CC BY
53
УДК 581.19:635.265
МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И БИОХИМИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ОБОГАЩЕННОГО СЕЛЕНОМ РАСТЕНИЯ ALLIUM SCHOENOPRASUM L. И ОЦЕНКА ЕГО СПОСОБНОСТИ ОКАЗЫВАТЬ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЕ ДЕЙСТВИЕ У МЫШЕЙ С ПЕРЕВИВАЕМЫМИ ОПУХОЛЯМИ
Т.И. ШИРШОВА*, И.В. БЕШЛЕЙ*, Н.В. МАТИСТОВ*, В.П. ДЕРЯГИ-НА**, Н.И. РЫЖОВА**
*Институт биологии Коми НЦ УрО РАН, г. Сыктывкар **НИИ канцерогенеза ФГБУ Российского онкологического научного центра им. Н.Н. Блохина Минздрава России, г. Москва beshley@ib.komisc.ru
Изучено влияние неорганических форм селена на морфологические и биохимические показатели растений Allium schoenoprasum, зависящее от метода введения селената натрия и его концентрации. Показано ингибирующее воздействие избытка Se на рост растений, а также на аккумуляцию микро- и макроэлементов. Результаты исследования действия экстрактов шнитт-лука и его селенобогащенной формы на метастазирующую эпидермоидную карциному легких Льюиса у мышей выявили способность слабо усиливать резистентность организма мышей по отношению к перевиваемым опухолям.
Ключевые слова: Allium schoenoprasum, селен, карцинома легких Льюиса
T.I.SHIRSHOVA, I.V.BESHLEY, N.V. MATISTOV, V.P. DERYAGINA, N.I. RY-ZHOVA. MORPHOLOGICAL AND BIOCHEMICAL FEATURES OF SELENIUM-ENRICHED PLANT ALLIUM SCHOENOPRASUM L. AND EVALUATION OF ITS ABILITY TO EXERT ANTITUMOR ACTIVITY IN MICE WITH TRANSPLANTABLE TUMORS
The influence of selenium inorganic forms on the morphological and biochemical parameters of Allium schoenoprasum plant was studied. Phenological observations showed that seed treatment with a solution of sodium selenate affected the growth rate of plants at early stages of ontogenesis by increasing the germination rates and germinating capacity compared to control. The additional introduction of selenium influenced the morphology of developing plants and resulted in reduction in the length of roots, increasing in the length of bulbs depending on the concentration of sodium selenate. In the leaves of selenium-enriched chives of the first year of life the decrease in the content of trace elements compared to control, especially significant for iron, aluminum and manganese, was observed. For plants of the second year of life such effect was not found. The additional introduction of Se generally did not affect the content of total nitrogen in leaves of chives, however, there was the decrease in the mass fraction of nitrogen of amino acids compared to control. The results of the study of antitumor action of the aqueous suspension of the selenium-enriched forms of onion showed that in conditions of its preventive regular intake in male mice BDF there occurs weak growth inhibition of solid carcinoma Lewis in the early stages of tumor development (18,0-31,2 %). It is established that the inhibitory effect (defined both as change of volume and reduction of tumor mass) of selenium-enriched forms of onion compared to onions grown traditionally, was absent.
Keywords: Allium schoenoprasum, selenium, Lewis lung carcinoma
Республика Коми, как и многие районы России, относится к селенодефицитным регионам, поэтому проблема недостатка селена (Бе) у населения стоит достаточно остро [1, 2]. Одним из современных методов решения этой проблемы является производство продуктов питания с повышенным содержанием Бе, в том числе - повышение селенового статуса овощных культур [3, 4]. В литературе неоднократно отмечались высокие антиоксидант-
ные свойства многолетних луков, обусловленные как наличием особых органических форм Бе, так и высокими концентрациями витамина С и флаво-ноидов. Потребность в витаминах и других микро-нутриентах для населения северных регионов, особенно остро ощущаемая ранней весной, может быть решена за счет более широкого использования луков, биологическая и фармакологическая ценность которых несомненна, это подтверждается
результатами исследований, которые приняли в последнее время более широкий и глубокий характер. Как показали наши исследования, шнитт-лук (Allium schoenoprasum), который в Республике Коми растет повсеместно и давно введен в культуру, является аккумулятором Se в биодоступных для человека формах [5, 6].
К настоящему времени получены экспериментальные и эпидемиологические доказательства того, что некоторые биологически активные вещества (БАВ), входящие в состав лука, могут подавлять пролиферацию опухолевых клеток разного ге-неза, а также снижать риск развития неоплазий некоторых органов, например, толстой кишки и желудка, репродуктивных органов [7-10]. Разработано несколько способов получения препаратов с противоопухолевым действием, содержащих эфирные масла чеснока и лука репчатого [11]. Французскими и японскими учеными был выявлен цитотоксический эффект стероидных гликозидов, выделенных из лука A. schoenoprasum, на клеточных линиях опухолей толстой кишки человека HCT-116 и HT-29 [12].
Многочисленные результаты экспериментальных, эпидемиологических и клинических исследований показывают, что Se проявляет противоопухолевую активность [13-16]. Полагают, что основной биологической ролью Se является его участие в синтезе антиоксидантных ферментов: глутатионпероксидаз I-IV, селензависимой перок-сидазы нейтрофилов, селенопротеинов P и W, 5'-йодотиронин дейодиназы, тиоредоксин-редуктазы [17, 18]. Эти ферменты участвуют в устранении индуцированных перекисями и гидроперекисями окислительных повреждений (предотвращая ауто-окисление липидных мембран), в регуляции внутриклеточной передачи сигнала, а также в обмене тироидных гормонов. В настоящее время выявлены новые свойства Se, объясняющие множество возможных механизмов его противоопухолевого действия. Показано, что этот микроэлемент участвует в метаболизме канцерогенов, в репарации ДНК, в индукции апоптоза в опухолевых клетках, влияет на ангиогенез, а также активность эффекторных клеток специфического и неспецифического противоопухолевого иммунитета [18-21]. Полагают, что органический Se, особенно если он поступает в организм с растительными продуктами, имеет преимущество перед неорганическим: органический Se хорошо всасывается, имеет малую токсичность, а его концентрация в тканях и жидкостях поддерживается на более высоком уровне [17, 22, 23]. Считают, что противоопухолевые эффекты Se проявляются преимущественно на ранней стадии развития канцерогенного процесса. На культурах опухолевых клеток и на моделях химического канцерогенеза было показано, что селенобогащенные чеснок, лук, капуста брокколи вызывают значимый дозо-зависимый антипрофелиративный эффект, и в некоторых случаях он был более выраженный, чем используемые в эквивалентных дозах неорганический и органический Se [22, 23].
Задачи настоящего исследования - изучение влияния неорганических форм Se на морфологи-
ческие и биохимические показатели растений Allium schoenoprasum, оценка способности обогащенного Se лука повышать противоопухолевую резистентность организма к трансплантируемым опухолевым клеткам и оказывать противоопухолевое действие у мышей с растущими перевиваемыми опухолями.
