CC BY
24
Репаративная регенерация мышечной ткани и структур мягкого остова
УДК 611.018.6
Э.Р. МУЛДАШЕВ1, А.И. ЛЕБЕДЕВА1, С.А. МУСЛИМОВ1, С.В. ПОПОВ2, С.А. АФАНАСЬЕВ2, Д.С. КОНДРАТЬЕВА2
1 Всероссийский центр глазной и пластической хирургии МЗ РФ, г. Уфа
2 Томский национальный исследовательский медицинский центр РАН, научно-исследовательский институт кардиологии, г. Томск
Аллогенный биоматериал - индуктор аутогенных стволовых и коммитированных клеток миокарда в ишемически поврежденном миокарде
Контактная информация:
Мулдашев Эрнст Рифгатович — доктор медицинских наук, профессор, президент «Всероссийского центра глазной и пластической хирургии» МЗ РФ
Адрес: 450075, г. Уфа, ул. Р. Зорге, д. 67/1, тел.: +7 (347) 224-68-01, e-mail: [email protected]
Стимуляция клеточного регенераторного потенциала взрослого миокарда не находит в достаточной мере отражения в практической медицине. Предлагаемые методы клеточной инженерии позволяют достичь лишь пара-кринный эффект от стволовых клеток, а не их интеграции в поврежденный миокард. Это незначительно улучшает структуру ишемически поврежденного миокарда и часто связано с осложнениями.
Цель. Выявить клеточный потенциал миокарда путем использования диспергированного аллогенного биоматериала (ДАБ), так как известно, что биоматериал «Аллоплант» улучшает структуру ишемически поврежденного миокарда.
Материал и методы. Использовали крыс-самцов породы Вистар, которым лигировали коронарную артерию. В опытной группе одновременно лигирование артерии сопровождали интрамиокардиальным введением суспензии ДАБ в бассейн стенозированой артерии, в контрольной группе вводили физиологический раствор. Использовали гистологические, иммуногистохимические, электронномикроскопические методы исследования.
Результаты. В условиях применения диспергированного аллогенного биоматериала выявлено значительное снижение зоны рубца в ишемически поврежденном миокарде. В настоящем исследовании демонстрируются стволовые клетки и их трансдифференцировка в зрелые кардиомиоциты с восстановлением межклеточных взаимодействий. Полученные нами данные указывают на их вероятную роль в клеточной регенерации, а не посредством паракринного эффекта.
Заключение. Частицы имплантированного ДАБ в ишемически поврежденный миокард являются хемоаттрак-тантом стволовых и прогениторных клеток. Продукты биодеградации трансплантата создают микроокружение в тканевом ложе, способствующее их дифференциации в кардиомиогенном направлении со всеми ультраструктурными элементами.
Ключевые слова: миокард, ишемия, аллогенной биоматериал, стволовые клетки.
DOI: 1Q.32QQQ/2Q72-17S7-2Q19-1-B9-94
(Для цитирования: Мулдашев Э.Р., Лебедева А.И., Муслимов С.А., Попов С.В., Афанасьев С.А., Кондратьева Д.С. Аллогенный биоматериал - индуктор аутогенных стволовых и коммитированных клеток миокарда в ишемически поврежденном миокарде. Практическая медицина. 2019. Том 17, № 1, C. 89-94)
E.R. MULDASHEV1, A.I. LEBEDEVA1, S.A. MUSLIMOV1, S.V. POPOV2, S.A. AFANASYEV2, D.S. KONDRATIEVA2
1Russian Eye and Plastic Surgery Center of the Russian Federation Health Ministry, Ufa, the Republic of Bashkortostan, Russian Federation
2Tomsk National Research Medical Center of the Russian Academy of Sciences, Tomsk, Russian Federation
Allogenic biomaterial - an inducer of autologous stem and committed myocardial cells in ischemic damaged myocardium
Contact details:
Muldashev E.R. — D.Sc. (medicine), Professor, President of "Russian Eye and Plastic Surgery Center" of the Ministry of Health of the Russian Federation
Address: 67/1 R. Sorge St., Ufa, the Republic of Bashkortostan, Russian Federation, 450075, tel.: +7 (347) 224-68-01, e-mail: [email protected]
Stimulation of the cell regenerative potential of an adult myocardium is not adequately reflected in practical medicine. The proposed methods of cell engineering allow to achieve only paracrine effect from stem cells, but not their integration into the damaged myocardium. This slightly improves the structure of the ischemically damaged myocardium and is often associated with complications.
