CC BY
33
THE COMPARATIVE ANALYSIS SOME PARAMETERS OF LOCAL IMMUNITY AT THE PATIENTS WITH ENDOGENIC AND EXOGENIC BRONCHIAL ASTHMA
U.I. Grinshtein, A.N. Melnikova, A.V. Kuligina, V.A. Shectovitski (Krasnoyarsk Medical Academy)
Some parameters of local immunity at the patients with endogenic and exogenic bronchial asthma in a phase of an aggravation and medicamentosis remission are investigated. It was established, that for endogenic bronchial asthma higher leukocytes contents in bronchial secret and authentic decrease production of the oxygen active forms by phagocytes is characteristic. At exogenic bronchial asthma researched parameters have an opposite orientation, that it is possible to use as diagnostic markers at realisation of differential diagnostics between endogenic and exogenic forms of bronchial asthma.
Литература
1. Артемова О.П., Борисова А.М., Порошина Ю.А. и др. Особенности гуморального местного иммунитета у больных хроническими аллергическими заболеваниями респираторного тракта // Иммунология. - 1996. - №6. - С.50-53.
2. Бронхиальная астма / Под ред. А.Г. Чучалина. - М.: Агар, 1997. - 400с.
3. Бронхиальная астма. Глобальная стратегия // Пульмонология, приложение. - 1996. - С.2-7.
4. Гробова О.М., Черняев A.JI. Бронхоальвеолярный лаваж при бронхиальной астме: состояние вопроса в настоящее время и перспективы развития // Materia medica. Бюллетень для врачей и фармацевтов. -1998. -№2(18). -С.8-15.
5. Методы изучения фагоцитирующих клеток при оценке иммунного статуса человека: Учебное пособие / Под ред. И.С. Фрейдлин. - JL, 1986.
6. Потапнев М.П., Печковский Д.В. Молекулярные и клеточные механизмы иммунопатологии при бронхиальной астме // Пульмонология. - 1997. - №3. -С.74-81.
7. Bechard D.E., Fisher B.J., Kessler F.K. et al. Macrophage spreading disparity: alveolar and peritoneal // J. Clin. Lab. Immunol. - 1988. - Vol.26. - P.67-71.
8. Bruijnzeel P. Eosinophil tissue mobilization in allergic disorders. Ann. N. Y. Acad. Sei. 1994, 725: 259-268.
9. Erb K.J., Le Gros G. The role of Th 2 type CD4+ T cells and TH 2 CD 8+ T cells in asthma // Immunol. Cell. Biol. - 1996. - Vol.74. № 2. - P.206-208.
10. Hallsworth M.P., Soh C.P., Lane J.P. et al. Selective production of GM-CSF, TNF-alpha, IL-1 beta and IL-8 production by monocytes and macrophages of asthamatic subjects // Eur. Respir. J. - 1994. - Vol.7, №6.-P.1096-1102.
11. Vence P. Inflammation markers in asthma: Verhand-lungsber. 30. Kolloq. “Asthma bronchiale: Neue Erkenntnisse Klin, und Prax., Bad Reichenhalle, 21. -22. June, 1997” // Atemwegs - und Lungenkrankh. -
1997. - Vol.23, №10. - P.580-582.
© САВЧЕНКО A.A., КАДРИЧЕВА С.Г., ДОГАДИН С.А., БУРАКОВ А.Ю. -УДК 616.441-002:616.15
МОРФОДЕНСИТОМЕТРИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ АКТИВНОСТИ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЭСТЕРАЗЫ И ос-ГЛИЦЕРОФОСФАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ БОЛЬНЫХ АУТОИММУННЫМ ТИРЕОИДИТОМ
A.A. Савченко, С.Г. Кадричева, С.А. Догадин., А.Ю. Бураков.
