CC BY
30
УДК: 611.018.4: 34.41
морфологические критерии периодизации роста позвоночника
Алла Михайловна ЗАЙДМАН, Анастасия Викторовна КОРЕЛЬ, Елена Леонидовна СТРОКОВА
Новосибирский НИИ травматологии и ортопедии им. Я.Л. Цивьяна Минздрава России 630091, г. Новосибирск, ул. Фрунзе, 17
Цель исследования - изучение морфогенетических критериев периодизации роста позвоночника в онтогенезе. Объект исследования - тела позвонков 50 мини-поросят в постнатальном онтогенезе (новорожденных, 2-недель-ных, 1-, 3- и 6-месячного возраста). Установлено, что процесс роста тел позвонков происходит в два основных этапа. 1. Ранний остеогенез от новорожденного до 1-месячного возраста - период интенсивной пролиферации и дифференцировки хондробластов по всему периметру тела позвонка за счет круговой зоны роста. В этот период метаболизм хрящевого тела позвонка осуществляется сосудистым путем, морфогенез тела позвонка - за счет хондрогематического барьера, регулирующего процесс остеогенеза и стимулирующего процессы пролиферации и дифференцировки. 2. В сформированном теле позвонка происходит линейный рост, который характеризуется периодизацией, дифференцировкой и остеогенезом в пластинке роста тела позвонка.
Ключевые слова: периодизация роста, хондробласт, пластинка роста, протеогликаны, хондроитинсульфаты.
Процесс роста - продолженный морфогенез в постнатальном периоде. Этапы морфогенеза, регуляция тонких механизмов роста исследованы преимущественно для длинных трубчатых костей [5-7]. Регуляция роста и структурные преобразования в пластинках роста тел позвонков представлены недостаточно [3, 4, 8]. Остаются не исследованными генетическая регуляция периодизации роста, структурные изменения хондробластов в процессе дифференцировки, пролиферации и остеогенеза. Между тем такие данные могут быть основой для трактовки патологий позвоночника, патогенез которых основан на нарушении роста.
Цель исследования - изучение морфогенетических критериев периодизации роста позвоночника в онтогенезе.
материал и методы
Объектом исследования служили тела позвонков 50 мини-поросят в постнатальном онтогенезе (новорожденных, 2-недельных, 1-, 3- и 6-месячного возраста). Ткани фиксировали в 10%-м растворе формалина, костную ткань подвергали декальцинации в холодном трилоне «Б»
и парафиновой проводке. Препараты окрашивали традиционными методами: гематоксилином и эозином по Ван Гизону; гистохимическими методами: толуидиновым синим при разных значениях рН, альциановой синью по Хейлу и Шиффу. Ко всем реакциям ставили соответствующие контроли. Ультраструктурные исследования проводили после фиксации в глютаральдегиде и до фиксации в осмии. Препараты после проводки по спиртам заливали в аралдит. Готовили полутонкие и тонкие срезы на ультратоме LKB (Швеция), просматривали и фотографировали на электронном микроскопе «Hitachi-100» (Япония). Исследования размеров зон пластинок проводили на парафиновых срезах, окрашенных гематоксилином и эозином при увеличении х 100. Границы зон определяли по степени дифференцировки хондробластов. Площади зон пластинок роста исследовали методом морфометрического анализа при помощи программы Axio Vision Le Rel. 4.3. фирмы Carl Zeiss и «Morpho Images» (Германия). Статистическую обработку полученных результатов осуществляли при помощи пакета программ подсчета коэффициентов формы клеток и ядер фирмы «Микромед».
Зайдман А.М. - д.м.н., проф., заслуженный деятель науки РФ, руководитель лаборатории патоморфологии и теоретических исследований в вертебрологии, e-mail: [email protected] Корель А.В. - к.б.н., старший научный сотрудник лаборатории патоморфологии и теоретических исследований в вертебрологии, e-mail: [email protected]
Строкова Е.Л. - научный сотрудник лаборатории патоморфологии и теоретических исследований в вертебрологии, e-mail: [email protected]
Для исследования уровня экспрессии генов хрящевую ткань отмывали в физиологическом растворе, измельчали в чашке Петри с минимальным объемом среды RPMI до размеров 1-2 мм2, затем помещали в 1,5%-й раствор коллагеназы в силиконизированной посуде и инкубировали в СО2-инкубаторе при температуре 37 °С в течение 22-24 ч. Полученную суспензию клеток пропускали через нейлоновый фильтр для удаления кусочков ткани и осаждали клетки центрифугированием в течение 10 мин при 2000 об/мин. Осажденные клетки идентифицировали и определяли общее их количество в камере Горяева.
