CC BY
15
БЮЛЛЕТЕНЬ ВОЛГОГРАДСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА РАМН
УДК 616-092-092.4:615.9
2-2007
МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В АДЕНОГИПОФИЗЕ И ЯИЧНИКАХ КРЫС-САМОК ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ЭНДОТОКСИКОЗЕ С ПРЕИМУЩЕСТВЕННЫМ ПОРАЖЕНИЕМ
ПОЧЕЧНОЙ ПАРЕНХИМЫ
С. А. Калашникова, А. Г. Денисов
Лаборатория фундаментальных исследований ВНЦ РАМН, г. Волгоград
Существует достаточно сложная иерархия управления гормональным балансом женских половых стероидов, которая весьма вариабельно и с мало предсказуемыми последствиями может меняться в условиях хронической интоксикации.
Яичник является конечной эндокринной железой оси "гипоталамус - гипофиз - яичники", в связи с этим на его территории разворачиваются основные межклеточные взаимодействия по формированию полового гормонального дисбаланса при хронической интоксикации.
Непосредственная реализация процессов трансформации органа под действием хронических токсических соединений, в том числе эндогенной природы, затрагивает как яйцеклетки, клетки гранулезы, тека-клетки, так и стромальные элементы - фибробласты, сосудистую сеть, моно-цитарное представительство [1, 3, 5]. Однако до настоящего времени остаются малоизученными вопросы о соотношении степени повреждения гипофиза и яичников, а также о вкладе цитоток-сического, фибропластического и стромально-сосудистого компонентов в повреждение данных органов при хроническом эндотоксикозе (ХЭТ).
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Сопоставить выраженность хронической эндогенной интоксикации и морфологические изменения в аденогипофизе и яичниках, возникающие у животных, при моделировании ХЭТ с преимущественным поражением почек.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Эксперименты выполнены на 50 белых крысах-самках линии "Вистар" массой (185±12) г, содержащихся в условиях вивария при стандартном рационе питания, свободном доступе к воде, обычном режиме освещения. Синхронизацию эс-труса и формирование мультиэструса проводили двукратным введением прогестерона внутрибрю-шинно в дозе 10 мкг/кг массы животного за двое суток до начала эксперимента.
Закономерности морфофункциональных изменений в аденогипофизе и яичниках и параллельно развивающиеся изменения в организме под действием эндогенных токсических соединений были изучены в модели ХЭТ с преимущест-
венным повреждением почек. Для этого применяли многократное введение малых доз бактериального ЛПС S. thyphimurium ("Sigma", USA) в дозе 0,2 мг/кг 1 раз в неделю в сочетании с внутрибрю-шинным введением 4 %-го гентамицина из расчета 20 мг/кг массы тела, тетрахлорметаном по 0,5 мл/кг массы. Патологию почек в конце эксперимента можно было рассматривать как дис-метаболическую нефропатию с формированием нефросклероза. Сроки вывода животных из эксперимента составили 30, 60 и 90 суток с момента его начала. Контролем служили интакт-ные крысы. Выведение из эксперимента проводили с использованием нембутала (100 мг/кг массы) [4].
ХЭТ верифицировали по следующим биохимическим показателям: содержание в плазме веществ средней молекулярной массы (ВСММ) и их олигопептидных фракций, концентрация малонового диальдегида (МДА), активность ацилазы печени и почек, а также наличия характерных па-томорфологических изменений в почках (объемной доли ткани интерстиция, мочевого пространства, канальцевого индекса) [2].
Для проведения морфологического исследования гипофиз и яичники фиксировали в нейтральном 10 %-м формалине, материал заливали в парафин по стандартной методике, срезы окрашивали гематоксилином и эозином по методу ван Гизона.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
При моделировании ХЭТ на 30-е сут. эксперимента концентрации ВСММ и их олигопептид-ные фракции регистрировались на уровне, превышающем аналогичные показатели в контрольной группе в 2,69 раза (р<0,05) и в 2,32 раза (р<0,05) соответственно (табл. 1).
В последующем содержание биохимических субстратов эндогенной интоксикации возрастало еще более, возрастая к 90-м сут. эксперимента в 3,18 и в 2,53 раза от соответствующих величин в контрольной группе (р<0,01).
