CC BY
12
2022. Vol. 24. № 7
medical & pharmaceutical
JOURNAL "PULSE"
https://clinical-journaL ru E-ISSN 2686-6838
©
RESEARCH ARTICLE 3. Medical sciences УДК 611.061
Corresponding Author: Dyatlova Larisa Ivanovna - Doctor of Medical Sciences, Professor of the Department of Obstetrics and Gynecology, PIOO VO "Medical University" REAVIZ ", Saratov, Russian Federation, E-mail: [email protected]
© Dyatlova L.I., Glukhova T.N. - 2G22
I Accepted: 05.07.2022
Http://dx.doi.org/1G.26787/nydha-2686-6838-2G22-24-7-1G6-111
МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ НЕСОСТОЯТЕЛЬНОСТИ ПЛОДНЫХ ОБОЛОЧЕК ПРИ НЕДОНОШЕННОЙ БЕРЕМЕННОСТИ ПО ДАННЫМ СКАНИРУЮЩЕЙ ЭЛЕКТРОННОЙ МИКРОСКОПИИ
Дятлова1 Л.И., Глухова2 Т.Н.
1 ЧУОО ВО «Медицинский университет «РЕАВИЗ», г. Саратов, Российская Федерация
2ФГБОУ ВО «Саратовский государственный медицинский университет им. В.И. Разумовского», г. Саратов, Российская Федерация
Аннотация. В настоящее время одной из наиболее значимых патологий в акушерской практике является дородовое излитие околоплодных вод при недоношенной беременности, которое более чем в 50% наблюдений предшествует преждевременному прерыванию беременности. Данное исследование посвящено изучению морфологических основ формирования несостоятельности плодных оболочек при недоношенной беременности. С помощью сканирующего электронного микроскопа Hitachi S-4500 при увеличении в 130 и 900 раз изучена ультраструктура двух плодных мембран (гладкого хориона и амниона) при физиологически протекающей гестации и при беременности, осложненной преждевременным разрывом плодных оболочек при длительности безводного промежутки не более 6 часов и отсутствии клинических и лабораторных признаков воспалительного процесса. Забор материала производили в ходе операции кесарева сечения. Образцы ткани размерами 1-4 мм были окрашены по методу Крановского. Установлено, что при физиологически протекающей беременности внешний слой амниона представлен кубическим эпителием, имеющим на апикальной части щеточную кайму звездчатой формы. Клетки амниона плотно прилегают друг к другу. Внутренний слой амниона представлен мезенхимальным эпителием. Изучение ультраструктуры гладкого хориона при физиологически протекающей беременности показало, что его наружная поверхность, соприкасающаяся с децидуальной оболочкой, состоит из плотно контактирующих клеток, имеющих микроворсинки звездчатой формы. Внутренняя поверхность гладкого хориона, прилегающая к амниону, представлена губчатой тканью. Исследование ультраструктуры плодных оболочек при недоношенной беременности, осложненной дородовым излитием околоплодных вод, позволило установить, что морфологической основой несостоятельности плодных мембран является повреждение щеточной каймы амниотического эпителия и увеличение межклеточных щелей в амниотической оболочке, что свидетельствует о неполноценности плодных оболочек уже на этапе их формирования.
Ключевые слова: ультраструктура, амнион, гладкий хорион, недоношенная беременность, преждевременный разрыв плодных оболочек.
MORPHOLOGICAL ASPECTS OF FETAL MEMBRANE DAMAGE IN MISCARRIGE OF PREGNANCY BY RESULTS OF SCANNING ELECTRONIC MICROSCOPY
Dyatlova1 L.I., Glukhova2 T.N.
