблюдаемая картина позволяет отнести тромботические образования в области раны по морфологическим критериям, предложенным Д.Д. Зербино и Л.Л. Лукасевич [13], к фибрино-эритроцитарному (смешанному) виду тромба.
При подсчете тромбоцитов в просвете крупных сосудов (рисунок 2С) их количество составило около 73 клеток в поле зрения (таблица 2).
В зоне травмы печени у животных, получивших гепарин и плацебо (группа № 2), тромботи-ческие массы определялись лишь в небольшом количестве и характеризовались меньшей толщиной - в 4,9 раза меньше, чем в контрольной группе № 1 (таблица 2, рисунок 3А). Фибрин в
334,9 [321,9-350,2] 51,0 [42,5-56,8]
Группа № 7 р17<0,000001; А*5,1 р17=0,003; А*1,4 Фибрино-
(стрептокиназа и ФМ) р47<0,000001; А*6,1 р47=0,290 эритроцитарный
р5 <0,000001; Ах9,0 р5 =0,002; Ах1,6 (смешанный)
р67<0,000001; Ах3,5 р67=0,290 Примечания: п.з. - поле зрения, ПС - протамина сульфат, ТК - транексамовая кислота, ФМ - фибрин-мономер, Д - разница показателей.
Таблица 2
Показатели морфометрического исследования гистологических препаратов раны печени
Показатели Толщина тромботических масс, мкм Количество
Группы тромбоцитов в просвете сосудов, число/п.з. Вид тромба
Группа № 1 (плацебо) 66,2 [62,7-83,5] 73,5 [61,0-90,8] Фибрино- эритроцитарный (смешанный)
Группа № 2 (гепарин и плацебо) 13,4 [11,0-15,1] р1 <0,0001, Ах4,9 119,0 [88,5-137,0] р1 =0,028, Ах1,6 Эритроцитарный
Группа № 3 (гепарин и ПС) 201,8 [192,9-223,7] р1 =0,003, Ах3,1 р23<0,0001, Ах15,1 70,0 [58,0-73,0] р2-3=0,348 р2 =0,013, Ах1,7 Фибрино- эритроцитарный (смешанный)
Группа № 4 (гепарин и ФМ) 55,2 [45,1-65,9] р14 =0,003, Ах1,2 р24<0,0001, Ах4,1 р34<0,0001,Ах3,7 45,5 [33,8-56,0] р1 =0,006, Ах1,6 р2 4=0,002, Ах2,6 р3 =0,030, Ах1,5 Эритроцитарный
Группа № 5 (стрептокиназа и плацебо) 37,1 [32,9-44,0] р1-5=0,000001; Ах1,8 80,0 [64,8-122,3] р1_5=0,364 Эритроцитарный
Группа № 6 (стрептокиназа и ТК) 95,9 [89,8-100,0] р1 =0,003; Ах1,5 р <0,000001; Ах2,6 58,0 [41,8-93,0] ры=0,145 р^=0,089 Эритроцитарный
геморрагических массах определялся лишь в отдельных местах микросрезов в виде различной величины бесструктурных, мелкосетчатых и гранулярных масс красноватого или сиреневого цвета. Присутствие фибриллярного нитчатого строения фибрина было нехарактерно. Также в тромботических массах определялись не агрегированные эритроциты и умеренное количество тромбоцитов. В области повреждения печени синусоидные капилляры были расширены, эритроциты в них находились в состоянии гемолиза, границы между ними были видны нечетко (рисунок 3В). Количество тромбоцитов в просветах крупных сосудов в непосредственной близости к раневой поверхности (рисунок 3С) превышало аналогичный показатель группы № 1 в 1,6 раза (таблица 2). Наблюдаемая картина тромботических отложений в группе № 2 позволила отнести их к тромбам эритроцитарного вида [13].
В группе № 3 у гепаринизированных животных после применения ПС в области операционной раны определялись грубые, толстые бугристые наложения тромботических масс. Толщина тромботических наложений в 3,1 раза
превышала аналогичный показатель в группе № 1 и в 15,1 - в группе № 2 (таблица 2, рисунок 4А). Фибрин в большинстве случаев имел вид гранулярных масс сиреневого или красноватого цвета различного размера. Отложения последнего в виде продольно расположенных тонких нитей определялись лишь на небольшом количестве участков. В геморрагических массах значительное количество эритроцитов находилось в состоянии гемолиза, они имели различную форму, с нечеткими границами между клетками. В расширенных синусоидах зоны травмы печени эритроциты были распределены агрегированными группами или в виде монетных столбиков (явление стаза и «сладж-феномена»), с нечеткими границами между ними (рисунок 4В). Количество тромбоцитов в просветах крупных сосудов в непосредственной близости к раневой поверхности (рисунок 4С) было умеренным, сопоставимым с группой плацебо (группа № 1). В данной группе описываемая характеристика тромботических масс была характерна для тромбов фибрино-эритроцитарного (смешанного) вида [13].
