CC BY
25
®Морфофункциональное изучение жизнеспособности витрифицированной овариальной ткани
Ключевые слова: витрификация, овариальная ткань, жизнеспособность
Малинова И.В., Южаков В.В., Киселева М.В., Бандурко Л.Н., Комарова Е.В., Ингель И.Э., Севанькаева Л.Е., Фомина Н.К.
МРНЦ им. А.Ф. Цыба - филиал ФГБУ «НМИРЦ» Минздрава России (Обнинск, Россия) 249031, Россия, Калужская область, Обнинск, ул. Маршала Жукова, 10 E-mail: [email protected]
Keywords:
vitrification,
ovarian tissue, viability
The morphofunctional study of the viability of vitrified ovarian tissue
Malinova I.V., Yuzhakov V.V., Kiseleva M.V., Bandurko L.N., Komarova E.V., Ingel I.E., Sevankaeva L.E., Fomina N.K.
A. Tsyb MRRC (Obninsk, Russia)
10, ul. Zhukova, Obninsk, Kaluga Region, 249031, Russia E-mail: [email protected]
Резюме
Комплексный гистологический и морфофункциональный анализ с применением маркеров пролиферации (PCNA и Ю-67), ангиогенеза (CD31 и CD34) и структурной целостности клеток мезенхимального происхождения (ви-ментина) свидетельствует о хорошей сохранности пула примордиальных фолликулов в витрифицированной ова-риальной ткани и быстром восстановлении жизнеспособности ее клеточных компонентов после размораживания.
Достижения в химиотерапии и лучевой терапии привели к увеличению выживаемости онкологических больных. К сожалению, агрессивная химиолучевая терапия может серьезно повлиять на овариальный резерв и привести к потере фертильности и преждевременной менопаузе [1]. Одним из методов сохранения фертильности у таких женщин стала криоконсервация тканей яичников. Согласно данным литературы [2], криоконсервация яичников до химиотерапии с последующей аутотрансплан-тацией размороженной овариальной ткани позволяет сохранить и восстановить фертильность женщин, перенесших онкологическое заболевание.
Цель исследования - изучить функциональную морфологию нативной ткани яичников женщин и оценить сохранность клеточных структур овариальной ткани в процессе ее витрификации, размораживания и культивирования in vitro в инкубационной среде для последующей аутотрансплантации.
Работа выполнена на образцах овариальной ткани 17 женщин в возрасте от 20 до 47 лет при их информированном согласии во время лапароскопии. Изучали фрагменты нативной и размороженной овариальной ткани, включающие кортикальную зону и остатки мозгового вещества после удаления медуллярного слоя, в виде пластинок размером = (3-5) х (3-5) х 1 мм. Методы изучения сохранности и жизнеспособности фолликулов, фибробластов и эндотелия сосудов овариальной ткани включали иммуноокраши-вание на PCNA, Ki-67, CD31, CD34 и виментин, а также компьютерный анализ микроскопических изображений.
Результаты исследования показали, что количественный и качественный состав фолликулярного аппарата в кортикальном слое яичников во многом определяется
Abstract
A comprehensive histological and morphofunctional analysis with the use of markers of proliferation (PCNA and Ki-67), an-giogenesis (CD31 and CD34) and structural integrity of cells of mesenchymal origin (vimentin) shows good preservation of the pool of primordial follicles in vitrified ovarian tissue and the rapid recovery of the viability of its cellular components after thawing.
наличием патологических изменений в структурной организации стромального компартмента нативной овариальной ткани. По данным морфометрии, после витрификации содержание морфологически нормальных фолликулов снизилось с 78,3 до 64%. Однако относительный пул при-мордиальных фолликулов сохранился на уровне более 90%. Судя по экспрессии маркеров пролиферации, сразу после размораживания овариальная ткань находилась в состоянии гипоксии. Восстановление репопуляционной активности клеток фибробластического ряда и эндотелия сосудов начиналось с периферии культивируемых образцов и определялось, по-видимому, скоростью и глубиной диффузии кислорода и питательных веществ в ткань яичника. В период инкубации до 4 часов жизнеспособность стромальных и гранулезных клеток восстанавливалась. Обращала на себя внимание высокая резистентность стромальных клеток мезенхимального происхождения и капиллярной сети овариальной ткани к процедуре ви-трификации и инкубации размороженных образцов в соответствующей среде. При длительном культивировании (более 8 часов) при 37°С в девитрифицированной ткани яичника начинали формироваться необратимые морфологические изменения. При этом дегенеративные изменения со стороны фолликулов и стромальных клеток начинались в центральных зонах фрагментов, наиболее удаленных от среды инкубации.
Полученные результаты позволяют подтвердить сохранность и жизнеспособность овариальной ткани после витрификации и свидетельствуют о целесообразности включения методов морфофункционального анализа в возможный протокол верификации жизнеспособности ткани яичника после ее криоконсервации.
Список литературы
1. David A., Van Langendonckt A., Gilliaux S., et al. Effect of cryopreservation and transplantation on the expression of kit ligand and anti-Mullerian hormone in human ovarian tissue. Hum Reprod. 2012; 27 (4): 1088-1095.
2. Broecke R., Van den Broecke R., Liu J., Handyside A., et al. Follicular growth in fresh and cryopreserved human ovarian cortical grafts transplanted to immunodeficient mice. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 2001 Aug;97 (2):193-201.
I Национальный конгресс «Онкология репродуктивных органов: от профилактики и раннего выявления к эффективному лечению». 19-21 мая 2016, Москва 109