РНК выделяли из клеток, полученных после центрифугирования, тризольным методом (TRI reagent, Sigma). Выделенную РНК обрабатывали RNAse-free DNAse (Fermentas, Thermo Fisher Scientific, США) согласно рекомендациям производителя. кДНК получали в реакции обратной транскрипции с использованием фермента
M-MLV Reverse Transcriptase (Promega, США) в присутствии Oligo (dT)15 праймера (БИОССЕТ, Россия). Все процедуры проводили в соответствии с рекомендациями производителя. Реакции без фермента использовали в качестве отрицательного контроля.
Амплификацию фрагментов исследуемых генов проводили методом ПЦР на амплифика-торе TRIO-Thermoblock (Biometra, Германия). В качестве контрольного использовался ген актина. ПЦР была выполнена с использованием Taq-полимеразы и ген-специфичных праймеров (табл. 1) при следующих условиях: 3 мин при 95 °C и 30 циклов: 30 при 95 °C, 30 при 58-60 °C и 30 при 72 °C.
Анализ продуктов ПЦР осуществляли методом горизонтального гель-электрофореза в 1,5%-м агарозном геле в буфере ТАЕ (0,04 М Tris-HCl, 0,05 М EDTA pH 8,0) с содержанием 1 мкг/мл бромистого этидия. Для нанесения на
Таблица 1
Подбор условий для проведения ПЦР
Название гена Название праймера Последовательность праймера Концентрация MgCl2, мМ Температура отжига, °C Размер целевого фрагмента, п. о.
Актин Actin f 5'-GCCGAGATCTCACCGACTAC-3' 3 59 360
Actin r 5'-CCCCAGAGAGGACGTTGTTA-3
Аггрекан ACAN1f 5'-GAAGCAGCAGTCACACCTGA-3' 3 59 505
ACAN1r 5'-GCTCCGCTTCTGTAGTCTGC-3'
Люмикан LUM f 5'-AGATCTCAAGGGTCCCCAAC-3' 3 59 357
LUM r 5'-GCAGCTGGTTGTAGGAGAGG-3'
Paxl Paxl f м 5'-ACGTGGTCAAGCACATCCGGGACT-3' 4 58 508
Paxl r м 5'-AAGGCGGGTTTCTCGAGCCCATT-3'
SOX9 SOX9 f 5'-ACGCGGAGCTCAGCAAGACTCTG-3' 4 60 370
SOX9 r 5'-TCTCGCTTCAGGTCAGCCTTGCC-3'
Pax9 Pax9 f 5'-ATCAGCCGCATCCTGCGCAACAA-3' 4 58 596
Pax9 r 5'-AGCGACGCGGGAATGTCACAGTTG-3'
COL1A1 COL1A1 f 5'-TGCTCCTCTTAGCGGCCACCG-3' 4 58 280
COL1A1 r 5'-ACCTCGCCTTCGGGGCAGAC-3'
COL2A1 COL2A1 f 5'-CCCCGGAACTCCTGGCACGG-3' 4 58 365
COL2A1 r 5'-CGTCAGCACCGGGAGGACCA-3'
COL10A1 COLlOAl f 5'-AAGCGGTCCCACCCGAAGGC-3' 4 58 4l5
COLlOAl r 5'-AGCCCGTTCGACCCAGCGTT-3'
GHR GHR f 5'-TGGGGCAAAGGATGACGACTCCG-3' 4 58 384
GHR r 5'-TGGCCCGGGGAAAGGACCAC-3'
HAPLN HAPLNl f 5'-GGCTGGACTGGTGCAACGCT-3' 4 58 376
HAPLNl r 5'-CTGCAGCGCCTTCTTGGCCT-3'
MMP9 MMP9 f 5'-GACGGCCGCTCAGACGGCTA-3' 4 58 343
MMP9 r 5'-TGAGCGCCTCTGGCACGGTT-3'
TGFB1 TGFBlf 5'-TTCACGGCATGAACCGGCCC-3' 4 58 385
TGFBlr 5'-TGCTCCACCTTGGGCTTGCG-3'
IHH IHH f 5'-ACGTGCATTGCTCCGTCAAGTCCG-3' 3 59 3l4
IHH r 5'-GCGGGCAGCTGGTTCTGTGTGATT-3'
гель раствор ДНК смешивали с 50%-м глицерином, содержащим 0,1 % бромфенолового синего, 0,1 % ксиленцианола, в соотношении 1:10. Сканирование геля проводили в УФ-свете с помощью видеосистемы «DNA Analyzer» (Москва).
