CC BY
15
ЭНТЕРОСОРБЕНТЫ ДЛЯ АДСОРБЦИИ МИКОТОКСИНОВ, ИХ СРАВНИТЕЛЬНАЯ
ХАРАКТЕРИСТИКА И ВЛИЯНИЕ НА ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЕ СОСТОЯНИЕ
СУХОСТОЙНЫХ КОРОВ
Бажинская А.А., Мерзленко Р.А.
Резюме
В статье представлены результаты исследований по применению энтеросорбентов "Микофикс", "Карбосил" и "Харуфикс" сухостойным стельным коровам, их влияние на физиологическое состояние и продуктивность стельных сухостойных коров. Опыты были проведены в хозяйствах Белгородской области на коровах черно-пестрой породы. Была проведена диагностика наличия микотоксинов в рационе крупного рогатого скота. При анализе комбикормов в них обнаружено содержание нескольких микотоксинов одновременно, за время опыта была произведена оценка биохимических показателей крови у животных на рационах с добавлением различных энтеросорбентов и без них. Показано положительное влияние энтеросорбентов на биохимические показатели крови и послеродовой статус коров.
CHELATORS FOR ADSORPTION OF MYCOTOXINS, THEIR COMPARATIVE CHARACTERISTICS AND THE INFLUENCE ON THE PHYSIOLOGICAL CONDITION OF
DRY COWS
Bazhinskaya A.A., Merzlenko R.A.
Summary
The article presents the results of studies on the application of enterosorbents "Mycofix", "Carbosil" and "HaruFix+" calves and dry pregnant cows, their influence on physiological condition and productivity of pregnant dry cows and calves. Experiments were carried out in farms of the Belgorod region on calves and cows of black-and-white breed. The diagnosis of the presence of mycotoxins in the diet of cattle was carried out. In the analysis of compound feeds in them the content of several mycotoxins at the same time was found, during the experiment the growth of calves (live weight), biochemical and General clinical blood parameters in animals on diets with the addition of various enterosorbents and without them. The positive effect of enterosorbents on General clinical and biochemical parameters of blood, increase of live weight of calves and postpartum status of cows is shown.
DOI 10.31588/2413-4201-1883-238-2-25-32 УДК 616.127:547.582:599.323.4
МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ И ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МИОКАРДА КРЫС ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ
Базекин Г.В. - к.б.н., доцент, Гатиятуллин И.Р. - ассистент ФГБОУ ВО «Башкирский государственный аграрный университет»
В последние годы увеличивается число исследований, посвященных изучению влияния растительных тритерпенои-дов на организм человека и животных. К этим веществам относится и корень солодки. Из корня солодки выделено около 50 компонентов, оказывающих влияние на
организм животных и человека. Важнейшим из них является глицирризиновая кислота. Глицирризиновая кислота оказывает противовоспалительное, противоязвенное, гепатопротекторное, иммуностимулирующее, антиаритмическое действие на организм, нормализует деятельность иммунной
системы [4,5]. Однако, кардиопротектор-ные свойства глицирризиновой кислоты изучены недостаточно. Поэтому, целесообразно изучить кардиопротекторные свойства на экспериментальных животных.
Цель и задачи исследования. Изучить влияние глицирризиновой кислоты на миокард крыс с помощью иммуногисто-химических и морфометрических методов исследований.
Материал и методы исследований. При проведении опытов использовали адреналиновую модель поражения миокарда. В качестве основного изучаемого фармакологического вещества использовался основной тритерпеновый гли-козид корня солодки - глицирризиновая кислота. Эксперимент проводили на белых крысах линии Wistar, обоего пола, массой 280-350 г в возрасте от 1,5 до 2 лет. Подбор крыс производили по принципу аналогов. Нами были сформулированы 3 группы крыс по 10 в каждой: 1 группа - в течение 14 дней до однократного введения адреналина животные получали с кормом гли-цирризиновую кислоту ежедневно в дозе 50 мг/кг; 2 группа - однократное введение адреналина; 3 группа - контроль (интакт-ные). Ткани фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина. Далее, сердца крыс всех исследуемых групп нарезали поперек на 3 сектора одинаковой толщины: верхний (основание сердца), средний и нижний (верхушка сердца). Образцы тканей обезвоживали в серии спиртов возрастающей концентрации и заливали в парафин по общепринятой методике. Срезы готовили на микротоме LEICA RM 2145 (Германия), которые окрашивали гематоксилином и эозином, по Маллори. Исследование и визуализацию препаратов проводили с использованием светового микроскопа Leica DMD 108 (Германия) со специализированным программным обеспечением управления настройками и захвата изображения [6,8].