'Medical University "REAVIZ", Saratov, Russian Federation
2Saratov State Medical University V.I. Razumovsky, Saratov, Russian Federation
Abstract. Currently, one of the most significant pathologies in obstetric practice is rupture of amniotic fluid in preterm pregnancy, which in more than 50% of cases precedes premature termination of pregnancy. This study is devoted to the study of the morphological foundations of the formation of insolvency of the membranes in preterm pregnancy. Using a Hitachi S-4500 scanning electron microscope at a magnification of 130 and 900 times, the ultrastructure of two fetal membranes (smooth chorion and amnion) was studied during physiological gestation and during pregnancy complicated by premature rupture of the fetal membranes with an anhydrous interval of not more than 6 hours and the absence of clinical and laboratory signs of the inflammatory process. The material was taken during a caesarean section. Tissue samples with dimensions of 1-4 mm are stained according to the Kranovsky method. It has been established that during a physiologically proceeding pregnancy, the outer layer of the amnion is represented by a cubic epithelium, which has a brush border on the apical part of the stellate shape. Amnion cells are tightly adjacent to each other. The inner layer of the amnion is represented by mesenchymal epithelium. The study of the ultrastructure of the smooth chorion during physiological pregnancy showed that its outer surface, in contact with the decidua, consists of tightly contacting cells with stellate microvilli. The inner surface of the smooth chorion, adjacent to the amnion, is represented by spongy tissue. The study of the ultrastructure of the fetal membranes during preterm pregnancy, complicated by prenatal rupture of amniotic fluid, made it possible to establish that the morphological basis of the failure of the fetal membranes is damage to the brush border of the amniotic epithelium and an increase in intercellular gaps in the amniotic membrane, which indicates the inferiority of the fetal membranes already at the stage of their formation.
Включен в Перечень ведущих рецензируемых научных журналов и изданий ВАК при Министерстве образования и науки Российской Федерации
hllps: clinical-journal. ru
E-ISSN 2686-6838
Key words: ultrastructure, amnion, chorion, premature pregnancy, premature rupture of membranes.
Введение. Дородовое излитие околоплодных вод при недоношенной гестации является одной из частых причин преждевременного завершения беременности, рождения ребенка с признаками морфофункциональной незрелости [1,2, 3].
По данным современной литературы наиболее значимым фактором формирования несостоятельности плодных оболочек при недоношенной беременности является влияние инфекционных агентов. Так, к лидирующим факторам относят восходящее инфицирование околоплодных мембран, внутриматочную инфекцию. Согласно другой точки зрения, к инициирующим механизмам повреждения плодных оболочек следует отнести аутоиммунные процессы в фетоплацентарном комплексе или генитальном тракте.
Существуют представления о значимости генетически обусловленной деградации матрикса различных типов коллагенов, входящих в состав околоплодных мембран. В тоже время ряд авторов утверждают, что повреждение коллагенов плодных оболочек связано с приобретенной активацией матриксных металлопротеиназ, обусловленной оксидантным стрессом или воспалительным процессом различной локализации [4,5,6].
Таким образом, отсутствие
унифицированных представлений о типовых молекулярно-клеточных механизмах
дестабилизации околоплодных мембран при недоношенной беременности требует дальнейшего изучения этиологических факторов, факторов риска и углубления современных представлений о патогенезе функциональных и метаболических расстройств в системе «мать-плацента-плод» при указанной патологии гестации.
В связи с вышеизложенным представляло интерес изучить морфологическую основу несостоятельности околоплодных мембран при недоношенной беременности на клеточном уровне с использованием сканирующего электронного микроскопа, позволяющего определить
микроструктуру исследуемого образца.
Цель настоящего исследования: определить значимость изменений ультраструктуры
околоплодных мембран как фактора риска невынашивания беременности, обусловленного дородовым излитием околоплодных вод.
Материалы и методы. Проведено изучение структуры амниона и гладкого хориона путем исследования образцов ткани размерами 1-4 мм у 20 пациенток со сроками гестации 28-34 недели при преждевременном излитии околоплодных вод, с длительностью безводного промежутка менее 6 часов и отсутствием клинических и лабораторных
признаков воспалительного процесса (основная группа). Забор материала производили в ходе операции кесарева сечения.
В качестве сопоставления аналогичные экстраэмбриональные структуры были исследованы у 20 пациенток с физиологически протекающей гестацией (группа сравнения). Полученные образцы были фиксированы в среде Крановского и изучены с помощью сканирующего электронного микроскопа Hitachi S-4500 при увеличении в 130 и 900 раз.
Результаты и обсуждение. Плодные оболочки выполняют не только роль барьера между матерью и плодом, но и обладают многогранными функциями, в том числе обеспечивают дыхательную, трофическую, защитную, выделительную функции. В тоже время амниотический эпителий участвует в экскреции и метаболизме околоплодных вод, поддерживает постоянное значение pH -7,1.
