CC BY
35УДК 611-018:611.778:611.91+611.9
МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ РЕГЕНЕРАЦИИ ТКАНЕЙ В МОДЕЛЬНОЙ ИШЕМИЗИРОВАННОЙ РАНЕ КОЖИ ПОД ВЛИЯНИЕМ ПОЛИНУКЛЕОТИДОВ
Шаповалова Е. Ю., Бойко Т. А., Барановский Ю. Г., Коломоец Т. А., Василенко С. А.
Кафедра гистологии и эмбриологии, Медицинская академия имени С. И. Георгиевского ФГАОУ ВО «КФУ имени В. И. Вернадского», 295051, Россия, г. Симферополь, бульвар Ленина, 5/7.
Для корреспонденции: Шаповалова Елена Юрьевна, доктор медицинских наук, профессор, зав. кафедрой гистологии и эмбриологии Медицинской академии имени С. И. Георгиевского ФГаОУ ВО «КФУ имени В. И. Вернадского», 295051, Россия, г. Симферополь, бульвар Ленина, 5/7. E-mail Shapovalova_L@mail.ru
For correspondence: Shapovalova Ye.Yu., MD, Professor, Head of the Department of Histology and Embryology, Medical Academy named after S.I. Georgievsky of Vernadsky CFU, е-mail Shapovalova_L@mail.ru
Information about authors:
Shapovalova Ye.Yu., http:// orcid.org. 0000-0003-2544-7696 Boyko T.A., http:// orcid.org. 0000-0002-9627-4051 Baranovskiy Yu.G., http:// orcid.org. 0000-0002-7044-1122 Kolomoyetz T.A., http:// orcid.org. 0000-0001-9416-4513 Vasilenko S.A., http:// orcid.org. 0000-0002-7965-2639
РЕЗЮМЕ
В настоящее время появился новый класс лекарственных веществ - полидезоксирибонуклеотидов (PDRN), способствующих укорочению сроков регенерации ран. Целью исследования было проведение анализа регенерации тканей, ангиогенеза и коллагенообразования в биоптатах ишемизированной раны кожи на этапах ее заживления на фоне введения полинуклеотидов. В экспериментальном исследовании на мышах линии С57/В1 в возрасте 5-7 месяцев, разделенных на контрольную и экспериментальную группы, в экспериментальной группе в дно и вокруг раны вводили 0,4 мл раствора полинуклеотидов. На 4, 7, 10, 12, 15 и 23-и сутки после операции биоптат заливали в парафин, окрашивали гематоксилином и эозином. Толщину эпидермиса, площадь коллагеновых волокон и микрососудов в дерме биоптатов измеряли с помощью программы «ImageJ». Установлено, что введение полинуклеотидов обеспечивает более быстрое заживление ишемизированных ран путем активной эпителизации, сокращение сроков пролиферативной фазы раневого процесса и предотвращает образование грубых рубцов через раннее усиление синтеза коллагена фибробластами и регуляцию ангиогенеза.
Ключевые слова: полинуклеотиды; ишемизированная рана; кожа; раневой процесс; ангиогенез; рубец.
MORPHOLOGICAL PECULIARITIES OF TISSUE REGENERATION IN THE MODEL ISCHEMIZED SKIN WOUND UNDER THE INFLUENCE OF POLYDEOXYRIBONUCLEOTIDES
Shapovalova Ye. Yu., Boyko T. A., Baranovskiy Yu. G., Kolomoyetz T. A., Vasilenko S. A.
Medical Academy named after S.I. Georgievsky of Vernadsky CFU, Simferopol, Russia
SUMMARY
At present, a new class of medicinal substances, Polydeoxyribonucleotides (PDRN), has appeared that helps shorten the time for regeneration of wounds. The aim of the study was to analyze tissue regeneration, angiogenesis and collagen formation in biopsies at the stages of the skin ischemic wound healing against the background of the introduction of Polydeoxyribonucleotides. In an experimental study in C57/B1 mice aged 5-7 months, divided into a control group and an experimental one, 0.4 ml of the PDRN solution was injected into the bottom and around the wound in the experimental group. On the 4th, 7th, 10th, 12th, 15th and 23th day after the operation, the biopsy specimen was embedded into paraffin and stained with hematoxylin and eosin. The thickness of the epidermis, the area of the collagen fibers and micro vessels in the biopsy dermis were measured using the "ImageJ" program. It has been found that introduction of Polydeoxyribonucleotides provides faster healing of ischemic wounds by active epithelializa-tion, a reduction of the proliferative phase of the wound process, and prevents formation of gross scars through early enhancement of collagen synthesis by fibroblasts and angiogenesis regulation.