Для проведения иммуногистохими-ческих исследований использовали парафиновые срезы толщиной 4 мкм. Окраску проводили на автоматизированном стей-нере для иммуногистохимии и гибридизации in situ Leica Microsystems Bond™
(Германия). В качестве первичных поли-клональных антител применяли: ММР (цитоплазматическое окрашивание) в разведении 1:300; TIMP 2 (цитоплазматическое окрашивание) в разведении 1:300; Gata 4 (ядерное окрашивание) в разведении 1:300 (Santa Cruz Biotechnology, США). Для демаскировки использовали поликлональную непрямую стрептавидин-биотиновую систему детекции Leica BOND (Novocastra™, Германия). Оценку специфичности реакции проводили при окрашивании срезов без первых антител. После проведения иммуногистохимиче-ской реакции срезы заключали в синтетическую среду Bio Mount (Bio Optica, Италия). Подсчет клеток производили в 20-и полях зрения каждого образца (n=6) при увеличении х400. Осуществлялся подсчет позитивно окрашенных клеток против антител к ММР- 9, TIMP-2, Gata 4 в реактивных зонах[6,8].
Исследование и визуализацию препаратов проводили с использованием светового микроскопа Leica DMD 108 (Германия) со специализированным программным обеспечением управления настройками и захвата изображения.
Результаты исследований. Пато-морфологические изменения были зафиксированы в миокарде левого желудочка, преимущественно в мышечной стенке основания и средней трети сердца. В области верхушки сердца воспалительных явлений и склеротических не зафиксировано.
Подсчет клеток производили в 22-и полях зрения каждого блока каждого образца (до формирования устойчивой дисперсии) при увеличении х200. На парафиновых срезах осуществлялся подсчет площади, занимаемой коллагеновыми волокнами при окраске по Ван-Гизону в левом желудочке - в зоне наиболее подверженной патоморфологическим преобразованиям. При количественном определении степени фиброза в сердцах экспериментальных животных выявлено, что во II опытной группе, площадь разрастания коллагеновых волокон занимала 67218±19804 мкм2 В I опытной группе площадь разрастания коллагеновых волокон занимала 8019 ± 3883 мкм2 (рис. 1).
Рисунок 1 - Количественное определение степени фиброза на поперечных срезах сердца крыс через 30 дней после применения адреналиновой пробы повреждения миокарда.
Чтобы доказать кардиопротектор-ную эффективность глицирризиновой кислоты, было проведено иммуногистохими-ческое исследование с применением первичных поликлональных антител: ММР 9 (цитоплазматическое окрашивание) в разведении 1:300, TIMP 2 (цитоплазматическое окрашивание) в разведении 1:300, Gata 4 (ядерное окрашивание) в разведении 1:300 (Santa Cruz Biotechnology, США). В разновидностях заживления сердечной мышечной ткани существенную роль играет система цинкзависимых ферментов - матриксных металлопротеиназ (ММР) и их ингибиторов (Т1МР). ММPs обусловливают разрушение компонентов межклеточного матрикса, таких как компоненты базальных мембран (коллаген IV типа, ламинин, энтактин, протеогликаны и гликозаминогликаны), коллагены I, II, III типов, фибронектин, нефибриллярные коллагены, эластин и расширение зоны поражения, что связано с прогрессирова-нием коллагеногенеза.
