CC BY
16
Таким образом, представляются перспективными для идентификации РПЖ человека паттерн маркеров МНФ, продемонстрировавших хороший предиктивный уровень: bax, bcl2 и tnf-a. Прогностическим фактором малигнизации тканей предстательной железы может служить изменение отношения экспрессии анти- и про-апоптозных генов семейства Bcl2 [5].
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Водолажский Д.И., Тимошкина Н.Н. 2009. Молекулярно-генетические маркеры рака предстательной железы // Вестн. Южного научного центра. - № 5 - С.36-52.
2. Berteau P., Dumas F., Gala J-L. [et al.]. Molecular Detection of Circulating Prostate Cells in Cancer II:
Comparison of Prostate Epithelial Cells Isolation Procedures // Clinical Chemistry - 1998. - № 44. -
Р. 1750-1753.
3. Chomczynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-
chloroform extraction // Anal. Biochem. - 1987. - № 162. - Р. 156-159.
4. Kim J.W. Cancer's molecular sweet tooth and the Warburg effect // Cancer Res. - 2006. - № 66. - Р. 8927-
8930.
5. Catz S.D., Johnson J.L. BCL-2 in prostate cancer: a minireview // Apoptosis. - 2003. - № 8. - Р. 29-37.
Водолажский Дмитрий Игоревич, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник Института аридных зон Южного научного центра РАН, Россия, 344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Чехова, 41., тел. 8-928-361-56-11, e-mail: ssc-ras@ssc-ras.ru
Тимошкина Наталья Николаевна, кандидат биологических наук, научный сотрудник Института аридных зон Южного научного центра РАН, Россия, 344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Чехова, 41., тел. 8-928-361-56-11,
e-mail: ssc-ras@ssc-ras.ru
Коган Михаил Иосифович, доктор медицинских наук, Заслуженный Деятель науки РФ, профессор, заведующий кафедрой урологии ФПК и ППС с курсом детской урологии и андрологии, директор НИИ урологии и нефрологии ГОУ ВПО «Ростовский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России, 344022, Россия, г. Ростов-на-Дону, пер. Нахичеванский, 29, тел. (8632)-50-40-88.
Чибичян Михаил Борисович, кандидат медицинских наук, кафедры урологии ФПК и ППС с курсом детской урологии и андрологии ГОУ ВПО «Ростовский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России, Россия, 344022, г. Ростов-на-Дону, пер. Нахичеванский, 29, тел. (8632)-50-40-88.
Матишов Дмитрий Геннадьевич, доктор географических наук, член-корр. РАН, заместитель Председателя Южного научного центра РАН, Россия, 344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Чехова, 41., тел. (8632)-63-77-51, e-mail: ssc-ras@ssc-ras.ru
УДК 615.099-056.2
© М.Ю. Воронкова, Д.М. Никулина, П.А. Иванов, В.С. Кальной, 2011
М.Ю. Воронкова, Д.М. Никулина, П.А. Иванов, В.С. Кальной
МОНИТОРИНГ МЕТАБОЛИЧЕСКОГО СТАТУСА У НАРКОЗАВИСИМЫХ В ПРОЦЕССЕ СТАЦИОНАРНОГО ЛЕЧЕНИЯ
ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России
Показаны особенности гомеостаза больных опийной наркоманией на фоне проводимого традиционного лечения в условиях стационара. Лабораторные показатели, отражающие изменения основных патогенетических звеньев токсикозави-симости, не имеют тенденции к снижению.
Ключевые слова: наркомания, метаболизм, маркеры.
M.Y. Voronkova, D.M. Nikulina, P.A. Ivanov, V.S. Kalnoy MONITORING METABOLIC STATUS IN DRUG ADDICTS IN INPATIENT TREATMENT
Study of the change homeostasis is presented in work beside sick opium drug addiction on background conducted traditional treatment in condition of the permanent establishment. The laboratory factors, reflecting change main section pathogenetic tocsicologi addicts, have a no trends to reduction.
Key words: drug, metabolism, markers.
Теоретически обосновано и практически доказано, что при различных видах наркотизации качественно и количественно изменяются взаимоотношения между параметрами биохимического гомеостаза. При этом формируется новая корреляционная матрица компонентов крови, которая достоверно отражает токсикоманический гомеостаз и несет диагностическую информацию [1, 2, 3].
Цель: мониторинговая оценка гомеостаза больных наркотической зависимостью для характеристики гомеостаза и оценки эффективности лечения.
Материалы и методы. Объектом изучения были образцы сыворотки крови больных опийной наркоманией (65 человек). Контрольную группу составили 30 доноров. Забор крови проводился в день поступления (1е определение) и на 7-10 день перед выпиской (2-е определение). В работе были использованы стандартные биохимические и иммунохимические методы. Лечение пациентов проводилось по классической психофармакологической схеме (транквилизаторы, нейролептики, снотворные, антидепрессанты, адреномиметики, антагонисты опия, аналгетики, ноотропы) с добавлением инфузионной терапии (гемодез, реополиглюкин, 5%, 10% р-ры глюкозы), сердечных гликозидов, гормонов, кардиотонических средств, витаминов, сульфата магния, эу-филлина и других препаратов, необходимых для лечения острой опийной абстиненции и ее осложнений.