Key words: Polydeoxyribonucleotide; ischemic wound; skin; wound process; angiogenesis; scar.
В настоящее время появился новый класс лекарственных веществ -полидезоксирибону-клеотиды (РБК^), которые экстрагируются из спермы лососевых рыб. РБЯМ содержат дезок-
сирибонуклеотидные полимеры с 50-2000 парами азотистых оснований [1]. Полимеры способны замещать поврежденные азотистые основания ДНК и РНК молекул клеток тканей ран
различной этиологии [2]. Экспериментальные работы указывают на увеличение подвижности и пролиферации фибробластов и остеобластов человека на участке ранения в зависимости от концентрации РБК^ [3]. Укорочение сроков регенерации ран связывают с восстановлением клеточных повреждений путем взаимодействия с пуринергическим рецептором А2 и ускорением дифференцировки фибробластов в пролиферативную фазу раневого процесса [4].
Сведения о позитивном влиянии РБЯМ на ан-гиогенез и синтез коллагена при заживлении ише-мизированных ран кожи встречаются в научной литературе, однако они единичны и редки [5, 6].
Цель исследования - провести анализ регенерации тканей, ангиогенеза и колла-
генообразования в биоптатах ишемизиро-ванной раны кожи на этапах ее заживления на фоне введения полинуклеотидов.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
В работе использованы 36 белых лабораторных мышей линии С57/В1, достигших возраста 4-6 месяцев. Были выделены две группы по 18 мышей: контрольная и экспериментальная (таблица 1). Методика формирования модельной раны описана в работе Барановского Ю. Г. с соавт., 2016 [7]. В экспериментальной серии модельную рану обкалывали 0,39 мл PDRN "Plenhyage Medium" фирмы I.R.A. Istituto Ricerche Applicate Sri (Италия).
Таблица 1
Распределение мышей по срокам забора материала в контрольной и экспериментальной группах
Отрезок времени после операции Контрольная группа (особей) Экспериментальная группа (особей)
4 сутки 3 3
7 сутки 2 4
10 сутки 4 2
12 сутки 2 3
15 сутки 4 2
23 сутки 3 4
Всего 18 18
Всего в исследовании - 36 особей
По прошествии 4, 7, 10, 12, 15 и 23-х дней заживающую рану удаляли и инкубировали сутки в нейтральном формалине стандартной концентрации. По общепринятой методике материал пропитывали парафином. Окраска срезов была проведена первым красителем - гематоксилином Майера, а затем вторым - эозином. Толщину эпидермиса, площадь коллагеновых волокон и микрососудов в дерме биоптатов измеряли с помощью программы «ImageJ» при общем увеличении в 400 раз по 50 измерений на срез. Используя программу MS Office Excel 2007 и STATISTICA 10,0 Enterprise (StatSoft Inc., США), сравнивали по критерию Манна - Уитни (U-критерий) с достоверностью различий р=0,05 вариационные ряды морфометрических данных. Сравнения средней толщины эпидермиса, площади, занимаемой коллагеновыми волокнами и сосудами грануляционной ткани в каждом сроке заживления раны, проводили в процентах по отношению к контрольной группе в этом сроке заживления или по отношению к каждому показателю в биоптате предыдущего срока.
РЕЗУЛЬТАТЫ
На 4-й день в срезах биптатов (окрашенных гематоксилином и эозином) мышей обоих групп эпидермис отсутствует. Рана закрыта струпом, который состоит из клеток воспаления и погибших клеток. Толщина струпа больше в контрольной группе. Весь дефект кожи выполнен белыми адипоцитами, поднявшимися из гиподермы. Коллагеновые волокна и кровеносные сосуды крайне малочисленны и практически не просматриваются.
На 7-е сутки силиконовое кольцо по-прежнему плотно пришито вокруг раны. Рана снаружи прикрыта струпом, состоящим из клеточного дебриса, под которым на срезах обнаруживается в контроле базальная мембрана с двумя рядами низких призматических клеток. После обкалывания полинуклеотидами эпидермис значительно толще за счет появления дополнительного третьего ряда эпидермоцитов. Толщина эпидермиса в обоих сериях приведена в таблице 2. В экспериментальной группе эпидермис толще на 49,20±0,12%. Площадь, занимаемая
коллагеновыми волокнами и сосудами (см. табл. 2), в экспериментальной группе на 24,48+0,02 % и 37,04+0,11 % соответственно больше.