А
76 МКМ
У
ПН
В
С
Рисунок 2 - Пример морфологической картины в области раны печени кролика группы № 1 (плацебо). Здесь и на рисунках №№ 3-8: А - тромботические отложения, окраска гематоксилином и эозином, увеличение *100; В - нити фибрина в тромботических отложениях (показаны стрелками, F - фибрин), окраска на фибрин по ОКГ, увеличение *400; С - тромбоциты в просвете крупных сосудов в области раны (тромбоциты отмечены стрелками), окраска гематоксилином и эозином, увеличение х1000.
А
12.9 МКМ -
С
Рисунок 3 - Пример морфологической картины
в области раны печени кролика группы № 2 (гепарин и плацебо). А - тонкие тромботические наложения; В - отсутствие нитей фибрина в геморрагических массах и гемолизированные эритроциты в синусоидах (эритроциты показаны стрелками); С - увеличение числа тромбоцитов в просветах сосудов в области операционной раны (тромбоциты показаны стрелками).
В
А
Рисунок 4 - Пример морфологической картины в области раны печени кролика группы № 3 (гепарин и ПС). А - широкие тромботические наложения; В -отсутствие нитей фибрина в геморрагических массах и гемолизированные эритроциты в синусоидах в виде монетных столбиков (показаны стрелками); С - умеренное количество тромбоцитов в просветах сосудов в области операционной раны (тромбоциты показаны стрелками).
А
Рисунок 5 - Пример морфологической картины в области раны печени кролика группы № 4 (гепарин и ФМ). А - умеренно выраженные тромботические наложения в области повреждения; В - отсутствие нитей фибрина в геморрагических массах и скопления гемолизированных эритроцитов в синусоидах (показаны стрелками); С - уменьшение числа тромбоцитов в просветах сосудов в области операционной раны (тромбоциты показаны стрелками).
После применения ФМ у гепаринизиро-ванных животных (группа № 4) в зоне травмы печени определялось умеренное количество тромботических масс (рисунок 5А), примерно сопоставимое по толщине с группой № 1 (в 1,2 раза меньше), но в 4,1 раза превышало аналогичный показатель группы № 2 (таблица 2). В тромботических массах определялся фибрин в виде различного размера мелкосетчатых и гранулярных масс красноватого или сиреневого цвета, среди которого находились агрегированные эритроциты. Выпадение фибрина фибриллярного строения было нехарактерно, отмечались лишь единичные его нити. Отличительной особенностью данной группы было наличие в тромботических массах большего количества тромбоцитов. При этом в крупных сосудах рядом с раневой поверхностью количество тромбоцитов значительно уменьшалось (в 2,6 раза, рисунок 5С) по сравнению с группой № 2 и группой № 1 (в 1,6 раза, таблица 2). Эритроциты в расширенных синусоидных капиллярах в области повреждения печени находились в состоянии гемолиза, с нечеткими границами между ними (рисунок 5В). Наблюдаемая картина тромботических отложений в группе № 4 позволила отнести их к тромбам эритро-цитарного вида [13].
В группе животных со стимуляцией фибри-нолиза, получивших плацебо (группа № 5), в области травмы найдены сравнительно менее заметные тромботические отложения (рисунок 6А), толщина которых составляла около 37 мкм (таблица 2). Основная часть этих отложений была представлена эритроцитами, границы между которыми определялись достаточно четко. При микроскопии раневой поверхности фибрин имел вид тонких «нежных» волокон (рисунок 6В), при этом толщина волокон уменьшилась в 1,4 раза (в сравнении с группой № 1), как показано в таблице 2. В целом, найденные особенности тромботических отложений в группе № 5 позволили отнести их к тромбам эритро-цитарного вида [13].
Кроме того, в синусоидных капиллярах в непосредственной близости от травмы были видны небольшие скопления тонких фибрино-вых волокон, а также единичные эритроциты с четкими границами между клетками. При подсчете тромбоцитов в просвете крупных сосудов (рисунок 6С) их количество составило около 80 клеток в поле зрения (таблица 2).