MMP-9 проявляется различными клетками соединительной ткани: мезенхимными клетками, фибробластами, нейтрофилами, моноцитами, макрофагами, а также гладкомышечными клетками
кровеносных сосудов и самими кардиомиоцитами. TIMP-2 обладает свойствами, присущими всем TIMPs ингибирующим MMPs, формирует неко-валентные комплексы с активными ферментами. Помимо этого известна роль семейства TIMP оказывать антиапоп-тотический эффект, тем самым способствовать росту и выживаемости тканеспецифичных клеток.
Коммитированные стволовые
клетки GATA-4 проявляют раннюю кар-диомиогенную направленность и относятся к кардиомиобластической клеточной форме. В клетках, GATA-4 выполняет функцию ключевого регулятора кардиаль-ных генов, участвует в контроле сборки саркомеров в кардиомиоцитах и в их диф-ференцировке.
В контрольной группе антиген Gata 4 выявлялся в периваскулярных пространствах в составе муральных клеток. Антиген к ММР 9 определялся преимущественно в субэпикардиальном пространстве. TIMP 2 - обнаруживался в интерстиции миокарда в эндомизии, в цитоплазме гистиоцитов или фибробластов.
В I опытной группе, где применяли адреналин и глицирризиновую кислоту,
Gata 4+ клетки локализовались в субэпи-кардиальном пространстве и очагах ремо-деляции миокарда - в зонах грануляционной ткани, возле кровеносных сосудов (рис. 2). ММР 9+ клетки определялись только в субэпикардиальном пространстве, а в реактивной зоне миокарда отсутствовали. TIMP 2+ клетки выявлялись в интер-стиции миокарда в зоне ремоделяции, а
также концентрировались возле кровеносных сосудов (рис. 3).
Во II опытной группе, где применяли адреналин, Gata 4+ клетки (|) также как и в I опытной группе выявлялись в реактивной зоне. TIMP 2+ клетки выявлялись в интерстиции миокарда в зоне ремо-деляции, а также концентрировались возле кровеносных сосудов (рис. 4).
Рисунок 2 - Выявление Gata 4+ клеток в Рисунок 3 - Выявление ММР 9+
миокарде крысы I опытной группы. Непрямой клеток в субэпикардиальном пространстве иммунопероксидазный метод выявления Gata миокарда у крыс I опытной группы. 4+с докраской гематоксилином. Увел.Х200. Непрямой иммунопероксидазный метод
выявления ММР 9+с докраской гематоксилином. Увел.Х200.
Рисунок 4 - Выявление Gata 4+ клеток в Рисунок 5 - Выявление Timp-2+ клеток в
миокарде крысы II опытной группы. Не- миокарде крысы II опытной группы. Непря-
прямой иммунопероксидазный метод вы- мой иммунопероксидазный метод выявления
явления Gata 4+с докраской гематоксили- Timp-2+ с докраской гематоксилином.
ном. Увел.Х100 Увел.Х200.
ММР 9+ клетки - выявлялись в единичном количестве в зоне ремоделяции и в субэпикардиальном пространстве.
TIMP 2+ клетки выявлялись в единичных количествах в периваскулярном пространстве (|) (рис. 5).
Таблица 1 - Количественное определение антигенов в реактивных зонах миокарда
крыс - в зонах его ремоделяции / воспалении через 30 дней после начала эксперимента
Эксперимент/позитивно Gata 4+ ММР 9+ TIMP 2+
окрашенные клетки на
антигены
Контрольная группа 1,35±0,7 0,35±0,4 0,35±0,4
I опытная группа 18,05±3,05 1,05±0,8 9,65±1,1
(ГК+адреналин)
II опытная группа 19,5±2,9 1,3±1,5 0,65±0,47
(адреналин)
В I и II опытных группах по сравнению с контрольной группой выявлено увеличение Gata 4+ клеток в 13 и 14 раз соответственно, но между собой группы по данному признаку никак не отличались. Следовательно, экспрессию данного антигена в клетках стимулировало только патологическое воздействие адреналина, а наличие глицирризиновой кислоты в ткани не индуцировало клеточную регенерацию (табл. 1). В отношении численности ММР 9+ также достоверных отличий между опытными группами не выявлено, а по-сравнению с контрольной группой
отмечалось лишь небольшое
незначительное увеличение данных клеток. В данном исследовании цитокин MMP-9 практически не определялся в реактивной зоне миокарда. При исследовании Т1МР 2+ клеток выявлено, что в первой опытной группе их количество увеличивалось, по сравнению с контролем, в 27,5 раз. Во второй опытной группе численность данных клеток практически не отличалась от контрольной группы. Следовательно, глицирризиновая кислота стимулирует в миокарде экспрессию клетками Т1МР 2+ (рис. 6).