(Институт медицинских проблем Севера СО РАМН, г.Красноярск, директор - д.м.н., проф. В.Т. Ман-чук. Эндокринологический центр (зав. - к.м.н. С.А. Догадин) при Краевой клинической больнице №1, г.Красноярск, гл. врач - засл. врач РФ Б.П. Маштаков)
Резюме. Проведено сравнительное исследование морфоденситометрических параметров активности а-глицерофосфатдегидрогеназы (аГФДГ) и неспецифической эстеразы (НЭ) в лимфоцитах крови больных с аутоиммунным тиреоидитом (АИТ). В лимфоцитах больных АИТ установлено локальное повышение активности аГФДГ, но при отсутствии выраженного синтеза фермента и повышения функциональной активности митохондрий. Морфоденситометрический анализ, также, позволил обнаружить увеличение активности НЭ, что отражает повышение деструктивных реакций в иммунокомпетентных клетках при исследуемом аутоиммунном процес-
се. Установлены особенности морфоденситометрических параметров аГФДГ и НЭ в лимфоцитах больных АИТ с высоким содержанием аутоиммунных антител. Все это позволяет заключить, что обнаруженные особенности активности аГФДГ и НЭ в лимфоцитах крови характеризуют патогенез аутоиммунного процесса.
Изучение регуляторных взаимосвязей между эндокринной системой и иммунитетом является важным аспектом медико-биологической науки, так как именно нарушения в системе иммунореактивности приводят к наиболее тяжелым и распространенным эндокрчнопатиям. Аутоиммунный тиреоидит (АИТ) является широко распространенной патологией щитовидной железы, при которой нарушения в иммунной системе являются как этиологическим фактором, так и обуславливают основные патогенетические процессы [2,12].
Необходимо отметить, что иммунокомпетент-ные клетки имеют богатый набор рецепторов, что делает их высокочувствительными к разнообразным изменениям гомеостаза организма [13]. В последние годы значительное развитие получило новое направление исследований, позволяющих одновременно оценить степень нарушения гомеостаза в организме и уровень функциональных возможностей иммунокомпетентных клеток, -изучение метаболических параметров лимфоцитов в норме и при патологии [1,5]. При этом, именно на уровне метаболической системы клеток происходит реализация регуляторных воздействий и формируются ответные реакции. Следовательно, изучая метаболические параметры лимфоцитов можно оценить основные биохимические реакции компенсаторных процессов, развивающихся в организме.
Таким образом, целью исследования явилось изучение особенностей активности неспецифической эстеразы (НЭ) и а-глицерофосфатдегидроге-назы (аГ ФДГ) в лимфоцитах крови больных АИТ.
Выбор данных метаболических параметров обусловлен тем, что представленные ферменты определяют функциональную возможность иммунокомпетентных клеток, а синтез аГФДГ в клетках зависит от воздействия тиреоидных гормонов [8,10].
Материалы и методы
Обследованы женщины в возрасте 20-45 лет: 37 больных с впервые выявленным АИТ (эути-реоидная форма) и 15 практически здоровые женщины. Диагноз АИТ выставлялся на основании клинических данных, результатов ультрасо-нографии щитовидной железы и гормонального анализа.
Цитохимическое окрашивание лимфоцитов периферической крови на аГФДГ осуществлялось по методу Р.П. Нарциссова [4]. В качестве субстрата для цитохимической реакции на НЭ использовался а-нафтилбутират [7]. Для оценки активности аГФДГ и НЭ применялся метод компьютерной морфоденситометрии [3,11]. Измерения осуществляли на цитоморфоденситометрической
установке “ДиаМорф”. Изображение представляется с микроскопа Люмам (объектив 100, опто-вар 2,5) в микроЭВМ в виде первичной матрицы распределения интенсивностей. Матрица имеет размерность 256x256 элементов (пиксель). Каждый элемент матрицы представляет собой усредненную на площади 1 пиксель величину интенсивности. При этом, интенсивность каждого ее элемента лежит в пределах от 0 до 255, т.е. всего 256 градаций полутонов серого при квантовании по интенсивности от 0 - черное до 255 - белое (байт на точку). В результате, цитохимическое изображение характеризуется оптическими и геометрическими признаками: 5 - площадь гранул (пиксель2), Р - суммарный периметр гранул (пиксель), Р¥ - фактор формы (где 1 - абсолютная окружность), СЮ - средняя оптическая плотность (единицы оптической плотности - е.о.п.), Ях - усредненное (на 1 клетку) значение расстояния между гранулами по оси X (пиксель), Яу - усредненное (на 1 клетку) значение расстояния между гранулами по оси У (пиксель), ЮБ - интегральная оптическая плотность (пиксельхе.о.п.).