В группе животных, получивших ТК (группа № 6), толщина тромботических отложений была сравнительно больше (рисунок 7А), чем в группах № 1 и № 5 (соответственно, в 1,5 и 2,6 раза, таблица 2), и составила около 96 мкм. Как видно из рисунка 7А, тромботическая масса
А
40,2 МКМ
Рисунок 6 - Пример морфологической картины в области раны печени кролика группы № 5 (стрепто-киназа и плацебо). А - небольшие тромботические наложения в области повреждения; В - умеренное количество нитей фибрина (показаны стрелками, F - фибрин); С - значительное число тромбоцитов в просветах сосудов в области операционной раны (тромбоциты показаны стрелками).
была представлена преимущественно не измененными эритроцитами с четко определяемыми границами между этими клетками. Наличие волокнистого фибрина в данных отложениях, в отличие от группы № 1, было нехарактерно, определялись лишь единичные «нежные» волоконца розового цвета (рисунок 7В). Это, в целом, позволило отнести связанные с травмой тромботические массы в группе № 6 так же, как и в группе № 5, к тромбам эритроцитарного вида [13]. Отмечено и увеличение толщины фи-бриновых нитей - в 1,3 раза в сравнении с группой № 5 (таблица 2).
В синусоидных капиллярах в непосредственной близости от зоны травмы были видны небольшие отложения тонких «нежных» фибри-новых волокон (рисунок 7В), а также эритроцитов в виде «монетных столбиков» с четкими границами между клетками. Там же, в просветах крупных сосудов, отмечалось меньшее количество тромбоцитов (рисунок 7С) в сравнении с группой № 5, при подсчете их количество составило около 58 клеток в поле зрения (таблица 2).
У животных, получивших ФМ (группа № 7), в области травмы определялись максимально выраженные тромботические отложения в сравнении с картиной во всех других группах наблюдений (рисунок 8А), их толщина составила около 335 мкм (таблица 2). Тромбо-тические массы состояли преимущественно как из неизмененных, так и гемолизированных и агрегированных эритроцитов, а также фибрина. Последний определялся на большинстве участков в виде скопления масс и продольно расположенных волокон розового цвета (рисунок 8В). Отмечено также увеличение толщины фибриновых нитей в сравнении с группами № 1, № 5 и № 6 в 1,6, 2,2 и 1,7 раза соответственно (таблица 2).
Данная морфологическая картина представила возможность отнести тромботические образования в области раны в группе № 7 к тромбам фибрино-эритроцитарного (смешанного) вида [13].
В просвете крупных сосудов поблизости от зоны травмы были видны преимущественно неизмененные эритроциты. В расширенных си-нусоидных капиллярах отмечались скопления гемолизированных, агрегированных эритроцитов, определялись явления стаза и сладж-фе-номена эритроцитов, что, по мнению Кузника Б.И., может служить дополнительным свидетельством вовлечения этих клеток в гемостати-ческие реакции [14, 15]. Число тромбоцитов в просвете сосудов (рисунок 8С) было наименьшим по сравнению с другими группами наблюдений и составило около 51 кровяной пластинки в поле зрения (таблица 2).
А
94,5 МКМ
В
I. н _ Уф
к
С
Рисунок 7 - Пример морфологической картины в области раны печени кролика группы № 6 (стрептокиназа и транексамовая кислота). А -выраженные тромботические наложения в области
повреждения; В - скопление нитей фибрина (показаны стрелками, F - фибрин); С - умеренное число тромбоцитов в просветах сосудов в области операционной раны (тромбоциты показаны стрелками).
А
Рисунок 8 - Пример морфологической картины в области раны печени кролика группы № 7 (стреп-
токиназа и ФМ). А - максимально выраженные тромботические наложения в области повреждения; B - значительные скопления нитей фибрина (показаны стрелками, F - фибрин); C - умеренное число тромбоцитов в просветах сосудов в области операционной раны (тромбоциты показаны стрелками).
Методология проведенных экспериментов не нова и соответствует рекомендациям при проведении доклинических исследований новых лекарственных препаратов, влияющих на систему гемостаза [16, 17]. В зарубежных публикациях в качестве примера такого подхода можно отметить ряд работ [18, 19, 20].