Исследовали гены, участвующие в процессе регуляции роста позвоночника (GHR, TGFB1), регулирующие процесс хондрогенной дифференцировки (SOX9, Pax 1, Pax 9, IHH) и определяющие структурно-функциональные особенности матрикса хряща (ACAN 1, LUM, COL1A 1, COL2A 1, C0L10A 1, HAPLN, ММР 9).
результаты и их обсуждение
В раннем онтогенезе (новорожденный поросенок) процесс роста тел позвонков осуществляется за счет радиально расположенной зоны роста, состоящей из поверхностной зоны, зоны изогенных групп, зоны колонковых структур и зоны гипертрофических клеток (рис. 1).
В цитоплазме клеток и матриксе определяются низкополимерные хондроитинсульфаты, гиа-луроновая кислота. Интенсивность реакций на хондроитинсульфаты возрастает от малодиффе-ренцированных клеток к гипертрофическим.
К межпозвонковому диску прилежит узкая поверхностная зона (табл. 2) - зона малодиф-ференцированных расположенных параллельно друг другу клеток. В центре клетки располагаются овальной формы ядро и узкий ободок цитоплазмы. В гомогенном межклеточном матриксе идентифицируются низкополимерные хондрои-тинсульфаты и гиалуроновая кислота.
Ультраструктурно выявляется рибосомаль-ный аппарат, представленный преимущественно свободными рибосомами и редкими полисомами. Комплекс Гольджи (КГ) единичен и располагается приядерно. Округлые митохондрии редкие, с хорошо выраженными кристами, представлены диффузно в цитоплазме.
Зона изогенных групп (см. табл. 2): хондро-бласты с округлым ядром с 1-2 ядрышками и ба-зофильной цитоплазмой, в которой определяются
Рис. 1. Новорожденный поросенок. Круговая зона роста тела позвонка. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение х 100
мелкие гранулы гликогена и сульфатированные гликозаминогликаны, располагаются группами по 2-4 клетки, встречаются митотические пластинки. Во внеклеточном пространстве визуализируются кровеносные сосуды, окруженные интенсивно базофильной и альциан-позитивной «муфтой» (хондрогематический барьер), состоящей из протеогликанов. Ультаструктурно хондробласты относятся к дифференцированным клеткам с преимущественно приядерной локализацией КГ, везикулярный аппарат которого представлен в виде немногочисленных вакуолей. Митохондрии редкие. Выявляются свободные рибосомы. Эндоплазматическая сеть с расширенными цистернами.
Зона колонковых структур представлена четкими стопками клеток, между которыми выявляются узкие прослойки слабо альциан- и Хейл-позитивного межклеточного матрикса. Ядро локализуется в центре клетки, содержит диспергированный хроматин. Цитоплазма этих клеток занимает значительный объем. Гладкий эндо-плазматический ретикулум представлен широкой сетью расширенных цистерн. КГ хорошо развит и располагается по всему объему цитоплазмы.
Таблица 2
Площадь, занимаемая слоями зоны роста тела позвонка, в возрастном аспекте
Зона роста Новорожденный 2 нед. 1 мес. 3 мес. 6 мес.
Поверхностная зона 520 ± 17 379±18* 357 ± 16 265 ± 8 258 ± 15
Изогенная группа 2634±36 1859± 15 1030 ± 120# 798 ± 37# 42 ± 9#
Колонковая структура 529 ± 14 934±23* 828 ± 37 760 ± 31 5630 ± 16#
Гипертрофия клеток 616 ± 34 579 ± 15# 644 ± 26 340 ± 14# 488 ± 17#
Примечание. Значения приведены в квадратных микрометрах, умноженных на 102. Обозначены статистически значимые (р < 0,05) отличия от соответствующих показателей: * - новорожденных поросят, # - предыдущего срока наблюдения.
