Сравнительный анализ некоторых показателей местного иммунитета у больных эндогенной и экзогенной бронхиальной астмой Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Литература

Кирдей Е.Г., Дмитриева Л.А., Беломестнова Е.Ю. и др. Иммунный статус и иммунокоррекция у больных с гнойными осложнениями травм длинных трубчатых костей // Травматол. и ортопед. России. - 1996. - №2. - С. 12-15.

Кирдей Е.Г., Барабаш А.П., Данилов Д.Г. и др. Иммунный статус больных с различными формами остеомиелитов II Сиб. мед. журн. - 1997. - №1-2. -С.19-21.

3. Майборода А.А., Кирдей Е.Г., Семинский И.Ж. и др. Механизмы индукции воспаления. Сообщение 1. // Сиб. мед. журн. - 1994. - №1-2. - С.5-11.

4. Маянский Д.Н. Хроническое воспаление. - М.: Медицина, 1991. -272с.

5. Maiboroda A.A., Kirdey E.G., Seminskiy I.J. et al. Immunologic approach to rehabilitation in patients with chronic infalammatory deseases // The Fifth Int. Symp. of the JRME. - Abstr. Sapporo (Jap.), P.67.

© ГРИНШТЕЙН Ю.И., МЕЛЬНИКОВА А.Н., КУЛИГИНА А.В., ШЕСТОВИЦКИЙ В.А. -УДК 616.248:612.017.1

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ НЕКОТОРЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ МЕСТНОГО ИММУНИТЕТА У БОЛЬНЫХ ЭНДОГЕННОЙ И ЭКЗОГЕННОЙ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ

Ю.И. Гринштейн, А.Н. Мельникова, А.В. Кулигина, В.А. Шестовицкий.

(Красноярская государственная медицинская академия, ректор - акад. РАЕН, проф. В.И. Прохоренков, кафедра терапии ФУВ, зав. - проф. Ю.И. Гринштейн)

Резюме. Исследованы некоторые показатели местного иммунитета у больных с эндогенной и экзогенной бронхиальной астмой в фазу обострения и медикаментозной ремиссии. Установлено, что для эндогенной бронхиальной астмы характерно более высокое содержание лейкоцитов в бронхиальном секрете и достоверное снижение продуцирования активных форм кислорода фагоцитами. При экзогенной бронхиальной астме исследуемые показатели имеют противоположную направленность, что можно использовать в качестве диагностических маркеров при проведении дифференциальной диагностики между эндогенной и экзогенной бронхиальной астмой.

Бронхиальная астма (БА) представляет собой хроническое воспалительное заболевание дыхательных путей, характеризующееся обратимой бронхиальной обструкцией и гиперреактивностью бронхов [2,3]. Воспалительная природа заболевания, связанная с воздействием специфических и неспецифических факторов, проявляется гиперплазией гладкой мускулатуры, утолщением базальной мембраны бронхов, инфильтрацией клеточными элементами, деструкцией эпителиальных клеток [2,4]. В воспалительном процессе участвуют эозинофилы, тучные клетки, лимфоциты и другие типы клеток [6,8,9]. Особую роль при этом играют альвеолярные макрофаги и нейтрофилы [10,11]. Исследования последних лет позволили изменить представления о роли нейтрофилов в развитии и поддержании воспалительного процесса в стенке бронха. Показано, что при бронхиальной астме наблюдается миграция нейтрофилов в легочную ткань и просвет бронхов, где под действием медиаторов воспаления происходит их активация, что сопровождается высвобождением метаболитов активированного кислорода и протео-литических ферментов [2].

Несмотря на ряд современных исследований остается дискуссионным вопрос о состоянии местного иммунитета в бронхиальном дереве и роли

иммунокомпетентных клеток в генезе воспалительного процесса при хоронических обструктив-ных заболеваниях легких. Поэтому целью нашей работы было изучение состояния местного иммунитета у больных бронхиальной астмой различных форм в фазу обострения и ремиссии заболевания.

Материалы и методы

Под нашим наблюдением находились 36 больных бронхиальной астмой средней степени тяжести, из них 22 женщины и 14 мужчин в возрасте 45-55 лет (средний возраст - 49,6+3.5). У 20 больных диагностирована эндогенная, у 16 - экзогенная БА. Длительность заболевания в наблюдаемой группе составила в среднем 6,5+1,5 года. В исследуемой группе с эндогенной БА у 80% больных обострение основного заболевания сочеталось с обострением сопутствующего хронического обструктивного бронхита. Диагноз устанавливался на основании клинической картины, лабораторноинструментальных данных, функциональных методов диагностики (спирография и пикфлуомет-рия), аллергологического исследования.