В настоящем исследовании впервые продемонстрированы межгрупповые морфологические отличия в области раневой поверхности печени на двух экспериментальных моделях кровоточивости, связанных с подавлением свертывания крови гепарином или активацией фи-бринолиза с помощью стрептокиназы, с оценкой эффектов системных гемостатических препаратов, выполняющих функцию антидотов.
Как и ожидалось, толщина тромботических масс в зоне повреждения у животных с фармакологически обусловленным снижением ге-мостатического потенциала без применения гемостатиков (плацебо, в группах № 2 и № 5) оказалась наименьшей, а число тромбоцитов в просвете крупных сосудов вблизи травмы было сопоставимо с их количеством в аналогичных сосудах в группе № 1 (без подавления гемостатического потенциала) или превышало значение данного показателя. Эти изменения в группах № 2 и № 5, по-видимому, и обусловили сравнительно больший объем кровопотери в проведенных экспериментах.
В группах животных № 3 и № 6, где на фоне снижения гемостатического потенциала были применены соответственно ПС и ТК, толщина тромботических масс ожидаемо возросла в 15,1 и 2,6 раза (по сравнению с данными в группах № 2 и № 5). Также наблюдался феномен уменьшения числа тромбоцитов в просвете сосудов вблизи травмы, что, возможно, было связано с большим вовлечением этих клеток в процесс образования тромба. Эти факты объясняют уменьшение кровопотери за счет действия известных антидотов гепарина и стрептокиназы.
Применение ФМ, взятого в качестве экспериментального системного гемостатика (группы № 4 и 7), также способствовало увеличению толщины тромботических масс (в 4,1 и 9,0 раза соответственно по сравнению с данными в группах № 2 и № 5), что, однако, сопровождалось еще большим вовлечением тромбоцитов в тромбообразование. Интересно, что описанные эффекты сочетались со значительным сокращением объема кровопотери (в 5,1-11,0 раз), что не уступало гемокоагулирующей активности ПС и ТК.
Можно сделать предположение, что существует определенная связь между экзогенно введенным ФМ и дополнительным стимулированием тромбоцитов к участию в остановке кровотечения. Ранее такой эффект был показан
нами in vitro при смешивании обогащенной тромбоцитами цитратной плазмы с ФМ [21].
В целом, гемостатические реакции, наблюдаемые в группе животных № 1, получивших перед дозированной травмой плацебо, мы расцениваем как физиологические. В этой группе прекращение кровотечения сопровождалось образованием на раневой поверхности фибриллярных нитей фибрина с умеренным включением в фибриновые массы тромбоцитов и неизмененных эритроцитов. Отметим, что по ранее опубликованным нами данным применение плацебо перед нанесением травмы не оказывало влияния на результаты стандартных коагуляционных тестов и генерацию тромбина в плазме крови [6, 22].
Данные, полученные в этой группе, явились отправной точкой для сравнения гемостатиче-ских реакций и их морфологических проявлений в других опытных группах.
Декомпенсированные гемостатические реакции наблюдались у гепаринизированных животных в группе № 2 (летальность от крово-потери 35,3%) и животных после стимуляции фибринолиза стрептокиназой в группе № 5 (летальность от кровопотери 31,3%). Повышенные показатели кровопотери в указанных группах (в 1,9 и 1,5 раза соответственно) ассоциировалась с многократным уменьшением толщины тромбо-тических масс в области травмы (по сравнению с группой плацебо в 4,9 и 1,8 раза соответственно), а также крайне редкой встречаемостью нитей фибрина, имеющих фибриллярную структуру (в группе № 2), и уменьшением толщины фибриновых нитей (в группе № 5). Вероятно, остановка кровотечения у таких животных может осуществляться преимущественно за счет тромбоцитарных реакций.
Компенсированные гемостатические реакции были обнаружены у животных группы № 3, получивших НГ, который был нейтрализован ПС (снижение объема кровопотери в сравнении с группой № 2 в 4,0 раза), и группы № 6, активация фибринолиза у которых блокировалась ТК (снижение объема кровопотери в сравнении с группой № 5 в 15,4 раза). В группе № 3 морфологическая картина в зоне травмы демонстрировала 15-кратный прирост толщины тромботических масс, имеющих в своем составе эритроциты (в основном гемолизированные) и умеренное количество тромбоцитов. Сверх-компенсированное снижение кровопотери в группе № 6, по всей видимости, достигается увеличением толщины тромботических отложений по краю раны (в 2,6 раза в сравнении с группой № 5) с низким содержанием фибрина и значительно большим - эритроцитов. Количество тромбоцитов в просветах сосудов рядом с раневой поверхностью в обеих группах было
умеренным, что, в целом, позволяет объяснить уменьшение кровопотери преимущественно коагуляционными механизмами, завершающимися переходом фибриногена в фибрин.