Зисунок 6 - Динамика численности антигенов в реактивных зонах миокарда крыс на фоне применения глицирризиновой кислоты
В I и II опытных группах по сравнению с контрольной группой выявлено увеличение Gata 4+ клеток в 13 и 14 раз соответственно, но между собой группы по данному признаку никак не отличались. Следовательно, экспрессию данного антигена в клетках стимулировало только патологическое воздействие адреналина, а наличие глицирризиновой кислоты в ткани не индуцировало клеточную регенерацию (таблица 1). В отношении численности ММР 9+ также достоверных отличий между опытными группами не выявлено, а по-сравнению с контрольной группой отмечалось лишь небольшое незначительное увеличение данных клеток. В данном исследовании цитокин MMP-9 практически не определялся в реактивной зоне миокарда. При исследовании TIMP 2+ клеток выявлено, что в первой опытной группе их количество увеличивалось, по сравнению с контролем, в 27,5 раз. Во второй опытной группе численность данных клеток практически не отличалась от контрольной группы. Следовательно, глицирризиновая кислота стимулирует в миокарде экспрессию клетками TIMP 2+ (рисунок 6). Высокое содержание TIMP-2 в I опытной группе указывает на гистопротекторный эффект в поврежденном миокарде, вызванный использованием глицирризиновой кислотой. Известно, что металлопротеи-назы и их ингибиторы секретируются клетками соединительной ткани, где ключевыми участниками являются, в том числе и макрофаги. Они являются полиморфной клеточной популяцией, фенотип которых определяется сигналами микроокружения. В I опытной группе после использования глицирризиновой кислоты стимулируют экспрессию TIMP-2 стро-мальными или воспалительными клетками.
В связи с этим, помимо ардиопро-текторного эффекта TIMP-2 не отрицается роль клеточного кардиомиогенеза.
Полученные данные показал, что GATA-4 обнаруживались в реактивной зоне поврежденного миокарда в обеих опытных группах, но не в контроле. Следовательно, кардиомиогенез в I опытной группе происходит за счет антиапоптоти-ческого эффекта, клеточной и внутрикле-
точной регенерации - гипертрофии кар-диомиоцитов, что гораздо предпочтительнее рубца.
Заключение. При иммуногистохи-мическом исследовании установили, что глицирризиновая кислота в миокарде крыс стимулирует повышенную экспрессию клетками тканевого ингибитора металло-протеиназы-2 (Т1МР-2), который обладая антиапоптическим эффектом, способствующим росту и выживаемости тканеспе-цифичных клеток (кардиомиоцитов), что и обеспечивает кардиопротекторный эффект.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Базекин, Г.В. Изучение токсикологических свойств лекарственных средств на основе новых производных глицирри-зиновой кислоты / Г.В. Базекин А.Ф. Исма-гилова // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. - 2012. - Т. 210. -С. 20-23.
2. Базекин, Г.В. Научно-экспериментальное обоснование применения глицир-ризиновой кислоты и её производных в ветеринарии / Г.В. Базекин, А.Ф. Исмаги-лова // БГАУ. - 2010 - 86 с.
3. Бондаренко, Д. А. Моделирование патологических состояний кожи у крыс и мышей / Д.А. Бондаренко и др. // Цитокины и воспаление. - 2010. - Т.9. - № 4. -С. 28-31.
