CC BY
63
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
ИММУНОПАТОЛОГИЯ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2016 УДК 616.348-002.44-091.8-078.33
Постовалова Е.А.12, Макарова О.В.1-2, Гао Ю.1
МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ОБОДОЧНОЙ КИШКИ И СУБПОПУЛЯЦИОННЫЙ СОСТАВ ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ОСТРОМ ЯЗВЕННОМ КОЛИТЕ РАЗНОЙ ТЯЖЕСТИ
1«Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова», 119234, г. Москва, Россия; 2ФГБНУ «НИИ морфологии человека», 117418, г. Москва, Россия
При экспериментальном декстраниндуцированном остром язвенном колите разной тяжести изучены морфологические изменения ободочной кишки и проведена оценка субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови с помощью проточной цитофлуориметрии. При потреблении в течение 5 сут половозрелыми самцами мышей C57BI/6 1% раствора декстрансульфата натрия на 7-е сутки эксперимента развивается острый язвенный колит, а при 5% - более тяжелая форма - фибринозно-язвенный колит с субтотальным язвенным процессом. При анализе субпопуляционного состава лимфоцитов по сравнению с контрольной группой в периферической крови при остром язвенном колите в 1,2, а при фибринозно-язвенном - в 2 раза уменьшаются показатели абсолютного количества лейкоцитов, лимфоцитов, CD3+CD4+ Т-хелперов, CD3+CD8+ цитотоксических и CD4+CD25+FOXP3+ регуляторных Т-лимфоцитов. При тяжелой форме язвенного колита нарушения субпопуляционного состава лимфоцитов более выражены. По сравнению с острым язвенным колитом при более тяжелой форме - фибринозно-язвенном колите - в 3 раза уменьшается количество CD3+CD4+ Т-хелперов и в 3,5 раза - CD19+ В-лимфоцитов; в 1,5 раза увеличивается количество CD4+CD25+FOXP3+ регуляторных Т-лимфоцитов.
К л ю ч е в ы е с л о в а: ободочная кишка; экспериментальный язвенный копит; периферическая кровь; иммунофе-нотип.
Для цитирования: Постовалова Е.А., Макарова О.В., Гао Ю. Морфологические изменения ободочной кишки и суб-популяционный состав лимфоцитов периферической крови при экспериментальном остром язвенном колите разной тяжести. Иммунология. 2016; 37 (3): 170-175. DOI: 10.18821/0206-4952-2016-37-3-170-175
Postovalova E.A.1-2, Makarova O.V.1-2, Gao Y.1
MORPHOLOGICAL CHANGES OF COLON AND LYMPHOCYTE SUBPOPULATION COMPOSITION OF PERIPHERAL BLOOD IN EXPERIMENTAL ACUTE ULCERATIVE COLITIS OF DIFFERENT SEVERITY
'Lomonosov Moscow State University, 119234 Moscow, Russia; 2Research Institute of Human Morphology, 117418 Moscow, Russia
In experimental acute ulcerative colitis of different severity induced by dextran sulfate sodium, the morphological changes of colon and lymphocyte subpopulation composition measured by flow cytometry have been studied. Acute colitis was induced by administration of 1%DSS for 7 days. Fibrinous ulcerative colitis - with subtotal ulcerative process - was induced by administration of 5% DSS for 7 days. As compared with control group absolute number of leukocytes, lymphocytes, CD3+CD4+ T-helper cells, CD3+CD8+ cytotoxic and CD4+CD25+FOXP3+ regulatory T-lymphocytes was reduced in 1,2 times in peripheral blood of mice with acute ulcerative colitis, while in case of fibrinopurulent ulcerative colitis these indicators was lower in 2 times than in control group. In severe ulcerative colitis violations of the lymphocyte subpopulation composition were more pronounced. At a more severe form of acute ulcerative colitis - fibrinopurulent ulcerative colitis the numbers of CD3+ CD4+ T-helper cells were reduced in 3 times, the quantity of CD19 + B lymphocytes was lower in 3,5 times, when the number of CD4+CD25+FOXP3+ regulatory T-lymphocytes was increased in 1,5 times.
Keywords: colon; experimental ulcerative colitis; peripheral blood; immunophenotype.
For correspondence: PostovalovaEkaterina A., PhD student of the M.V. Lomonosov Moscow state university, E-mail: [email protected]
For citation: Postovalova E.A., Makarova O.V., Gao Y. Morphological changes of colon and lymphocyte subpopulation composition of peripheral blood in experimental acute ulcerative colitis of different severity. Immunologiya. 2016; 37 (3): 170-175. DOI: 10.18821/0206-4952-2016-37-3-170-175
conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
Funding. The study had no sponsorship.