Материал и методы исследования
Для экспериментального повышения содержания Se в шнитт-луке использовали семена из коллекции ботанического сада. Сбор производили в сентябре 2011 г. Семена сушили в термостате при 35°С и постоянном вентилировании, намачивали в 0,001- и 0,005 %-ном водном растворе селената натрия, проращивали в полиэтиленовых ящиках, заполненных торфяно-песчаной смесью. Лабораторную всхожесть семян определяли по методике Николаевой с соавторами [24]. Высаженные растения подкармливали селенатом натрия из расчета 0,5 и 1,5 мг/кг почвы. Для проведения эксперимента брали по 500 семян для каждой из семи групп в трех повторностях. Первую группу, семена которой не подвергались обработке селенатом натрия, использовали в качестве контроля (табл. 1). За жизнеспособностью и всхожестью семян наблюдали в течение 21 дня. Измерения параметров морфологических признаков проростков (диаметр и высота луковиц, длина корней, высота листьев и цветоноса) проводили через три месяца после посадки семян в грунт. Первичный материал обработан методами математической статистики с использованием программы Microsoft Excel.
Таблица 1
Методы обработки семян и развивающихся растений Allium schoenoprasum растворами селената натрия
Table 1
Methods of treatment of seeds and developing plants of Allium schoenoprasum with solutions of sodium selenate
Номер образца Намачивание семян в 0,001 %-ном растворе Na2SeO4 Намачивание семян в 0,005 %-ном растворе Na2SeO4 Однократная подкормка растений 1,5 мг Na2SeO4 /кг почвы Трехкратная подкормка растений 0,5 мг Na^eO^r почвы
1 контроль
2 - - Х -
3 - - - Х
4 - Х - -
5 - Х Х -
6 Х - - -
7 Х - Х -
Примечание: Х - действие, проводимое над объектом. Note: Х - the action carried out on the object.
Анализ элементного состава проводили в Центре коллективного пользования «Хроматография» Института биологии Коми НЦ УрО РАН. Металлы в кислоторастворимой форме определяли на атомно-эмиссионном спектрометре с индуктивно-связанной плазмой Spectro CirosCCD (Spectro Analytical Instrument GmbH, Германия), серу - с использованием газовой хроматографии на элементном анализаторе EA 1110, модель CHNS-O (CE
Instruments, Италия). Содержание элементов в воздушно-сухой почве устанавливали по стандартной методике [25]. Результаты приведены в мг/кг. Se в растениях определяли флуорометрическим методом [26] с использованием референс-стандартов в трех повторностях в НИИ питания РАМН (д.б.н. Н.А.Голубкина, Москва), валовое содержание Se в почве - методом атомно-абсорбционной спектрометрии с использованием проточно-инжекционной системы. О накоплении макро- и микроэлементов судили по величине коэффициента биологического накопления (КБН), который рассчитывали по формуле:
Кбн - Содержание элемента в сухой биомассе Содержание элемента в почве .
Исследования противоопухолевой активности проводили в НИИ канцерогенеза Российского онкологического научного центра им. Н.Н. Блохина РАМН (к.б.н. В.П. Дерягина, к.б.н. Н.И. Рыжова, Москва).
В качестве объекта исследования использовали растения A. schoenoprasum L., выращенные из семян, прошедших намачивание в 0,001 %-ном водном растворе селената натрия Na2SeO4 (OnSel), а также растений, получивших дополнительное содержание Se при корневой подкормке селенатом натрия из расчета 1,5 мг Se на кг почвы (QnSe2). Для сравнения брали растения шнитт-лука, не получившие дополнительно Se (СЛ), содержание микроэлемента в котором составляло 80±7 мкг/кг сухого вещества. Листья лука измельчали и сушили при комнатной температуре и постоянном вентилировании. Содержание бАв и микро-нутриентов в листьях лука приведено в таблице ранее опубликованной статьи [27]. Содержание Se в образцах QnSel и QnSe2 составляло 96±9 и 570±43 мкг/кг сухого вещества соответственно.
Для приготовления суспензии в коническую колбу на 50 мл помещали 750 мг мелко измельченного высушенного лука, добавляли дистиллированную воду, интенсивно перемешивали и доводили до метки водой. Суспензию готовили ежедневно. Опыты проводили на 40 мышах-самцах BDF (F1 (C57Bl/6xDBA/2) в возрасте трех месяцев, массой 30-32 г, разводки питомника «Столбовая». Штамм метастазирующей эпидермоидной карциномы легких Льюиса (КЛ) получали из банка Российского онкологического научного центра им. Н.Н. Блохина. Использовали две-три пассажи опухоли in vivo. Мышей содержали в условиях вивария на брикетированном комбикорме с содержанием в нем Se -75±6 мкг/кг. Инокуляцию опухолевых клеток КЛ проводили п/к по 5х106 клеток на мышь в правую подмышечную область. Мышей распределили на четыре группы по 10 животных в каждой: 1 группа (контроль) - мыши с перевитой КЛ; мыши 2-4 групп в профилактическом режиме получали перорально пять раз в неделю на протяжении двух недель до перевивки КЛ и после нее в течение всего опыта по 0,5 мл перемешанной водной суспензии лука комнатной температуры из расчета 250 мг вещества на кг массы тела животного (м.т.ж.). Мыши 3 и 4 групп, потреблявшие суспензию обогащенного Se лука,
дополнительно, при каждом пероральном введении, получали с растением 0,024 мкг Бе/кг м.т.ж. и 0,1225 мкг Бе/кг м.т.ж., соответственно.
Ингибирующий эффект тестируемых веществ оценивали по торможению роста опухоли (ТРО), определяемому по объему и массе опухолей у животных опытных групп по сравнению с контрольной группой
ТРО = [(Уоп-Ук)/Ук] х 100 %, где Ук - средний объем опухоли в контрольной группе, Уоп - средний объем опухоли в опытной группе (мм3).
Объем опухолей вычисляли по формуле согласно методическим рекомендациям [28]. Минимально значимый критерий эффективности действия вещества, определяемый по объему, должен соответствовать показателю ТРО > 50 %.
В конце эксперимента мышей усыпляли под эфирным наркозом. После вскрытия животных выделяли опухоли и уточняли их массу. Результаты изучения влияния субстанций на рост КЛ приведены в таблице в конце статьи.
Проверку значимости различий между данными (представленными в таблице как среднеарифметическое ± выборочное стандартное отклонение) проводили с помощью ^критерия Стьюдента.
Результаты и обсуждение
Экспериментальное повышение селенового статуса шнитт-лука, как показали наши исследования, влияет на биохимические и морфологические показатели развивающегося растения. Были выявлены наиболее эффективные способы введения селената натрия для накопления Бе в концентрациях, не превышающих ПДК (табл. 1).