Для всех полученных данных определяли среднее арифметическое значение (X) и ошибку средней арифметической (ш). Проверку гипотезы о статистической достоверности двух выборок проводили с помощью критерия Манна-Уитни.
Результаты и обсуждение
Морфоденситометрические параметры аГФДГ лимфоцитов крови здоровых людей и больных АИТ представлены в табл.1. Обнаружено, что у больных женщин в лимфоцитах крови значительно возрастает оптическая плотность гранул ди-формазана, образованного в ходе ферментативной реакции аГФДГ.
Таблица 1
Морфоденситометрические параметры активности аГФДГ в лимфоцитах крови здоровых людей и больных АИТ (X ±т)
Показатели Здоровые « = 15 АИТ п = 37 Р
5, пиксель2 295,37±89,77 253,42±33,95
Р, пиксель 65,86113,94 94,86+15,22
FF, o.e. 0,94+0,01 0,88±0,01
OD, е.о.п. 8,12+0,98 14,82±0,70 <0,01
Rx, пиксель 15,43+5,70 16,74± 1,69
Ry, пиксель 12,48±4,48 16,68± 1,82
IOD, пиксельхе.о.п. 982,23+211,67 1278,041161,38
Исследуемый фермент локализуется строго в митохондриальном компартменте и вносит суще-
ственный вклад в соотношение НАДН/НАД в цитоплазме и митохондриях [9]. Увеличение оптической плотности при отсутствии изменений площади и периметра позволяет предположить точечную активацию аГФДГ и отсутствие выраженного синтеза фермента при воздействии повышенных доз Г3 (у здоровых женщин Тъ =1,52 ± ±0,04 нмоль/л; у женщин с АИТ Тъ =2,01 ±0,09; Р<0,01). Кроме того, отсутствие увеличения площади, периметра и усредненного расстояния между гранулами диформазана (образованного в результате ферментативной реакции) в лимфоцитах у больных АИТ позволяет, также, предположить, что площадь митохондрий в иммунокомпе-тентных клетках при данной патологии значительно не изменяется.
До сих пор обсуждается возможность использования ферментативной реакции с а-нафтилбу-тиратом (НЭ) для дифференциации морфологических вариантов лимфоцитов [6,7,10]. Нами обнаружено, что у больных АИТ достоверно повышено относительное содержание лимфоцитов с локальным распределением активности НЭ (/*<0,01), но снижена концентрация иммунокомпетентных клеток с отрицательной реакцией на НЭ (Р<0,01).
Таблица 2
Морфоденситометрические параметры НЭ в лимфоцитах крови здоровых людей и больных АИТ ((X ±т)
Также обнаружено, что при данной патологии изменяются морфоденситометрические параметры НЭ (табл.2). Причем, все выявленные изменения в морфоденситометрических параметрах НЭ лимфоцитов крови женщин с АИТ по сравнению
со здоровыми однозначно отражает выраженную активацию фермента. Так, в лимфоцитах с диффузным распределением НЭ выявляется увеличение площади, периметра, оптической плотности и как следствие - интегральной оптической плотности НЭ. Снижение фактора формы при АИТ отражает большее количество раздельных гранул, в то время как в лимфоцитах здоровых женщин чаще встречаются конгломераты гранул. По этой же причине в лимфоцитах больных АИТ повышено усредненное расстояние между гранулами. То есть, в лимфоцитах больных АИТ гранулы, представляющие собой продукт ферментативной реакции НЭ, распределены по всей клетке.
Выявляются различия в величинах морфоденситометрических параметров НЭ в лимфоцитах с локальным распределением активности (табл.2). В данной популяции клеток у больных с АИТ обнаружено увеличение площади, периметра, оптической плотности и интегральной оптической плотности. Однако различий по усредненному расстоянию между гранулами у здоровых женщин и больных АИТ не выявлено. Данный факт определяется тем, что в лимфоцитах с локальным распределением активности НЭ выявляется преимущественно 1-2 крупные, близко расположенные гранулы.