Received 05.02.16 Accepted 18.02.16
Для корреспонденции: Постовалова Екатерина Андреевна, аспирант биологического факультета МГУ им. М.В. Ломоносова, E-mail: [email protected]
введение
Язвенный колит - широко распространенное среди населения развитых стран воспалительное заболевание неизвестной этиологии с рецидивирующим течением, поражающее
слизистую оболочку толстой кишки. Клинически язвенный колит проявляется болями в животе, диареей, синдромом нарушенного всасывания, снижением массы тела, ректальными кровотечениями. В последние 20 лет частота встречаемости язвенного колита возросла в 15 раз, а у 20% больных на фоне длительного течения хронического воспалительного процесса развивается колоректальный рак [1].
Язвенный колит - многофакторное заболевание, в его развитии играют роль генотип, возраст, особенности питания, стрессы и др. [2]. По данным литературы, нарушения функционирования иммунной системы при язвенном колите характеризуются изменением баланса продукции про- и противовоспалительных цитокинов, факторов роста, а также соотношения Т-эффекторных и Т-регуляторных лимфоцитов [3]. В ряде работ показано, что в патогенезе язвенного колита важная роль принадлежит CD4+CD25+FOXP3+ регуляторным Т-лимфоцитам, которые оказывают цитокин-независимое супрессорное действие [3-7]. Ре-гуляторные Т-лимфоциты подавляют пролиферацию CD4+CD25- Т-эффекторных лимфоцитов, что препятствует развитию воспалительных и аутоиммунных процессов [3]. При сокультивировании cD4+cD25+FOxP3+ регуляторных с CD4+CD25- эффекторными T-лимфоцитами выявлена су-прессорная активность первых, характеризующаяся угнетением пролиферации и продукции Th1 - IFN-y, IL-2 и Th2 -IL-5, IL-13 цитокинов [8].
В настоящее время изучение механизмов развития воспалительного процесса при язвенном колите проводят на различных экспериментальных моделях, и среди них наиболее широко используется модель колита, разработанная I. Okayasu и соавт. [9]. Язвенный колит воспроизводится путем замены питьевой воды на водный раствор декстрансуль-фата натрия (ДСН). Однако в работах, посвященных изучению язвенного колита на этой модели, используют разные концентрации ДСН, и поэтому тяжесть колита варьирует. В связи с этим сопоставление полученных разными авторами данных затруднено.
Цель исследования - изучить морфологические изменения ободочной кишки и субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови у самцов мышей C57B1/6 при экспериментальном остром язвенном колите разной тяжести.
Материал и методы
Работа выполнена на 20 половозрелых самцах мышей линии C57B1/6 массой тела 18-20 г (центральный питомник лабораторных животных «Андреевка», Россия). При работе с экспериментальными животными руководствовались приказом Минздрава СССР № 755 от 12.08.1977.
Мыши опытных групп с целью моделирования острого язвенного колита получали в течение 5 сут 1 и 5% водный раствор ДСН (Mr ~40,000, BioChemica, Германия). Мыши контрольной группы (n = 10) потребляли питьевую воду. Животных контрольной и опытных групп выводили из эксперимента передозировкой диэтилового эфира на 7-е сутки. Проводили забор крови из шейных вен. Для морфологического исследования ободочную кишку фиксировали в жидкости Буэна. Материал проводили по спиртам восходящей концентрации и ксилолам в аппарате Tissue-Tek VIP5Jr (Sakura, США). Обезвоженные образцы заливали в гистомикс на аппарате Tissue-Tek TEC (Sakura, США). С парафиновых блоков изготовляли срезы толщиной 4-6 мкм на микротоме модели Microm HM340E (Thermo Scientific, США), монтировали их на предметные стекла, депарафинировали. Гистологические срезы ободочной кишки окрашивали гематоксилином и эозином. Оценивали распространенность язв и эрозий во всех отделах ободочной кишки с помощью морфометрической программы Image-Pro 6.0.
Субпопуляционный состав лимфоцитов в периферической крови у животных экспериментальных групп опреде-
ORIGINAL ARTICLE
ляли методом проточной цитофлуориметрии на приборе Cytomics FC 500 (Beckman Coulter). Абсолютное количество лейкоцитов и лимфоцитов в крови оценивали на гематологическом анализаторе Celltac alpha MEK-6400 (Nihon Kohden).