Как известно, плодные оболочки состоят из амниона и гладкого хориона. В свою очередь амнион включает наружный и внутренний слои, которые разделены базальной мембраной. Внутренний слой амниотической мембраны, обращенный к базальной мембране - губчатый, состоит из мезенхимальных фибробластов, в состав которых входит коллаген I, II и V типов. Указанный слой прочно соединен посредством базальной мембраны с тканью гладкого хориона [1,3].
Основной составляющей базальной мембраны является коллаген IV типа, являющийся каркасом амниотической оболочки. Особенностью этого слоя является присутствие гепаринсульфатов, препятствующих миграции крупных молекул амниотической жидкости [2,5].
Наружный слой амниона представлен кубическим эпителием, на апикальной поверхности которого находится щеточная кайма [1,11]. Щеточная кайма является продуцентом целого ряда биологически активных субстанций. Однако можно предположить значимость ее в обеспечении контакта между различными оболочками. В состав амниотического эпителия входят фосфорные соединения, протеины, мукополисахариды, липиды, ферменты [6,13]. К свойствам амниотического эпителия следует отнести участие в иммунологических реакциях, метаболизме околоплодных вод, поддержании постоянного рН амниотической жидкости, гомеостазе плода [8].
При исследовании амниона при физиологически протекающей беременности установлено, что толщина данной оболочки находится в пределах 0,2-05 мм, амнион имеет эластичную структуру.
2022. Vol. 24. № 7
Issue doi: 10.26787/nydha-2686-6838-2022-24-7
E-ISSN 2686-6838
внешняя поверхность амниона при физиологически протекающей
Рис.^ (х900) беременности.
Рис.1Ь (*900) - амнион, обращенный к хориальной пластинке при физиологически протекающей беременности.
Fig.1a (x900) - the outer surface of the amnion during a physiological pregnancy. Fig. 1b (*900) - amnion facing the chorionic plate during a physiological pregnancy.
Внешняя поверхность амниона однородная, для нее характерна складчатость (рис.^). Вероятно, склачатость свидетельствует о возможности менять объемы плодного пузыря в зависимости от количества околоплодных вод. Немаловажное значение для прочности плодных оболочек имеет плотный контакт между клетками кубического эпителия. Так, на снимке 1а видно, что межклеточные щели практически отсутствуют. В тоже время возникающие дефекты заполняются выростами близлежащих клеток (рис.1а).
Как указывалось ранее, кубический эпителий амниона имеет выросты, которые формируют щеточную кайму. Установлено, что посредством щеточной каймы осуществляется экскрекция иммуноглобулинов, аминокислот, глюкозы, железа, витамина В12, трансферрина, ферритина, фолатов, кальция, липопротеинов, кортикостерона [9]. Таким образом, выраженность щеточной каймы свидетельствует о ее важности в гомеостазе околоплодных вод и плода.
Высокая разрешающая способность сканирующего электронного микроскопа Hitachi S-4500 позволила установить, что щеточная кайма на апикальной поверхности амниотического эпителия имет звезчатую форму (рис. 1a). Возможно предположить, что звезчатая форма щеточной каймы позволяет осуществлять контакт с клеточным составом околоплодных вод.
Далее был исследован внутренний слой амниона, прилегающий к гладкому хориону.
Последний визуализировался как губчатая ткань (рис.1Ь). Губчатая ткань представлена в основном малодифференцированными фибробластами,
которые продуцируют преимущественно гликозаминогликаны, которые являются составляющими межклеточного матрикса и участвуют в образовании и поддержании формы клеток. Такого вида губчатая ткань, или рыхлая соединительная ткань, характерна в основном для эмбриональных структур. Губчатая ткань посредством коллагеновых нитей, которые, собственно, и формируют базальную мембрану, крепится к гладкому хориону. Связь между двумя оболочками (амнионом и гладким хорионом) непрочная. В результате они достаточно легко разделяются, при этом базальная мембрана разрывается. Поэтому базальную мембрану при разделении оболочек исследовать не представляется возможным.
При изучении амниотической оболочки у беременных основной группы установлено, что несостоятельность плодных оболочек
характеризуется более выраженной скадчатостью, увеличением межклеточных щелей, что свидетельствует о деградации клеточных мембран. Крайне важным является обнаруженное повреждение щеточной каймы (рис.2а). Деструкция щеточной каймы, безусловно, является одним из патогенетических факторов формирования несостоятельности плодных оболочек и нарушения их функций.