Остановка кровотечения в группах № 3 и № 6, вероятно, имеет разные механизмы образования тромба, зависящие от принципа действия применяемого гемостатического средства (ПС или ТК).
Наряду с известными гемостатическими средствами ПС и ТК компенсированной гемо-статической реакцией обладал ФМ в группах животных № 4 и № 7 (снижение объема крово-потери в 5,1 и 11,0 раза соответственно). Морфологическая картина зоны повреждения в этих группах имела отличия. Толщина тромботи-ческих масс у гепаринизированных животных, получивших ФМ, была значительно меньше и была сопоставима по значению с группой № 1. Наблюдаемый фибрин, как правило, не имел фибриллярную структуру, а в тромботических массах было отмечено наличие многочисленных тромбоцитов, тогда как их количество в просветах сосудов рядом с раневой поверхностью значительно уменьшалось. Там же наблюдались гемолизированные эритроциты.
В группе № 7, получившей ФМ на фоне активации фибринолиза, при микроскопии раневой поверхности определялись наиболее выраженные из всех сравниваемых групп тромботи-ческие отложения с заметным присутствием в их составе не только эритроцитов, но и фибри-новых образований. При этом число тромбоцитов, как и в группе № 4, в просветах сосудов рядом с раневой поверхностью значительно снижалось.
Данное обстоятельство, на наш взгляд, свидетельствует о ведущей роли сосудисто-тром-боцитарного звена гемостаза в механизме кровоостанавливающего эффекта экзогенного ФМ.
Заключение
Сопоставление интенсивности кровопотери и морфологической картины в области дозированной раны печени после применения ФМ, на фоне введения гепарина или стрептокиназы позволило отследить закономерности тромбо-образования в ране, в том числе при использовании известных системных гемостатиков (соответственно, протамина сульфата, транек-самовой кислоты) и потенциально нового препарата этой группы - фибрин-мономера. Есть основания предположить, что последний реализует свою местную кровоостанавливающую функцию не самостоятельно, а в кооперации с тромбоцитами, что требует дальнейших исследований в этом направлении.
Работа поддержана грантом РФФИ на реализацию научного проекта № 18-415-220001
конкурса р_а - Конкурс проектов фундаментальных научных исследований 2018 года, фирмой ООО «Технология-Стандарт» (г. Барнаул) и ФГБОУ ВО «Алтайский государственный медицинский университет» Минздрава России (г. Барнаул).
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Список литературы:
1. Hoffman M., Monroe D.M. A Cell-based Model of hemostasis. Thrombosis and Haemostasis. 2001;85(6): 958-965. DOI: 10.1055/s-0037-1615947
2. Бутылин А.А., Пантелеев М.А., Атаул-лаханов Ф.И. Пространственная динамика свертывания крови. Российский химический журнал. 2007;51(1): 45-50.
3. Зубаиров Д.М. Молекулярные основы свертывания крови и тромбообразования. Казань: ФЭН; 2000: 367.
4. Луговской Э.В., Макогоненко Е.М., Ко-мисаренко С.В. Молекулярные механизмы образования и разрушения фибрина: физико-химический и иммунохимический анализ. Киев: Наукова думка; 2013: 229.