Для иммунофенотипирования субпопуляций лимфоцитов использовали антитела фирмы eBioscience - CD3+CD4+ (Т-хелперы), CD3+CD8+ (цитотоксические Т-лимфоциты), CD19 (В-лимфоциты), а для выявления субпопуляции CD4+CD25+FOXP3+ - регуляторных Т-лимфоцитов - набор Mouse Regulatory T Cell Staining Kit № 3 (eBioscience). Проводили подсчет абсолютного и относительного количества лимфоцитов и их субпопуляций. Процентное содержание В-лимфоцитов, Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов вычисляли по отношению к абсолютному количеству лимфоцитов; процентное содержание регуляторных Т-лимфоцитов -по отношению к абсолютному количеству Т-хелперов.
Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием пакета Statsoft Statistica 6.1. Для множественного сравнения трех групп применяли критерий Коновера. Различия считали статистически значимыми при р < 0,05.
Результаты
В контрольной группе у мышей C57Bl/6 при морфологическом исследовании в стенке ободочной кишки патологических изменений не выявлено.
На 3-и и 5-е сутки у мышей C57Bl/6, получавших вместо питьевой воды 1% раствор ДСН, был жидкий желто-коричневый стул. У всех мышей, получавших 5% раствор ДСН, в кашицеобразном кале черно-коричневого цвета выявлялась кровь.
При морфологическом исследовании в ободочной кишке у мышей, потреблявших 1% водный раствор ДСН, выявлена картина острого язвенного колита (см. рисунок, а). В слизистой оболочке дистального отдела ободочной кишки обнаружены язвы, дно их было покрыто слизисто-гнойным экссудатом. Эпителиальная выстилка сохранена на большей части поверхности кишки и представлена колоноцитами и крупными бокаловидными клетками. Поверхность эпителия очагово покрыта слоем слизи с десквамированным эпителием и нейтрофилами. Просветы крипт расширены, расстояние между ними увеличено. Собственная пластинка слизистой оболочки отечна, инфильтрирована макрофагами, лимфоцитами и нейтрофилами. Лейомиоциты мышечной пластинки вытянутой формы с четко контурируемыми ядрами и гомогенной эозинофильной цитоплазмой. Подслизистый слой неравномерно расширен за счет отека, диффузно и очагово инфильтрирован макрофагами, лимфоцитами и единичными нейтрофилами. Лимфатические сосуды базального отдела собственной пластинки слизистой оболочки и подслизисто-го слоя расширены. Сосуды микроциркуляторного русла неравномерно полнокровны. В мышечной оболочке ободочной кишки патологических изменений не выявлено.
При остром язвенном колите, вызванном 5% раствором ДСН, в дистальном отделе ободочной кишки у всех мышей выявлена картина фибринозно-язвенного колита (см. рисунок, б). На большей части поверхности слизистая оболочка изъязвлена. На поверхности язв определялись очаговые наложения масс фибрина и скопления лейкоцитов. Крипты в этих зонах отсутствовали, собственная пластинка слизистой оболочки была замещена грануляционной тканью с большим количеством тонкостенных сосудов, в части которых выявлялись лейкостазы, фибрин и фибриноидный некроз стенки. Отмечалась выраженная воспалительная инфильтрация макрофагами, лимфоцитами, нейтрофилами. В отдельных участках наблюдалась реэпителизация язв. В небольших зонах ободочной кишки с сохраненной структурой крипт выявлялись крипт-абсцессы. Лейомиоциты мышечной пластинки были очагово некротизированы. Подслизистый слой резко
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Морфологические изменения ободочной кишки у мышей С57В1/6, потреблявших 1% (а, б) и 5% (в, г) раствор декстрансульфата натрия. а, б - острый язвенный колит. а - на поверхности язвы гнойный экссудат, собственная пластинка слизистой оболочки замещена грануляционной тканью с выраженной воспалительной инфильтрацией. Отек и диффузная воспалительная инфильтрация подслизистого слоя; б - в воспалительном инфильтрате макрофаги, нейтрофилы и лимфоциты; в, г - фибринозно-язвенный колит. в - на поверхности язвы массы фибрина. Собственная пластинка слизистой оболочки замещена грануляционной тканью с выраженной воспалительной инфильтрацией. Лимфатические сосуды ее базального отдела резко расширены. Лейомиоциты мышечной пластинки некротизированы. Отек и диффузная воспалительная инфильтрация подслизистого слоя. г - вена с фибриноидным некрозом стенки. В воспалительном инфильтрате макрофаги, лимфоциты, нейтрофилы. Ув. а, в - 200; б, г - 640. Окраска гематоксилином и эозином.