Objective: to identify the cellular potential of the myocardium by using dispersed allogeneic biomaterial (DAB), because Alloplant's biomaterial is known to improve the structure of the ischemically damaged myocardium.
Material and methods. Male Wistar rats were used to ligate the coronary artery. In the experimental group, simultaneous ligation of the artery was accompanied by intramyocardial injection of DAB suspension into the stenotic artery pool, and in the control group physiological saline was injected. Histological, immunohistochemical, and electron microscopic methods of research were used.
Results. In terms of the use of dispersed allogenic biomaterial, a significant reduction in the scar area in the ischemic damaged myocardium was revealed. This study demonstrates stem cells and their transdifferentiation into mature cardiomyocytes with the restoration of cell-cell interactions. Research clearly shows their likely role in cell regeneration, and not through the paracrine effect.
Conclusion. Implanted DAB particles in ischemic damage myocard is a chemoattractant of stem and progenitor cells. The products of biodegradation of the graft create microenvironment in the tissue, which contributes to their differentiation in the cardiomyogenic direction with all ultrastructural elements.
Key words: myocardium, ischemia, allogeneic biomaterial, stem cells.
(For citation: Muldashev E.R., Lebedeva A.I., Muslimov S.A., Popov S.V., Afanasyev S.A., Kondratieva D.S. Allogenic biomaterial -an inducer of autologous stem and committed myocardial cells in ischemic damaged myocardium. Practical Medicine. 2019. Vol. 17, no. 1, P. 89-94)
Стимуляция клеточного регенераторного потенциала взрослого миокарда не находит в достаточной мере отражения в практической медицине. Предлагаемые методы клеточной инженерии позволяют достичь лишь паракринный эффект от стволовых клеток, а не от интеграции в поврежденный миокард. Что незначительно улучшает структуру ишемически поврежденного миокарда и связано с осложнениями.
Цель исследования - выявить клеточный потенциал миокарда путем использования диспергированного аллогенного биоматериала (ДАБ), так как известно, что биоматериал «Аллоплант» улучшает структуру ишемически поврежденного миокарда [1].
Материал и методы
Исследования выполнены на крысах-самцах линии Вистар массой 180-200 г. Всем животным под внутримышечным наркозом (раствор золети-ла) выполнялось лигирование r. interventricularis paraconalis a. coronarii sin. левого желудочка. Животным опытной группы (n=50) одновременно с перевязкой артерии интрамиокардиально делали инъекции 1,2 мг ДАБ суспендированного в физиологическом растворе (доза произвольная). Для настоящего исследования аллогенный биоматериал был изготовлен из сухожилий крыс и диспергирован. В контрольной группе (n=50) вводили физиологический раствор. Животных выводили из опыта путем инсуфляции летальной дозы паров эфира на 3, 7, 14, 30, 45 сутки. При работе с животными руководствовались правилами лабораторной практики в Российской Федерации и Европейской Конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей. Диспергированный аллогенный биоматериал «Аллоплант» разработан в ФГБУ «Всероссийский центр глазной и пластической хирургии» МЗ РФ
Рисунок 1
GATA-4+ клетки миокарда в периинфарктной зоне Двойное иммуногистохимическое
окрашивание клеток против антигенов c-kit+ и GATA-4+ в ишемически поврежденном миокарде крыс через 7 суток после введения ДАБ. Непрямой иммунопероксидазный метод выявления c-kit+ (коричневое цитоплазматическое окрашивание) и GATA-4+ (красное ядерное окрашивание) клеток с докраской гематоксилином Fig. 1
GATA-4 + myocardial cells in the peri-infarction zone Double immunohistochemical staining of cells against c-kit + and GATA-4 + antigens in ischemic damaged myocardium of rats 7 days after administration of DAB. Indirect immunoperoxidase method for detection of c-kit + (brown cytoplasmic staining) and GATA-4 + (red nuclear staining) of cells with hematoxylin finishing painting
г. Уфы. Биоматериал изготавливается согласно ТУ 42-2-537-87, сертифицирован и разрешен к применению приказом МЗ СССР № 87 901-87 от 22.07.1987 г. Сердца животных, выведенных из эксперимента, фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина, обезвоживали в серии спиртов возрастающей концентрации и заливали в парафин по общепринятой методике. Срезы готовили на микротоме LEICA RM 2145 (Германия), которые окрашивали гематоксилином и эозином.