5. Weisel J.W., Litvinov R.I. Fibrin formation, structure, and properties. Subcell Biochem. 2017;82: 405-456. DOI: 10.1007/978-3-319-49674-0_13
6. Момот А.П., Вдовин В.М., Шахматов И.И., Толстокоров И.Г., Орехов Д.А., Шевченко В.О., Лычёва Н.А., Кудинов А.В., Белозерская Г.Г., Киселев В.И. Системные гемостатические и протромботические эффекты фибрин-мономера в эксперименте при дозированной травме печени. Сибирский научный медицинский журнал. 2019;39 (1): 6-12. DOI: 10.15372/SSMJ20190101
7. Вдовин В.М., Момот А.П., Орехов Д.А., Толстокоров И.Г., Шевченко В.О., Красюкова В.О., Шахматов И.И., Лычёва Н.А., Белозерская Г.Г. Время-зависимые системные гемостати-ческие эффекты фибрин-мономера при дозированной травме печени. Казанский медицинский журнал. 2019;100(2): 257-263. DOI: 10.17816/ KMJ2019-257
8. Вдовин В.М., Момот А.П., Красюкова В.О., Толстокоров И.Г., Орехов Д.А., Шевченко В.О., Шахматов И.И., Лычёва Н.А. Системные гемостатические и гемостазиологические эффекты фибрин-мономера при прямом ингиби-ровании тромбина в эксперименте. Российский физиологический журнал. 2019;105(2): 207-2015. DOI: 10.1134/S0869813919020109
9. Момот А.П., Вдовин В.М., Орехов Д.А., Лычёва Н.А., Толстокоров И.Г., Шевченко В.О., Красюкова В.О., Шахматов И.И. Профилактика массивных интраоперационных кровотечений, ассоциированных с гепарином, при системном применении фибрин-мономера в эксперименте. Патологическая физиология и эксперименталь-
ная терапия. 2019;63(4): 48-55. DOI: 10.25557/00312991.2019.04.48-55
10. Вдовин В.М., Момот А.П., Орехов Д.А., Толстокоров И.Г., Шевченко В.О., Шахматов И.И., Лычёва Н.А., Красюкова В.О. Системные гемостатические и гемостазиологические эффекты низкой дозы фибрин-мономера на фоне действия варфарина в эксперименте. Тромбоз, гемостаз и реология. 2019;79 (3): 16-23. DOI: 10.25555/THR.2019.3.0885
11. Вдовин В.М., Момот А.П., Орехов Д.А., Красюкова В.О., Шахматов И.И., Лычева Н. А., Момот Д.А., Чернусь В.Е., Теряев В.В. Минимизация посттравматического кровотечения при тромболитической терапии путем системного введения фибрин-мономера в эксперименте. Патология кровообращения и кардиохирургия. 2020;24(1): 78-86. DOI: 10.21688/1681-3472-2020-178-86
12. Park K.J., Kwon E.H., Kim H. J., Kim S.H. Evaluation of the Diagnostic Performance of Fibrin Monomerin Disseminated Intravascular Coagulation. Korean J. Lab. Med. 2011;31(3): 143-147. DOI: 10.3343/kjlm.2011.31.3.143
13. Зербино Д.Д., Лукасевич Л.Л. Диссеми-нированное внутрисосудистое свертывание крови: Факты и концепции. Москва: Медицина; 1989: 256.
14. Кузник Б.И. Клеточные и молекулярные механизмы регуляции системы гемостаза в норме и патологии. Чита: Экспресс-издательство; 2010: 832.
15. Кузник Б.И., Стуров В.Г. Левшин Н.Ю., Максимова О.Г., Кудлай Д.А. Геморрагические и тромботические заболевания и синдромы у детей и подростков. изд. 2-е, перераб. и доп. Новосибирск: Наука; 2018: 524.
16. Хабриев Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. изд. 2-е, перераб. и доп. Москва: Медицина; 2005: 832.
17. Миронов А.Н. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Ч. 1. Москва: Гриф и К; 2012: 944.
18. Pragst I., Zeitler S.H., Doerr B., Kaspereit F.J., Herzog E., Dickneite G., van Ryn J. Reversal of dabigatran anticoagulation by prothrombin complex concentrate (Beriplex P/N) in a rabbit model. Thrombosis and Haemostasis. 2012;10(9): 1841-1848. DOI: 10.1111/j.1538-7836.2012.04859.x
19. Lambourne M.D., Eltringham-Smith L.J., Gataiance S., Arnold D.M., Crowther M.A., Sheffield W.P.. Prothrombin complex concentrates reduce blood loss in murine coagulopathy induced by warfarin, but not in that induced by dabigatran etexilate. Thrombosis and Haemostasis. 2012;10 (9): 1830-1840. DOI: 10.1111/j.1538-7836.2012.04863.x
20. Herzog E., Kaspereit F., Krege W., Doerr B., Mueller-Cohrs J., Pragst I. et al. Effective reversal
of edoxaban-associated bleeding with four-factor prothrombin complex concentrate in a rabbit model of acute hemorrhage. Anesthesiology. 2015;122(2): 387-398. DOI: 10.1097/ALN.0000000000000520
21. Момот А.П., Суханова Г.А. Агрегация тромбоцитов, индуцированная фибрин-мономером и ее нарушения при внутрисосудистом свертывании крови. Гематология и трансфузио-логия. 1991;36(11): 25-26.