Данные, характеризующие выраженность пато-морфологических изменений в почках в зависимости от длительности ХЭТ, представлены в табл. 2.
2-2007
БЮЛЛЕТЕНЬ ВОЛГОГРАДСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА РАМН
Таблица 1
Биохимические показатели выраженности эндотоксикоза у крыс в модели с хроническим введением ЛПС+ТХМ, М±т
Показатели Контроль- ЛПС + ТХМ по схеме, сут.
ная группа 30 60 90
ВСММ, усл.ед. 0,16± 0,02 0,43± 0,05* 0,49± 0,05* 0,51± 0,06*
Олиго- пептиды, мг/л 115,5± 13,8 268,5± 29,8* 289,4± 30,5* 291,0± 36,4*
МДА, ммоль/г липидов 5,33± 0,43 11,40± 0,94* 10,53± 1,25* 11,08± 1,35*
Ацилаза печени, мккат/г 27,91± 1,93 9,06± 0,87* 7,58± 0,73* 5,97± 0,68*
Ацилаза почек, мккат/г 35,61± 2,90 18,21± 1,78* 13,61± 1,45* 9,61± 1,12*
* - р<0,05 по сравнению с интактными крысами.
Таблица 2
Морфометрические показатели почек в зависимости от выраженности ХЭТ, М±т
Показатели Контрольная группа ЛПС + ТХМ по схеме, сут.
30 60 90
Морфо-
метрии по-
чек:
объемная
доля ткани
интерсти-ция, % 7,2±0,4 9,2±0,9 14,5±1,3* 19,7±4,4*
мочевое
простран-
ство,
усл.ед. 1,4±0,1 1,2±0,1 1,2±0,1 1,1±0,6*
канальце-
вый ин-
декс,
усл.ед. 0,8±0,1 1,6±0,2 0,6±0,1* 0,5±0,1*
* - р<0,05 по сравнению с интактными крысами.
При морфометрии почек установлено достоверное увеличение объемной доли интерстиция к 90-м сут. эксперимента на 275 % в сочетании с сокращением мочевого пространства на 77 % по сравнению с контрольной группой (р<0,05).
Результаты гистологического исследования показали, что длительная эндогенная интоксикация приводит к изменению морфо-функциональ-ного состояния гипофиза экспериментальных животных. На 30-е сут. ХЭТ в клеточной популяции аденогипофиза преобладали базофилы. Отмечалось просветление в цитоплазме базофилов, пик-
нотические ядра. В некоторых эпителиальных клетках имелось набухание, признаки вакуольной дегенерации. Ацидофилы распределены неравномерно. Капилляры полнокровны (рис. 1).
На 60-е сут. ХЭТ в аденогипофизе увеличивалось количество эпителиальных клеток с оптически пустой цитоплазмой - хромофобные клетки, составляющие более 50 %. Встречались единичные базофилы с эксцентрически расположенным ядром, в центральной части цитоплазмы которых обнаруживались вакуоли с просветлением. По периферии - зоны мелких эпителиальных клеток. Ацидофилы расположены неравномерно, у большинства из них цитоплазма слабо ацидо-фильна. Ядра округлые, расположены в центре. Обнаружены участки вакуолизации цитоплазмы, ядра уменьшены в размерах, часто сморщены. Со стороны сосудистого русла - более выраженное полнокровие и явления периваскулярного отека.
Нарушения, выявленные в аденогипофизе на 90-е сут. хронической эндогенной интоксикации характеризовались более выраженными стро-мально-сосудистыми изменениями: на фоне увеличения периваскулярного отека и полнокровия обнаружен набухший эндотелий с признаками повреждения (ядра выступают в просвет сосудов). Клеточные элементы распределены неравномерно: встречались участки с преобладанием хромо-фобных клеток и хромофильных клеток. Среди последних превалировали базофилы, в отдельных клетках которых обнаружены признаки дегенерации и вакуолизации цитоплазмы (рис. 2).