Таблица 3
Качественные результаты ПЦР исследуемых генов
Срок наблюдения Ген домашнего хозяйства Гены, определяющие структурно-функциональные особенности матрикса хряща Гень проц ди( [, регулирующие :сс хондрогенной )ференцировки Гены, участвующие в процессе регуляции роста позвоночника
Актин ACAN LUM COL1A1 COL2A1 COL10A1 HAPLN1 MMP9 IHH Paxl Pax9 SOX9 GHR TGFB1
Новорожденный + + + + + + + + + + + + + +
2 нед. + + + + + + + + - + + + + +
1 мес. + + + + + + + + - + + + + +
3 мес. + + + + + + + + + + + + + +
6 мес. + + + + + + + + + - - + + +
Митохондрии крупные, овальной формы, с просветленным матриксом. В гиалоплазме выявляются многочисленные скопления гранул гликогена и липиды.
Слой гипертрофических клеток (см. табл. 2): гипертрофические хондроциты делятся на поверхностные (высокодифференцированные клетки), а также прилежащие к зоне остеогене-за (крупные клетки со светлой цитоплазмой и мелким и/или отсутствующим ядром). Высоко-дифференцированные хондроциты - это клетки с базофильными округлыми ядрами и интенсивно Хейл-позитивной цитоплазмой, околоклеточный матрикс выполнен сульфатированными гликоза-миногликанами. В клетках, прилежащих к зоне остеогенеза, видны фрагментированные ядра, в большинстве клеток ядро отсутствует. В матрикс активно внедряются кровеносные сосуды, вокруг которых активируется процесс остеогенеза. В этот период экспрессируются гены - маркеры дифференцировки хондроцитов: Рах1, Рах9, Sox9, 1НН, а также гены основных компонентов матрикса: аггрекан, линк-белок (HAPLN), гены коллагенов I, II и X типов (табл. 3).
В возрасте 14 дней рост тела позвонка осуществляется за счет хрящевой ткани остатка круговой зоны роста, в которой сохраняется зональность в зависимости от степени дифферен-цировки хондробластов (рис. 2).
Поверхностная зона прилежит к формирующемуся межпозвонковому диску. Ее размер уменьшился по сравнению с предыдущим периодом (см. табл. 2), но структура не изменилась.
Структурно: в базофильном матриксе располагаются единичные малодифференцированные вытянутые хондробласты с базофильным ядром и базофильной цитоплазмой, в которой выявляются гранулы гликогена, хондроитинсульфаты АС.
Ультраструктура усложнилась по сравнению с предыдущим сроком наблюдения: в цитоплазме выявляются скопления свободных рибосом и полисомы. Гладкий эндоплазматический ритикулум слабо развит, КГ с расширенными цистернами расположен приядерно и диффузно, увеличилось количество везикул, митохондрии единичные, округлые с электронно-плотным матриксом.
Хондробласты зоны изогенных групп расположены группами по 2-4 клетки в базофильном межклеточном матриксе, в котором интенсивны реакции на сульфатированные гликозаминогли-каны. Наблюдается резкое снижение интенсивности реакции на протеогликаны вокруг хон-дрогематического барьера и внедрение сосудов в матрикс хряща. Вокруг сосудов сформирована костная ткань - область будущего эпифиза.
Площадь, занимаемая колонковыми структурами и матриксом, наибольшая по отношению
Рис. 2. Зона роста тела позвонка. 2-недельный поросенок. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение х 100
к другим зонам (см. табл. 2). Наряду с синтезом хондроитинсульфатов АС в матриксе выявляется кератансульфат, что свидетельствует об усложнении структуры матрикса. Ультраструктура клеток усложняется. Эндоплазматическая сеть с расширенными цистернами широко распространена по всей цитоплазме, рибосомы встречаются как в свободном виде, так и прикрепленные к эндоплазматической сети. КГ располагается диффузно, многочисленные вакуоли расположены примембранно, митохондрии с хорошо выраженными кристами многочисленны. В этот период наблюдается экспрессия всех исследуемых генов, сопряженных с синтезом белков и протео-гликанов, экспрессия гена 1НН не регистрируется (см. табл. 3), что свидетельствует о некотором замедлении стадии дифференцировки хондро-бластов.
