CC BY
2
УДК 579.64
Морфологические, культуральные и физиолого-биохимические свойства микроорганизмов — потенциальных продуцентов ксиланаз
Д-р техн. наук Л. С. ДЫШЛЮК, канд. биол. наук О. В. КАЗИМИРЧЕНКО, д-р техн. наук Е. В. УЛЬРИХ1, канд. техн. наук С. В. АГАФОНОВА Калининградский государственный технический университет 1E-mail: [email protected]
В последнее десятилетие активно изучаются свойства ксиланолитических ферментов, которые используются в производстве целлюлозы и бумаги, кормов для сельскохозяйственных животных, а также продуктов питания и напитков (в частности, пребиотических компонентов). Целью данной работы являлась идентификация по морфологическим, культуральным, тинкториальным и физиолого-биохимическим свойствам микроорганизмов, выделенных из растительного сырья и представляющих интерес с точки зрения возможности продуцировать ксиланазы. Из микрофлоры лигноцеллюлозного сырья, собранного в Калининградской области, выделены изоля-ты бактерий и плесневых грибов, которые можно рассматривать как перспективные продуценты ферментов ксиланолитического действия. Из микрофлоры семян люпина белого выделены четыре бактериальных изолята Bacillus megaterium, B. badius, B. mesentericus, B. lentus; из оболочек семян люпина белого — пять бактериальных изолятов B. brevis, B. firmus, B. megaterium, B. sp., B. mycoides и один изолят плесневого гриба Penicillium glaucum; из семян конского каштана — два изолята бактерий B. pumilus, B. mycoides и один изолят микроми-цета Penicillium glaucum; из соевой оболочки — четыре бактериальных изолята B. mesentericus, B. sphaericus, B. stearothermophilus и Staphylococcus saprophyticus. Сопоставление полученных результатов с литературными данными позволяет предположить наличие у выделенных бактерий и микроскопических грибов способности продуцировать ферменты ксиланолитического действия, которая будет оцениваться в дальнейших исследованиях. Ключевые слова: ксилан, ксиланолитические ферменты, микроорганизмы — продуценты, микрофлора лигноцеллюлозного сырья, бактерии, плесневые грибы.
Информация о статье:
Поступила в редакцию 03.08.2023, одобрена после рецензирования 25.08.2023, принята к печати 15.09.2023 DOI: 10.17586/1606-4313-2023-22-4-79-90 Язык статьи — русский Для цитирования:
Дышлюк Л. С., Казимирченко О. В., Ульрих Е. В., Агафонова С. В. Морфологические, культуральные и физиоло-го-биохимические свойства микроорганизмов — потенциальных продуцентов ксиланаз. // Вестник Международной академии холода. 2023. № 4. С. 79-90. DOI: 10.17586/1606-4313-2023-22-4-79-90
Morphological, cultural, and biophysiochemical characteristics of microorganisms — potential producers of xylanase
D. Sc. L. S. DYSHLYUK, Ph. D. O. V. KAZIMIRCHENKO, D. Sc. E. V. ULRIKH1, Ph. D. S. V. AGAFONOVA
Kaliningrad State Technical University 'E-mail: [email protected]
In the last decade, the properties of xylanolytic enzymes, which are used in the production of cellulose and paper, feed for farm animals, as well as food and beverages (in particular, prebiotic components), have been actively studied. The purpose of this work was to identify microorganisms isolatedfrom plant materials and of interest in terms of the ability to produce xylanases by their morphological, cultural, tinctorial, and biophysiochemical properties. From the microflora of lignocellulosic raw materials collected in the Kaliningrad region, isolates of bacteria and moldfungi were isolated, which can be considered as promising producers ofxylanolytic enzymes. Four bacterial isolates ofBacillus megaterium, B. badius, B. mesentericus, and B. lentus were isolatedfrom the microflora of white lupine seeds; five bacterial isolates of B. brevis, B. firmus, B. megaterium, B. sp., B. mycoides and one isolate of the fungus Penicillium glaucum — from seed hulls of white lupine; two isolates of bacteria B. pumilus, B. mycoides and one isolate of micromycete Penicillium glaucum —from horse chestnut seeds; four bacterial isolates of B. mesentericus, B. sphaericus, B. stearothermophilus and Staphylococcus saprophyticus — from soybean hulls. Comparison of the results obtained with the literature data suggests that the isolated bacteria and microscopicfungi have the ability to produce xylanolytic enzymes, which will be evaluated in further studies. Keywords: xylan, xylanolytic enzymes, microorganism-producers, microflora of lignocellulosic raw materials, bacteria, mold fungi.
Article info:
Received 03/08/2023, approved after reviewing 25/08/2023, accepted 15/09/2023 DOI: 10.17586/1606-4313-2023-22-4-79-90 Article in Russian For citation:
Dyshlyuk L. S., Kazimirchenko O. V., Ulrikh E. V., Agafonova S. V Morphological, cultural, and biophysiochemical characteristics of microorganisms — potential producers of xylanase. Journal of International Academy of Refrigeration. 2023. No 4. p. 79-90. DOI: 10.17586/1606-4313-2023-22-4-79-90
Введение
Ксилан представляет собой сложный гетерополимер с гомополимерной основной цепью 1,4-связанных звеньев Р-Э-ксилопиранозы и О-ацетил, а-Ь-арабинофуранозил, а-1,2-связанными глюкуроновыми или 4-о-метилглюку-роновыми заместителями [1]. Необходимо несколько гидролитических ферментов, чтобы разрушить сложную структуру ксилана. Среди наиболее важных ферментов следует отметить эндо-1,4-а-Э-ксиланазу (ЕС 3.2.1.8), Р-Э-ксилозидазу (ЕС 3.2.1.37), а-Ь-арабинофуранозидазу (ЕС 3.2.1.55), а-Э-глюкуронидазу и ацетилксиланэстера-зу (ЕС 3.1.1.6). Ферментативный гидролиз ксилана сопровождается образованием ксилоолигосахаридов, ксилоби-озы и ксилозы [2].
В последнее десятилетие активно изучаются свойства ксиланолитических ферментов, которые используются в производстве целлюлозы и бумаги, кормов для сельскохозяйственных животных, а также продуктов питания и напитков (в частности, пребиотических компонентов). В целлюлозно-бумажной промышленности ксиланазы используются для предварительной обработки перед отбеливанием целлюлозы и бумаги как альтернатива применению хлора. В производстве продуктов питания и напитков промышленные ксиланолитические ферменты используются для улучшения качества хлеба, осветления фруктовых соков, вин и пива [3], а также для получения ксилоолигосахаридов, обладающих пре-биотическим действием [4].
Поиск продуцентов ксиланаз представляет собой перспективную задачу. В ряде источников сообщалось, что источники ферментов ксиланолитического действия обнаружены среди грибов, бактерий, дрожжей, морских водорослей, семян растений, ракообразных, улиток. Наибольший интерес в этом отношении представляют бактерии (термофильные, мезофильные и психрофильные) и микромицеты [5].