расширен, в нем определялся выраженный отек, воспалительная инфильтрация из макрофагов, лимфоцитов, нейтро-филов, неравномерное полнокровие кровеносных сосудов, стазы и сладжи. Лимфатические сосуды резко расширены.
На всем протяжении циркулярного и продольного слоев мышечной оболочки отмечалось чередование зон со светлыми и темными миоцитами.
По данным количественной оценки, распространенность
язвенного процесса в ободочной кишке при колите, индуцированном 5% ДСН, по сравнению с 1%, была в 6 раз выше и составила в процентах 65,31 (52,46; 73,44) и 11,04 (10,63; 13,60) соответственно.
Таким образом, по клиническим проявлениям и морфологическим данным при потреблении в течение 5 сут 1 и 5% раствора ДСН у мышей С57В1/6 развивается менее тяжелый острый язвенный и более тяжелый фибринозно-язвенный колит соответственно.
По сравнению с контролем в периферической крови у половозрелых самцов мышей С57В1/6 с острым язвенным (1% ДСН) и фибринозно-язвенным (5% ДСН) колитом статистически значимо уменьшалось абсолютное количество лимфоцитов, Т-хелперов, цитотоксических Т- и регулятор-ных Т-лимфоцитов. При фибринозно-язвенном колите, по сравнению с контролем статистически значимо снижалось абсолютное количество лейкоцитов, В-лимфоцитов. По данным оценки субпопуляций лимфоцитов, при нарастании выраженности патологического процесса при остром язвенном колите абсолютное количество Т-хелперов и В-лимфоцитов уменьшалось.
Обсуждение
По литературным данным, пероральное введение 1-10% раствора ДСН самцам мышей линии С57В1/6 вызывает развитие острого язвенного колита [9-11]. Однако сведения о морфологических особенностях острого язвенного колита в зависимости от используемой концентрации ДСН в литературе отсутствуют. В настоящей работе установлено, что при потреблении мышами в течение 5 сут 5% раствора ДСН развивается тяжелая форма острого колита - фибринозно-язвенный колит с обширным язвенным процессом, а 1% раствора - менее тяжелый острый язвенный колит, то есть тяжесть колита зависит от концентрации введенного ДСН.
Инициальные механизмы развития воспалительного процесса при ДСН-индуцированном язвенном колите связаны с прямым цитотоксическим действием ДСН, изменением физико-химических свойств слизи, адгезией просветной микрофлоры к эпителиальной выстилке [12], структурным нарушением мембранных белков плотных контактов: окклю-дина и клаудинов [1, 3-5, 11]. На 3-4-е сутки потребления ДСН нарушается баланс процессов пролиферации и гибели эпителиальных клеток [13], что приводит к повышению проницаемости эпителиального барьера и способствует проникновению ДСН в слизистую оболочку ободочной кишки, где он фагоцитируется макрофагами [14, 15]. В более поздние сроки вследствие нарушения эпителиального барьера происходит транслокация микроорганизмов в слизистую оболочку ободочной кишки, и в ней развивается острый инфекционно-воспалительный процесс с выраженной лейкоцитарной инфильтрацией, альтеративными эрозивно-язвенными изменениями [12, 16].
Воспалительные изменения, развивающиеся в ободочной
ORIGINAL ARTICLE
кишке при ДСН-индуцированном колите, сочетаются с системными проявлениями воспаления и активацией механизмов врожденного и приобретенного иммунитета. По данным литературы, у мышей линии C57B1/6 с ДСН-индуцированным колитом выявляется повышение уровня воспалительных маркеров - белка амилоида А сывороточного, провоспали-тельных TNFa, IL-1ß, INF-y, IL-16 и противовоспалительных цитокинов - TGFß, lL-10 [14]. Оценка нарушения иммунологических реакций и системных проявлений воспалительного процесса может проводиться не только по уровню цитоки-нов, но и по субпопуляционному составу лимфоцитов периферической крови. Нарушение баланса субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови отражает изменения в центральных и периферических органах иммунной системы и очаге воспаления. В механизмах развития острого язвенного колита важную роль играют Т-регуляторные и Т-эффекторные лимфоциты. Показано, что регуляторные Т-лимфоциты проявляют супрессорную активность in vitro, ингибируя пролиферацию Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов [17]. Однако данные по оценке субпопуляций лимфоцитов периферической крови человека противоречивы и основаны на недостаточно репрезентативных группах пациентов по полу, возрасту и используемым для лечения лекарственным препаратам, а экспериментальные исследования иммунофенотипа лимфоцитов периферической крови у мышей при ДСН-индуцированном язвенном колите не проводились.