Фенологические наблюдения показали, что обработка семян раствором селената натрия влияла на темпы роста растений на начальных этапах онтогенеза, увеличив скорость их прорастания и всхожесть по сравнению с контролем. Максимальная всхожесть отмечена для образцов 6 и 7 после намачивания в 0,001 %-ном, а также для образцов 4, 5 после намачивания в 0,005 %-ном растворе селената натрия. Семена контрольной группы (обр. 1-3) имели самую низкую всхожесть (рис. 1).
Установлено влияние селената натрия на активность ростовых процессов и изменение морфологических признаков растений: проведенные через три месяца после посадки промеры длины корней, луковиц и листьев показали значительные отличия в морфологии луковиц (табл. 2).
В контроле (обр. 1) луковицы имели округлую форму длиной 1 см, а растения, выращенные из семян после намачивания или подкормки растворами селената натрия - вытянутые луковицы, максимальная длина которых составила 5,3 см (обр. 5, получивший максимальную дозу селената натрия). Отличий в морфологии луковиц, выращенных из семян после намачивания в растворах селената разных концентраций (обр. 4, 6), не обнаружено; длина их составила 3,2 и 3,3 см соответственно. На изменение морфологии луковиц и корней оказыва-
Рис. 1. Всхожесть семян Allium schoenoprasum. Fig. 1. Germination of seeds of Allium schoenoprasum.
Таблица 2
Длина различных частей селенобогащенного Allium schoenoprasum первого года вегетации, см
Table 2
The length of different parts of selenium-enriched Allium schoenoprasum of the first year of vegetation, cm
Номер образца * Часть растения
Корень Луковица
1 7,5±1,5 1,0±0,3
2 6,1 ±0,9 3,0±0,5
3 5,9±1,3 3,5±0,6
4 7,2±1,3 3,2±0,4
5 5,0±1,0 5,3±0,7
6 5,6±1,0 3,3±0,4
7 4,8±0,7 3,1±0,2
Примечания: ±Д - доверительный интервал абсолютной погрешности при P = 0.95; * Здесь и далее номера образцов соответствуют приведенным в табл.1.
Notes: ±Д - the confidence interval of absolute error at P = 0.95; * Here and further the sample numbers correspond to the samples shown in Table.1.
ло влияние количество подкормок: при однократной подкормке (1,5 мг/кг почвы) морфологические изменения были менее значительные, чем при трехкратной подкормке (0,5 мг/кг почвы). Максимальная длина корней обнаружена у контрольного образца, минимальная - у обр. 5 и 7, для которых была проведена стратификация в растворах селената и последующая однократная подкормка 1,5 мг/кг почвы. Повышение содержания Se намачиванием семян в растворах селената натрия, а также внесение его в почву оказывало влияние на морфологию развивающегося растения - приводило к уменьшению длины корней, увеличению длины луковиц в зависимости от концентрации селената натрия. На длину листа растений первого года жизни селенат натрия оказывал незначительное влияние, наиболее существенные морфологические различия проявились на второй год (рис. 2).
Наибольшая длина листа была у растений, получивших Se при корневой подкормке (обр. 2, 3). Наименьшая длина листа и в этом случае была у
■I
□II
1 2 3 4 5 6 7 номер образца
Рис. 2. Длина листа Allium schoenoprasum первого (I) и второго (II) года вегетации.
Fig. 2. Leaf length of Allium schoenoprasum of the first (I) and second (II) year of vegetation.
обр. 7, что подтверждает мнение об ингибирующем влиянии избытка Se на рост растений [29, 30]. В литературе имеются сведения, что при внесении в почву 2 мг/кг Se наблюдалось снижение урожайности некоторых сельскохозяйственных культур. Установлены критические концентрации Se в побегах, ингибировавшие рост растений, мкг/г: для капусты сарептской Brassica juncea Czern L. - 105, кукурузы -41, риса и пшеницы - 19. В дозе свыше 1,5 - 3 мг/кг почвы Se накапливался в этих растениях до токсичного для потребления животными уровня -больше 5 мг/кг биомассы [31]. Установлено, что при концентрации Se в почве свыше 0,5 мг/кг продукция растениеводства токсична для животных [32]. Имеется мнение, что селенаты и селениты, которые быстро поглощаются и включаются в метаболизм, токсичны для растений [33].
До настоящего времени нет четкого понимания взаимного влияния макро- и микроэлементов, зависимости их содержания в растении от дополнительного введения Se тем или иным образом. Отличные результаты были получены в Финляндии, где использование удобрений с содержанием селената натрия позволило более чем вдвое увеличить потребление населением этого микроэлемента. Это дало возможность достичь уровня, отвечающего максимальной активности селенозависимой глутатионпероксидазы тромбоцитов [34]. Кроме того, было отмечено, что использование селената натрия как компонента удобрений снизило аккумулирование тяжелых металлов во всех звеньях пищевой цепи [5].
В наших экспериментах дополнительное введение Se приводило к существенным изменениям. В листьях растений первого года вегетации его содержание во всех случаях возросло многократно, особенно в образцах 4-7, где оно значительно превысило ПДК, и, следовательно, такие растения становятся токсичными для человека (табл. 3).
Как показали наши исследования, слишком высокие концентрации вводимого Se влияют не только на его содержание в растении, но и на онтогенез и морфологические показатели. Например, рас-
Таблица 3
Содержание селена в листьях Allium schoenoprasum первого и второго года вегетации, мг/кг сухого вещества
Table 3
The content of selenium in the leaves of Allium schoenoprasum of the first and second year of vegetation, mg/kg of dry matter
Номер образца Первый год вегетации Второй год вегетации
Содержание КБН Содержание КБН
1 0,04 0,3 0,10±0,05 0,8
2 1,9±1,0 12,7 0,10±0,05 1,0
3 1,9±1,0 5,3 0,10±0,05 0,4
4 8,0±4,0 50,0 0,18±0,09 1,8
5 17,0±8,0 77,3 0,51±0,26 3,4
6 6,0±3,0 27,3 0,35±0,18 2,2
7 70±40 333,3 2,2±1,1 22,0
тения (обр. 7, табл. 1), получившие максимальное количество Se в результате намачивания семян и однократной подкормки 1,5 мг/кг почвы, по всем показателям отличались от других: избыток Se инги-бировал рост растения - они имели минимальную длину корней и листьев по сравнению с другими образцами. На второй год вегетации содержание Se в контроле возросло с 0,04 до 0,1 мг/кг (в 2,5 раза), но в экспериментальных образцах оно существенно упало. Однако высокие значения КБН в большинстве растений сохранились (табл. 3). Полученные результаты свидетельствуют о том, что шнитт-лук очень хорошо аккумулирует Se и может накапливать его в количествах, значительно превышающих ПДК.