На данный момент интерес многих научных групп сосредоточен на выделении новых микробных продуцентов ксиланолитических ферментов из природных источников. Потенциальным сырьем для выделения таких микроорганизмов являются лигноцеллюлозные субстраты: пшеничная солома, жмых сахарного тростника, рисовая солома, рисовые и пшеничные отруби, кукурузные початки, оболочки орехов, льняная стружка и другие [6].
Учитывая вышеизложенное, скрининг бактерий и микроскопических грибов, выделенных их лигноцеллюлоз-ного сырья, в частности агропромышленных отходов, и продуцирующих ферменты ксиланолитического действия, представляет научный и практический интерес.
Целью данной работы является выделение микроорганизмов (бактерий и плесневых грибов) из лигноцел-
люлозного сырья Калининградской обл., их идентификация по совокупности морфологических, культураль-ных, тинкториальных, физиолого-биохимических свойств и оценка потенциальной возможности продуцировать ксиланазы.
Материалы и методы исследования
Материалом для исследования послужили образцы семян люпина белого (Lupinus albus, сорт «Дега»), оболочек семян люпина белого, семян каштана конского обыкновенного (Aesculus hippocastanum), соевых оболочек не тестированных (ГК «Содружество», Калининградская обл.). Семена люпина белого и каштана конского собраны в Калининградской обл. в сентябре 2022 г.
Для выделения микроорганизмов из растительных образцов использовали метод 10-кратных разведений в стерильном физиологическом растворе, исходная навеска пробы составила 10 г. Для изучения бактериофло-ры высев суспензии из соответствующих разведений пробы в объеме 1 мл осуществляли в стерильные чашки Петри с последующей их заливкой расплавленным ры-бопептонным агаром. Определение микрофлоры вели по агару Сабуро с предварительным высевом суспензии из соответствующих разведений пробы в стерильные чашки Петри и последующей их заливкой питательной средой. Чашки с рыбопептонным агаром термостатиро-вали при температуре 30 °C в течение 72 ч, чашки с агаром Сабуро — при температуре 22 °C в течение 5 сут.
Идентификацию бактерий вели по совокупности культуральных, морфологических, тинкториальных и физиолого-биохимических признаков [7].
При описании культуральных признаков бактерий на рыбопептонном агаре отмечали форму колоний, поверхность, оптические свойства, цвет, профиль, край. Для накопления биомассы бактерий с целью их дальнейшего изучения колонии пересевали на поверхность скошенного рыбопептонного агара с последующим термо-статированием при температуре 37 °C в течение 24 ч.
Морфологические (форма клеток, их взаимное расположение, наличие споры) и тинкториальные (тип клеточной стенки) признаки бактерий изучали при микроскопии препаратов, окрашенных по методу Грама. Окрашенные мазки микроскопировали с использованием иммерсионного объектива микроскопа (х 100).
Физиологические признаки бактерий (тип дыхания, подвижность) устанавливали по росту культур в полужидком агаре, биохимическую активность — по росту на дифференциально-диагностических питательных средах.
Каталазную активность бактерий изучали экспресс-методом с внесением культуры бактерий в 3 %-ный раствор перекиси водорода. Углеводную активность
бактерий определяли на средах Гисса с глюкозой, араби-нозой, ксилозой, лактозой, маннитом, среде Хью — Лейфсона. Для определения способности бактерий деза-минировать фенилаланин использовали скошенный агар с добавлением фенилаланина. Бактерии, обладающие ферментом фенилаланиндезаминазой, меняли цвет культуры на зеленый после внесения 10 %-ного раствора хлорида железа по скошенной части питательной среды.
Для определения способности бактерий образовывать ацетилметилкарбинол (тест Фогеса — Проскауэра) использовали среду Кларка, после термостирования посевов в среду с культурой добавляли 1 мл 16 %-ного раствора едкого калия и 0,5 мл 6 %-ного спиртового раствора а-нафтола. Появление вишневого цвета кольца в верхней части среды указывало на положительную реакцию.
Образование индола учитывали по розовому окрашиванию фильтровальной бумаги, пропитанной 12 %-ным раствором щавелевой кислоты. Фильтровальную бумагу подвешивали под пробку пробирки с рыбо-пептонным бульоном и внесенной культурой бактерий.
Дегидролазную активность по аргинину учитывали на жидкой среде с аргинином под слоем вазелинового масла по изменению цвета среды после термостатирова-ния посевов.
Денитрифицирующую способность бактерий определяли по питательному бульону с нитратом калия. После термостатирования посевов проводили качественную реакцию: в питательную среду добавляли 0,5 мл 10 %-ной серной кислоты и смешанный раствор крахмала с йодистым калием. Коричнево-черная окраска среды свидетельствовала о наличии у бактерий фермента нитратредуктазы.
Утилизацию бактериями цитрата натрия как единственного источника углерода устанавливали по цитра-тому агару. Цитратположительные бактерии окрашивались в синий цвет. Протеолитическую активность бактерий изучали на рыбопептонном желатине. После термостатирования пробирки с посевами на 20 минут помещали в холодильник на температуру 4 °С, после чего учитывали степень разжижения желатина.
Для определения способности бактерий расти при температуре 45 °С культуры высевали на скошенный рыбопептонный агар. Рост бактерий в солевом бульоне с добавлением 7,5% хлорида натрия учитывали по наличию пленки на поверхности среды, помутнению среды и образованию осадка.
Идентификацию выделенных бактерий проводили по определителям [8].
Определение плесневых грибов проводили по куль-туральным и морфологическим признакам. При изучении культуральных признаков учитывали характер мицелия, его цвет, при изучении морфологических признаков — характер гиф мицелия (наличие или отсутствие септ), спорононошение. Идентификацию плесневых грибов вели по определителям [9, 10].
Результаты и их обсуждение
Результаты выделения изолятов бактерий и микроскопических грибов из лигноцеллюлозного сырья, собранного в Калининградской обл., приведены в табл. 1.
Из микрофлоры семян люпина белого выделены 4 бактериальных изолята, идентификацию которых про-
водили на основе результатов изучения совокупности свойств: культуральных, морфологических, тинктори-альных, физиолого-биохимических. Плесневые грибы не обнаружены. Результаты изучения культуральных, морфологических и тинкториальных признаков выделенных бактериальных культур отражены в табл. 2.
Согласно данным табл. 2, все выделенные бактерии представляют собой грамположительные палочки различной длины и толщины. В зависимости от взаимного расположения клеток выявлены моно- и диплобактерии (изоляты 2 и 3), а также стрептобактерии (изоляты 1 и 4). Все изолированные бактерии относятся к спорообразу-ющим. Изоляты 1, 3 и 4 при росте на рыбопептонном агаре формируют плоские колонии круглой формы диаметром от 8 до 20 мм, изолят 2 — плоские колонии овальной формы диаметром 10 мм. Цвет колоний — грязно-белый, бежевый, бледно-желтый и молочный, соответственно, для изолятов 1, 2, 3 и 4.