В нашей работе показано, что по сравнению с контролем в периферической крови при остром язвенном колите в 1,2, а при фибринозно-язвенном - в 2 раза уменьшаются показатели абсолютного количества лейкоцитов, лимфоцитов, CD3+CD4+ Т-хелперов, CD3+CD8+ цитотоксических и CD4+CD25+FOXP3+ регуляторных Т-лимфоцитов. По сравнению с острым язвенным колитом при более тяжелой форме - фибринозно-язвенном колите в 3 раза уменьшается количество CD3+CD4+ Т-хелперов и в 3,5 раза - CD19+ В-лимфоцитов; в 1,5 раза увеличивается количество CD4+CD25+FOXP3+ ре-гуляторных Т-лимфоцитов.
Таким образом, нарушения субпопуляционного состава лимфоцитов более выражены при тяжелом фибринозно-язвенном колите, и они свидетельствуют о развитии вторичного иммунодефицитного состояния [18]. Данные о снижении количества в периферической крови при остром язвенном колите регуляторных Т-лимфоцитов согласуются с результатами Y. Yokoyama и соавт. [19]. Снижение количества в периферической крови регуляторных Т-лимфоцитов при обеих морфологических формах острого язвенного колита, очевидно, связано с тем, что дифференцирующиеся в тимусе натуральные регуляторные Т-лимфоциты интенсивно мигрируют в органы иммунной системы и очаг воспаления. Так, A. Hakansson и соавт. [7] обнаружили в брыжеечных лимфатических узлах при остром язвенном колите, индуцированном 5% ДСН, увеличение регуляторных Т-лимфоцитов
Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови у половозрелых самцов мышей С57В1/6 контрольной и экспериментальных групп, Ме (25-75%)
Показатель 1. Контрольная 2. Острый язвенный колит (1% ДСН) 3. Фибринозно-язвенный колит (5% ДСН) Р1-2 Р1-3 Р2-3
Лейкоциты, млн/мл 9,40 (8,80; 9,60) 8,10 (6,90; 8,30) 5,0 (3,70; 7,45) 0,05 0,01 0,26
Лимфоциты, млн/мл 7,50 (7,06; 8,10) 6,40 (6,30; 6,60) 3,30 (2,50; 7,53) 0,03 0,003 0,15
Т-хелперы, млн/мл 1,17 (1,13; 1,23) 1,09 (0,80; 1,13) 0,34 (0,19; 0,62) 0,03 2,3E-06 0,002
Цитотоксические Т-лимфоциты, млн/мл 1,01 (0,91; 1,17) 0,83 (0,22; 0,91) 0,64 (0,28; 1,06) 0,01 0,04 0,38
В-лимфоциты, млн/мл 4,49 (3,04; 5,35) 4,0 (3,77; 4,08) 1,13 (0,31; 4,44) 0,06 3,9E-07 8,8E-05
Регуляторные Т-лимфоциты, тыс./мл 33,56 (25,66; 46,81) 15,24 (4,42; 15,26) 22,54 (18,71; 23,48) 5,3E-07 0,0004 0,01
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
в брыжеечных лимфатических узлах и ободочной кишке. Ре-гуляторные Т-лимфоциты играют важную роль в контроле воспалительных реакций в слизистой оболочке кишечника, ограничивая развитие Т-клеточного ответа на собственные антигены [4]. На настоящий момент известны две субпопуляции регуляторных Т-лимфоцитов: естественные (дифференцируются в тимусе под действием тимического лимфопоэти-на) и индуцированные (дифференцируются на периферии). Поэтому необходимо проведение дальнейших исследований по изучению субпопуляционного состава лимфоцитов в брыжеечных лимфатических узлах и стенке ободочной кишки.
Выводы
1. При потреблении половозрелыми самцами мышей C57B1/6 1% раствора декстрансульфата натрия развивается острый язвенный колит, а при 5% - более тяжелая форма -фибринозно-язвенный колит с более распространенным язвенным процессом.