Дополнительное введение Se оказывало ин-гибирующее действие на усвоение растением других микроэлементов, особенно в растениях первого года вегетации. В листьях селенобогащенного шнитт-лука первого года жизни наблюдали снижение содержания микроэлементов по сравнению с контролем, особенно значительное для железа, алюминия и марганца. Для растений второго года жизни такой эффект не был обнаружен (табл. 4).
Дополнительное введение Se влияло и на содержание макроэлементов. В листьях растений с экспериментально повышенным содержанием Se в первый год вегетации наблюдалось снижение концентрации кальция, магния, калия и фосфора по сравнению с контролем (табл. 5). На второй год жизни содержание кальция, магния и калия в контроле уменьшилось, а фосфора и серы возросло. Дополнительное введение Se в основном не влияло на содержание общего азота в листьях шнитт-лука. Однако массовая доля азота аминокислот по сравнению с контролем снижалась (обр. 1, табл. 6).
Результаты исследования противоопухолевого действия Se-обогащенных форм лука приведены в табл. 7. Анализ данных показал, что в условиях профилактического регулярного поступления в
организм водной суспензии лука происходит слабая задержка роста солидной КЛ на ранних сроках развития опухоли (в течение двух недель). Показатель ТРО на этот срок составил 24,1-26,4 % и был статистически достоверным (р<0,05). При потреблении мышами суспензии лука, выращенного в условиях корневой подкормки селенатом натрия (гр. 4), определяли снижение объемов опухолей у мышей на 18,0-31,2 %, причем различие с контрольной группой на 11-е и 18-е сутки роста КЛ было статистически значимое (р<0,01). Однако на поздних сроках роста опухолей ингибирующее влияние лука, обогащенного Se, не проявлялось. Масса опухолей, выделенных на 25-е сутки роста КЛ у мышей, потреблявших суспензию лука, в том числе полученного из обогащенного Se растения, статистически не отличалась от показателя контроля. Следует отметить, что в группах животных, которым вводили суспензии лука, не регистрировали их гибели, в то время как в контрольной группе погибло одно животное. Полученные результаты показали, что ингиби-рующий эффект (определяемый как по изменению объемов опухоли, так и по снижению массы опухолей) селенобогащенных форм лука по сравнению с луком, выращенным традиционно, отсутствовал.
В наших ранних работах [27, 35] было показано, что водные и водно-спиртовые экстракты листьев шнитт-лука, полученные после фильтрации выдержанной в термостате водной или водно-спиртовой суспензии сухого растения, проявляют тенденцию к ингибированию роста подкожно перевиваемой карциномы Эрлиха (КЭ) у мышей-самцов BDF на стадии ее интенсивного развития. Изучение влияния субстанций, обогащенных стероидными гликозидами, полученных из шнитт-лука, показало, что насыщение организма мышей стероидными гликозидами до перевивки КЭ и во время роста КЭ не повлияло на резистентность организма к опухолевым клеткам, не сказалось на латентном периоде формирования опухолевых узлов и скорости роста опухоли. Тестирование в лечебном режиме выявило стимулирующий эффект спиростаноловых гли-козидов в отношении роста КЭ. В то же время при терапии фуростаноловыми гликозидами отмечалось слабое торможение роста опухолей, определяемое как по объему, так и массе опухолей [35]. Таким образом, результаты исследований показали, что суспензии листьев лука, а также полученная из него субстанция, обогащенная фуростаноловыми гликозидами, могут в определенной мере сдерживать рост перевиваемых опухолей. Результаты проведенного исследования выявили способность экстрактов лука и его селенобогащенной формы слабо усиливать резистентность организма мышей по отношению к перевиваемым опухолям КЛ.
При анализе литературных данных также прослеживается дозо-зависимый характер ингибирую-щего бластомогенез действия Se-содержащих растений, который проявлялся при скармливании животным корма, содержащего 1-3 мг Se/кг [13]. Тестируемые авторами Se-обогащенные растительные
Таблица 4
Содержание некоторых микроэлементов в листьях Allium schoenoprasum с повышенным селеновым статусом первого (числитель) и второго (знаменатель) года вегетации, мг/кг сухого вещества
Table 4
The content of some microelements in the leaves of Allium schoenoprasum with high selenium status of the first (numerator) and second (denominator) year of vegetation (mg/kg of dry matter)
Элементы Номер образца
1 2 3 4 5 6 7
Fe 770 ± 220 760 ±210 320 ± 90 340 ± 100 440 ± 120 390 ± 110 220 ± 60
64 ±18 57 ±16 71 ± 20 61± 17 64 ± 18 73 ±20 55 ±15
Al 1070 ±280 1120 ± 290 450 ±120 510 ± 130 670 ± 170 570 ± 150 320 ± 90
54 ±14 40 ±10 45 ±12 45 ±12 58 ±15 69 ±18 45 ±12
Cu 5,6 ±1,1 3,0±0,6 7,4 ±1,5 3,2 ± 0,6 4, 3 ± 0, 9 4,5 ±0,6 6,2 ± 1,2 4,0 ±0,6 5,7 ±1,1 3,0±0,6 4, 4 ± 1, 0 3,0±0,6 4,1± 0,8 2,9 ± 0,6
Zn 19 ± 4 16±3 17 ± 3 17±3 18 ± 4 17 ± 3 17 ± 3
18 ± 4 18 ± 4 24 ±5 22 ±4 16±3 17 ± 3 15 ± 3
Mn 42 ±12 36 ± 11 23 ±7 25 ± 7 26 ±8 25 ±7 19 ± 6
18 ± 6 19 ± 6 27 ±8 22 ±7 16 ± 5 18 ± 5 16 ± 5
Cr 2,5 ± 0,5 2, 7 ± 0, 5 1,45 ±0,29 1,39 ±0,28 1,7 ± 0,3 1,6±0,3 1, 20 ± 0, 24
0,29 ±0,06 0, 44 ± 0, 08 2, 4 ± 0, 5 0, 24 ± 0, 05 0, 23 ± 0, 06 0,17 ±0,03 0, 37 ± 0, 07
Ni 7,8 ± 2,7 8,1± 2,8 4,2 ±1,5 4,0 ±1,4 4,4 ±1,5 4, 8 ± 1, 7 3,7 ± 1,3
0,9 ± 0,3 1,2 ±0,4 2,3 ± 0,8 1,3 ± 0,4 0,84 ±0,29 0,83 ±0,29 1,0 ± 0,4
Pb 2,5 ± 0,6 2, 3 ± 0, 6 1,3±0,3 1,4 ± 0,3 1,3±0,3 0, 94 ± 0, 24 0, 88 ± 0, 22
0,5 0,5 0,64 ±0,18 0,5 0,5 0,5 0,5
Cd 0,14 ±0,07 0,1 0,12 ±0,06 0,1 0,1±0,06 0,13 0,12 ±0,06 0,1 0,11±0,06 0,1 0,11±0,06 0,1 0,12 ±0,06 0,1