Простота внешней формы бактерий и строения их клетки делает классификацию по морфологическим признакам затруднительной. Поэтому физиолого-биохими-ческие признаки занимают важное место при классификации микроорганизмов. Физиолого-биохимические свойства микроорганизмов свидетельствуют об их приспособленности к различным факторам среды. Свойство сбраживать различные углеводы, включая сахара, спирты и органические кислоты лежит в основе отличительных признаков при идентификации бактерий. Физиоло-го-биохимические признаки бактерий, выделенных из семян люпина белого, приведены в табл. 3-5.
Анализируя данные табл. 3, сделан вывод о том, что все изучаемые бактериальные изоляты являются подвижными, проявляют каталазную активность, по типу дыхания — факультативные анаэробы. Протеолитиче-ская активность всех изолированных бактерий проявляется в способности разжижать желатин. Способность к образованию индола не продемонстрировал ни один из тестируемых изолятов. К образованию сероводорода способен только изолят 3.
В соответствии с табл. 4, все изоляты, за исключением изолята 2, ферментируют глюкозу. Все четыре изолята не сбраживают арабинозу и маннит, а также не способны образовывать ацетилметилкарбинол. Для изолятов 1 и 3 показана способность метаболизировать ксилозу
Таблица 1
Количество изолятов микроорганизмов, выделенных из растительного сырья
Table 1
The number of microbial isolates isolated from plant material
Объект исследования Количество изолятов бактерий Количество изолятов микроскопических грибов
Семена люпина белого 4 0
Оболочка семян люпина белого 5 1
Семена каштана конского 2 1
Соевая оболочка 4 0
Таблица 2
Культуральные, морфологические и тинкториальные признаки изолятов бактерий, выделенных из семян люпина белого
Table 2
Cultural, morphological, and tinctorial characteristics of bacterial isolates isolated from white lupin seeds
Изолят Культуральные признаки Тинкториальные и морфологические признаки
на рыбопептонном агаре на скошенном рыбопептонном агаре
Изолят 1 Колония круглой формы (диаметром 8 мм) с ровными краями, грязно-белого цвета, плоская Сплошной рост культуры по всему скосу среды, не прозрачный, слизистый, блестящий, бело-бежевого цвета Грам (+) палочки, моно-и диплобактерии, некоторые в цепочках по 4-8 клеток, спора субтерминальная; зрелые споры округлые
Изолят 2 Колония овальной формы (диаметром 10 мм) с ровными краями, бежевого цвета, плоская Сплошной рост культуры по всему скосу среды, не прозрачный, слизистый, блестящий, светло-желтого цвета Грам (+) тонкие палочки, моно-и диплобактерии, спора центральная
Изолят 3 Колония круглой формы (диаметром 20 мм) с волнистыми краями, бледно-желтого цвета, плоская Сплошной рост культуры по всему скосу среды, по краю волнистый, не прозрачный, слизистый, блестящий, бежевого цвета Грам (+) короткие палочки, моно-и диплобактерии, спора центральная или субтерминальная
Изолят 4 Колония круглой формы (диаметром 20 мм) с волнистыми краями, молочного цвета, плоская Сплошной рост культуры по всему скосу среды, не прозрачный, слизистый, грязно-белого цвета Грам (+) короткие толстые палочки, моно-, дипло- или стрептобактерии, спора субтерминальная; зрелые споры округлые
Таблица 3
Подвижность, тип дыхания, каталазная, протеолитическая активность изолятов бактерий,
выделенных из семян люпина белого
Table 3
Motility, respiratory pattern, catalase, and proteolytic activity of bacterial isolates isolated from white lupin seeds
Изолят Подвижность Тип дыхания Наличие фермента каталазы Протеолитическая активность
Разжижение желатина Образование индола Образование сероводорода
Изолят 1 + факультативные анаэробы + + - -
Изолят 2 + факультативные анаэробы + + - -
Изолят 3 + факультативные анаэробы + + - +
Изолят 4 + факультативные анаэробы + + - -
Таблица 4
Активность по углеводам и манниту изолятов бактерий, выделенных из семян люпина белого
Table 4
Carbohydrate and mannitol activity of bacterial isolates isolated from white lupin seeds
Изолят Глюкоза Способность к образованию ацетилметилкар-бинола (реакция Фогеса — Проскауэра) Арабиноза Ксилоза Маннит
Изолят 1 + - - + -
Изолят 2 - - - - -
Изолят 3 + - - + -
Изолят 4 + - - - -
Таблица 5
Денитрифицирующая активность изолятов бактерий, выделенных из семян люпина белого, использование фенилаланина и цитрата натрия, способность к росту в солевом бульоне
Table 5
Denitrifying activity of bacterial isolates isolated from white lupin seeds, the use of phenylalanine and sodium
citrate, and growth ability in salt broth
Изолят Ферментативная активность Характер роста культуры в солевом бульоне
Нитратредуктаза Фенилаланин- дезаминаза Использование цитрата натрия Пленка Помутнение среды Осадок
Изолят 1 - + + - - -
Изолят 2 - - - - - -
Изолят 3 - + - - - -
Изолят 4 - + - - - -
Таблица 6
Культуральные, морфологические и тинкториальные признаки изолятов бактерий, выделенных из оболочек семян люпина белого
Table 6
Cultural, morphological, and tinctorial characteristics of bacterial isolates isolated from the hulls of white lupin seeds
Изолят Культуральные признаки Тинкториальные и морфологические признаки
на рыбопептонном агаре на скошенном рыбопептонном агаре
Изолят 1 Колония круглой формы (диаметром 8 мм) с ровными краями, желтого цвета, плоская Сплошной рост культуры по всему скосу среды, полупрозрачный, слизистый, с голубым оттенком, блестящий, бежевого цвета Грам (+) или грам ( — ) тонкие палочки, моно- и диплобактерии, спора центральная в раздутом спорангии
Изолят 2 Колония круглой формы (диаметром 16 мм) с волнистыми краями, грязно-белого цвета, радиально исчерченная, центр морщинистый Сплошной рост культуры по всему скосу среды, не прозрачный, слизистый, грязно-белого цвета Грам (+) короткие палочки с закругленными концами, монобактерии, спора центральная или терминальная
Изолят 3 Колония круглой формы (диаметром 20 мм) с волнистыми краями, молочного цвета, плоская Сплошной рост культуры по всему скосу среды, не прозрачный, слизистый, блестящий, грязно-белого цвета Грам (+) короткие утолщенные палочки, моно- и стрептобактерии, спора центральная или субтерминальная; зрелые споры округлые
Изолят 4 Колония круглой формы (диаметром 2 мм) с волнистыми краями, серо-белого цвета, морщинистая Сплошной рост культуры по всему скосу среды, не прозрачный, слизистый, серо-белого цвета Грам (+) короткие палочки, монобактерии, спора центральная
Изолят 5 Колония ризоидная, распространяющаяся по среде в виде нитей, с шероховатой поверхностью, грязно-белого цвета Сплошной рост культуры по всему скосу среды, не прозрачный, слизистый, бело-серого цвета Грам (+) палочки с закругленными концами, моно- и диплобактерии, спора центральная; зрелые споры овальной формы
Таблица 7
Подвижность, тип дыхания, каталазная, протеолитическая активность изолятов бактерий, выделенных из оболочек семян люпина белого
Table 7
Motility, respiratory pattern, catalase, and proteolytic activity of bacterial isolates isolated
from the hulls of white lupin seeds
Изолят Подвижность Тип дыхания Наличие фермента каталазы Протеолитическая активность
Разжижение желатина Образование индола Образование сероводорода
Изолят 1 + факультативные анаэробы + - - -
Изолят 2 + факультативные анаэробы + + - -
Изолят 3 + факультативные анаэробы + + - -
Изолят 4 + факультативные анаэробы - + - -
Изолят 5 + факультативные анаэробы - + - -
Таблица 8
Активность по углеводам и манниту изолятов бактерий, выделенных из оболочек семян люпина белого
Table 8
Carbohydrate and mannitol activity of bacterial isolates isolated from the hulls of white lupin seeds
Изолят Глюкоза Способность к образованию ацетилметилкарбинола (реакция Фогеса — Проскауэра) Арабиноза Ксилоза Маннит
Изолят 1 + - - + -
Изолят 2 + - - - -
Изолят 3 + - - - -
Изолят 4 - - - - -
Изолят 5 + + - - -
в процессе жизнедеятельности, в то время как изоляты 2 и 4 такой способностью не обладают.