При исследование морфоденситометрических параметров аГФДГ и НЭ в лимфоцитах крови у больных АИТ с высоким содержанием антител к микросомальной фракции по сравнению с больными с низким содержанием аутоиммунных антител обнаружено снижение площади гранул диформазана (0,1>Р>0,05). Выявляется изменение морфоденситометрических параметров НЭ в лимфоцитах с диффузным распределением активности: повышение величины фактора формы (Р<0,05), снижение оптической плотности НЭ (0,1>Р>0,05), более плотное расположение гранул (Р< 0,05).
Таким образом, морфоденситометрический анализ активности аГФДГ и НЭ в лимфоцитах крови здоровых женщин и больных АИТ позволил выявить различия, определяющие метаболические особенности иммунокомпетентных клеток. Так, в лимфоцитах больных АИТ установлено локальное повышение активности аГФДГ, но при отсутствии выраженного синтеза фермента и повышения функциональной активности митохондрий. Морфоденситометрический анализ, также, позволил обнаружить увеличение активности НЭ, что отражает повышение деструктивных реакций в иммунокомпетентных клетках при исследуемом аутоиммунном процессе. Установлены особенности морфоденситометрических параметров аГФДГ и НЭ в лимфоцитах больных АИТ с высоким содержанием аутоиммунных антител. Следовательно, обнаруженные особенности активности аГФДГ и НЭ в лимфоцитах крови позволяют характеризовать патогенез аутоиммунного процесса.
Показатели Здоровые п = 15 АИТ п = 37 Р
В лимфоцитах с диффузным распределением активности
S, пиксель2 47,84±7,02 102,89±10,53 <0,01
Р, пиксель 23,47±2,58 44,95±3,78 <0,01
FF, o.e. 0,96±0,01 0,93+0,01 <0,05
OD, е.о.п. 10,18+0,83 12,69±0,48 <0,01
Rx, пиксель 0,37+0,26 14,29±1,66 <0,001
Ry, пиксель 0,01+0,001 12,02+1,56 <0,001
IOD, пик-сельхе.о.п. 299.34±48,75 686,88±53,72 <0,001
В лимфоцитах с локальным распределением активности
S, пиксель2 74,42±20,16 294,95±41,60 <0,01
Р, пиксель 23,00±3,38 105,45± 14,88 <0,001
FF, o.e. 0,95±0,02 0,86±0,02 <0,05
OD, е.о.п. 13,45±0,68 16,31 ±0,44 <0,01
Rx, пиксель 7,42±3,44 13,16±1,71
Ry, пиксель 9,11+3,69 13,87±1,83
IOD, пик-сельхе.о.п. 712,48±127,06 2207,69±222,03 <0,01
MORPHODENSITOMETRIC PECULIARITIES OF NON-SPECIFIC ESTERASE AND GLYCEROL-3-PHOSPHATE DEHYDROGENASE ACTIVITIES OF BLOOD LYMPHOCYTES IN PATIENTS WITH AUTOIMMUNE THYRIODITIS
A.A. Savchenko, S.G. Kadricheva, S.A. Dogadin, A.Yu. Burakov
(Institute of Medical Problems of the North, Siberian Division, Russian Academy Sciences, Krasnoyarsk.
Endocrine Centre in Regional Clinical Hospital № 1. Krasnoyarsk)
Morphodensitometric parameters of glycerol-3-phosphate dehydrogenase (Gly-3-PDH) and non-specific esterase (NSE) activities in blood lymphocytes of patients with the autoimmune thyroiditis (AT) were investigated. The point increase of Gly-3-PDH activity but in the absense of significance synthesis of the enzyme and unaffected functional activities of mitochondria was observed in lymphocytes of patients with AT. The morphodensitometric analysis allows to detect increase of NSE activity, that it suggets a increase destructive reactions in immunocompetent cells in the presence autoimmune processes. Morphodensitometric peculiarities of non-specific esterase and glycerol-3-phosphate dehydrogenase activities of blood lymphocytes in AT patients with increased concentration of autoimmune antibody were detected. Consequently, the revealed peculiarities of non-specific esterase and glycerol-3-phosphate dehydrogenase activities of blood lymphocytes will allow an understanding of the autoimmune process pathogenesis.