Материалом для исследования служил бронхиальный секрет, полученный в ходе санирующей и дигностической бронхоскопии, выполняемой по стандартной методике в нашей модифи>-ации.

Бронхоскопия проводилась на 3-4 сутки обострения заболевания и в фазу ремиссии после проведенного курса бронхолитической и противовоспалительной терапии (р2-агонисты, холинолитики, метилксантины, стабилизаторы клеточных мембран, антибактериальные препараты при инфек ционном обострении сопутствующего хронического обструктивного бронхита). Процедура проводилась в утренние часы натощак под местной анестезией лидокаином или дикаином. Выделенные из бронхиального секрета клетки отмывали в растворе Хенкса без фенолового красного общепринятым методом [7]. После подсчета цитоза пробирочным методом в камере Горяева готовили мазки, которые окрашивали по Романовскому-Гимзе. На 300-ах клетках мазка определяли процентное соотношение различных клеточных элементов (нейтрофилов, макрофагов, эозинофилов, лимфоцитов). Функциональная активность фагоцитов, выделенных из бронхиального секрета, определялась посредством метода хемилюминес-центного биотестирования по Мюллеру [5] на хе-милюминометре CL 3604 (СКТБ “Наука”). Принцип метода заключатся в автоматической регистрации квантов света, излучаемого фагоцитами при метаболизме активных форм кислорода (АФК). Тестирование проводили в двух параллельных пробах: спонтанной хемилюминесценции - естественная продукция АФК фагоцитами, и стимулированной хемилюминесценции - продукция АФК клетками в активированном состоянии. В качестве стимулятора использовали опсонизированный зи-мозан (Sigma) в концентрации 20 мг/мл. В качестве контрольной группы для оценки функционального состояния фагоцитов использовали бронхиальный секрет, полученный у 16 больных без бронхолегочной патологии.

В супернатанте, полученном после первого центрифугирования бронхиального секрета, определяли содержание иммуноглобулинов А, М, G методом радиальной иммунодиффузии по Манчи-ни. Все материалы обработаны статистически с расчетом t-критерия Стьюдента.

Результаты и обсуждение

Анализ цитограмм бронхиального секрета у больных с различными формами БА выявил следующее (табл.1).

Количество лейкоцитов в бронхиальном секрете в фазу обострения у больных с эндогенной

БА достоверно выше такового по сравнению с экзогенной БА. Следует отметить, что данная тенденция сохраняется и в фазу ремиссии. Это может быть обусловлено влиянием инфекционного компонента при эндогенной БА. Данный показатель может быть использован в качестве дополнительного диагностического маркера при проведении дифференциальной диагностики между экзогенной и эндогенной БА.

Согласно данным О.М Гробовой и А.Л. Черняева (1998) клеточный состав бронхоальвеолярных смывов у практически здоровых лиц содержит 82-92% альвеолярных макрофагов, 7-12% лимфоцитов, 1-2% нейтрофилов и менее 1% эозинофилов и базофилов. Наши исследования показали, что у больных различными формами БА снижается содержание альвеолярных макрофагов в бронхиальном секрете и повышается количество нейтрофилов и эозинофилов как в фазу обострения, так и в фазу ремиссии заболевания. В то же время при сравнении количественного содержания нейтрофилов и альвеолярных макрофагов в бронхиальном секрете при эндогенной и экзогенной БА отличий существенных не обнаружено. Наряду с этим уровень эозинофилов в бронхиальном секрете при эндогенной БА достоверно ниже такового при экзогенной БА независимо от фазы заболевания. Увеличение содержания эозинофилов в бронхиальном секрете при экзогенной БА может быть обусловлено известными механизмами развития аллергического воспаления. Вероятно, медиаторы, вырабатываемые тучными клетками и базофилами, вызывают приток эозинофилов в зону аллергической реакции [2].

Проведенные нами исследования гуморального звена местного иммунитета выявили достоверное повышение уровня ^ А после курса проведенной терапии у больных с экзогенной БА, в то время как у больных с эндогенной БА этот показатель практически не изменился (табл.2). Таким образом, можно предположить, что при эндогенной БА формируются условия недостаточной защищенности слизистой бронхов от основного спектра бактериальных антигенов, что находит свое отражение и в исследованиях других авторов [1].