Как показывают результаты, представленные в табл. 5, все бактериальные изоляты, выделенные из семян белого люпина, не способны расти в солевом бульоне (7,5% хлористого натрия) и не обладают денитрифи-
цирующей способностью. Цитрат натрия как единственный источник углерода может использовать только изолят 1. Наконец, способность дезаминировать фенилаланин проявляют изоляты 1, 3 и 4.
Совокупный анализ культуральных, морфологических, тинкториальных, физиолого-биохимических при-
знаков бактериальных изолятов, выделенных из семян белого люпина, дает основания идентифицировать их как бактерии рода Bacillus семейства Bacillaceae (Firmicutes), относящиеся к видам B. megaterium (изолят 1), B. badius (изолят 2), B. mesentericus (изолят 3), B. lentus (изолят 4).
Из микрофлоры оболочек семян люпина белого удалось выделить 5 бактериальных изолятов и 1 изолят микроскопических грибов. Экспериментальные результаты изучения свойств изолятов бактерий приведены в табл. 6-9.
Как следует из табл. 6, изоляты 1-4 при росте на ры-бопептонном агаре образуют круглые колонии диаметром от 2 до 20 мм с волнистыми или ровными краями, желтого, грязно-белого, молочного или серо-белого цвета. Бактериальный изолят 5 формирует ризоидные колонии с шероховатой поверхностью, грязно-белого цвета. Все выделенные изоляты по строению клеточной стенки относятся к грамположительным (в случае изолята 1 представлены как грамположительные, так и грамотрицатель-ные формы) палочкам. Изоляты 1 и 5 представлены моно-и диплобактериями, изоляты 2 и 4 — одиночными клетками, изолят 3 — моно- и стрептобактериями. Все изучаемые изоляты являются спорообразующими.
Анализируя данные табл. 7, пришли к выводу, что по типу катаболизма все тестируемые изоляты принадлежат к группе факультативных анаэробов и являются подвижными. Фермент каталазу продуцируют только изоляты 1-3, для изолятов 4 и 5 каталазная активность не выявлена. Все изоляты, кроме изолята 1, проявляют протеолитическую активность в части способности к разжижению желатина. Свойство образовывать индол и сероводород не продемонстрировано ни для одного из выделенных изолятов.
Что касается способности ферментировать углеводы, бактериальные изоляты 1, 2, 3 и 5 способны усваивать глюкозу, изолят 4 такой способности не проявляет. Изолят 5 в процессе метаболизма продуцирует ацетилме-тилкарбинол, для изолятов 1-4 такое свойство не установлено. Арабинозу и маннит не сбраживает ни один из пяти изолятов. Способностью метаболизировать ксилозу характеризуется только изолят 1 (см. табл. 8).
Согласно данным табл. 9, ни один из изучаемых изолятов бактерий не способен расти в солевом бульоне. Денитрифицирующая способность отмечена для изолятов 2 и 5, способность дезаминировать фенилаланин — для изолята 3, способность использовать цитрат натрия в качестве единственного источника углерода — для изолятов 1 и 5.
Совокупный анализ культуральных, морфологических, тинкториальных, физиолого-биохимических признаков бактериальных изолятов, выделенных из оболочек семян белого люпина, позволил идентифицировать их как бактерии рода Bacillus семейства Bacillaceae (Firmicutes), а именно B. brevis (изолят 1), B. firmus (изолят 2), B. megaterium (изолят 3), B. sp. (изолят 4), B. mycoides (изолят 5).
Кроме бактериальных изолятов, из данного растительного сырья также выделен изолят микроскопического гриба, по характерным культуральным и морфологическим признакам (табл. 10) отнесенный к виду Penicillium glaucum.
Эксперименты по выделению микроорганизмов из семян каштана конского позволили получить 2 изолята бактерий и 1 изолят плесневого гриба.
В табл. 11 описаны культуральные, морфологические и тинкториальные признаки бактериальных изолятов.
Данные табл. 11 свидетельствуют о том, что морфологически оба выделенных изолята представляют собой
Таблица 9
Денитрифицирующая активность изолятов бактерий, выделенных из оболочек семян люпина белого, использование фенилаланина и цитрата натрия, способность к росту в солевом бульоне
Table 9
Denitrifying activity of bacterial isolates isolated from the hulls of white lupin seeds, the use of phenylalanine and sodium citrate, and growth ability in salt broth
Изолят Ферментативная активность Характер роста культуры в солевом бульоне
Нитрат редуктаза Фенилаланин дезаминаза Использование цитрата натрия Пленка Помутнение среды Осадок
Изолят 1 - - + - - -
Изолят 2 + - - - - -
Изолят 3 - + - - - -
Изолят 4 - - - - - -
Изолят 5 + - + - - -
Таблица 10
Культуральные и морфологические признаки изолята микроскопического гриба, выделенного из оболочек семян люпина белого
Table 10
Cultural, morphological, and tinctorial characteristics of microscopic fungal isolate isolated from the hulls of white lupin seeds
Культуральные признаки колоний на агаре Сабуро Морфологические признаки (прямая микроскопия колоний, увеличение объективах 10)
Мицелий бархатистый, серо-зеленого цвета с желтыми крупинками, края колонии белого цвета Гифы септированные, конидии круглой формы, располагаются цепочками в виде кисточек на конидиеносцах
палочковидные бактерии, по строению клеточной стенки — грамположительные (изолят 2) либо грамположи-тельные совместно с грамотрицательными (изолят 1). При культивировании на рыбопептонном агаре формируются колонии круглой (изолят 1) или ризоидной формы (изолят 2), бежевого или грязно-белого цвета. По взаимному расположению клеток оба изолята представлены моно- и диплобактериями, являются спорообразующими.