E-ISSN 2686-6838
Рис.2 a (*900) - внешняя поверхность амниона при недоношенной беременности, вскоре после отхождения околоплодных вод.
Рис.2Ь (*900) - амнион, обращенный к хориальной пластинке при недоношенной беременности, вскоре после отхождения околоплодных вод.
Fig. 2 a (*900) - the outer surface of the amnion during premature pregnancy, shortly after the amniotic fluid has passed.
Fig. 2b (*900) - amnion facing the chorionic plate during premature pregnancy, shortly after amniotic fluid discharge.
В тоже время губчатый мезенхимальный слой полностью сохранил свою структуру (рис. 2b). Важность сохранения целостности
мезенхимального слоя заключается в реализации эпителиально-мезенхимального перехода
эпителиальных клеток амниона, позволяющего ускорять миграцию клеток и заживление амниона. Далее была изучена вторая плодная мембрана -гладкий хорион. Как оказалось, данная мембрана менее прозрачна и несколько толще, чем амниотическая оболочка. Прочность гладкого хориона обеспечивает коллаген III типа [8, 9]. В гладком хорионе происходит синтез хорионического гонадотропина, АКТГ, пролактина и простагландинов [10].
Изучение ультраструктуры гладкого хориона при физиологически протекающей
беременности показало
поверхность, соприкасающаяся с децидуальнои оболочкой, состоит из плотно контактирующих клеток, имеющих микроворсинки звездчатой формы (рис.За), представляющие основу щеточной каймы. Щеточная кайма хориальной пластинки обеспечивает непосредственный контакт с децидуальной оболочкой.
Особенностью данной оболочки является презентация на ней клеток материнской крови: в основном эритроцитов, в незначительном количестве лимфоцитов, единичных моноцитов, крайне низкого числа тромбоцитов. Клетки крови располагаются свободно, отсутствуют признаки сладжирования эритроцитов и тромбоцитов (рис.За). Последнее свидетельствует о возможности продукции плодными оболочками дезагрегантов, препятствующих адгезии и агрегации форменных элементов крови, прежде всего эритроцитов.
Рис. 3a (х900). Гладкий хорион, внешняя поверхность при физиологически протекающей беременности.
Рис.3Ь (х900). Внутренняя поверхность гладкого хориона при физиологически протекающей беременности.
Рис.3с (х900) - внешняя поверхность гладкого хориона при недоношенной беременности, осложненной преждевременным разрывом околоплодных мембран.
Рис. 3d (х900) - внутренняя поверхность гладкого хориона при недоношенной беременности,
осложненной преждевременным разрывом околоплодных мембран.
Fig. 3a (x900). Smooth chorion, the outer surface during a physiological pregnancy.
Fig. 3b (x900). The inner surface of a smooth chorion during a physiological pregnancy.
Fig. 3c (x900) - the outer surface of a smooth chorion in preterm pregnancy, complicated by premature
rupture of amniotic membranes.
Fig. 3d (x900) - the inner surface of the smooth chorion in preterm pregnancy, complicated by premature rupture of amniotic membranes.
I -ISSN 2686-6838
Далее исследована внутренняя поверхность гладкого хориона, прилегающая к амниону. Установлено, что она представлена губчатой тканью, на которой присутствуют сгустки фибриноида (рис. 3Ь). Как известно, фибриноид Лангханса - неклеточная фибриноподобная масса, в норме он находится на поверхности ворсин хориона со второй половины беременности. Присутствие фибриноида в мезенхимальном слое околоплодных мембран требует дальнейшего осмысления и изучения.
В последующем был исследован гладкий хорион у беременных, недоношенная беременность которых осложнилась дородовым излитием околоплодных вод. Как оказалось, структура данной оболочки не претерпела изменений по сравнению с аналогичной при физиологически протекающей беременности. Поверхность хориальной пластинки, прилегающая к эндометрию, представлена плотно прилегающими друг к другу клетками, полностью сохранена щеточная кайма. Внутренняя часть представлена губчатым мезенхимальным слоем (рис. 3 с).