При сравнительном изучении уровня функциональной активности фагоцитов нами выявлены следующие особенности. В фазу обострения у

Таблица 1

Показатели лейкоцитарной формулы бронхиального секрета у больных с разными формами бронхиальной астмы (I - до лечения, II - после лечения)

Группы исследуемых Цитоз, (лейкоциты) *109/мл Нейтрофилы % Эозинофилы % Макрофаги, % Лимфоциты, %

I II I II I II I II I II

Эндогенная БА, п=20 6,60 ±1,02 8,60 ±3,5 66,90 ±4,80 62,50 ±6,10 1,50 ±0,50 2,36 +0,75 26,10 ±4,10 27,70 ±6,40 2,86 ±1,00 2,80 ±1,20

Экзогенная БА, «=16 2,05 ±0,60* 3,80 ±0,80* 63,40 ±5,20 57,70 ±6,10 20,10 ±6,90** 7,50 ±2,05 22,80 ±5,20 36,40 ±6,40 3,00 ±0,90 3,80 ±1,60

Примечание: * - р<0,05; ** - р<0,001 при сравнении эндогенной и экзогенной бронхиальной астмы

Таблица 2

Содержание иммуноглобулинов различных классов в бронхиальном секрете у больных с разными формами бронхиальной астмы (I - до лечения, II - после лечения)

Г руппы исследуемых І2 А, г/л їй М, г/л ІЙ в, г/л

I II I II I II

Эндогенная БА, «=20 0,16±0,03 0,18±0,02 0,13±0,02 0,17+0,06 4,57±0,59 3,56+0,30

Экзогенная БА, «=16 0,14±0,03 0,32±0,08* 0,27+0,12 0,38±0,16 4,12±0,98 3,89+0,93

Примечание: * - р<0,05 при сравнении значений до и после лечения

больных БА независимо от формы заболевания показатели хемилюминесцентного ответа (как спонтанного, так и стимулированного) достоверно выше, чем в группе контроля. В фазу ремиссии у больных эндогенной БА показатели спонтанного и стимулированного хемилюминесцентного ответа снижаются до уровня контрольной группы (рис.1), что можно объяснить купированием обострения бронхолегочной инфекции. В то же время у больных экзогенной БА эти показатели после проведенной терапии достоверно увеличиваются (рис.2). Таким образом, у больных с экзогенной БА вне зависимости от фазы заболевания активность фагоцитов остается достаточно высокой по сравнению с контролем и эндогенной БА. Вероятно, это можно объяснить участием аллергии в развитии воспалительного процесса при экзогенной БА. Возможно, подобное увеличение спонтанного и стимулированного хемилюминесцентного ответа фагоцитов бронхиального секрета возникает за счет большего участия эозинофилов в процессе образования АФК у больных с экзогенной БА. Данное предположение также подтверждается данными цитологического исследования бронхиального секрета.

Таким образом, для больных с эндогенной БА оказалось характерным более высокое содержание

лейкоцитов в бронхиальном секрете и снижение функциональной активности фагоцитов в динамике по сравнению с таковыми у больных с экзогенной формой БА. Это можно объяснить тем, что хроническое персистирующее воспаление у больных с эндогенной формой бронхиальной астмы поддерживается обострением сопутствующего хронического обструктивного бронхита. Характерным для цитограммы бронхиального секрета при экзогенной БА оказалось меньшее число лейкоцитов, высокое процентное содержание эозинофилов в стадию обострения заболевания, а также увеличение уровня ^Ав бронхиальном секрете и повышение хемилюминесцентной активности фагоцитов на фоне проведенного лечения. Вероятно, это свидетельствует об аллергическом характере воспалительного процесса при данном типе БА.

Исходя из полученных нами данных можно предположить, что количественное содержание эозинофилов и различие в хемилюминесцентной активности фагоцитов в бронхиальном секрете могут использоваться в качестве диагностических маркеров при проведении дифференциальной диагностики между эндогенной и экзогенной БА.

| 1800 | 1600 £ 1400

спонтанный ХЛ-ответ стимулированный ХЛ-отчет

Рис.1. Хемилюминесцентная активность фагоцитов у

больных эндогенной бронхиальной астмой, п=20.

Е53 кош роль I I - больные до лечения КЗ больные после лечения * - р<0.05

спонтанный ХЛ-ответ стимулированный ХЛ -ответ

Рис.2. Хемилюминесцентная активность фагоцитов у больных экзогенной бронхиальной астмой, п=16.