В возрасте 1 мес. сформирована линейная пластинка роста тела позвонка (рис. 3). Матрикс и хондроциты по-прежнему располагаются в определенной зональности практически подобно предыдущему возрасту. Площадь гипертрофического слоя увеличена по отношению к предыдущим срокам (см. табл. 1). В матриксе и цитоплазме клеток выявляются высокополимерные сульфатированные гликозаминогликаны, наиболее интенсивно - вокруг клеточных групп и в межтерриториальном матриксе.
Особенно интенсивны реакции на высокополимерные протеогликаны в цитоплазме предги-пертрофических клеток. На ультраструктурном уровне увеличивается количество элементов КГ и вакуолей, которые рассредоточены по всей цитоплазме, особенно примембранно, что свидетельствует о синтетической активности клеток и экстраклеточном транспорте протеогликанов.
Рис. 3. Пластинка роста тела позвонка месячного поросенка. Окраска альциановым синим. Увеличение х 100
Наблюдаются широкие поля эндоплазматиче-ской сети с расширенными цистернами и многочисленные митохондрии с хорошо контуриру-ющимися кристами. Все исследуемые гены, за исключением 1НН, экспрессируются, что свидетельствует об интенсивности процесса роста, а также функциональной напряженности клеток этого ряда, но некотором снижении скорости дифференцировки хондробластов (отсутствие экспрессии 1НН) (см. табл. 3). Активность пролиферации клеток подтверждается широкой зоной колонковых структур.
В возрасте 3 мес. сформированы пластинка роста, замыкательная пластинка и эпифизы (рис. 4). Матрикс однородный, зональность по-прежнему сохранена, но в этот период наблюдается интенсификация процесса дифференцировки хон-дробластов. Зона изогенных групп сужена (см. табл. 2), но значительно расширена зона колонковых структур. На этом фоне активизировалась синтетическая активность клеток: реакции на высокополимерные протеогликаны интенсивны как в матриксе, так и внутри клеток. Ультраструктур-но: сформирован хондрометаболический барьер, происходит переключение синтеза на коллаген II типа, что свидетельствует о процессе «зрелости» хрящевой ткани. Этот период может быть охарактеризован как период линейного роста. Зона роста «перекрывается» костной пластинкой, препятствующей инвагинации сосудов в хрящевую ткань. Все исследуемые гены экспрессиру-ются в данном периоде (см. табл. 3).
В возрасте 6 мес. структура тела позвонка полностью сформирована (рис. 5). Узкая линейная пластинка роста расположена между эпифизом и телом позвонка. Ее апикальная поверхность отделена от эпифиза узкой поверхностной зоной,
Рис. 4. Сформированные пластика роста и эпифиз у 3-месячного поросенка. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение х 100
Рис. 5. «Разрывы матрикса». 6-месячный поросенок.
Окраска альциановым синим. Увеличение х 200
в матриксе которой интенсифицированы реакции на высокополимерные протеогликаны - хондрои-тинсульфаты (Хейл-реакция). Вероятно, эта зона выполняет барьерные функции, так как состоит из продольно расположенных тонких коллагено-вых волокон, связанных с протеогликанами.
Зона изогенных групп практически отсутствует (см. табл. 2), только редкие изогенные группы клеток по 2-4 в лакуне располагаются среди базофильного матрикса. Вся площадь пластинки роста практически заполнена колонковыми структурами, составляющие их клетки находятся на разной стадии дифференцировки. Цитоплазма клеток и межклеточный матрикс выполнены высокополимерными протеогликанами, особенно интенсивны реакции на гликозаминогликаны вокруг клеток.
Зона остеогенеза широкая, внедряющиеся сосуды лизируют матрикс между гипертрофическими клетками. Обращают на себя внимание зоны «разрыва матрикса» между гипертрофическими и колонковыми клетками. Эти участки морфологически определяются в виде зон сухого некроза и, по мнению Т.И. Виноградовой [1], являются следствием «разрыва» матрикса в результате интенсивного деления хондроцитов, знаменующего интенсификацию роста. На основании предыдущих исследований [3] надо полагать, что разрывы матрикса в хрящевой пластинке роста возникают как следствие отека в связи с усложнением структурной композиции тела позвонка - формированием эпифиза и нарушением единой транспортной системы метаболитов, особенно лимфо-дренажа.