При гистологическом исследовании ткани яичника при моделировании хронического эндо-токсикоза с преимущественным поражением почечной паренхимы на 30-е сут. ворота яичника и мозговое вещество характеризовались незначительной гиперемией и отдельными периваскуляр-ными кровоизлияниями в корковое вещество яичника. Отмечалось достаточное количество примордиальных, вторичных и третичных фолликулов, имеющих характерное строение. Атрети-ческие фолликулы имели активную пролиферацию клеток гранулезы, приобретающих характер лютеиновых, и тека-оболочки (рис. 3).
На 60-е сут. эксперимента также отмечалась гиперемия сосудов ворот и мозгового вещества яичника с единичными периваскулярными скоплениями клеток лимфоцитарного происхождения. Строма развита достаточно. Корковое вещество характеризовалось снижением количества при-мордиальных, вторичных и третичных фолликулов. Вторичные и третичные фолликулы имели хорошо выраженную тека-оболочку (внутренний и наружный компонент). Значительные изменения происходили на стадии атретических фолликулов. Большинство из них приобретало вид микрофолликулярных кист, выстланных клетками фолликулярного эпителия, окруженных тека-обо-лочкой и заполненных эозинофильной фолликулярной жидкостью. В отдельных случаях в полости фолликулярных кист наблюдаются клетки лимфо-цитарного и макрофагального происхождения.
БЮЛЛЕТЕНЬ ВОЛГОГРАДСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА РАМН
2-2007
Рис. 1. ХЭТ с преимущественным поражением почечной паренхимы. 30-е сут. Аденогипофиз. Преобладание ба-зофилов с пикнотическими ядрами. Окр. гематоксилином и эозином, ув. х120
Рис. 3. ХЭТ с преимущественным поражением почечной паренхимы. 30-е сут. Корковое вещество яичника. Пролиферация клеток тека-оболочки и лютеиновых элементов. Окр. гематоксилином и эозином, ув. х120
Рис. 2. ХЭТ с преимущественным поражением почечной паренхимы. 90-е сут. Аденогипофиз. Периваскулярный отек, выраженные стромально-сосудистые изменения. Окр. гематоксилином и эозином, ув. х120
Рис. 4. ХЭТ с преимущественным поражением почечной паренхимы. 90-е сут. Яичник. Пролиферация клеток гранулезы. Окр. гематоксилином и эозином, ув. х40
Также отмечаются периваскулярные диапедезные кровоизлияния в паренхиму яичника, активное разрастание паренхиматозных элементов, представленных эпителиальными и соединительнотканными (текальными) элементами.
На 90-е сут. эксперимента более выраженные изменения наблюдались в корковом веществе яичника, нарастала гиперемия сосудов стромы. Примордиальные фолликулы единичны. Вторичные фолликулы подвержены дегенеративным изменениям, выраженным в редукции первичного ооцита, по-прежнему находящегося на яйценосном бугорке. Увеличено количество фолликулярной жидкости по сравнению с контрольной группой животных. Клетки гранулезы активно проли-феровали, что подтверждается их несколько хаотичным расположением с увеличением толщины слоя фолликулярных клеток (рис. 4).
Фолликулы, подвергшиеся атрезии, в большинстве случаев характеризовались активной
пролиферацией клеток гранулезы и текальных элементов, увеличением содержания липидов в лютеиновых клетках. Кроме этого, наблюдались диапедезные кровоизлияния в полость атретиче-ских фолликулов.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В результате проведенного исследования установлено, что морфологические изменения, возникающие в эндокринной системе при хронической эндогенной интоксикации, носят комплексный характер и затрагивают как периферические, так и центральные органы. Сопоставление морфологических изменений в аденогипофизе и яичниках с длительностью ХЭТ свидетельствуют о нарастании патологического процесса в зависимости от срока эксперимента, с формированием максимальных изменений к 60-м суткам. При этом тканевая перестройка аденогипофиза осуществляется преимущественно за счет стромально-сосу-
БЮЛЛЕТЕНЬ ВОЛГОГРАДСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА РАМН
I 2-2007
дистого компонента, в то время как в формировании изменений в яичниках ведущими являются фибропластические процессы.
ЛИТЕРАТУРА
1. Ветров В. В. // Эфферент. терапия. - 2001. -Т. 7, № 1. - С. 4-9.