На 10-й день после операции и обкалывания полинуклеотидами кольцо у мышей отпало за счет закрытия раны эпидермисом. Снаружи эпидермис покрыт сохранившимся еще струпом, который в экспериментальной серии тоньше, чем в контроле (см. табл. 2) (рис. 1А и рис. 1Б). Толщина эпидермиса в экспериментальной группе на 25,53+0,12 % толще, чем в контрольной группе. Вместе с тем, по сравнению с толщиной эпидермиса в биоптатах предыдущего возраста, толщина эпидермиса в контрольной группе увеличилась на 44,23+0,14 %, а в экспериментальной группе - на 15,2+0,04 %. Грану-
ляционная ткань сформирована лучше в срезах экспериментальной серии за счет большего количества фибробластов, более густой сети коллагеновых волокон, в петлях которой лежат и кровеносные капилляры (рис. 1А и рис. 1Б). Коллагеновые волокна занимают площадь на 49,86+0,13 % большую, чем в контроле. По сравнению с 7-ми сутками площадь под коллагено-выми волокнами в экспериментальной группе увеличилась на 38,51+0,14 % против 7,38+0,02 % в контрольной группе. Кровеносные сосуды занимают площадь на 30,67+0,10 % большую, чем в контроле. По сравнению с 7-ми сутками площадь под кровеносными сосудами в экспериментальной группе увеличилась на 28,00+0,09 % против 40,38+0,15 % в контрольной группе.
Таблица 2
Толщина эпидермиса, площадь сосудов и коллагеновых волокон в биоптатах раны кожи контрольной и экспериментальной групп
Количество суток после операции Толщина эпидермиса в мкм Площадь сосудов в дерме в % Площадь коллагеновых волокон в дерме в %
Контрольная группа Экспериментальная группа Контрольная группа (Р=0,05) Экспериментальная группа (Р=0,05) Контрольная группа (Р=0,05) Экспериментальная группа (Р=0,05)
4-е сутки - - - - - -
7-е сутки 22,98±0,14 45,24±0,23 0, 34±0,01 0,54±0,02 20,08±0,12 26,59±0,11
10-е сутки 39,73±0,12 53,35±0,16
0,75±0,02 21,68±0,12 43,24±0,12
12-е сутки 51,73±0,12 60,64±0,22 0,69±0,02 1,47±0,11 29,70±0,16 59,63±0,22
15-е сутки 54,19±0,27 75,87±0,17 1,17±0,10 1,36±0,10 49,52±0,26 70,88±0,24
23-и сутки 62,32±0,12 94,69±0,21 1,06±0,04 0,77±0,04 55,39±0,19 81,52±0,25
Рис. 1. Срез биоптатов на 10-й день. А - экспериментальная группа. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение: ок. 10 об. 20. Б - контрольная группа. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение: ок. 10 об. 10. 1 - струп; 2 - эпидермис; 3 - грануляционная ткань; 4 - кровеносный сосуд.
К 12-му дню кольцо не обнаруживается у всех животных, но эпидермис толще (см. табл. 2) на 14,69+0,11 % и более дифференцирован на фоне первоначальной инъекции полинуклеоти-дов. По сравнению с 10-ми сутками его высота увеличилась на 12,03+0,03%. Грануляционная ткань дермы продолжает развиваться. Площадь коллагеновых волокон (см. табл. 2) увеличилась по сравнению с 10-ми сутками на 27,00+0,10 %. Немногочисленные кровеносные капилляры и венулы расширены. Их площадь возросла с 10-х суток на 24,64+0,16 %. В биоптатах после введения полинуклеотидов течение регенераторного гистогенеза происходило более благоприятно. С поверхности эпидермиса струп полностью отделился. Значительно продвинулась диффе-ренцировка слоев эпидермиса. На поверхности заметен выраженный роговой слой, наметилось появление сосочкового слоя дермы в виде волнистой границы между базальной мембраной эпидермиса и подлежащей грануляционной тканью. Грануляционная ткань характеризуется усилением процессов ангиогенеза (площадь сосудов больше на 53,06+0,11 %, чем в контроле) и коллагенообразования (площадь коллагеновых волокон больше на 50,19+0,17 %). За прошедшие двое суток коллагенообразование увеличилось на 27,49+0,10 %, а ангиогенез - на 49,98+0,15 %.