2. При остром язвенном и фибринозно-язвенном колите по сравнению с контролем в периферической крови уменьшаются показатели абсолютного количества лейкоцитов, лимфоцитов, CD3+CD4+ Т-хелперов, CD3+CD8+ цитотокси-ческих и CD4+CD25+FOXP3+ регуляторных Т-лимфоцитов, а при фибринозно-язвенном колите также количество CD19+ В-лимфоцитов.
3. По сравнению с острым язвенным колитом при его более тяжелой форме - фибринозно-язвенном колите уменьшается количество CD3+CD4+ Т-хелперов, CD19+ В-лимфоцитов; а количество CD4+CD25+FOXP3+ регуляторных Т-лимфоцитов увеличивается.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. Финансирование из бюджета.
ЛИТЕРАТУРА
1. Carlos R.V., Ligia Y.S. Incidence and prevalence rates of inflammatory bowel diseases, in midwestern of Sao Paulo State, Brazil. Arq. Gastroenterol. 2009; 46 (1).
2. Ткачев А.В., Мкртчян Л.С., Никитина К.Е., Волынская Е.И. Воспалительные заболевания кишечника: на перекрестке проблем. Практическая медицина. 2012; 3 (58): 17-22.
3. Powrie F. Immune regulation in the intestine: a balancing act between effector and regulatory T cell responses. Ann. N. Y. Acad. Sci. 2004; 1029: 132-41.
4. Быковская С.Н., Карасев А.В., Лохонина А.В., Клейменова Е.Б. Анализ Т-регуляторных клеток CD4+CD25+FOXP3+ при аутоиммунных заболеваниях. Молекул. мед. 2013; (3): 20-7.
5. Izcue A., Coombes J.L., Powrie F. Regulatory T cells suppress systemic and mucosal immune activation to control intestinal inflammation. Immunol. Rev. 2006; 212: 256-71.
6. Ando T., Hatsushika K., Wako M., Ohba T., Koyama K., Ohnuma Y. et al. Orally administered TGF-beta is biologically active in the intestinal mucosa and enhances oral tolerance. J. Allergy Clin. Immunol. 2007; 120 (4): 916-23.
7. Hakansson A., Tormo-Badia N., Baridi A., Xu J., Molin G., Hagslätt M.L. et al. Immunological alteration and changes of gut microbiota after dextran sulfate sodium (DSS) administration in mice. Clin. Exp. Med.. 2014; 11.
8. Müzes G., Molnar B., Tulassay Z., Sipos F. Changes of the cytokine profile in inflammatory bowel diseases. World J. Gastroenterol. 2012; 18 (41): 5848-61.
9. Okayasu I., Hatakeyama S., Yamada M., Ohkusa T., Inagaki Y., Na-kaya R. A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice. Gastroenterology. 1990; 98 (3): 694-702.
10. Melgar S., Karlsson A., Michaelsson E. Acute colitis induced by dextran sulfate sodium progresses to chronicity in C57BL/6 but not in BALB/c mice: correlation between symptoms and inflammation. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2005; (6): G1328-38.
11. Perse M., Cerar A. Dextran sodium sulphate colitis mouse model: traps and tricks. J. Biomed. Biotechnol. 2012; ID718617: 13.
12. Smith P., Siddharth J., Pearson R., Holway N., Shaxted M., Butler M. et al. Host genetics and environmental factors regulate ecological succession of the mouse colon tissue-associated microbiota. PLoS One. 2012; 7 (1): 30 273.
13. Mennigen R., Nolte K., Rijcken E., Utech M., Loeffler B., Senninger N., Bruewer M. Probiotic mixture VSL#3 protects the epithelial barrier by maintaining tight junction protein expression and preventing apoptosis in a murine model of colitis. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2009; 296 (5): G1140-9.
14. Kawada M., Arihiro A., Mizoguchi E. Insights from advances in research of chemically induced experimental models of human inflammatory bowel disease. World J. Gastroenterol. 2007; 42 (13): 5581-93.
15. Laroui H., Ingersoll S.A., Liu H.C., Baker M.T., Ayyadurai S., Cha-rania M.A. et al. Dextran Sodium Sulfate (DSS) induces colitis in mice by forming nano-lipocomplexes with medium-chain-length fatty acids in the colon. PLoS One. 2012; 7 (3): e32084.
16. Абдулаева С.О., Хомякова Т.И., Симонова Е.Ю., Цветков И.С., Добрынина М.Т., Макарова О.В., Яцковский А.Н. Сравнительная морфологическая, бактериологическая и иммунологическая характеристика индуцированного декстрансульфатом натрия острого язвенного колита у мышей BALB/c и C57Bl/6. Клиническая и экспериментальная морфология. 2013; 4 (8): 27-33.