Co 0,43 ±0,01 0,1 0, 42 ± 0, 01 0,1 0,18 ± 0,01 0,1 0, 21 ± 0, 01 0,1 0, 24 ± 0, 01 0,1 0, 22 ± 0, 01 0,1 0,15 ± 0,01 0,1
Mo 10± 4 7, 2 ± 2, 9 10±4 11±4 8±3 12±5 20 ± 8
0,38 ±0,15 0,16 ±0,06 0,55 ±0,22 0,24 ±0,10 0,13 ±0,05 0,9 ± 0,4 1,2 ± 0,5
Ba 15±4 14±4 9,6 ± 2,9 10±3 11±3 10±3 7, 2 ± 2, 2
8,0 ± 2,4 9,2 ± 2,8 12 ± 3 11±3 12 ± 4 8,2 ± 2,5 8,9 ± 2,7
V 2,1± 0,5 0,1 2,1± 0,5 0,1 0, 92 ± 0, 23 0,1 1,02 ±0,25 0,1 1,3±0,3 0,1 1,13 ±0,28 0,1 0,65 ±0,16 0,1
Sr 36 ±11 29 ± 9 28 ±8 26 ± 8 27 ±8 28 ±8 25 ±7
24 ±7 28 ±8 35 ±11 31 ± 9 27 ±8 26 ±8 28 ±8
As 0, 04 ± 0, 01 0,1 0, 31 ± 0, 01 0,1 0,15 ± 0,01 0,1 0,14 ± 0,01 0,1 0,19 ± 0,01 0,1 0,19 ± 0,01 0,1 0,12 ± 0,01 0,1
продукты - брокколи, чеснок, лук, спирулина - содержали более высокие уровни этого незаменимого микроэлемента, достигающие 28 мг/кг сухого вещества (лук) или 1 г/кг (чеснок, спирулина) [13, 19, 2123]. В нашем случае при потреблении мышами суспензии лука, содержащего Se в максимальной концентрации - 570 мкг Se/кг, поступление микроэлемента в организм мышей было существенно меньше количеств, при которых исследователи отмеча-
ли устойчивый и продолжительный противоопухолевый эффект. Можно ожидать, что при более высоких уровнях накопления Se в луке профилактическое действие растения будет более выраженным. Однако содержание Se в растении должно строго контролироваться, так как его высокие концентрации в суспензии могут вызвать отрицательный эффект. Известно, что доминирующей формой присутствия Se в растениях является аминокислота селе-
Таблица 5
Содержание макроэлементов в листьях Allium schoenoprasum с экспериментально повышенным селеновым статусом первого и второго года вегетации, мг/кг сухого вещества
Table 5
The content of mncroelements in the leaves of Allium schoenoprasum with experimentally increased selenium status of the first and second year of vegetation, mg/kg of dry matter
Номер образца Ca Mg K P S
1 9200 ± 2800 2800 ± 800 14000 ±6000 2600 ± 800 2600 ± 800
6700 ± 2000 1500 ± 400 13000 ± 5000 2900 ± 900 3600 ±1100
2 7200 ± 2200 2100 ±600 10000 ±4000 2100 ±600 1900 ± 600
7600 ± 2300 1600 ± 500 15000 ± 6000 3200 ± 1000 4300 ± 1300
3 7400 ± 2200 1800 ± 500 11000 ± 4000 2200 ± 700 2100 ±600
9700 ± 2900 1500± 400 19000 ± 8000 4300 ± 1300 5000 ± 1500
4 6900 ±2100 1900 ±600 11000 ± 4000 2200 ± 700 2700 ± 800
8600 ± 2600 1800 ± 500 16000 ± 6000 3600 ±1100 4500 ± 1400
5 7000 ±2100 2000 ± 600 11000 ± 4000 2400 ± 700 3500 ±1100
7200 ±2100 1400± 400 15000 ± 6000 2700 ± 800 3400 ± 1000
6 7400 ± 2200 2100 ±600 1100 ± 4000 2200 ± 700 2800 ± 800
7400 ± 2200 1300± 400 14000 ±5000 2900 ± 900 4000 ± 1200
7 7200 ± 2200 1700 ± 500 12000 ± 5000 2300 ± 700 3700±1100
8700 ± 2600 1300± 400 15000 ±6000 2900 ± 900 4800 ± 1400
Примечание: числитель - содержание элементов в первый год вегетации; знаменатель - содержание элементов во второй год вегетации.
Note: the numerator - the content of elements in the first year of vegetation; the denominator - the content of elements in the second year of vegetation.
Таблица 6
Содержание общего азота и азота аминокислот
в листьях Allium schoenoprasum с экспериментально повышенным содержанием селена
Table 6
The content of total nitrogen and nitrogen of amino acids in the leaves of Allium schoenoprasum with experimentally increased content of selenium
Номер образца Массовая доля общего азота в сухом веществе,% Массовая доля азота аминокислот от общего азота, %
1 1,8±0,3 56,3
2 2,2±0,4 49,2
3 2,2±0,4 50,5
4 1,9±0,3 53,2
5 1,8±0,3 48,2
6 1,9±0,3 51,6
7 1,8±0,3 47,4
нометионин. Антиканцерогенное действие селено-метионина предположительно обусловлено его способностью к ферментативному расщеплению при помощи фермента метиониназы до метилселе-нола (CH3SeH), который является критическим метаболитом, модулирующим экспрессию ряда генов,
способных вызывать задержку клеточного цикла в G1 фазе и инициировать апоптоз в опухолевых клетках [36]. Показано, что время полураспада поступившего в организм селенометионина, расходуемого на образование биологически активных соединений Se, составляет 252 дня, т.е. селеноме-тионин многократно расходуется в организме [5, 37]. Следовательно, он может накапливаться, вызывая токсикозы и другие негативные проявления. Кроме того, при наличии в луке высоких концентраций различных БАВ могут проявляться синергиче-ские эффекты.
Следует добавить, что для более полного и всестороннего изучения противоопухолевого потенциала Se-обогащенных форм лука целесообразно проведение исследований в длительных хронических экспериментах на моделях химического канцерогенеза, которые позволят выявить профилактическое действие на всех стадиях опухолевого процесса.
Заключение
Выявлены наиболее эффективные способы экспериментального повышения содержания Se в луке Allium schoenoprasum. Показано влияние неорганических форм Se на морфологические и биохимические показатели растений Allium schoenoprasum, зависящее от метода введения селената нат-
Таблица 7
Влияние суспензий селенобогащенного Allium schoenoprasum на рост перевиваемой
карциномы легких Льюиса у мышей
Table 7
The influence of suspensions of selenium-enriched Allium schoenoprasum (chive) on the growth of transplantable lung carcinoma Lewis in mice
Группа, доза вещества (дополнительное Средний объем опухоли, мм3 (cутки после перевивки опухоли) Масса опухоли, мг
поступление Se)
7 11 14 18 21 25
1 117 ± 50 2871 ± 658 3877± 948 6409 ±1735 8819±2471 7603 ± 1159
Контроль n=10 n=10 n=9 n=9 n=9 n=8
2 123± 51 2113 ± 552* 2942 ± 479* 5304±812 8580 ±1370 7250 ± 1243
СЛ 250 мг/кг м.т.ж. n=10 (-26,4 %)*** n=10 (-24,1 %) n=10 (-17,2 %) n=9 n=9 n=9
(0,02 мкг Se/кг м.т.ж.)