2. Калашникова С. А., Полякова Л. В., Кузнецов И. М. и др. // Бюлл. Волгоградского научного центра РАМН. - 2007. - № 1. - С. 16-18.
3. Курляндский Б. А., Филов В. А. Общая токсикология. - М.: Медицина, 2002. - 608 с.
4. Новочадов В. В. // Морфология процессов индивидуального развития, адаптации и компенсации: Труды ВолГМУ. - Т. 62, вып. 1. - Волгоград, 2005. -С. 49-52.
5. Andonegui G., Goyert S. M., Kubes P. // J. Immunol. - 2002. - Vol. 169, №4. - P. 2111-2119.
6. Fitzgerald S. M., Chi D. S, Hall H. K., et al. // J. Interferon Cytokine Res. - 2003. - Vol. 23, № 2. - P. 57-65.
УДК 616.89-008.441.13:616.233-092.4
МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ЛИМФОИДНОЙ ТКАНИ В БРОНХАХ РАСТУЩИХ КРЫС ПРИ МОДЕЛИРОВАНИИ ХРОНИЧЕСКОГО АЛКОГОЛИЗМА
М. Р. Иванова
Кафедра патологической анатомии ВолГМУ, Волгоградский научный центр РАМН и АВО
В настоящее время растет потребление алкоголя среди подрастающего поколения [6]. Считается, что возраст начала потребления алкоголя определяет злокачественность течения раннего алкоголизма. Однако существует мнение, что нет никаких оснований считать подростковый возраст решающим фактором быстрой хронизации алкоголизма [3]. При длительном употреблении алкоголя повреждаются различные органы иммунной системы [7]. Изменение защитных сил организма проявляется нарушением как неспецифической резистентности, так и иммунной реактивности [1, 2, 7].
Алкоголь и его метаболиты, обладая иммуно-депрессивным действием, способствуют развитию пусковых механизмов проявления острого респираторного дистресс-синдрома. При этом уменьшается концентрация глутатиона - основного ан-тиоксиданта, выстилающего полость альвеол, что, в свою очередь, приводит к хроническому окси-дантному стрессу, который снижает клеточные функции и увеличивает восприимчивость легких к различным заболеваниям [8, 10]. Однако изменения в БАЛТ, возникающие под действием алкоголя и других токсических веществ, остаются малоизученными и касаются в основном взрослого организма [4].
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Выявить морфологические изменения в лим-фоидной ткани мелких бронхов неполовозрелых растущих крыс в условиях длительной этаноловой интоксикации.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследование было проведено на 8 беспородных белых крысах обоего пола. Животные были разделены на 2 группы. 1-я группа (4 зверь-
ка) - контрольные крысы в возрасте 45 суток, 2-я группа (4 грызуна) - крысы в исходном возрасте 30 суток, получавшие 15 %-й раствор этанола в качестве единственного источника жидкости в течение 15 суток. Данная концентрация этанола является наиболее оптимальной, поскольку при минимальных затратах времени позволяет добиться добровольного потребления животными максимально больших доз алкоголя, при котором он эффективнее всего оказывает токсическое действие на функции органов и систем [5]. Контрольные животные получали свободный доступ к корму и воде. Производили измерение массы тела и легких контрольных и экспериментальных животных. Эвтаназию производили в соответствии с "Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных" под эфирным наркозом. Для микроскопического исследования легкие фиксировали в нейтральном 10 %-м формалине. Парафиновые срезы окрашивали гематоксилином и эозином и по методу ван Гизона. На поперечных срезах бронхов с помощью окулярного микрометра МОВ-1-15х измеряли толщину стенки в местах, где обнаруживались скопления лимфоидной ткани, толщину лимфоид-ного инфильтрата. Статистическую обработку данных производили с использованием программы "Excel".
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
При сравнении массы тела и массы легких животных, подвергнутых принудительной алкоголизации в течение 15 суток с контролем, значимых различий не обнаружено. Однако отмечается увеличение относительной массы легких на 9,2 % (p>0,05), которая составляет (10,7±0,2) мг/г (см. табл.).