Табл. 12-14 содержат описание физиолого-биохимических признаков выделенных бактериальных изоля-тов.
Анализ физиолого-биохимических свойств бактериальных изолятов (табл. 12-14) показал, что все изоляты реализуют свой метаболизм как по анаэробному (брожение), так и по аэробному (дыхание) пути, т. е. являются факультативными анаэробами. Оба изолята подвижны и разжижают желатин. Других видов протеолитической активности изоляты не демонстрируют. Каталазной активностью характеризуется только изолят 1. Способность образовывать ферменты фенилаланиндезаминазу и ни-тратредуктазу не установлена для изолятов 1 и 2 так же, как способность использовать цитрат натрия в качестве
Культуральные, морфологические и тинкториальные признаки изолятов бактерий, выделенных из семян каштана конского
Cultural, morphological, and tinctorial characteristics of bacterial isolates isolated
from horse chestnut seeds
Таблица 11
Table 11
Изолят Культуральные признаки Тинкториальные и морфологические признаки
на рыбопептонном агаре на скошенном рыбопептонном агаре
Изолят 1 Колония круглой формы (диаметром 2 мм) с волнистыми краями, бежевого цвета, плоская Сплошной рост культуры по всему скосу среды, не прозрачный, слизистый, грязно-белого цвета Грам (+) или грам ( — ) тонкие палочки, моно- и диплобактерии, спора центральная в раздутом спорангии
Изолят 2 Колония ризоидная, распространяющаяся по среде в виде нитей, с шероховатой поверхностью, грязно-белого цвета Сплошной рост культуры по всему скосу среды, не прозрачный, слизистый, бело-серого цвета Грам (+) палочки с закругленными концами, моно- и диплобактерии, спора центральная; зрелые споры овальной формы
Таблица 12
Подвижность, тип дыхания, каталазная, протеолитическая активность изолятов бактерий,
выделенных из семян каштана конского
Table 12
Motility, respiratory pattern, catalase, and proteolytic activity of bacterial isolates isolated
from horse chestnut seeds
Изолят Подвижность Тип дыхания Наличие фермента каталазы Протеолитическая активность
Разжижение желатина Образование индола Образование сероводорода
Изолят 1 + факультативные анаэробы + + - -
Изолят 2 + факультативные анаэробы - + - -
Таблица 13
Активность по углеводам и манниту изолятов бактерий, выделенных из семян каштана конского
Table 13
Carbohydrate and mannitol activity of bacterial isolates isolated from horse chestnut seeds
Изолят Глюкоза Способность к образованию ацетилметилкарбинола (реакция Фогеса-Проскауэра) Арабиноза Ксилоза Маннит
Изолят 1 + + - - +
Изолят 2 + + - - -
Таблица 14
Денитрифицирующая активность изолятов бактерий, выделенных из семян каштана конского, использование фенилаланина и цитрата натрия, способность к росту в солевом бульоне
Table 14
Denitrifying activity of bacterial isolates isolated from horse chestnut seeds, the use of phenylalanine and sodium citrate, and growth ability in salt broth
Изолят Ферментативная активность Характер роста культуры в солевом бульоне
Нитрат редуктаза Фенилаланин дезаминаза Использование цитрата натрия Пленка Помутнение среды Осадок
Изолят 1 - - - - - +
Изолят 2 - - - - - +
единственного источника углерода. Оба выделенных изолята способы расти в солевом бульоне (7,5% хлористого натрия), что проявилось образованием осадка (табл. 14).
По полученным результатам установлена видовая принадлежность бактерий, выделенных из семян каштана конского: изолят 1 — Bacillus pumilus, изолят 2 — B. mycoides. Бактерии относятся к семейству Bacillaceae (Firmicutes).
Также из семян каштана конского выделен и идентифицирован (табл. 15) изолят плесневого гриба — Pénicillium glaucum.
Из соевой оболочки выделены 4 изолята бактерий, культуральные, морфологические и тинкториальные признаки которых описаны в табл. 16, физиолого-биохи-мические признаки — в табл. 17-21. Микроскопические грибы не обнаружены.
Согласно данным табл. 16, из соевой оболочки выделены как грамположительные палочковидные бактерии (изоляты 1-3), так и грамположительные кокки, расположенные в виде грозди винограда (изолят 4). Для изолятов 3 и 4 на рыбопептонном агаре зафиксирован сплошной рост, в то время как изоляты 1 и 2 растут отдельными колониями. Все палочковидные бактерии (изоляты 1-3) образуют споры. Изоляты 1, 3 и 4 формируют колонии круглой формы диаметром от 1 до 6 мм, изолят 2 —
колонии неправильной формы диаметром 5 мм. Цвет колоний изолятов 1-3 от серо-белого до бежевого, изолята 4 — ярко-желтый.
Из табл. 17 следует, что все изучаемые бактериальные изоляты являются факультативными анаэробами. Изоляты 1-3 подвижны, в отличие от изолята 4. Каталазная активность зафиксирована для изолятов 1 и 4. Способностью к разжижению желатина обладают изоляты 1-3.
Поскольку на основании морфологических свойств установлено присутствие среди выделенных бактерий как палочек, так и кокков (предположительно стафилококков), дальнейшие исследования их физиолого-биохи-мических свойств вели отдельно. Для палочковидных бактерий устанавливали активность по глюкозе, араби-нозе, ксилозе, манниту, способность к образованию аце-тилметилкарбинола, способность продуцировать нитра-тредуктазу, фенилаланиндезаминазу, использование цитрата натрия, а также характер роста в солевом бульоне (табл. 18, 19). Для шаровидных бактерий классическими тестами являются установление способности сбраживать глюкозу, маннит, лактозу, образовывать ацетил-метилкарбинол, определение углеводной активности на среде Хью — Лейфсона, изучение протеолитической, денитрифицирующей активности, способности использовать аргинин, расти при температуре 45 °С и в солевом бульоне (табл. 20, 21).