4. Гатиятуллин, И. Р. Морфофункцио-нальная оценка миокарда крыс линии Wistar при применении глицирризиновой кислоты / И. Р. Гатиятуллин, Г. В. Базекин, И. В. Чудов // Вестник Башкирского государственного аграрного университета. -2018. - № 2 (46). - С. 66-72.
5. Лебедева, А.И. Влияние аллогенных биоматериалов на регенерацию мышечной ткани: экспериментально-морфологическое исследование: автореферат дис. ... доктора биологических наук: 06.02.01 / Лебедева Анна Ивановна // Башкир. гос. аграр. ун-т. - Уфа. - 2016. - 43 с.
6. Хисамутдинова, Р.Ю. Антиаритмическая активность комплекса лаппакони-тина с глицирризиновой кислотой (глиа-лин): автореферат дис. ... кандидата биологических наук : 14.00.25 // Волгогр. гос.
мед. ун-т. - Уфа, 2007. - 21 с.
7. Чуваев, И. В. Изучение кардиопро-текторных свойств препарата Гепакардин / И.В. Чуваев, С.В. Глотова, А.А. Кудряшов, Ю.В. Ганкина // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. - 2010. - №2. - С. 26-33.
8. Adamcovа M., Potacova A., Popelova O.et al. Cardiac remodeling and MMPs on the model chronic daunorubicin - induced cardio-
myopathy in rabbit. Physiol. Res. - 2010; 59: -P. 831-836.
9. Ito T. Effects of antiglaucoma drops on MMP and TIMP balance in conjunctival and subconjunctival tissue // Invest Ophthalmol Vis Sci. - 2006; 47: 823-830.
10. Kim W.U., Min S.Y., Cho ML. et al. Elevated matrix metalloproteinase-9 in patients with systemic sclerosis Arthritis. Res Ther. 2005; 7(1): P. 71-79.
МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ И ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МИОКАРДА КРЫС ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ
Базекин Г. В. , Гатиятуллин И. Р.
Резюме
Основной целью наших исследований явилось изучение кардиопротекторного действия глицирризиновой кислоты при экспериментальной модели поражения миокарда у крыс. Крысы I опытной группы в течение 14 дней, до введения адреналина получали с кормом глицирризиновую кислоту, ежедневно, в дозе 50 мг/кг. Крысам II опытной группы, однократно вводили адреналин. III опытная группа крыс являлась контрольной. Через 24 после введения адреналина, 5 крыс из каждой группы были декапитированы, для иммуногистохи-мических исследований был взят миокард. Иммуногистохимические исследования проводили с применением первичных поликлональных антител: ММР 9, TIMP 2, Gata 4. На парафиновых срезах осуществлялся подсчет площади, занимаемой коллагеновыми волокнами при окраске по Ван-Гизону. Подсчет клеток производили в 22-и полях зрения каждого блока каждого образца при увеличении x200. При количественном определении степени фиброза в сердцах экспериментальных животных выявлено, что во II опытной группе, площадь разрастания коллагеновых волокон занимала 67218±19804 мкм2. В I опытной группе площадь разрастания коллагеновых волокон занимала8019 ± 3883 мкм2, что в 8,4 раз меньше. При иммуногистохимическом исследовании установили, что глицирризиновая кислота в миокарде крыс стимулирует повышенную экспрессию клетками TIMP-2, который обладая антиапоптическим эффектом, способствует росту и выживаемости тканеспецифичных клеток (кардиомиоцитов), что и обеспечивает кардиопротекторный эффект.
MORPHOLOGICAL AND IMMUNOHISTOCHEMICAL CHARACTERISTICS OF RATS MYCARDUS UNDER EXPOSURE TO GLYCIRRIZIN ACID
Bazekin G.V., Gatiyatllin I.R.