Для иммуногистохимического исследования парафиновые срезы толщиной 4 мкм окрашивали с помощью иммуногистостейнера Leica Microsystems Bond™ (Германия). В качестве первых антител применяли c-kit (клон с-19) и GATA-4 (клон G-4) в разведении 1:300 (Santa Cruz Biotechnology, США). Для демаскировки использовали непрямую стреп-тавидин-биотиновую систему детекции Leica BOND (Novocastra™, Германия).
Для электронно-микроскопического исследования вырезали кусочки размером 1-2 мм3 и фиксировали в 2,5%-ном растворе глютаральдегида, приготовленного на какодилатном буфере (рН 7,2-7,4) с дофиксацией в 1%-ном растворе OsO4 на том же буфере. Материал обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации и заливали в эпон-812 по общепринятой методике. Ультратонкие срезы изучали в трансмиссионном микроскопе JEM-1011 (Jeol, Япония).
Анализ данных проводили с использованием метода двухфакторного дисперсионного анализа и применения непараметрических методов - одно-факторного дисперсионного анализа по Краскелу-Уоллесу и сравнения некоррелированных данных методом Манна-Уитни в программе Statistica 6,0.
Результаты
В опытной группе после введения ДАБ и проведения коронароокклюзии в перифокальной зоне ишемизированного миокарда выявлялись c-kit+ и GATA-4+ клетки. Причем некоторые клетки проявляли двойное фенотипирование по данным марке-
рам, что указывает на дифференциацию стволовых клеток в кардиомиогенном направлении (рис. 1).
При определении GATA-4+ клеток оказалось, что в опытной группе их численность была достоверно выше, чем в контрольной на протяжении всего периода наблюдений, и значимо зависела от сроков наблюдения как в опытной, так и в контрольной группах (ч1=75; р<0,0001 и ч1=63; р<0,0001 соответственно). К 3-м суткам GATA-4+ клеток в основной группе было больше (р<0,0001), чем в контроле (п 20/43 и п 1/31 соответственно, медианы 25 и 7 соответственно). К 7-м суткам число GATA-4+ клеток в обеих группах статистически значимо возрастало (п 49/85 и 33/56, медианы 62 и 45 соответственно, р<0,0001). В последующие сроки эксперимента в контрольной группе численность GATA-4+ клеток достоверно снижалась (п 0/1). В основной группе количество GATA-4+ клеток практически не отличалось от такового на 14-й день (р>0,63). Значительное снижение их числа (п 8/15, медиана 13) отмечено только на 30 и 45 сутки (п 19/37, медиана 23, р>0,14) (рис. 2).
Известно, что стволовые клетки миокарда присутствуют в стволовых нишах, в субэпикардиальном пространстве, не отрицается способность эпители-ально-мезенхимальных переходов, а также хемоат-тракция стволовых клеток из костного мозга [2 3, 4]. Для более достоверного определения трансдиф-ференцировки и специализации изучаемых клеток было проведено электронномикроскопическое исследование периинфарктной зоны с высокой клеточной гетероморфирией, в частности с наличием с-к^+ и GATA-4+ клеток в опытной группе.
Через 7 суток после начала эксперимента обнаруживались малодифференцированные клетки, достигающие 4-7 мкм в поперечном диаметре и 8-10 мкм в длину, овальной или округлой формы, не имеющие отростков, с гладкой цитолеммой. Ядерно-цитоплазматическое отношение равно единице. Ядра были овальной или округлой формы, содержали преимущественно эухроматин, гетерох-роматин в виде узкой полоски конденсировался
Рисунок 2
Изменения численности GATA-4+ клеток в миокарде после применения ДАБ (красный цвет) и в контроле (синий цвет). По оси абсцисс - сроки наблюдения в днях. По оси ординат - количество клеток Fig. 2
Changes in the number of GATA-4 + cells in the myocardium after the application of DAB (red) and in control (blue). Along the abscissa axis is the observation time in days. Along the ordinate axis is the number of cells
вдоль внутренней ядерной мембраны. Иногда определялось крупное ядрышко. В кариолемме наблюдались ядерные поры. Цитоплазма просветленная, богата свободными гранулами гликогена, свободными рибосомами и розетками полисом. В клетках был хорошо развит гранулярный эндоплазматиче-ский ретикулум (ГЭР) с четкими многочисленными рибосомами, фиксированными на ее мембране в большом количестве. Каналы ГЭР были удлиненные, часто резко расширены. Подобное клеточное строение обеспечивает интенсивную белоксинтети-ческую деятельность, направленную на образование клеточных органелл. В цитоплазме выявлялись тоно-, микрофиламенты, актиновые филаменты.