На 15-е сутки наметились признаки перехода пролиферативной фазы раневого процесса в стадию фиброзирования. Этот процесс происходит интенсивнее после введения РБЯМ, где площадь, занятая коллагеновыми волокнами, на 30,14+0,13 % больше, чем в контрольной группе. Коллагеновые волокна формируют тонкие пучки, лежащие параллельно базальной мембране эпидермиса. Сетчатая структура коллагеновых волокон теряется. Формируется сосочковый слой дермы, когда линия разграничения эпидермиса и дермы становится волнистой. В обеих группах наблюдается прирост площади занимаемой коллагеновыми волоконами (см. табл. 2) по сравнению с 12-ми сутками, но в контрольной группе прирост выше (40,02+0,12 % против 15,87+0,04 % в экспериментальной группе). Площадь, занятая капиллярами, также на 13,98+0,04 % больше в экспериментальной группе. Вместе с тем, под влиянием полинуклеотидов площадь сосудов в экспериментальной группе уменьшилась на 7,48+0,02 % по сравнению с 12-ми сутками, в то время, как в контрольной группе она продолжает нарастать (41,03+0,15 %).
На 23-и сутки, которые, учитывая продолжительность жизни лабораторных мышей, являются весьма отделенным сроком, рубец у мышей экспериментальной группы выглядит полностью сформированным и даже имеет шерстяной
покров. У этих мышей на гистологических срезах эпидермис дифференцирован в 4 слоя, как и положено тонкой коже, и толще на 34,19+0,16 %, чем в контроле. По сравнению с 15-ми сутками он стал выше на 18,88+0,10 % против 13,05+0,06 % в контроле. Видны закладки волос. В дерме коллагеновые волокна собраны в пучки параллельно поверхности эпидермиса (см. табл. 2). В контрольной группе коллагеновых волокон больше на 32,05+0,17 %, но пучки более тонкие. Площадь, занятая кровеносными сосудами, меньше на 27,36+0,14 %, чем в контроле. В контрольной группе сформировался более грубый рубец без волос с толстыми пучками коллагено-вых волокон, среди которых много капилляров. В контрольной группе по сравнению с 15-ми сутками коллагеновые волокна увеличились на 10,60+0,04 % против 13,05+0,02 % на фоне по-линуклеотидов. Площадь кровеносных сосудов в обеих группах сократилась, но в экспериментальной группе более существенно (9,40+0,02 % против 43,38+0,12 % в эксперименте).
ОБСУЖДЕНИЕ
Несмотря на то, что точный механизм влияния полинуклеотидов на процессы регенерации до конца не ясен, известно, что они способствуют усилению ангиогенеза и коллагенообра-зования при заживлении диабетических язв, термических и лучевых поражениях и других длительно незаживающих дефектах кожных покровов различной этиологии [8, 9]. БШ:о А. с соавт. [10] описали восстановление кровообращения в ишемизированной ране у крыс после инъекций полинуклеотидов. Более того, обнаружено, что ширина сформировавшегося рубца была значительно более узкой в группах, обработанных РБЯМ, чем в группе без лечения [11, 12]. Нами выявлено, что в экспериментальной группе накопление коллагеновых волокон в грануляционной ткани после 4-х суток, когда начинается пролиферативная фаза раневого процесса, происходит активнее, чем в контроле. Наибольший прирост содержания коллагеновых волокон наблюдается к 10-м суткам, тогда как в контроле - только к 15-м суткам. Активность синтеза коллагена фибробластами на фоне введения РБЯМ в среднем выше на 37,34 %. Фаза фиброзирования, сопровождающаяся уменьшением количества кровеносных сосудов, в экспериментальной группе начинается раньше - на 15-е сутки. В контроле этот процесс зафиксирован только на 23-и сутки. Рубцевание под влиянием РБЯМ начинается к 15-м суткам и интенсивно продолжается, формируя к 23-м суткам нормотрофический рубец, в котором присутствуют даже дериваты кожи - волосы шерсти.