Культуральные и морфологические признаки изолята микроскопического гриба, выделенного из семян каштана конского
Cultural, morphological, and tinctorial characteristics of microscopic fungal isolate isolated from horse chestnut seeds
Таблица 15
Table 15
Культуральные признаки колоний на агаре Сабуро Морфологические признаки (прямая микроскопия колоний, увеличение объективах10)
Мицелий бархатистый, серо-зеленого цвета, края колонии белого цвета, нижняя часть колонии желтого цвета Гифы септированные, конидии круглой формы, располагаются цепочками в виде кисточек на конидиеносцах
Культуральные, морфологические и тинкториальные признаки изолятов бактерий,
выделенных из соевой оболочки
Таблица 16
Table 16
Cultural, morphological, and tinctorial characteristics of microscopic fungal isolate isolated from soybean hulls
Изолят Культуральные признаки Тинкториальные и морфологические признаки
на рыбопептонном агаре на скошенном рыбопептонном агаре
Изолят 1 Колония круглой формы (диаметром 1 мм) с ровными краями, прозрачная, слизистая Рост отдельными мелкими слизистыми колониями бежевого цвета Грам (+) короткие палочки, монобактерии, спора центральная
Изолят 2 Колония неправильной формы (диаметром 5 мм) с волнистыми краями, бежевого цвета, слизистая Рост отдельными колониями не правильной формы с волнистыми краями, бежевого цвета слизистые Грам (+) короткие утолщенные палочки или коккобациллы, монобактерии, конец клетки раздувшийся; зрелые споры округлой формы
Изолят 3 Колония круглой формы (диаметром 6 мм) с ровными краями, серо-белого цвета, с матовой поверхностью Сплошной рост культуры по всему скосу среды, не прозрачный, слизистый, серо-белого цвета Грам (+) утолщенные короткие палочки, монобактерии или в коротких цепочках; зрелые споры овальные
Изолят 4 Колония круглой формы (диаметром 3 мм) с ровными краями, выпуклым центром, с матовой поверхностью, ярко-желтого цвета Сплошной рост культуры по всему скосу среды, не прозрачный, слизистый, желтого цвета Грам (+) кокки, диплококки или в виде грозди винограда (стафилококки)
Таблица 17
Подвижность, тип дыхания, каталазная, протеолитическая активность изолятов бактерий,
выделенных из соевой оболочки
Table 17
Motility, respiratory pattern, catalase, and proteolytic activity of bacterial isolates isolated from soybean hulls
Изолят Подвижность Тип дыхания Наличие фермента каталазы Протеолитическая активность
Разжижение желатина Образование индола Образование сероводорода
Изолят 1 + факультативные анаэробы + + — +
Изолят 2 + факультативные анаэробы — + — —
Изолят 3 + факультативные анаэробы — + — —
Изолят 4 — факультативные анаэробы + — — —
Таблица 18
Активность по углеводам и манниту изолятов бактерий (палочки), выделенных из соевой оболочки
Table 18
Carbohydrate and mannitol activity of bacterial isolates (bacillus) isolated from soybean hulls
Изолят Глюкоза Способность к образованию ацетилметилкарбинола (реакция Фогеса-Проскауэра) Арабиноза Ксилоза Маннит
Изолят 1 + - - + +
Изолят 2 - - - - -
Изолят 3 + + + + +
Таблица 19
Денитрифицирующая активность изолятов бактерий (палочки), выделенных из соевой оболочки, использование фенилаланина и цитрата натрия, способность к росту в солевом бульоне
Table 19
Denitrifying activity of bacterial isolates (bacillus) isolated from soybean hulls, the use of phenylalanine and sodium citrate, and growth ability in salt broth
Изолят Ферментативная активность Характер роста культуры в солевом бульоне
Нитрат редуктаза Фенилаланин дезаминаза Использование цитрата натрия Пленка Помутнение среды Осадок
Изолят 1 + - - - + -
Изолят 2 - - + - + -
Изолят 3 + - + + - -
Таблица 20
Активность по углеводам и манниту изолятов бактерий (кокки), выделенных из соевой оболочки
Table 20
Carbohydrate and mannitol activity of bacterial isolates (cocci) isolated from soybean hulls
Среда Хью — Лейфсона Глюкоза Способность к образованию ацетилметилкарбинола (реакция Фогеса — Проскауэра) Маннит Лактоза
окисление ферментация
+ + + + - -
Таблица 21
Протеолитическая, денитрифицирующая активность изолятов бактерий (кокки), выделенных из соевой оболочки, использование аргинина, способность к росту при температуре 45 °C и в солевом бульоне
Table 21
Proteolytic and denitrifying activity of bacterial isolates (cocci) isolated from soybean hulls, the use of arginine, growth ability at 45° C and in salt broth
Разжижение желатина Нитрат редуктаза Аргинин дегидролаза Рост при 45 °C Характер роста культуры в солевом бульоне
Пленка Помутнение среды Осадок
+ - - + - - -
Таблица 22
Бактерии и плесневые грибы, выделенные из лигноцеллюлозного сырья
Table 22
Bacteria and mold fungi isolated from lignocellulosic raw materials
Объект исследования Bngbi SaKrepHH Виды плесневых грибов
Семена люпина белого Bacillus megaterium, Bacillus badius Bacillus mesentericus, Bacillus lentus не выделено
Оболочка семян люпина белого Bacillus brevis, Bacillus firmus, Bacillus megaterium, Bacillus sp., Bacillus mycoides Penicillium glaucum
Семена каштана конского Bacillus pumilus, Bacillus mycoides Penicillium glaucum
Соевая оболочка Bacillus mesentericus, Bacillus sphaericus, Bacillus stearothermophilus, Staphylococcus saprophyticus не выделено
Как показывают данные табл. 18, 19, изоляты 1 и 3 ферментируют глюкозу, ксилозу и маннит. Способностью усваивать арабинозу и продуцировать ацетилме-тилкарбинол характеризуется только изолят 3. Фермент фенилаланиндезаминазу не образует ни один из рассматриваемых изолятов. Денитрифицирующая способность отмечена для изолятов 1 и 3. Изоляты 2 и 3 продемонстрировали способность использовать цитрат натрия в качестве единственного источника углерода. Все изоляты показали способность расти в солевом бульоне: изоляты 1 и 2 — в виде помутнения среды, изолят 3 — в виде пленки.
Согласно данным табл. 20, 21, изолят 4 ферментирует глюкозу, образует ацетилметилкарбинол, не усваивает маннит и лактозу, проявляет углеводную активность на среде Хью — Лейфсона (окисление и ферментация). Изолят 4 способен расти при температуре 45 °C, разжижать желатин (протеолитическая активность). Денитрифицирующей способностью изолят 4 не обладает, в солевом бульоне не растет.
По совокупности культуральных, морфологических, тинкториальных и физиолого-биохимических характеристик изолятов бактерий, выделенных из соевой оболочки, провели идентификацию до вида: Bacillus mesentericus (изолят 1), B. sphaericus (изолят 2), B. stearothermophilus (изолят 3), семейство Bacillaceae (Firmicutes); Staphylococcus saprophyticus (изолят 4), семейство Staphylococcaceae (Firmicutes).
Таким образом, из лигноцеллюлозного сырья, собранного в Калининградской области, выделены бактерии родов Bacillus и Staphylococcus, а также плесневые грибы рода Penicillium (табл. 22).
Анализ литературных данных свидетельствует о том, что изолированные из растительного сырья штаммы можно рассматривать как перспективные продуценты ферментов ксиланолитического действия. Так, продуценты ксиланаз среди микроскопических грибов рода Penicillium, выделенных из различных видов лигноцеллюлозного сырья, описаны в [11]. Хотя следует отметить, что грибы рода Penicillium являются менее изученными продуцентами ксиланаз по сравнению, например, с ми-кромицетами Aspergillus и Trichoderma.