Ультраструктура клеток характеризует стадийность дифференцировки клеток: в основном это высокодифференцированные клетки с крупным ядром, диспергированным хроматином, 1-2 ядрышками и с обогащенной органеллами цитоплазмой. КГ с хорошо выраженными вакуолями,
рассредоточенными по всей цитоплазме. Большое количество вакуолей расположено примембранно. Эндоплазматическая сеть широкая, с расширенными цистернами. Митохондрии с хорошо выраженными многочисленными кристами. В измененных хондроцитах ядро пикнотичное или отсутствует, органеллы редуцированы. Многие клетки находятся в апоптозе. Все исследуемые гены, за исключением Paxl и Pax9, в этом периоде экспрессируются, что свидетельствует о структурной «зрелости» пластинки роста тела позвонка.
заключение
Процесс роста тел позвонков происходит в два основных этапа. Первый этап - это ранний остеогенез от новорожденного до месячного возраста, который можно охарактеризовать как «взрывной» рост: период интенсивной пролиферации и дифференцировки хондробластов по всему периметру тела позвонка за счет круговой зоны. В этот период метаболизм хрящевого тела позвонка осуществляется сосудистым путем, а морфогенез - за счет хондрогематического барьера [2], регулирующего процессы остеогенеза, пролиферации и дифференцировки. В сформированном теле позвонка осуществляется линейный рост, который характеризуется периодизацией, дифференцировки и остеогенеза в пластинке роста тела позвонка.
список литературы
1. Виноградова Т.П. Биологические особенности хрящевой ткани и их значение // Арх. патологии. 1966. (8). 3-9.
2. Зайдман А.М. Идиопатический сколиоз. М.: Наука, 1994.
3. Зайдман А.М., Корель А.В. Структурно-функциональные особенности пластинки роста тела позвонка человека в критические периоды роста // Хирургия позвоночника. 2004. (1). 113-120.
4. Зайдман А.М., Строкова Е.Л., Новиков В.В. и др. Экспрессия генов в хондроцитах пластинки роста у пациентов с идиопатическим сколиозом // Хирургия позвоночника. 2014. (4). 88-98.
5. Burdan F., Szumilo J., Korobowicz A. et al. Morphology and physiology of the epiphyseal growth plate // Folia Histochem. Cytobiol. 2009. 47. (1). 5-16.
6. WuellingM., VortkampA. Chondrocyte proliferation and differentiation // Endocr. Dev. 2011. 21. 1-11.
7. LuValle P., Vortkamp A. Cell cycle control in growth plate chondrocytes // Front. Biosci. 2000. 5. D493-D503.
8. Lui J., Baron J. Mechanisms limiting body growth in mammals // Endocr. Rev. 2011. 32. (3). 422440.
morphological criteria for periodization of spine development
Alla Mikhaylovna ZAIDMAN, Anastasiya Viktorovna KOREL, Elena Leonidovna STROKOVA
Novosibirsk Research Institute of Traumatology and Orthopedics n.a. Ya.L.Tsivyan 630091, Novosibirsk, Frunze str., 17
The objective of the research was to study morphogenetic criteria for periodization of spine development in ontogenesis. The subject of the study was vertebral bodies of 50 mini pigs in the postnatal period (newborn, two-week-old, one-month-old, three-month-old, and six-month-old piglets). It was found that vertebral bodies develop in two stages. Stage 1 involves early osteogenesis from birth till one month of age, which is a period of intense chondroblast proliferation and differentiation around the vertebral body perimeter due to a circular growth zone. During this period, vertebral body cartilage metabolism is mediated by vessels. Growth control is associated with the blood-cartilage barrier restraining osteogenesis, stimulating cell proliferation and differentiation by maintaining the homeostasis of cells and the matrix. Stage 2 involves linear growth, which is characterized by decreased proliferation and intensified synthetic processes that are followed by differentiation of chondroblasts into chondrocytes. This period of development is associated with the formed cartilage growth plate contributing to the longitudinal development of the vertebral body.
Key words: periodization of development, chondroblast, growth plate, proteoglycans, chondroitin sulfates.
Zaidman A.M. - doctor of medical sciences, professor, head of laboratory ofpathomorphology and theoretical research in vertebrology, honored scientist of the RF, e-mail: [email protected] Korel A.V. - candidate of biological sciences, senior researcher of the laboratory ofpathomorphology and theoretical research in vertebrology, e-mail: [email protected]
Strokova E.L. - researcher of laboratory ofpathomorphology and theoretical research in vertebrology, e-mail: [email protected]