ЕЗ - контроль [ I - больные до лечения 538 больные после лечения * - р<0,05

THE COMPARATIVE ANALYSIS SOME PARAMETERS OF LOCAL IMMUNITY AT THE PATIENTS WITH ENDOGENIC AND EXOGENIC BRONCHIAL ASTHMA

U.I. Grinshtein, A.N. Melnikova, A.V. Kuligina, V.A. Shectovitski (Krasnoyarsk Medical Academy)

Some parameters of local immunity at the patients with endogenic and exogenic bronchial asthma in a phase of an aggravation and medicamentosis remission are investigated. It was established, that for endogenic bronchial asthma higher leukocytes contents in bronchial secret and authentic decrease production of the oxygen active forms by phagocytes is characteristic. At exogenic bronchial asthma researched parameters have an opposite orientation, that it is possible to use as diagnostic markers at realisation of differential diagnostics between endogenic and exogenic forms of bronchial asthma.

Литература

1. Артемова О.П., Борисова A.M., Порошина Ю.А. и др. Особенности гуморального местного иммунитета у больных хроническими аллергическими заболеваниями респираторного тракта // Иммунология. - 1996. - №6. - С.50-53.

2. Бронхиальная астма / Под ред. А.Г. Чучалина. - М.: Агар, 1997. - 400с.

3. Бронхиальная астма. Глобальная стратегия // Пульмонология, приложение. - 1996. - С.2-7.

4. Гробова О.М., Черняев A.JI. Бронхоальвеолярный лаваж при бронхиальной астме: состояние вопроса в настоящее время и перспективы развития // Materia medica. Бюллетень для врачей и фармацевтов. -1998. -№2(18). -С.8-15.

5. Методы изучения фагоцитирующих клеток при оценке иммунного статуса человека: Учебное пособие / Под ред. И.С. Фрейдлин. - JL, 1986.

6. Потапнев М.П., Печковский Д.В. Молекулярные и клеточные механизмы иммунопатологии при бронхиальной астме // Пульмонология. - 1997. - №3. -С.74-81.

7. Bechard D.E., Fisher B.J., Kessler F.K. et al. Macrophage spreading disparity: alveolar and peritoneal // J. Clin. Lab. Immunol. - 1988. - Vol.26. - P.67-71.

8. Bruijnzeel P. Eosinophil tissue mobilization in allergic disorders. Ann. N. Y. Acad. Sci. 1994, 725: 259-268.

9. Erb K.J., Le Gros G. The role of Th 2 type CD4+ T cells and TH 2 CD 8+ T cells in asthma // Immunol. Cell. Biol. - 1996. - Vol.74. № 2. - P.206-208.

10. Hallsworth M.P., Soh C.P., Lane J.P. et al. Selective production of GM-CSF, TNF-alpha, IL-1 beta and IL-8 production by monocytes and macrophages of asthamatic subjects // Eur. Respir. J. - 1994. - Vol.7, №6.-P.1096-1102.

11. Vence P. Inflammation markers in asthma: Verhand-lungsber. 30. Kolloq. “Asthma bronchiale: Neue Erk-enntnisse Klin, und Prax., Bad Reichenhalle, 21. -22. June, 1997” // Atemwegs - und Lungenkrankh. -1997. - Vol.23, №10. - P.580-582.

© САВЧЕНКО А.А., КАДРИЧЕВА С.Г., ДОГА ДИН С.А., БУРАКОВ А.Ю. -УДК 616.441-002:616.15

МОРФОДЕНСИТОМЕТРИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ АКТИВНОСТИ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЭСТЕРАЗЫ И ос-ГЛИЦЕРОФОСФАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ БОЛЬНЫХ АУТОИММУННЫМ ТИРЕОИДИТОМ

А.А. Савченко, С.Г. Кадричева, С.А. Догадин, А.Ю. Бураков.

(Институт медицинских проблем Севера СО РАМН, г.Красноярск, директор - д.м.н., проф. В.Т. Ман-чук. Эндокринологический центр (зав. - к.м.н. С.А. Догадин) при Краевой клинической больнице №1, г.Красноярск, гл. врач - засл. врач РФ Б.П. Маштаков)

Резюме. Проведено сравнительное исследование морфоденситометрических параметров активности а-глицерофосфатдегидрогеназы (аГФДГ) и неспецифической эстеразы (НЭ) в лимфоцитах крови больных с аутоиммунным тиреоидитом (АИТ). В лимфоцитах больных АИТ установлено локальное повышение активности аГФДГ, но при отсутствии выраженного синтеза фермента и повышения функциональной активности митохондрий. Морфоденситометрический анализ, также, позволил обнаружить увеличение активности НЭ, что отражает повышение деструктивных реакций в иммунокомпетентных клетках при исследуемом аутоиммунном процес-