22. Вдовин В.М., Момот А.П., Орехов Д.А., Бобров И.П., Момот Д.А., Шахматов И.И., Красюкова В.О., Чернусь В.Е., Теряев В.В., Лы-чева Н.А., Москаленко С.В. Влияние экзогенного фибрин-мономера на гемостатический потенциал и образование фибрина в области дозированной травмы печени в эксперименте. Российский физиологический журнал. 2020;106(9): 1132-1143. DOI: 10.31857/S0869813920070092
References
1. Hoffman M., Monroe D.M. A Cell-based Model of hemostasis. Thrombosis and Haemostasis. 2001;85(6): 958-965. DOI: 10.1055/s-0037-1615947
2. Butylin A.A., Panteleev M.A., Ataullakha-nov F.I. Spatial dynamics of blood clotting. Russian Chemistry Journal. 2007;51(1): 45-50. (In Russ.)
3. Zubairov D.M. Molecular bases of blood clotting and thrombus formation. Kazan: FEN; 2000: 367. (In Russ.)
4. Lugovskoy E.V., Makogonenko E.M., Komisarenko S.V. Molecular mechanisms of fibrin formation and destruction: physicochemical and immunochemical analysis. Kyiv: Naukova dumka; 2013: 229. (In Russ.)
5. Weisel J.W., Litvinov R.I. Fibrin formation, structure, and properties. Subcell Biochem. 2017;82: 405-456. DOI: 10.1007/978-3-319-49674-0_13
6. Momot A.P., Vdovin V.M., Shakhmatov I.I., Tolstokorov I.G., Orekhov D.A., Shevchenko V.O. et al. Systemic hemostatic and prothrombot-ic effects of fibrin-monomer in experiment with dosed liver injury. The Siberian Scientific Medical Journal. 2019;39 (1): 6-12. (In Russ.) DOI: 10.15372/ SSMJ20190101
7. Vdovin V.M., Momot A.P., Orekhov D.A., Tolstokorov I.G., Shevchenko V.O., Krasyukova V.O. et al. Time-dependent systemic hemostatic effects of fibrin monomer in controlled liver injury. Kazan Medical Journal. 2019;100(2): 257-263. (In Russ.) DOI: 10.17816/KMJ2019-257
8. Vdovin V.M., Momot A.P., Krasyukova V.O., Tolstokorov I.G., Orekhov D.A., Shevchenko V.O. et al. Systemic hemostatic and hemostasiological effects of fibrin-monomer in direct thrombin inhibition in the experiment. Russian Physiological Journal. 2019;105(2): 207-2015. (In Russ.) DOI: 10.1134/S0869813919020109
9. Momot A.P., Vdovin V.M., Orekhov D.A., Lycheva N.A., Tolstokorov I.G., Shevchenko
V.O. et al. Prevention of heparin-associated massive intraoperative bleedings by systemic administration of fibrin monomer in experiment. Pathological Physiology and Experimental Therapy. 2019;63(4): 48-55. (In Russ.) DOI: 10.25557/00312991.2019.04.48-55
10. Vdovin V.M., Momot A.P., Orekhov D.A., Tolstokorov I.G., Shevchenko V.O., Shakhmatov I.I. et al. Systemic hemostatic and hemostasiological effects of fibrin monomer in low dose under warfarin action in experiment. Tromboz, Gemostaz I Reologiya. 2019;79 (3): 16-23. (In Russ.) DOI: 10.25555/THR.2019.3.0885
11. Vdovin V.M., Momot A.P., Orekhov D.A., Krasyukova V.O., Shakhmatov I.I., Lycheva N. A. et al. Posttraumatic bleeding reduction by systemic administration of fibrin monomer in thrombolytic therapy. Patologiya krovoobrashcheniya i kardiokhirurgiya. 2020;24(1): 78-86. (In Russ.) DOI: 10.21688/1681-3472-2020-1-78-86
12. Park K.J., Kwon E.H., Kim H. J., Kim S.H. Evaluation of the Diagnostic Performance of Fibrin Monomerin Disseminated Intravascular Coagulation. Korean J. Lab. Med. 2011;31(3): 143-147. DOI: 10.3343/kjlm.2011.31.3.143
13. Zerbino D.D., Lukasevich L.L. Disseminated intravascular blood clotting: Facts and concepts. Moscow: Medicina; 1989: 256. (In Russ.)
14. Kuznik B.I. Cell and molecular mechanisms of regulation of hemostasis system in norm and pathology. Chita: Ekspress-izdatelstvo; 2010: 832. (In Russ.)