Summary
The main goal of our research was to study the cardioprotective effect of glycyrrhizic acid in an experimental model of myocardial damage in rats. Rats I of the experimental group for 14 days, prior to the administration of adrenaline, received glycyrrhizic acid with the feed, daily, in a dose of 50 mg / kg. Rats II experimental group, once injected adrenaline. The III experimental group of rats was the control. After 24 after administration of adrenaline, 5 rats from each group were decapitated, myocardium was taken for immunohistochemical studies. Immunohistochemical studies were performed using primary polyclonal antibodies: ММР 9, TIMP 2, Gata 4. Paraffin sections were used to calculate the area occupied by collagen fibers during Van Gieson staining. Cell counting was carried out in 22 fields of view of each block of each sample at x 200 magnification. When quantifying the degree of fibrosis in the hearts of experimental animals, it was
found that in the second experimental group, the growth area of collagen fibers was 67218 ± 19804 mcm2. In the experimental group I, the expansion area of collagen fibers was 8019 ± 3883 mcm2, which is 8,4 times smaller. An immunohistochemical study found that glycyrrhizic acid in the rat myocardium stimulates increased expression of TIMP-2 cells, which, having an antiapoptotic effect, promotes the growth and survival of tissue-specific cells (cardiomyocytes), which ensures the cardioprotective effect.
DOI 10.31588/2413-4201-1883-238-2-32-34 УДК: 636. 082. 2
УЛУЧШЕНИЕ ПРОИЗВОДСТВЕННОГО ЦИКЛА ПРИ ОТБОРЕ САМОК ПЕСЦА НА ПЛЕМЯ С ЖЕЛАТЕЛЬНЫМИ СРОКОМ И ХАРАКТЕРОМ ЭСТРУСА
Баранов В.А. - к.в.н., доцент, *Халилова Г.Х. - магистрат, Равилов Р.Х. - д.в.н., профессор
ФГБОУ ВО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана» *ФГБОУ ВО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии -
МВА имени К.И.Скрябина»
Ключевые слова: желательный срок, звероводство, эструс, целевой отбор Keywords: desired period, fur farming, estrus, purposive selection
Разведение песцов в промышленных условиях обусловлено улучшением воспроизводительной способности животных для получения сырья в соответствии с требуемыми сроками [3,5].
Формирование племенного ядра, осуществляется для концентрации лучших зверей и получения от них молодняка с хорошей наследственностью. С целью выявления лучших зверей и проведение отбора их на ремонт племенного стада должен проводиться зоотехнический учёт и глубокая племенная работа. Важным фактором, влияющим на характер и сроки эструса потомства, является срок прихода самок в охоту, который определяет качество помёта и дальнейшее развитие щенков. Ранние сроки способствуют более продолжительному развитию щенков и получению от них шкурок больших размеров. Кроме того сроки и характер эструса, согласно литературным данным имеют свойство наследуемости. Для верного определения желательных признаков, необходимо делить самок по срокам эструса [2,6]. Сроки прихода в охоту у самок песцов подразделяют на три группы:
- статичный эструс, характеризуется наступлением охоты в одни и те же сроки в течение репродуктивной жизни самки. Отклонения от даты первого спаривания
второго периода размножения составляет ± 5 дней.
- стабильный эструс, характеризуется отклонениями на протяжении репродуктивной жизни от даты первого спаривания второго репродуктивного сезона до 10 дней в ту или иную сторону от оптимума.
- динамичному эструсу, свойственно иметь большую амплитуду вариации, от первого спаривания второго репродуктивного сезона вплоть до ± 30 дней, что является неудобным в производственных условиях, из-за невозможности планирования прихода самки в охоту.
Так же сроки определяют, как:
- ранние, в случае прихода самок в охоту до 13 марта;
- средние, которые характеризуются приходом самки в охоту до 30 марта;
- поздние сроки, в случае если самка покрывается вплоть до 10 апреля [1,4].
Материал и методы исследований. Исследования были проведены на песцовой ферме в ЗАО «Бирюли» Высокогорского района Республики Татарстан и в условиях кафедры технологии животноводства Казанской ГАВМ им. Н.Э. Баумана. Анализ данных производственной деятельности проводили за два года, по наличию документальной базы.