При увеличении в 900 раз на внешней поверхности гладкого хориона визуализируется щеточная кайма и свободно лежащие элементы
крови (рис.3 с). Внутренний слой также представлен неизмененным мезенхимальным губчатым слоем (рис. 3 d).
Таким образом, можно утверждать, что наиболее значимые изменения ультраструктуры плодных оболочек, характеризующие
несостоятельность плодных мембран при недоношенной беременности, затрагивают прежде всего амнион.
Заключение. В результате проведенных исследований с использованием метода сканирующей электронной микроскопии установлено, что несостоятельность плодных оболочек при недоношенной беременности сопряжена с рядом морфологических изменений. Последние характеризуются повреждением щеточной каймы и увеличением межклеточных щелей в амниотической оболочке при сохранении нормальной структуры гладкого хориона. Наиболее значимым является повреждение щеточной каймы амниона, принимающей участие в создании иммунологического барьера между матерью и плодом и определяющей оптимальные реологические условия маточно-плацентарного кровотока.
REFERENCES
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИМ СПИСОК
[1]. Volkova O. V., Shakhlamova V. A., Mironova A. A. Atlas of scanning electron microscopy of cells, tissues and organs. M.: Medicine, 1987. 464 p.
[2]. Gruzdev S.A. Immuno-expression of villus chorionic markers during normal and undeveloped pregnancy with retrochorial hematoma: author. dis. ... cand. medical sciences. Ulyanovsk, 2013. 26 p.
[3]. Zabozlaev G.F. Pathomorphology of the uterus, placental bed and placenta in case of violation of labor activity specialty: author. dis. ... d-r. medical. sciences. M., 2007. 39p.
[4]. Krajushkin A.I., Bagriy E.G., Alieva E.A. Morphological features of the placenta in women with multiple births with asymptomatic bacteriuria // Volgograd Medical Journal. 2014. no. 3. P. 15-20.
[5]. Mustafina L.R., Hon E.V., Logvinov S.V. Morphological and functional characteristics of the villous chorion in early pregnancy in the presence of urogenital infection // Bulletin of Siberian medicine. 2011. no. 6. P. 19-22.
[6]. Sultangadzhieva H.G. Pathogenesis of chorionic detachment and intrauterine hematomas in early pregnancy: a review of current scientific data // Obstetrics, gynecology and reproduction. 2019. vol. 13. no. 4. P. 354 - 368.
[7]. Chereshnev V.A., Pichugova S.V., Tulakina L.G., Klein A.V., Savinova T.L., Lebedeva L.M., Beikin Ya.B. Characterization of the ultrastructure of the placenta during antenatal death of the fetus. Obstetrics // Gynecology. Reproduction. 2018. vol. 12. no. 3. P. 36-46.
[8]. Aykut V., Celik U., Celik B. The destructive effects of antibiotics on the amniotic membrane ultrastructure // Int Ophthalmol. 2019. vol. 35. no. 3. P. 381-385.
[9]. Kim T.G., Do Ki K., Lee M.K., So J.W., Chung S.K. Comparison of cytokine expression and ultrastructural alterations in fresh-frozen and dried electron beam-irradiated human amniotic membrane and chorion // Cell
[1]. Волкова О.В., Шахламова В.А., Миронова А.А. Атлас сканирующей электронной микроскопии клеток, тканей и органов. М.: Медицина, 1987. 464 с.
[2]. Груздев С.А. Иммуноэкспрессия маркеров ворсинчатого хориона при нормальной и неразвивающейся беременности с ретрохориальной гематомой: автореф. дис. ... канд. мед наук. Ульяновск, 2013. 26 с.
[3]. Забозлаев Г.Ф. Патоморфология матки, плацентарного ложа и плаценты при нарушении родовой деятельности специальность: автореф. дис. ... докт. мед. наук. Москва, 2007. 39 с.
[4]. Краюшкин А.И., Багрий Е.Г., Алиева Э.А. Морфологические особенности плацент у многорожавших женщин с бессимптомной бактериурией // Волгоградский научно-медицинский журнал. 2014. № 3. С.15-20.
[5]. Мустафина Л.Р., Хон Е.В., Логвинов С.В. Морфофункциональная характеристика ворсинчатого хориона в ранние сроки беременности при наличии урогенитальной инфекции // Бюллетень сибирской медицины. 2011. №6. С.19-22.