Литература
1. Грязева Н.И., Робинсон М.В., Барыкина Н.Н. и др.
Различия в составе клеточных элементов крови и активности лимфоцитарных дегидрогеназ у крыс с генетическими различиями нейроэндокринного статуса // Бюлл. эксперим. биол. и медицины. -
1998. - Т.125, №5. - С.555-557.
2. Дедов И.И., Мельниченко Г.А., Фадеев В.В. Эндокринология. Краткий справочник. - М.: Издательский дом “Русский врач”, 1998.
3. Жукоцкий А.В., Якубова Н.И., Пищулина J1.A. и др. Компьютерный анализ ультраструктурных и функциональных параметров митохондрий печени крыс // Биофизика. - 1993. - №2. - С.284-286.
4. Нарциссов Р.П. Применение /г-тетразолия фиолетового для количественной цитохимии дегидрогеназ лимфоцитов человека // Арх. анатомии, гисто-, логии и эмбриол. - 1969. - №5. - С.82-91.
5. Нарциссов Р.П. Анализ изображения клетки - следующий этап развития клинической цитохимии в педиатрии // Педиатрия. - 1998. - №4. - С.101-105.
6. Робинсон М.В., Труфакин В.А. Активность неспецифической эстеразы в лимфоцитах мышей при экспериментальном аутоиммунном процессе //
Бюлл. СО АМН. - 1987. - №2. - С.29-31.
7. Cook F., Eales L.J. Flow cytometric measurement of non-specific esterase activity // J.Immunol. Methods. -1994. - Vol.168, №2. - P.203-208.
8. Gong D.W., Bi S., Weintraub B.D., Reitman M. Rat mitochondrial glycerol - 3 - phosphate dehydrogenase
© ПРОКОПЬЕВА Е.В., ПИВОВАРОВ Ю.И. -УДК 616.127-005.4
РОЛЬ БОЛЬШОГО ЯДРА ШВА В АРИТМОГЕНЕЗЕ СЕРДЦА ПРИ ОСТРОЙ ИШЕМИИ МИОКАРДА
Е.В. Прокопьева. Ю.И. Пивоваров.
(Иркутский государственный медицинский университет, ректор - акад. МТА и АН ВШ А.А. Майбо-рода, кафедра патофизиологии, зав. - проф. Ю.И. Пивоваров)
Резюме. Показано участие одной из серотонинергических структур ствола мозга - большого ядра шва - в развитии аритмий сердца при острой ишемии миокарда.
gene: multiple promoters, high levels in brown adipose tissue, and tissue-specific regulation by thyroid hormone // DNA Cell. Biol. - 1998. - Vol. 17, №3. -P.301-309.
9. Hwang K., leong D.W., Lee J.W. et al. Alteration of the NAD+/NADH ratio in CHO cells by stable transfection with human cytosolic glycerol-3-phosphate dehydrogenase: resistance to oxidative stress // Mol. Cells. - 1999. - Vol.9, №4. - P.429-435.
10. Knapp D.W., Turek J.J., DeNicola D.B. et al. Ultrastructure and cytochemical staining characteristics of canine natural killer cells // Anat. Rec. - 1995. -Vol.243, №4. - P.509-515.
11. Madison S.D., Dunn S.E., Michel R N. Quantitative microphotometric assessment of membrane-bound dehydrogenase activities in excitable cells: obtaining linear and slowly progressing histochemical reactions // I.Histochem. Cytochem. - 1998. - Vol.46 №10. -P.1211-1212.
12. Mirakian R., Hammond L.I., Botazzo G.F. Pathogenesis of thyroid autoimmunity: the Botazzo-
Feldmann hypothesis // Imminol.Today. - 1998. -Vol.19, №2. - P.97-98.
13. Vorobiev D.V., Vetrova E.G., Larina I.M. et al. Energy substrates, hormone responses and glucocorticoid binding in lymphocytes during intense physical exercise in humans following phosphocreatine administration // Eur. J. Appl. Physiol. - 1996. - Vol.74, №6. -P.534-540.