Мы не встретили в доступной литературе сведений о влиянии PDRN на регенерацию эпидермиса. По нашим данным, начиная с 4-х суток, во все дальнейшие изученные сроки заживления кожной раны после введения полинуклеотидов толщина эпидермиса достоверно больше, чем в контрольной группе. В экспериментальной группе количество рядов клеток эпидермиса активно нарастает к 7-м суткам, а в контроле - только к 10-м суткам. Максимальная разница толщины эпидермиса между контрольной и экспериментальной группой наблюдается на 7-е сутки регенерации ишемизированной раны, когда полинуклеотиды стимулируют более быструю эпителизацию раны по сравнению с контролем.
Заключение. Таким образом, введение по-линуклеотидов обеспечивает более быстрое заживление ишемизированных ран путем активной эпителизации, сокращение сроков пролиферативной фазы раневого процесс и предотвращает образование грубых рубцов через раннее усиление синтеза коллагена фибробластами и регуляцию ангиогенеза.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
Финансирование. Работа поддержана проектом академической мобильности «РНИ-ЭМ» ФГАОУ ВО «КФУ имени В. И. Вернадского» и выполнена с использованием инфраструктуры ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И. П. Павлова».
Funding. The work is supported by the project «Academic Mobility Network «DSREM»" of Vernadsky Crimean Federal University and implemented using the infrastructure of the First S.- Peterburg State Medical University named by I.P. Pavlov.
ЛИТЕРАТУРА
1.Noh T.K., Chung B.Y., Kim S.Y., Lee M.H., Kim M.J., Youn C.S., Lee M.W., Chang S.E. Novel Anti-Melanogenesis Properties of Polydeoxyribonucleotide, a Popular Wound Healing Booster. Int J Mol Sci. 2016;17(9):E1448. doi: 10.3390/ijms17091448.
2. Galeano M., Bitto A., Altavilla D., Minutoli L., Polito F., Calo M., Lo Cascio P., Stagno d'Alcontres F., Squadrito F. Polydeoxyribonucleotide stimulates angiogenesis and wound healing in the genetically diabetic mouse. Wound Repair Regen. 2008;16:208-217. doi: 10.1111/j.1524-475X.2008.00361.
3. Koo Y., Yun Y. Effects of polydeoxyribonucleotides (PDRN) on wound healing: Electric cell-substrate impedance sensing (ECIS). Mater Sci Eng C Mater Biol Appl. 2016;1(69):554-60. doi: 10.1016/j.msec.2016.06.094.
4. Sini P., Denti A., Cattarini G., Daglio M., Tira M.E., Balduini C. Effect of polydeoxyribonucleotides on human fibroblasts in primary culture. Cell Biochem. Funct. 1999;17:107-114. doi: 10.1002/(SICI)1099-0844(199906)17:2<107::AID-CBF815>3.0.CO;2-#.
5. Polito F., Bitto A., Galeano M. Polydeoxyribonucleotide restores blood flow in an experimental model of ischemic skin flaps. Journal of Vascular Surgery. 2012;55(2):479-488.
6. Woonhyeok J., Chae E.Y., Tai S.R., Jun H.K., Ju Hee L., Won J.L. Scar Prevention and Enhanced Wound Healing Induced by Polydeoxyribonucleotide in a Rat Incisional Wound-Healing Modelnt. J Mol Sci. 2017;18(8):1698. doi: 10.3390/ijms18081698
7. Барановский Ю. Г., Ильченко Ф. Н., Шаповалова Е. Ю. Способ моделирования трофической язвы у лабораторных мышей в опытной модели. Вестник неотложной и восстановительной хирургии. 2016;1 (2):259-261.
8. Squadrito F., Bitto A., Altavilla D., Arcoraci V., de Caridi G., de Feo M.E., Corrao S., Pallio G., Sterrantino C., Minutoli L. The effect of PDRN, an adenosine receptor A2A agonist, on the healing of chronic diabetic foot ulcers: Results of a clinical trial. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2014;99:E746-E753. doi: 10.1210/jc.2013-3569.
9. Bitto A., Galeano M., Squadrito F., Minutoli L., Polito F., Dye J.F., Clayton E.A., Calo M., Venuti F.S., Vaccaro M., et al. Polydeoxyribonucleotide improves angiogenesis and wound healing in experimental thermal injury. Crit. Care Med. 2008;36:1594-1602. doi: 10.1097/ CCM.0b013e318170ab5c.
10. Bitto A., Polito F., Altavilla D., Minutoli L., Migliorato A., Squadrito F. Polydeoxyribonucleotide (PDRN) restores blood flow in an experimental model of peripheral artery occlusive disease. J. Vasc. Surg. 2008;48:1292-1300. doi: 10.1016/j.jvs.2008.06.041.