Наряду с клетками без четкой функциональной специализации, выявлялись малодифференци-рованные клетки коммитированные в кардиоми-огенном направлении. Помимо хорошо развитого белоксинтетического аппарата, в цитоплазме содержались полиморфные довольно крупные митохондрии с просветленным матриксом и укороченными пластинчатыми параллельно ориентированными кристами, мелкие пиноцитозные пузырьки. В пользу миогенной дифференцировки указывал факт наличия в цитоплазме как хаотично направленных, так и упорядоченных коротких фрагментов толстых мио-зиновых филаментов, на концах которых определялись гранулы гликогена. Начинали формироваться миофибриллы (рис. 3). Клетки были разрознены между собой, плотные контакты не образовывали. Между клетками обнаруживались многочисленные мелкие вакуоли. Клетки были удлиненной, вере-теновидной формы. Судя по форме и отсутствию плотных контактов, можно предположить о наличии амебоидного движения. Длинная ось вектора движения была направлена в сторону интактной зоны миокарда.
Спустя 14 суток в периинфарктой зоне миокарда Рисунок 3
Через 7 суток после введения ДБМА. Мало-дифференцированные клетки. А-стволовая клетка без ультраструктурной специализации, расширенные каналы ГЭР (ГЭР). Б-коммитированная клетка с миозиновыми филаментами Электронограмма Fig.3
7 days after injection of dispersed Alloplant biomaterial. Undifferentiated cells. A-stem cell without ultrastructural specialization, advanced gastroesophageal reflux (GER) channels. B-committed cell with myosin filaments Electron diffraction pattern
опытной группы наблюдались клетки, размер которых увеличивался и достигал 5-10 мкм в ширину и 10-15 мкм в длину. Ядра крупные, просветленные, содержали эухроматин. Кариолемма образовывала инвагинации, что значительно увеличивало площадь их поверхности. В ней обнаруживались ядерные поры. Форма клеток вытянутая, овальная. Отличительной чертой от вышеописанных клеток являлись миофибриллы в цитоплазме. Миофибрил-лы обнаруживались в виде коротких фрагментов с четко выраженной Z-линией, на концах которых определялись электронноплотные зерна гликогена. Миофибриллы располагались вдоль длинной оси клетки. Межклеточные взаимодействия осуществлялись посредством нексусов. Также в щелевид-ном пространстве наблюдались пиноцитозные пузырьки, что способствовало обмену информацией между клетками. Данные клетки можно причислить к кардиомиобластам (рис. 4).
По мере накопления сократительных элементов расстояние между кардиомиогенными клетками сокращались. Между полюсами смежных клеток обнаруживались образования в виде утолщений клеточных мембран. Начинали формироваться вставочные диски. В цитоплазме обнаруживались расширенные цистерны сети каналов саркоплазматического рети-кулума, локализованные около Z-линий. В дифференцирующихся мышечных клетках увеличивалось количество митохондрий. Они имели неправильную форму, рассеяны в клетке диффузно. Причем в периферической зоне клеток образование фибрилл сопровождалось синтезом и ростом митохондрий. Митохондрии укрупнялись, количество удлиненных параллельно ориентированных крист увеличивалось. Митохондриальный матрикс был плотный, затемненный. Клетки дифференцировались в рабочие кардиомиоциты (рис. 5).
Таким образом, после введения ДАБ в миокарде обнаруживались признаки дифференциации мало-дифференцированных клеток в кардиомиогенном направлении и восстановление межмиоцитарных взаимоотношений.