17. Yu T.Q., Saruta M., Avanesyan A., Fleshner R.F., Banham H.A., Papadakis A.K. Expression and functional characterization of FOX-P3CD4 regulatory T cells in ulcerative colitis. Inflamm. Bowel Dis. 2007; 13 (2): 191-9.
18. Смирнов В.С., Шубик В.М., Сосюкин А.Е., Петленко С.В. Им-мунодефицитные состояния / Под ред. проф. В.С. Смирнова, проф. И.С. Фрейдлина. СПб.: Фолиант; 2000: 293-330.
19. Yokoyama Y., Fukunaga K., Fukuda Y., Tozawa K., Kamikozuru K., Ohnishi K. et al. Demonstration of low-regulatory CD25High+CD4+ and high-pro-inflammatory CD28-CD4+ T-Cell subsets in patients with ulcerative colitis: modified by selective granulocyte and monocyte adsorption apheresis. Dig. Dis. Sci. 2007; 52 (10): 2725-31.
REFERENCES
1. Carlos R.V., Ligia Y.S. Incidence and prevalence rates of inflammatory bowel diseases, in midwestern of Sao Paulo State, Brazil. Arq. Gastroenterol. 2009; 46 (1).
2. Tkachev A.V., Mkrtchyan L.S., Nikitina K.E., Volynskaya E.I. Inflammatory bowel disease: crossing of the problems. Prakticheskaya meditsina. 2012; 3 (58): 17-22. (in Russian)
3. Powrie F. Immune regulation in the intestine: a balancing act between effector and regulatory T cell responses. Ann. N. Y. Acad. Sci. 2004; 1029: 132-41.
4. Bykovskaya S.N., Karasev A.V., Lokhonina A.V., Kleymenova E.B. CD4+CD25+FOXP3+ T regulatory cell analysis in autoimmune diseases. Molekul. med. 2013; (3): 20-7. (in Russian)
5. Izcue A., Coombes J.L., Powrie F. Regulatory T cells suppress systemic and mucosal immune activation to control intestinal inflammation. Immunol. Rev. 2006; 212: 256-71.
6. Ando T., Hatsushika K., Wako M., Ohba T., Koyama K., Ohnuma Y. et al. Orally administered TGF-beta is biologically active in the intestinal mucosa and enhances oral tolerance. J. Allergy Clin. Immunol. 2007; 120 (4): 916-23.
7. Hakansson A., Tormo-Badia N., Baridi A., Xu J., Molin G., Hagslatt M.L. et al. Immunological alteration and changes of gut microbiota after dextran sulfate sodium (DSS) administration in mice. Clin. Exp. Med. 2014; 11.
8. Mfizes G., Molnar B., Tulassay Z., Sipos F. Changes of the cytokine profile in inflammatory bowel diseases. World J. Gastroenterol. 2012; 18 (41): 5848-61.
9. Okayasu I., Hatakeyama S., Yamada M., Ohkusa T., Inagaki Y., Na-kaya R. A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice. Gastroenterology. 1990; 98 (3): 694-702.
10. Melgar S., Karlsson A., Michaelsson E. Acute colitis induced by dextran sulfate sodium progresses to chronicity in C57BL/6 but not in BALB/c mice: correlation between symptoms and inflam-
mation. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2005; (6): G1328-38.
11. Perse M., Cerar A. Dextran sodium sulphate colitis mouse model: traps and tricks. J. Biomed. Biotechnol. 2012; ID718617: 13.
12. Smith P., Siddharth J., Pearson R., Holway N., Shaxted M., Butler M. et al. Host genetics and environmental factors regulate ecological succession of the mouse colon tissue-associated microbiota. PLoS One. 2012; 7 (1): 30 273.
13. Mennigen R., Nolte K., Rijcken E., Utech M., Loeffler B., Senninger N., Bruewer M. Probiotic mixture VSL#3 protects the epithelial barrier by maintaining tight junction protein expression and preventing apoptosis in a murine model of colitis. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2009; 296 (5): G1140-9.
14. Kawada M., Arihiro A., Mizoguchi E. Insights from advances in research of chemically induced experimental models of human inflammatory bowel disease. World J. Gastroenterol. 2007; 42 (13): 5581-93.
15. Laroui H., Ingersoll S.A., Liu H.C., Baker M.T., Ayyadurai S., Cha-rania M.A. et al. Dextran Sodium Sulfate (DSS) induces colitis in mice by forming nano-lipocomplexes with medium-chain-length fatty acids in the colon. PLoS One. 2012; 7 (3): e32084.