[6]. Султангаджиева Х.Г. Патогенез возникновения отслойки хориона и внутриматочных гематом на ранних сроках беременности: обзор современных научных данных // Акушерство, гинекология и репродукция. 2019. № 13(4). С. 354 - 368.
[7]. Черешнев В.А., Пичугова С.В., Тулакина Л.Г., Клейн А.В., Савинова Т.Л., Лебедева Л.М., Бейкин Я.Б. Характеристика ультраструктуры плаценты при антенатальной гибели плода // Акушерство. Гинекология. Репродукция. 2018. № 12(3). С. 36-46.
[8]. Aykut V., Celik U., Celik B. The destructive effects of antibiotics on the amniotic membrane ultrastructure // Int Ophthalmol. 2019 vol. 35. no. 3. P. 381-385.
E-ISSN 2686-6838
Tissue Bank. 2019. vol. 20. no. 2. P. 163-172. DOI: l<>.l<><>7/sl(>56l-<>l9-<>97-48-9. [10]. Management of preterm labor // Obstet. Gynecol. American College of Obstetricians and Gynecologists. ACOG practice bulletin no. l27. 2d2. vol. ll9. no. 6. P. 3l8-33>.
|9|. Kim T.G., Do Ki K., Lee M.K., So J.W., Chung S.K. Comparison of cytokine expression and ultrastructural alterations in fresh-frozen and dried electron beam-irradiated human amniotic membrane and chorion // Cell Tissue Bank. 2019. vol. 20. no. 2. P. 163-172. DOI: 10.1007/s10561-019-09748-9.
[10]. Management of preterm labor // Obstet. Gynecol. American College of Obstetricians and Gynecologists. ACOG practice bulletin no. 127. 2012. vol. 119. no. 6. P. 318-330.
Author Contributions. Dyatlova L.I. — research work, analysis of the results, writing the text; Glukhova T.N. — research concept and design.
Conflict of Interest Statement. The authors declare no conflict of interest. Dyatlova LI. — SPIN ID: 7517-4222; ORCID ID: 0000-0002-1965-5301 Glukhova T.N. — SPIN ID: 7576-3211; ORCID ID: 0000-0001-6062-4841
For citation: Dyatlova L.I., Glukhova T.N. MORPHOLOGICAL ASPECTS OF FETAL MEMBRANE DAMAGE IN MISCARRIGE OF PREGNANCY BY RESULTS OF SCANNING ELECTRONIC MICROSCOPY. Medical & pharmaceutical journal "Pulse". -2022;24(7):106-111. http://dx.doi.org/10.26787/nydha-2686-6838-2022-24-7-106-111.
Вклад авторов. Дятлова Л.И. — проведения исследования, анализ результатов, написание текста; Глухова Т.Н. — концепция и дизайн исследования.
Заявление о конфликте интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Дятлова Л.И. — SPIN ID: 7517-4222; ORCID ID: 0000-0002-1965-5301 Глухова Т.Н. — SPIN ID: 7576-3211; ORCID ID: 0000-0001-6062-4841
Для цитирования: Дятлова Л.И., Глухова Т.Н. МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ НЕСОСТОЯТЕЛЬНОСТИ ПЛОДНЫХ ОБОЛОЧЕК ПРИ НЕДОНОШЕННОЙ БЕРЕМЕННОСТИ ПО ДАННЫМ СКАНИРУЮЩЕЙ ЭЛЕКТРОННОЙ МИКРОСКОПИИ // Медико-фармацевтический журнал "Пульс". 2022. - Т. 24. № 7. - С. 106-111. http://dx.doi.org/10.26787/nydha-2686-6838-2022-24-7-106-111.
ьО
œ
о
и
и
G
s;
M
о
^
о
а
X
^
S
äS
ьО
а
а
о
у
G
s;
а.
о
а
з"
m
о;
œ
о
.
си
о
œ
à
.
о
m
та
G
а
о
с
о
\о
IN
à
о
о
а
G
.
си
та
^
а
G
'S
œ
ctf
^
о
M
03
Ci
N
о
S
о
LTl
^
on
vo
к
к
к
<о
Ol
г
^
Ti
G
œ
S
tj
-G
<u
s
та
œ
и
.
eu
^
о
y
G
se
a
о
Se