3 85 ± 15 2327±519 3256 ± 533 5143 ± 1249 7375 ±1236 7970 ±1021
CTISel 250 мг/кг м.т.ж. n=9 (-18,9 %) n=9 (-16 %) n=9 (-19,8 %) n=9 (-16,4 %) n=9 n=9
(0,024 мкг Se/кг м.т.ж.)
4 93 ± 53 2054 ± 437** 3144 ± 577 4411 ± 952** 7396+1821 8242 ± 890
CISe2 250 мг/кг м.т.ж. n=10 (-28,5%) n=9 (-18,9%) n=9 (-31,2%) n=9 (-16,1%) n=9 n=9
(0,1225 мкгёе/кг м.т.ж.)
Примечания: * - р<0,05; ** - р<0,01 - достоверность различия по отношению к контролю по критерию Стьюдента; ***- в скобках указан % ингибирования; СЛ - суспензия лука; СЛSe1 и СЛSe2 - суспензия лука, обогащенного Se; n - число животных; м.т.ж. - масса тела животного.
Notes: * - р<0,05; ** - р<0,01 - the accuracy of the difference relative to the control according to Student's test; ***- in brackets - % of inhibition; SC - suspension of chive; SCSel and SCSe2 - suspension of selenium-enriched chive; b.w.a. - animal body weight; n - number of animals.
рия и его концентрации: обработка семян раствором селената натрия влияла на темпы роста растений на начальных этапах онтогенеза, увеличив скорость их прорастания и всхожесть по сравнению с контролем, приводила к изменению морфологии луковиц и корней, длины листа. Определено инги-бирующее влияние избытка Se на рост растений, а также на аккумуляцию микро- и макроэлементов.
Результаты исследования действия экстрактов шнитт-лука и его селенобогащенной формы на метастазирующую эпидермоидную карциному легких Льюиса у мышей выявили способность слабо усиливать резистентность организма мышей по отношению к перевиваемым опухолям КЛ. Это требует более полного и всестороннего изучения противоопухолевого потенциала Se-обогащенных форм лука в длительных хронических экспериментах на моделях химического канцерогенеза, которые позволят установить профилактическое действие на всех стадиях опухолевого процесса.
Литература
1. Проблемы адаптации человека к экологическим и социальным условиям / Под. ред. Е.Р. Бойко. Сыктывкар - СПб., 2009. 264 с.
2. Паршукова О.И. Влияние климато-геогра-фических факторов на содержание селена в сыворотке крови жителей европейского Севера // Известия Коми НЦ УрО РАН. 2010. № 1. С. 51-53.
3. Finley J.W., Ip C., Lisk D.J. et al. Cancer-protective pro-perties of high-selenium brocco-
li // J. Agric. Food Chem. 2001. Vol. 49. P. 2679-2683.
4. Whanger P.D. Selenocompounds in plants and animals and their biological significance // Journal of the American College of Nutrition. 2002. Vol. 21. N. 3. P. 223-232.
5. Голубкина НА, Папазян Т.Т. Селен в питании. Растения, животные, человек. М.: Печатный город, 2006. 255 с.
6. Ширшова Т.И., Голубкина НА, Бешлей И.В., Матистов Н.В. Селенодефицит и возможности его сокращения. Аккумулирующие свойства некоторых представителей рода Allium L. по отношению к селену//Известия Коми НЦ УрО РАН. 2011. №3(7). С. 48-54.
7. Tache S., Ladam A., Corpet D.E. Chemopre-vention of abberant crypt foci in the colon of rats by dietary onion // Eur. J. Cancer. 2007. Vol. 43. N. 2. P. 454-458.
8. Galeone C., Pelucchi C, Dal Maso L. et al. Allium vegetables intake and endometrial cancer risk // Public Health Nutr. 2009. Vol. 12. N. 9. P.1576-1579.
9. Lazarevic K., Nagorni A., Rancic N. et al. Dietary factors and gastric cancer risk: hospital-based case control study // J. Buon. 2010. Vol. 15. N. 1. P. 89-93.
10. Viry E., Anwar A., Kirsch G. et al. Antiproliferative effect of natural tetrasulfides in human breast cancer cells is mediated through the inhibition of the cell division cycle 25 phosphatases // Int. J. Oncol. 2011. Vol. 38. N. 4. P. 1103-1111.
11. Дейнеко Г.И. Липиды, жирные кислоты и углеводы видов Allium L. // Раст. ресурсы. 1985. Т. 21. Вып. 2. С. 221-229.
12. Tim^ G, Mitaine-Offer A.-C., Miyamoto T. et al. Structure and cytotoxicity of steroidal glycosides from Allium schoeno-prasum // Phyto-chem. 2013. Vol. 88. P. 61-66.
13. Экспериментальное изучение профилактических свойств обогащенных селеном растительных продуктов на модели перевиваемых опухолей у мышей / В.П. Дерягина, Н.И. Рыжова Н.А. Голубкина, Е.Е. Антошина, Т.Г. Горькова// Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2011. № 9. С. 49-55.
14. Combs G.F., Gray W.P. Chemopreventive agents: selenium // Pharmacol. Ther. 1998. Vol. 79. P. 179-192.
15. Brozmanova J. Selenium and Cancer: from Prevention to Treatment // Clin. Oncol. 2011. Vol. 24. N. 3. P. 171-179.
16. Vinceti M, Dennert G., Crespi C.M. et al. Selenium for preventing cancer // Cochrane Database Syst. Rev. 2014. Vol. 30. N 3.
17. Гмошинский И.В., Мазо В.К. Селен в питании: краткий обзор // Medicina Altera. 1999. № 4. С. 18-22.
18. Hatfield D.L., Tsuji PA., Carlson BA, Glady-shev V.N. Selenium and selenocysteine: roles in cancer, health, and development // Trends Biochem. Sci. 2014. Vol. 39. N.3. P. 112-120.
19. Ip C, Lisk D.J. Efficacy of cancer prevention by high-selenium garlic is primary dependent on the action of selenium // Cancer. 1995. Vol. 16. P. 2649-2652.
20. Harrison P.R., Lanfear J., Wu L. et al. Mechanisms of chemoprevention and growth inhibition by selenium compounds // Selenium in Biology and Medicine: Proc. of the 6th Intern. Symp. New York: Van Nost-rand Reinhold, 1996. P. 74-82.