ORIGINAL ARTICLE
16. Abdulaeva S.O., Khomyakova T.I., Simonova E.Yu., Tsvetkov I.S., Dobrynina M.T., Makarova O.V., Yatskovskiy A.N. Comparative morphological, bacteriological and immunological characteristics of severe ulcerative colitis induced by sodium dextran sulfate in Balb/c and C57BL/6 mice. Klinicheskaya i eksperimental'naya morfologi-ya. 2013; 4 (8): 27-33. (in Russian)
17. Yu T.Q., Saruta M., Avanesyan A., Fleshner R.F., Banham H.A., Papadakis A.K. Expression and functional characterization of FOX-P3CD4 regulatory T cells in ulcerative colitis. Inflamm. Bowel Dis. 2007; 13 (2): 191-9.
18. Smirnov V.S., Shubik V.M., Sosyukin A.E., Petlenko S.V. Immunodeficiency States. [Immunodefitsitnye sostoyaniya] / Eds prof. Smirnov V.S., prof. Freidlin I.S. St. Petersburg: Foliant; 2000: 293-330. (in Russian)
19. Yokoyama Y., Fukunaga K., Fukuda Y., Tozawa K., Kamikozuru K., Ohnishi K. et al. Demonstration of low-regulatory CD25High+CD4+ and high-pro-inflammatory CD28-CD4+ T-Cell subsets in patients with ulcerative colitis: modified by selective granulocyte and monocyte adsorption apheresis. Dig. Dis. Sci. 2007; 52 (10): 2725-31.
Поступила 05.02.16 Принята в печать 18.02.16
КЛИНИЧЕСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2016
УДК 616.24-007.272-036.12-085.357-078.33
Караулов А.В.3, Макарова Е.В.1, Любавина Н.А.1, Варварина ПН.1, Кравченко Г.А.2, Евсегнеева И.В.3, Новиков В.В.2
РАСТВОРИМЫЕ ФОРМЫ МЕМБРАННЫХ ЛЕЙКОЦИТАРНЫХ АНТИГЕНОВ ПРИ КОРТИКОСТЕРОИДНОЙ ТЕРАПИИ ОБОСТРЕНИЙ ХРОНИЧЕСКОЙ ОБСТРУКТИВНОЙ БОЛЕЗНИ ЛЕГКИХ
1ГБОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 603005, г. Нижний Новгород, Россия; 2ФГАОУ ВО «Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского», 603950, г. Нижний Новгород, Россия; 3ГБОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации», 119991, г Москва, Россия
Растворимые формы дифференцировочных молекул клеток иммунной системы принимают участие в патогенезе заболеваний органов дыхания. В настоящей работе исследовано содержание растворимых форм молекул CD50, CD54, CD38, CD25, CD8, CD95, HLA I, HLA-DR в сыворотке крови у больных с обострением хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) до и после лечения глюкокортикоидами. Обнаружено снижение сывороточного уровня маркеров активации клеток иммунной системы (sCD8 и sCD38), молекул адгезии (sCD50 и sCD54), ингибитора апоптоза (sCD95) и sHLA I, sHLA-DR. Применение системных кортикостероидов при ХОБЛ усугубляет снижение сывороточного содержания sCD50, sCD54, sCD8, sCD95 и sHLA-DR. Выявлены корреляционные связи концентрации тестируемых молекул с длительностью и дозой применяемых в лечении системных глюкокортикои-дов. Ингаляционные глюкокортикоиды (небулизированный будесонид) демонстрируют противовоспалительную активность и не оказывают иммуносупрессивного действия.
К л ю ч е в ы е с л о в а: CD-антигены; растворимые формы мембранных молекул; обострение ХОБЛ; небулизированный будесонид; системные глюкокортикоиды. Для цитирования: Караулов А.В., Макарова Е.В., Любавина Н.А., Варварина Г.Н., Кравченко Г.А., Евсегнеева И.В., Новиков В.В. Растворимые формы мембранных лейкоцитарных антигенов при кортикостероидной терапии обострений хронической обструктивной болезни легких. Иммунология. 2016; 37 (3): 175-180. DOI: 10.18821/0206-49522016-37-3-175-180
Для корреспонденции: Караулов Александр Викторович, д-р мед. наук, член-корр. РАН, проф., зав. каф. клинической иммунологии и аллергологии ГБОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации», г. Москва, E-mail: [email protected]