Что касается бактериальных продуцентов ксиланаз, для бактерий рода Bacillus, изолированных из различных источников, широко описана способность продуцировать ксиланолитические ферменты в процессе метаболизма [2]. В том числе, в литературе имеются сведения о таких
бактериальных продуцентах целевых ферментов рода Bacillus, как Bacillus sp. [12], Bacilluspumilus [13], Bacillus stearothermophilus [14], Bacillusfirmus [2]. В литературных источниках описаны бактерии рода Staphylococcus, проявившие способность продуцировать ксиланазы [15].
Немаловажным фактором при выборе продуцента ксиланолитических ферментов являются свойства получаемых ферментов. Широкое применение в промышленности получили бактериальные ксиланазы, благодаря термостабильности и устойчивости в щелочной среде. Для грибных ксиланаз, напротив, отмечен узкий диапазон рН и невысокая термостабильность, несмотря на имеющееся преимущество — высокий выход, внеклеточное продуцирование и высокая активность [6].
В настоящем исследовании показана возможность выделения из растительного сырья микроорганизмов, перспективных в качестве продуцентов ксиланаз. Последующие исследования в рамках данного направления будут сфокусированы на изучении способности бактерий и микроскопических грибов, выделенных из лигноцеллюлозного сырья Калининградской обл., продуцировать ферменты ксиланолитического действия.
Выводы
Из микрофлоры лигноцеллюлозного сырья, собранного в Калининградской области, выделены изоляты бактерий и плесневых грибов, для которых проведена видовая идентификация по совокупности морфологических, культуральных, тинкториальных и физиоло-го-биохимических признаков. Из семян люпина белого выделены четыре бактериальных изолята, принадлежащих роду Bacillus (B. megaterium, B. badius, B. mesentericus, B. lentus), из оболочек семян люпина белого — пять бактериальных изолятов рода Bacillus (B. brevis, B. firmus, B. megaterium, B. sp., B. mycoides) и один изолят плесневого гриба (Penicillium glaucum). Семена конского каштана стали источником двух изолятов бактерий (B. pumilus, B. mycoides) и одного изолята микро-мицета (Penicillium glaucum). Из микрофлоры соевой оболочки изолированы три бактериальных изолята рода Bacillus (B. mesentericus, B. sphaericus, B. stearothermophilus) и один бактериальный изолят рода Staphylococcus (St. saprophyticus). Сопоставление полученных результатов с литературными данными позволяет предположить наличие у выделенных бактерий и микроскопических грибов способности продуцировать
ферменты ксиланолитического действия, которая будет оцениваться в дальнейших исследованиях. Перспективы последующих исследований в данном направлении — использование выделенных ксиланаз для получения
Литература
1. Bakry M. M., Salem S. S., Atta H. M., et al. Xylanase from ther-motolerant Bacillus haynesii strain, synthesis, characterization, optimization using Box-Behnken Design, and biobleaching activity // Biomass Conv. Bioref. 2022. https://doi.org/10.1007/ s13399-022-03043-6.
2. Bhardwaj N., Kumar B., Verma P. A detailed overview of xy-lanases: an emerging biomolecule for current and future prospective // Bioresour. Bioprocess. 2019. V. 6, 40. https://doi. org/10.1186/s40643-019-0276-2.
3. De Buck V., PolanskaM, Van Impe J. Modeling biowaste biore-fineries: a review // Front. Sustain. Food Syst. 2020. V. 4. https:// doi.org/10.3389/fsufs. 2020.00011.
4. Mano M. C. R., Neri-Numa I. A., Silva J. B., et al. Oligosaccharide biotechnology: an approachof prebiotic revolution on the industry // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2018. V. 102. Р. 17-37. https://doi.org/10.1007/s00253-017-8564-2.
5. Gomes A. F. S., dos Santos B. S. L., Ransciscon E. G., Baf-fi M. A. Subtract and temperature effect on xylanase production by Aspergillus fumigatus using low-cost agricultural wastes // Biosci J. 2016. V. 32 (4). Р. 915-921.
6. Den W., Sharma V. K., Lee M., et al. Lignocellulosic biomass transformations via greener oxidative pretreatment processes: access to energy and value-added chemicals // Front. Chem. 2018. V. 6. Р. 1-23. https://doi.org/10.3389/fchem. 2018.00141.
7. Определитель бактерий Берджи. В 2 т.: Пер. с англ. / Под ред. Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Снита. М.: Мир, 1997.
8. Пивоваров Ю. П., Королик В. В. Санитарно-значимые микроорганизмы (таксономическая характеристика и дифференциация). М.: Изд-во ИКАР, 2000. 268 с.
9. Саттон Д., Фотергилл А., Ринальди М. Определитель патогенных и условно-патогенных грибов. М.: Мир, 2001. 467 с.
10. Кузьмина С. А. Учебный определитель по Джильмену. Калининград: КГТУ, 1985. 20 с.
11. Dhaver P., Pletschke B., Sithole B., Govinden R. Isolation, screening, preliminary optimisation and characterisation of thermostable xylanase production under submerged fermentation by fungi in Durban, South Africa // Mycology. 2022. V. 13 (4). Р. 271-292. https://doi.org/10.1080/21501203.2022.2079745.
12. Gupta V., GargS., Capalash N., et al. Production of thermo-al-kali-stable laccase and xylanase by co-culturing of Bacillus sp. and B. halodurans for biobleaching of kraft pulp and deinking of waste paper // Bioprocess Biosyst Eng. 2015. V. 38. Р. 947-956. https://doi.org/10.1007/s00449-014-1340-0.
13. ThomasL., UshasreeM. V., Pandey A. An alkali-thermostable xylanase from Bacillus pumilus functionally expressed in Kluyveromyces lactis and evaluation of its deinking efcien-cy // Bioresour Technol. 2014. V. 165. Р. 309-313. https://doi. org/10.1016/j. biortech. 2014.03.037
14. Chakdar H., KumarM., Pandiyan K., et al. Bacterial xylanases: biology to biotechnology. 3 Biotech. 2016. V. 6. Article number 150. https://doi.org/10.1007/s13205-016-0457-z.
15. Iloduba M. I., Milala M. A., Ali A. Isolation and partial characterization of crude cellulase-free xylanase from Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus for possible use in paper industry // Int J Microbiol. 2016. V. 3, 8.
ксилоолигосахаридов, обладающих пребиотическими
свойствами, из лигноцеллюлозного сырья.
Статья выполнена при финансовой поддержке гранта РНФ,
соглашение № 23-26-00091.
Reference
1. Bakry M. M., Salem S. S., Atta H. M., et al. Xylanase from thermotolerant Bacillus haynesii strain, synthesis, characterization, optimization using Box-Behnken Design, and biobleaching activity. Biomass Conv. bioref. 2022. https://doi.org/10.1007/ s13399-022-03043-6.