21. Ip C. Lessons from basic research in selenium and cancer prevention // J. Nutr. 1998. Vol. 128. N. 11. P.1845-1854.
22. Davis C.D., Zheng H, Finley J.W. Selenium-enriched broccoli decreases intestinal tumori-genesis in multiple intestinal neoplasia mice // J. Nutr. 2002. Vol. 132, N. 2. P. 307-309.
23. El-Bayomy K., Sinha R., Pinto J.T., Rivlin R.S. Cancer chemoprevention by garlic and garlic-containing sulfur and selenium compounds // J. Nutr. 2006. Vol. 136. N. 3. P. 864-869.
24. Николаева М.Г., Лязгунова И.В., Поздова Л.М. Биология семян. СПб.: НИИ химии СПбГУ, 1999. 233 с.
25. Методические указания. Методика выполнения измерений массовой доли кислото-растворимых форм металлов (меди, свинца, цинка, никеля, кадмия) в пробах почвы атомно-абсорбционным анализом. М., 1990. (Государственный комитет СССР по гидрометеорологии, РД 52.18.191-89).
26. Alfthan G.V. A micromethod for the determination of selenium in tissues and biological fluids by single-test-tube fluorimetry // Anal. Chim. Acta. 1984. Vol. 165. P. 187-194.
27. Изучение химического состава листьев A. schoenoprasum L. и ингибирующего действия их экстрактов на опухолевый рост у мышей/ Т.И.Ширшова, И.В.Бешлей, В.П.Дерягина, Н.И.Рыжова, Н.В.Матистов // Хим.-фарм. журн. 2012. Т. 46. № 11. С. 30-33.
28. Трещалина Е.М., Жукова О.С., Герасимова Г.К. и др. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: Медицина, 2005. С. 637-651.
29. Биологически активные соединения овощей/ Н.А.Голубкина, С.М.Сирота, В.Ф.Пивоваров, А.Я.Яшин, Я.И.Яшин М.: ВНИИССОК, 2010. 200 с.
30. Битюцкий Н.П. Микроэлементы высших растений. СПб.: Изд-во С.-Петерб. ун-та, 2011. 368 с.
31. Rani N, Dhillon K.S., Dhillon S.K. Critical levels of selenium in different crops grown in an alkaline silty loam soil treated with sele-nite-Se // Plant Soil. 2005. Vol. 277. P. 367374.
32. Dhillon S.K., Dhillon K.S. Pools of selenium in some Indian soils at field capacity and submerged moisture regimes // Aust. J. Soil Res. 2004. Vol. 42. P. 247-257.
33. Wu L., Huang Z.Z., Burau R.G. Selenium accumulation and selenium-salt co-tolerance in five grass species // Crop Sci. 1988. Vol. 28. P. 517-522.
34. Aspila P. The history of selenium supplemented fertilization in Finland // Twenty years of selenium fertilization: Proceedings of workshop. Helsinki, 2005. P. 8-13.
35. Ширшова Т.И., Бешлей И.В., Дерягина В.П., Рыжова Н.И. Компонентный состав стероидных гликозидов, выделенных из соплодий Allium schoenoprasum L., и оценка их влияния на рост перевиваемых опухолей у мышей // Хим.-фарм. журн. 2014. Т. 48. № 5. С. 28-31
36. Zeng H, Briske-Anderson M, Wu M, Moyer M.P. Methylselenol, a selenium metabolite, plays common and different roles in cancerous colon HCT116 cell and noncancerous NCM460 colon cell proliferation // Nutrition and Cancer. 2012. Vol. 64. P. 128-135.
37. Swanson CA., Patterson B.H., Levander OA., Vellon C.Z. (75Se)selenium amino acids meta-bolism//Biofactors. 1991. Vol.10. Р. 257-262.
References
1. Problemy adaptatsii cheloveka k ekologiche-skim i sotsial'nym usloviyam [The problems of human adaptation to environmental and social conditions]/ Ed. E.R.Boyko. Syktyvkar-St.Petersburg, 2009. 264 p.
2. Parshukova ОЛ. Vliyanie klimato-geografiche-skikh faktorov na soderzhanie selena v sy-vorotke krovi zhiteley Evropeyskogo Severa [Influence of climatic and geographical factors on the selenium content in the blood serum of inhabitants of the European North] // Proc. of Komi Sci. Centre, Ural Branch, RAS. 2010. № 1. P. 51-53.
3. Finley J.W., Ip C., Lisk D.J. et al. Cancer-protective properties of high-selenium broccoli // J. Agric. Food Chem. 2001. Vol. 49. P. 2679-2683.
4. Whanger P.D. Selenocompounds in plants and animals and their biological significance // J. of American College of Nutrition. 2002. Vol. 21. No. 3. P. 223-232.
5. Golubkina NA., Papazyan T.T. Selen v pitanii. Rasteniya, zhivotnye, chelovek [Selenium in the diet. Plants, animals, people]. Moscow: Pechatntiy gorod, 2006. 255 p.
6. Shirshova T.I., Golubkina NA., Beshley I.V., Matistov N.V. Selenodefitsit i vozmozhosti ego sokrashcheniya. Akkumuliruyushchie svoystva nekotorykh predstaviteley roda Allium L. po otnoshetiyu k selenu [Selenium deficiency and possibilities of its reduction. Accumulating properties of some members of Allium L. genus in relation to selenium] // Proc. of Komi Sci. Centre, Ural Branch, RAS. 2011. № 3 (7). P. 48-54.
7. Tache S., Ladam A., Corpet D.E. Chemopre-vention of abberant crypt foci in the colon of rats by dietary onion // Eur. J. Cancer. 2007. Vol. 43. No. 2. P. 454-458.
8. Galeone C., Pelucchi C, Dal Maso L. et al. Allium vegetables intake and endometrial cancer risk // Public Health Nutr. 2009. Vol. 12. No. 9. P. 1576-1579.
9. Lazarevic K., Nagorni A., Rancic N. et al. Dietary factors and gastric cancer risk: hospital-based case control study // J. Buon. 2010. Vol. 15. No. 1. P. 89-93.
10. Viry E., Anwar A., Kirsch G. et al. Antiproliferative effect of natural tetrasulfides in human breast cancer cells is mediated through the inhibition of the cell division cycle 25 phosphatases // Int. J. Oncol. 2011. Vol. 38, No. 4. P. 1103-1111.
11. Deyneko G.I. Lipiny, zhirnie kisloty i uglevody vidov Allium L. [Lipids, fatty acids and carbohydrates of Allium L. species] // Rast. resursy [Plant resources]. 1985. Vol. 21. Issue 2. P. 221-229.
12. Timitu G, Mitaine-Offer A.-C., Miyamoto T. et al. Structure and cytotoxicity of steroidal glycosides from Allium schoeno-prasum//Phy-tochem. 2013. Vol. 88. P. 61-66.