15. Kuznik B.I., Sturov V.G. Levshin N.Yu., Maksimova O.G., Kudlai D.A. Hemorrhagic and thrombotic diseases and syndromes in children and adolescents. ed. 2, updated and revised. Novosibirsk: Nauka; 2018: 524. (In Russ.)
16. Khabriev R.U. Guidance on experimental (preclinical) study of new pharmacological substances. ed. 2, updated and revised. Moscow: Medicina; 2005: 832. (In Russ.)
17. Mironov A.N. Guidelines for conducting preclinical trials of drugs. P. 1. Moscow: Grif i K; 2012: 944. (In Russ.)
18. Pragst I., Zeitler S.H., Doerr B., Kaspereit F.J., Herzog E., Dickneite G., van Ryn J. Reversal of dabigatran anticoagulation by prothrombin complex concentrate (Beriplex P/N) in a rabbit model. Thrombosis and Haemostasis. 2012;10(9): 1841-1848. DOI: 10.1111/j.1538-7836.2012.04859.x
19. Lambourne M.D., Eltringham-Smith L.J., Gataiance S., Arnold D.M., Crowther M.A., Sheffield W.P.. Prothrombin complex concentrates reduce blood loss in murine coagulopathy induced by warfarin, but not in that induced by dabigatran etexilate. Thrombosis and Haemostasis. 2012;10 (9): 1830-1840. DOI: 10.1111/j.1538-7836.2012.04863.x
20. Herzog E., Kaspereit F., Krege W., Doerr B., Mueller-Cohrs J., Pragst I. et al. Effective reversal of edoxaban-associated bleeding with four-factor
prothrombin complex concentrate in a rabbit model of acute hemorrhage. Anesthesiology. 2015;122(2): 387-398. DOI: 10.1097/ALN.0000000000000520
21. Momot A.P., Sukhanova G.A. Platelet aggregation induced by fibrin monomer and its disorders in intravascular blood clotting. Russian Journal of Hematology and Transfusiology. 1991;36(11): 25-26. (In Russ.)
22. Vdovin V.M., Momot A.P., Orekhov D.A., Bobrov I.P., Momot D.A., Shakhmatov I.I. et al. Influence of exogenous fibrin monomer on hemostatic potential and formation of fibrin in the area of dosed liver injury in experiment. Russian Physiological Journal. 2020;106(9): 1132-1143. (In Russ.) DOI: 10.31857/S0869813920070092
Контактные данные
Автор, ответственный за переписку: Вдовин Вячеслав Михайлович, к.м.н., доцент, заведующий кафедрой патологической физиологии Алтайского государственного медицинского университета, г. Барнаул. 656038, г. Барнаул, пр. Ленина, 40. Тел.: (3852) 566947. E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-4606-3627
Информация об авторах
Бобров Игорь Петрович, д.м.н., профессор кафедры судебной медицины имени профегсо-ра В.Н. Крюкова и патологической анатомии с курсом ДПО Алтайского государственного медицинского университета, г. Барнаул. 656050, г. Барнаул, ул. Юрина, 168Н. Тел.: (3852) 566945. E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-9097-6733
Шахматов Игорь Ильич, д.м.н., доцент, заведующий кафедрой нормальной физиологии Алтайского государственного медицинского университета, г. Барнаул. 656038, г. Барнаул, пр. Ленина, 40. Тел.: (3852) 566928. E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-0979-8560
Момот Андрей Павлович, д.м.н., профессор кафедры сестринского дела Алтайского государственного медицинского университета; директор Алтайского филиала ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Минздрава России, г. Барнаул. 656045, г. Барнаул, ул. Ляпидевского, 1/2. Тел.: (3852) 689800. E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-8413-5484
Поступила в редакцию 18.03.2021 Принята к публикации 02.04.2021
Для цитирования: Вдовин В.М., Бобров И.П., Шахматов И.И., Момот А.П. Морфологические последствия системного применения фибрин-мономера в условиях подавления гемо-статического и усиления фибринолитического потенциалов при дозированной травме печени в эксперименте. Бюллетень медицинской науки. 2021;1(21): 74-87.
Citation: Vdovin V.M., Bobrov I.P., Shakhmatov I.I., Momot A.P. Morphological consequences of systemic application of fibrin monomer in conditions of hemostatic potential suppression and fibrinolytic potential amplification in dosed liver injury in experiment. Bulletin of Medical Science. 2021;1(21): 74-87. (In Russ.)