2. Bhardwaj N., Kumar B., Verma P. A detailed overview of xylanases: an emerging biomolecule for current and future prospective. Bioresour. Bioprocess. 2019. V. 6, 40. https://doi. org/10.1186/s40643-019-0276-2.
3. De Buck V., Polanska M., Van Impe J. Modeling biowaste biore-fineries: a review. Front. Sustain. food system. 2020. V. 4. https:// doi.org/10.3389/fsufs. 2020.00011.
4. Mano M. C. R., Neri-Numa I. A., Silva J. B., et al. Oligosaccharide biotechnology: an approachof prebiotic revolution on the industry. Appl. microbiol. Biotechnol. 2018. V. 102. р. 17-37. https://doi.org/10.1007/s00253-017-8564-2.
5. Gomes A. F. S., dos Santos B. S. L., Ransciscon E. G., Baf-fi M. A. Subtract and temperature effect on xylanase production by Aspergillus fumigatus using low-cost agricultural wastes. Biosci J. 2016. V. 32 (4). р. 915-921.
6. Den W., Sharma V. K., Lee M., et al. Lignocellulosic biomass transformations via greener oxidative pretreatment processes: access to energy and value-added chemicals. Front. Chem. 2018. V. 6. р. 1-23. https://doi.org/10.3389/fchem. 2018.00141.
7. Burgey's Bacteria Determinant. In 2 volumes: Per. from English. / Ed. J. Holt, N. Krieg, P. Sneath. M.: Mir, 1997. (in Russian)
8. Pivovarov Yu. P., Korolik V. V. Sanitary-significant microorganisms (taxonomic characteristics and differentiation). M.: Publishing house IKAR, 2000. 268 p. (in Russian)
9. Sutton D., Fothergill A., Rinaldi M. Key to pathogenic and opportunistic fungi. M.: Mir, 2001. 467 p. (in Russian)
10. Kuzmina S. A. Educational determinant according to Gilman. Kaliningrad: KSTU, 1985. 20 p. (in Russian)
11. Dhaver P., Pletschke B., Sithole B., Govinden R. Isolation, screening, preliminary optimisation and characterization of thermostable xylanase production under submerged fermentation by fungi in Durban, South Africa. Mycology. 2022. V. 13 (4). р. 271-292. https://doi.org/10.1080/21501203.2022.2079745.
12. Gupta V., Garg S., Capalash N., et al. Production of thermo-al-kali-stable laccase and xylanase by co-culturing of Bacillus sp. and B. halodurans for biobleaching of kraft pulp and deinking of waste paper. Bioprocess Biosyst Eng. 2015. V. 38. P. 947-956. https://doi.org/10.1007/s00449-014-1340-0.
13. Thomas L., Ushasree M. V., Pandey A. An alkali-thermostable xylanase from Bacillus pumilus functionally expressed in Kluyveromyces lactis and evaluation of its deinking efciency. Bioresour Technol. 2014. V. 165. р. 309-313. https://doi. org/10.1016/j. biortech. 2014.03.037.
14. Chakdar H., Kumar M., Pandiyan K., et al. Bacterial xylanases: biology to biotechnology. 3 Biotech. 2016. V. 6. Article number 150. https://doi.org/10.1007/s13205-016-0457-z.
15. Iloduba M. I., Milala M. A., Ali A. Isolation and partial characterization of crude cellulase-free xylanase from Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus for possible use in paper industry. Int J Microbiol. 2016. V. 3, 8.
Сведения об авторах
Дышлюк Любовь Сергеевна
Д. т. н., доцент, профессор кафедры биотехнологии, Калининградский государственный технический университет, 236022, пр. Советский, 1, [email protected], ORCID 0000-0002-7333-8411
Information about authors
Dyshlyuk Lyubov S.
D. Sc., Associate Professor, Professor of the Department of Biotechnology, Kaliningrad State Technical University, Russia 236022, Sovetsky Ave., 1, [email protected], ORCID 0000-0002-7333-8411
Казимирченко Оксана Владимировна
К. б. н., доцент, доцент кафедры водных биоресурсов и аквакультуры Института рыболовства и аквакультуры, зав. научно-исследовательской ихтиопатологической лабораторией, Калининградский государственный технический университет, 236022, пр. Советский, 1, [email protected], ORCID 0009-0005-7197-0287
Kazimirchenko Oksana V.
Ph. D., Associate Professor, Associate Professor
of the Department of Aquatic Bioresources and Aquaculture
of the Institute of Fisheries and Aquaculture, Head.
Research Ichthyopathological Laboratory, Kaliningrad State
Technical University, Russia 236022, Sovetsky Ave., 1,
ORCID 0009-0005-7197-0287
Ульрих Елена Викторовна
Д. т. н., доцент, профессор кафедры производства и экспертизы качества сельскохозяйственной продукции, Калининградский государственный технический университет, 236022, пр. Советский, 1, [email protected], ORCID 0000-0003-4107-7277
Ulrikh Elena V.
D. Sc., Associate Professor, Professor of the Department of Production and Quality Assurance of Agricultural Products, Kaliningrad State Technical University, Russia 236022, Sovetsky Ave., 1, [email protected], ORCID 0000-0003-4107-7277
Агафонова Светлана Викторовна
К. т. н., доцент, доцент кафедры пищевой биотехнологии, Калининградский государственный технический университет, 236022, Россия, Калининград, Советский пр., 1, [email protected], ORCID 0000-0002-5992-414Х
Agafonova Svetlana V.
Ph. D., Associate Professor Associate Professor of the Food Biotechnology Department of Kaliningrad State Technical University, Russia 236022, Kaliningrad, Soviet Avenue, 1, [email protected], ORCID 0000-0002-5992-414X
@0®
Статья доступна по лицензии
Creative Commons «Attribution-NonCommercial»
m
АГРОПРОМЫШЛЕННЫЙ ФОРУМ ЮГА РОССИИ VKjSgï
. выставки ИНТЕРДГРОМДШ MfÊ^à Ж_АГРОТЕКНОПОГИИ '
28 февраля - 01 марта 2024 года
«Интерагромаш» & «Агротехнологии» - это выставка, направленная на демонстрацию сельскохозяйственной техники, оборудования и материалов для производства и переработки сел ьхозпродукци и.
РАЗДЕЛЫ ВЫСТАВКИ «ИНТЕРАГРОМАШ»:
• Сельскохозяйственная техника и запчасти
• Автоматизация
РАЗДЕЛЫ ВЫСТАВКИ «АГРОТЕХНОЛОГИИ»:
• Растениеводство
• Оборудование для хранения и переработки сельхозпродукции
• Животноводство
• Оборудование для животноводства
• Услуги для АПК
Организатор:
КВЦ «ДонЭкспоцентр»
тел.: (863) 268-77-68
Место проведения:
КВЦ «ДонЭкспоцентр»
г. Ростов-на-Дону, пр. М. Нагибина, 30
Руководитель проекта - Жадан Ольга тел.: 8-863-268-77-86 моб: 8-918-544-41-20 e-mail: [email protected]
http://www.interagromash.net/index.html