13. Eksperimental'noe izuchenie profilaktiche-skikh svoystv obogashchennikh selenom rasti-tel'nikh produktov na modeli perevivaemykh opukholey u myshey [Experimental study of the prophylactic properties of selenium-enriched plant foods on the model of transplantable tumors in mice] / V.P.Deryagina, N.I.Ryzhova, NA.Golubkina, E.EAntoshyna, T.G.Gor'kova. // Voprosy biologicheskoy, mi-ditsinskoy i farmatsevticheskoy khimii [Questions of biological, medical and pharmaceutical chemistry]. 2011. № 9. P. 49-55.
14. Combs G.F. Gray W.P. Chemopreventive agents: selenium // Pharmacol. Ther. 1998. Vol. 79. P. 179-192.
15. Brozmanova J. Selenium and Cancer: from Prevention to Treatment // Clin Oncol. 2011.
Vol. 24. No. 3. P. 171-179.
16. Vinceti M, Dennert G., Crespi C.M. et al. Selenium for preventing cancer // Cochrane Database Syst. Rev. 2014. Vol. 30. No. 3.
17. Gmoshinsky I.V., Mazo V.K. Selen v pitanii: kratkiy obzor [Selenium in nutrition: an overview] // Medicina Altera. 1999. № 4. P. 18-22.
18. Hatfield D.L., Tsuji PA, Carlson BA, Gla-dyshev V.N. Selenium and selenocysteine: roles in cancer, health, and development // Trends Biochem. Sci. 2014. Vol.39. No. 3. P. 112120.
19. Ip C., Lisk D.J. Efficacy of cancer prevention by high-selenium garlic is primary dependent on the action of selenium // Cancer. 1995. Vol. 16. P. 2649-2652.
20. Harrison P.R., Lanfear J., Wu L. et al. Mechanisms of chemoprevention and growth inhibition by selenium compounds // Selenium in Biology and Medicine: Proc. of the 6th Intern. Symp. New York: Van Nostrand Reinhold, 1996. P. 74-82.
21. Ip C. Lessons from basic research in selenium and cancer prevention // J. Nutr. 1998. Vol. 128. No. 11. P.1845-1854.
22. Davis C.D., Zheng H., Finley J.W. Selenium-enriched broccoli decreases intestinal tumori-genesis in multiple intestinal neoplasia mice // J. Nutr. 2002. Vol. 132. No. 2. P. 307309.
23. El-Bayomy K., Sinha R, Pinto J.T., Rivlin R.S. Cancer chemoprevention by garlic and garlic-containing sulfur and selenium compounds // J. Nutr. 2006. Vol. 136. No. 3. P. 864-869.
24. Nikolaeva M.G., Lyazgunova I.V., Pozdova L.M. Biologiya semyan [Seeds Biology]. St.Petersburg: NII khimii SPbGU [Res.Inst. of Chemistry, St.Petersburg State Univ.], 1999. 233 p.
25. Metodicheskie ukazaniya. Metodika vypolne-niya izmereniy massovoy doli kislotorast-vorimykh form metallov (medi, svintsa, tsin-ka, nikelya, kadmiya) v probakh pochvy atom-no-absobtsionnym analizom [Methodical instructions. Methods of measurement perfoma-nce of the mass fraction of acid-soluble forms of metals (copper, lead, zinc, nickel, cadmium) in soil samples by atomic absorption analysis. Moscow, 1990. (Gosudarstvenniy komitet SSSR po gidrometeorolodii [USSR State Committee for Hydrometeorology], RD 52.18.19189).
26. Alfthan G.V. A micromethod for the determination of selenium in tissues and biological fluids by single-test-tube fluorimetry // Anal. Chim. Acta. 1984. Vol. 165. P. 187-194.
27. Izuchenie khimi-cheskogo sostava list'ev A. schoenoprasum i ingibiruyushchego deystviya ikh ekstraktov na opukholevyy rost u myshey [Chemical composition of A. schoenoprasum leaves and inhibitory effect of their extract on tumor growth in mice] / T.I.Shirshova, I.V.Beshley, V.P.Deryagina, N.I.Ryzhova, N.VMa-tistov. // Khim.-farm. zhurn. [Pharm. Chem. J]. 2012. Vol. 46. № 11. P. 30-33.
34. Aspila P. The history of selenium supplemented fertilization in Finland // Twenty years of selenium fertilization: Proc. of workshop. Helsinki, 2005. P. 8-13.
35. Shirshova T.I., Beshley I.V., Deryagina V.P., Ryzhova N.I. Komponentnyy sostav steroid-nykh glikozidov, vydelennikh iz soplodiy Allium schoenoprasum L., i otsenka ikh vliya-niya na rost perevivaemykh opukholey u my-shey [The component composition of steroid glycosides extracted from the fruits of Allium schoenoprasum L. and assessment of their effects on the growth of transplanted tumors in mice] // Khim.-farm. zhurn. [Pharm. Chem. J]. 2014. Vol. 48. № 5. P. 28-31.
36. Zeng H, Briske-Anderson M, Wu M, Moyer M.P. Methylselenol, a selenium metabolite, plays common and different roles in cancerous colon HCT116 cell and noncancerous NCM460 colon cell proliferation // Nutrition and Cancer. 2012. Vol. 64. P. 128-135.
37. Swanson CA., Patterson B.H., Levander OA., Vellon C.Z. (75Se)selenium amino acids metabolism // Biofactors. 1991. Vol. 10. Р. 257262.
Статья поступила в редакцию 27.09.2016. P. 517-522.
28. Treshchalina E.M., Zhukova O.S., Gerasimova G.K. et al. Rukovodstvo po eksperimental'-nomu (doklinicheskomu) izucheniyu novykh farma-kologicheskikh veshchestv [Manual on experimental (preclinical) study of new pharmacological substances]. Moscow: Meditsina [Medicine], 2005. P. 637-651.
29. Biologicheski aktivnye soedineniya ovoshchey [Biologically active compounds of vegetables] / NA. Golubkina, S.M. Sirota, V.F. Pivovarov, AYa.Yashin, Ya.I.Yashin. Moscow: VNIISSOK, 2010. 200 p.
30. Bityutsky N.P. Mikroelementy vysshikh ras-teniy [Microelements of higher plants]. St.Pe-tersburg.: St.Petersburg State Univ. Publ., 2011. 368 p.
31. Rani N, Dhillon K.S., Dhillon S.K. Critical levels of selenium in different crops grown in an alkaline silty loam soil treated with sele-nite-Se // Plant Soil. 2005. Vol. 277. P. 367374.
32. Dhillon S.K., Dhillon K.S. Pools of selenium in some Indian soils at field capacity and submerged moisture regimes // Aust. J. Soil Res. 2004. Vol. 42. P. 247-257.
33. Wu L., Huang Z.Z., Burau R.G. Selenium accumulation and selenium-salt co-tolerance in five grass species // Crop Sci. 1988. Vol. 28.