Рисунок 4
Кардиомиобласты (КМБ) и юные кардиомиоциты (ЮКМЦ). Через 14 суток после введения ДБМА. Электронограмма Fig.4
Cardiomyoblasts (CMB) and immature cardiomyocytes. 14 days after injection of dispersed Alloplant biomaterial. Electron diffraction pattern
Рисунок 5
Новообразованные рабочие кардиомиоциты. Формирование вставочных дисков. Электро-нограмма Fig. 5
Newly formed working cardiomyocytes. Formation of insert discs. Electron diffraction pattern
Выводы
C-kit антиген фактора роста стволовых клеток экспрессируется на цитоплазматической мембране гематопоэтических стволовых клеток. Стволовые клетки являются мультипотентными и могут специализироваться в различных направлениях: фибро-бластическом, адипогенном, остеогенном, миоген-ном, миокардиальном и т.д. [5, 6]. GATA 4 является маркером ранней кардиомиогенной дифференци-ровки малодифференцированных клеток и имеет ядерную локализацию [7].
Положительное фенотипирование клеток к антигенам c-kit и GATA 4 является свидетельством дифференциации стволовых клеток в кардиомиогенном направлении. Прогениторные c-kit+ клетки выявлялись по всей площади ишемически поврежденного миокарда, а c-kit+/GATA-4+ клетки обнаруживались только в периинфарктной зоне вблизи с сохранившимся миокардом. Рисунок 2 демонстрирует высокий уровень коммитированных GATA-4+ клеток по сравнению с контрольной группой, где ДАБ не применялся. Исходя из этого, можно заключить, что продукты биодеградации биоматериала не только являются хемоаттрактантом стволовых клеток, но и создают микроокружение, способствующее их дифференциации и росту.
В данной зоне обнаруживались клетки с признаками различной кардиомиогенной трансдифферен-цировки: от стволовых клеток без четкой специализации до рабочих кардиомиоцитов. Определялась хронологическая гетероморфность кардиомиоци-тов. В одном временном интервале присутствовали как молодые, так и коммитированные клетки. В связи с этим можно предположить, что скорость репликации клеток достаточно высокая.
В ранних работах показано значительное улучшение морфофункционального состояния постише-мического миокарда при использовании ДАБ за счет значительного снижения площади рубца [8, 9, 10].
Уровень цитодифференциации коррелирует с синтезом, накоплением сократительных элементов, образованием митохондрий, редукцией гликогена и рибосом. По мере формирования миофибрилл
происходило образование саркоплазматического ретикулума, что может косвенно указывать о восстановлении сократительной способности новообразованного миокарда.
Во всех случаях выявлялась связь молодых про-гениторных клеток со зрелыми кардиомиоцитами и друг другом посредством развитого везикуло-пино-цитозного аппарата. Следовательно, регуляторами дифференцировки клеток служат пептиды, микро-РНК и т.д., экспрессируемые зрелыми кардиальными клетками тканевого ложа. Восстановление межмио-цитарных связей, интеграция малодифференциро-ванных и дифференцирующихся кардиомиоцитов в единый функциональный синцитий происходило за счет последовательной организации адгезивных контактов, нексусов, плотных контактов - десмосом и вставочных дисков. Данный механизм кардиоми-огенеза характерен для раннего зародышевого периода развития [11].
Аллогенный биоматериал представляет собой децеллюляризированный межклеточный матрикс, в котором превалируют коллаген, протеогликаны, гликозаминогликаны (гиалуроновая кислота, ке-ратан- и дерматансульфат). За счет гликозамино-гликанов и протеогликанов, дефицит которых проявляется во взрослом организме, в тканевом ложе создаются условия, приближенные к онтогенетическим. Продукты биодеградации имплантированного в поврежденную ткань коллагена становятся ингибиторами миграции и коллагенсинтетической активности фибробластических клеток по типу обратной связи. Биоматериал «Аллоплант» является ингибитором фиброза при заживлении различного рода повреждений в скелетной [12], гладкой [13] и в сердечной [10] мышечных тканях. Следовательно, ДАБ способен не только привлекать стволовые клетки, но и снижать скорость коллагеногенеза, тем самым позволяя клеткам направленно дифференцироваться в тканеспецифичном направлении.
Таким образом, наши исследования показывают, что аллогенный биоматериал может использоваться для восстановления ишемически поврежденного миокарда в качестве индуктора клеточной регенерации в миокарде взрослых животных. Помимо этого, ДАБ за счет тканевой биосовместимости и в качестве стимулятора дифференциации кардиомиоцитов целесообразно использовать в виде скаф-фолда с целью инкубации мышечных клеток для клеточной терапии.