11. Xue M., Jackson C.J. Extracellular matrix reorganization during wound healing and its impact on abnormal scarring. Adv. Wound Care. 2015;4:119-136. doi: 10.1089/wound.2013.0485.
12. Yu M., Lee J.Y. Polydeoxyribonucleotide improves wound healing of fractional laser resurfacing in rat model. J Cosmet Laser Ther. 2017;19(1):43-48. doi: 10.1080/14764172.2016.1247966.
REFERENCES
1.Noh T.K., Chung B.Y., Kim S.Y., Lee M.H., Kim M.J., Youn C.S., Lee M.W., Chang S.E. Novel Anti-Melanogenesis Properties of Polydeoxyribonucleotide, a Popular Wound HealingBooster. Int J Mol Sci. 2016;17(9):E1448. doi: 10.3390/ijms17091448.
2. Galeano M., Bitto A., Altavilla D., Minutoli L., Polito F., Calo M., Lo Cascio P., Stagno d'Alcontres F., Squadrito F. Polydeoxyribonucleotide stimulates angiogenesis and wound healing in the genetically diabetic mouse. Wound Repair Regen. 2008;16:208-217. doi: 10.1111/j.1524-475X.2008.00361.
3. Koo Y., Yun Y Effects of polydeoxyribonucleotides (PDRN) on wound healing: Electric cell-substrate impedance sensing (ECIS). Mater Sci Eng C Mater Biol Appl. 2016;1(69):554-60. doi: 10.1016/j.msec.2016.06.094.
4. Sini P., Denti A., Cattarini G., Daglio M., Tira M.E., Balduini C. Effect of polydeoxyribonucleotides on human fibroblasts in primary culture. Cell Biochem. Funct. 1999;17:107-114. doi: 10.1002/(SICI)1099-0844(199906)17:2<107::AID-CBF815>3.0.CO;2-#.
5. Polito F., Bitto A., Galeano M. Polydeoxyribonucleotide restores blood flow in an experimental model of ischemic skin flaps. Journal of Vascular Surgery. 2012;55(2):479-488.
6. Woonhyeok J., Chae E.Y., Tai S.R., Jun H.K., Ju Hee L., Won J.L. Scar Prevention and Enhanced Wound Healing Induced by Polydeoxyribonucleotide in a Rat Incisional Wound-Healing Modelnt. J Mol Sci. 2017;18(8):1698. doi: 10.3390/ijms18081698
7. Baranovskiy Yu.G., Ilchenko F.N., Shapovalova Ye.Yu. Method of modeling trophic ulcers in laboratory mice in the experimental model. Vestnik neotlozhnoj i vosstanovitel'noj hirurgii. 2016;1 (2).259-61. (in Russian)
8. Squadrito F., Bitto A., Altavilla D., Arcoraci V., de Caridi G., de Feo M.E., Corrao S., Pallio G., Sterrantino
C., Minutoli L. The effect of PDRN, an adenosine receptor A2A agonist, on the healing of chronic diabetic foot ulcers: Results of a clinical trial. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2014;99:E746-E753. doi: 10.1210/jc.2013-3569.
9. Bitto A., Galeano M., Squadrito F., Minutoli L., Polito F., Dye J.F., Clayton E.A., Calo M., Venuti F.S., Vaccaro M., et al. Polydeoxyribonucleotide improves angiogenesis and wound healing in experimental thermal injury. Crit. Care Med. 2008;36:1594-1602. doi: 10.1097/ CCM.0b013e318170ab5c.
10. Bitto A., Polito F., Altavilla D., Minutoli L., Migliorato A., Squadrito F. Polydeoxyribonucleotide (PDRN) restores blood flow in an experimental model of peripheral artery occlusive disease. J. Vasc. Surg. 2008;48:1292-1300. doi: 10.1016/j.jvs.2008.06.041.
11. Xue M., Jackson C.J. Extracellular matrix reorganization during wound healing and its impact on abnormal scarring. Adv. Wound Care. 2015;4:119-136. doi: 10.1089/wound.2013.0485.
12. Yu M., Lee J.Y. Polydeoxyribonucleotide improves wound healing of fractional laser resurfacing in rat model. J Cosmet Laser Ther. 2017;19(1):43-48. doi: 10.1080/14764172.2016.1247966.