Работа выполнена в рамках государственного задания: регистрационный номер НИОКР 115040870057 от 8.04.2015 г.
Мулдашев Э.Р. - ORCID ID: 0000-0003-3834-8427 Лебедева А.И. - ORCID ID: 0000-0002-9170-2600 Муслимов С.А. - ORCID ID: 0000-0002-9076-0251 Попов С.В. - ORCID ID: 0000-0002-9050-4493 Афанасьев С.А. - ORCID ID: 0000-0001-6066-3998 Кондратьева Д.С. - ORCID ID : 0000-0002-4004-2497
ЛИТЕРАТУРА
1. Лебедева А.И., Муслимов С.А., Мусина Л.А. Морфологические аспекты регенеративного потенциала ишемически поврежденного миокарда, после применения аллогенного биоматериала // Биомедицина. - 2016. - № 2. - С. 32-43.
2. Anversa P., Kajstura J., Leri A., Bolli R. Life and death of cardiac stem cells: a paradigm shift in cardiac biology // Circulation. - 2006. -№ 113, Т. 11. - P. 1451-1463.
3. Orlic D. BM stem cells and cardiac repair: where do we stand in 2004? // Cytotherapy. - 2005. - № 7, Т. 1. - P. 3-15.
4. Kuhn E.N., Wu S.M. Origin of cardiac progenitor cells in the
developing and postnatal heart // J Cell Physiol. - 2010. - № 225, Т. 2. - P. 321-325.
5. Шахов В.П., Попов С.В. Стволовые клетки и кардиомиогенез в норме и патологии. - Томск, 2004. - Р. 4-38.
6. Van Berlo J.H., Kanisicak O., Maillet M. et al. C-kit+ cells minimally contribute cardiomyocytes to the heart // Nature. - 2014. -№ 509. - Р. 337-341. D0I:10.1038/nature13309.
7. Black B.L. and Cripps R.M. Myocyte enhancer factor 2 transcription factors in heart development and disease. In «Heart Development and Regeneration» (N. Rosenthal and R.P. Harvey, eds.). - 2010. - Р. 673-699.
8. Афанасьев С.А., Кондратьева Д.С., Лебедева А.И., Муслимов С.А., Попов С.В. Функциональное состояние миокарда после использования аллогенного бесклеточного материала для стимуляции его регенаративных возможностей при экспериментальном инфаркте // Российский кардиологический журнал. - 2018. -№ 3, Т. 155. - С. 71-75. http://dx.doi.org/10.15829/1560-4071-2018-3-71-75
9. Лебедева А.И., Муслимов С.А., Гареев Е.М., Попов С.В., Афанасьев С.А., Кондратьева Д.С. Экспериментальный кардиомиогенез в условиях применения различных доз аллогенного биоматериала // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -2018. - № 6, Т. 165. - С. 753-756.
10. Лебедева А.И., Муслимов С.А., Гареев Е.М., Попов С.В., Афанасьев С.А., Кондратьева Д.С. Экспрессия металлопротеи-наз и их ингибиторов в ишемизированном миокарде после применения аллогенного биоматериала // Российский кардиологический журнал. - 2018. - № 23, Т. 7. - С. 73-79. http://dx.doi. огд/10.15829/1560-4071-2018-7-73-79
11. Хлопонин П.А. Малодифференцированные кардиомиоциты в нормальном и репаративном кардиомиогенезе // Вопросы морфологии XXI в. Выпуск 3. Сборник научных трудов: « Актуальные вопросы преподавания морфологических дисциплин с использованием современных технологий. Фундаментальные и прикладные проблемы гистологии» (220 лет со дня рождения профессора МХА К.М. Бэра) / под ред. И.А. Одинцовой. С. В. Костюкевича. -СПб.: Издательство ДЭАН, 2012. - С. 88-94.
12. Лебедева А.И. Аллогенный губчатый биоматериал - ингибитор фиброза поврежденной скелетной мышечной ткани // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - № 4, Т. 13. -Р. 37-44.
13. Лебедева А.И. Биоматериал «Аллоплант» при регенерации миометрия рога матки экспериментальных животных - стимулятор макрофагов мезенхимного происхождения // Биомедицина. -2016. - № 2. - С. 44-51.