Результаты. Среди лабораторных показателей крови, наиболее полно отражающих изменение патогенетических звеньев, были выбраны следующие: концентрации мочевины и креатинина, отражающие гломерулярную функцию почек; уровни гамма-глутамилтранспептидазы (ГГТ), аланин- и аспартаттрансаминазы (АЛАТ и АСАТ), тимоловая проба (ТП), характеризующие функциональное состояние печени и сердца, а также активность катаболизма белков; уровни пролактина (ПРЛ) и тиреотропного гормона (ТТГ) - гормонов передней доли гипофиза, испытывающих ингибирующее влияние норадреналина, дофамина, серотонина, ГАМК, опиоидов, для оценки состояния гипофизарной системы; уровень креатинкиназы (КК), являющийся индикатором мышечной активности, поражения сердечной мышцы, отравления алкоголем и рядом лекарственных средств; концентрации иммуноглобулинов классов А, в, М, Е, использующиеся для оценки иммунореактивности; содержание альфафетопротеина (АФП) - информационный показатель хронической деструкции клеток с выраженной тенденцией к дерепрессии структурного гена ДНК.
Установлено, что в динамике лабораторные показатели не имеют достоверных изменений, что, вероятно, связано с глубокими нарушениями метаболических процессов и их регуляции, вызванными длительным действием токсических веществ и недостаточным сроком лечения в пределах периода наблюдения больных (табл.).
Таблица
Показатели гомеостаза больных наркотической зависимостью в динамике
Лабораторный показатель Значение показателя, M±m Контрольная группа, M±m
при поступлении перед выпиской
Мочевина (ммоль/л) 10,31±0,31 10,72±0,34 3,98±0,61
Креатинин (мкмоль/л) 94,22±4,31 93,43±4,37 61,13±3,17
АСАТ (Е/л) 63,41±12,96 69,72±2,01 21,23±0,33
АЛАТ (Е/л) 49,33±2,31 31,12±2,38 31,71±0,83
ГГТ (Е/л) 62,99±2,42 62,76±2,01 44,10±4,90
КК (Е/л) 228,42±19,38 209,96±7,71 114,14±12,68
ТП (ЕД Б-И) 3,13±0,21 3,23±0,27 1,93±0,27
АФП (МЕ/мл) 1,90±0,11 1,82±0,1 3,86±0,83
ПРЛ (мМЕ/мл) 78,88±3,1 83,96±3,09 231,38±8,04
ТТГ (мМЕ/л) 0,37±0,02 0,38±0,02 3,11±0,42
^М (МЕ/л) 0,94±0,06 0,99±0,06 0,31±0,04
(МЕ/л) 10,90±0,33 10,84±0,31 6,90±0,41
^А (МЕ/л) 0,81±0,03 0,82±0,03 0,47±0,03
1дЕ (МЕ/л) 316,26±12,38 313,90±11,11 97,38±2,32
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Веселовская Н.В., Коваленко А.Е. Наркотики: cвойства, действия, фармакокинетика, метаболизм. -М.: Триада-Х, 2000. - 203 с.
2. Менделевич В.А. Стандарты (модели протоколов) лечения наркологических больных в Российской Федерации с позиции доказательной медицины // Психическое здоровье. - 2008. - № 11. - С.48-34.
3. Чернобровкина Т.В. Биохимическая синдромология в лабораторной диагностике заболеваний, связанных с химической зависимостью // Клин. лаб. диагн. - 2000. - № 9. - С. 17-18.
Воронкова Марина Юрьевна, кандидат медицинских наук, доцент кафедры биохимии с курсом клинической лабораторной диагностики ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, тел. (8312) 32-33-21, e-mail: dimax@astranet.ru
Никулина Дина Максимовна, доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой биохимии с курсом клинической лабораторной диагностики ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, тел. (8312) 32-33-20, e-mail: dimax@astranet.ru
Иванов Павел Александрович, старший преподаватель кафедры биохимии с курсом клинической лабораторной диагностики ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, тел. (8512) 52-53-21
Кальной Валентин Степанович, кандидат медицинских наук, руководитель Наркологического учебно-научнолечебного центра ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, г. Астрахань, Началовское шоссе, 9, тел. (8512) 38-50-72.
УДК 616-006.6-031.81
© А.И. Глухов, С.А. Апрятин, С.Е. Северин, 2011
А.И. Глухов1, С.А. Апрятин2, С.Е. Северин1
ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ, ИНГИБИРУЮЩИХ ТЕЛОМЕРАЗУ, НА РОСТ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК МЫШИНОЙ
МЕЛАНОМЫ IN VIVO
'ГОУ ВПО «Первый Московский медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздравсоцразвития России 2ГУЗ Московский НИИ медицинской экологии Департамента здравоохранения Москвы
Экспериментальные результаты показали тормозящее действие TelP5 (в дополнение к РНК матрица компонент сайта) и олигонуклеотидов TMO24C фосфоротиоат на рост опухолей в естественных условиях, путем трехкратной подкожной инъекции, по сравнению с контрольной группой. Количество метастазов в легких во всех группах лечения с тремя последовательностями олигонуклеотидов была также значительно ниже. Выживаемость мышей была значительно выше в TelP5, TMO24G и TMO24С групп после однократного введения олигонуклеотидов по сравнению с контрольной группой.
Ключевые слова: теломераза, онкогенез, олигонуклеотиды.
A.I. Gluhov, S.A. Apryatin, S.E. Severin
THE INFLUENCE OF INHIBITING TELOMERASE MODIFIED OLIGONUCLEOTIDES ON THE GROWTH OF TUMOR CELLS IN MOUSE MELANOMA IN VIVO
Experimental results showed the inhibitory effect of TelP5 (complementary to RNA matrix site component) and TMO24C phosphorothioate oligonucleotides on tumor growth in vivo by subcutaneous three times injection in comparison with the control group. Number of lung metastases in all treatment groups with three consecutive oligonucleotides was also significantly lower. Survival of mice was significantly higher in the TelP5, TMO24G and TMO24c: groups after single injection of oligonucleotides in comparison with the control group.
Key words: telomerase, tumorigenesis, oligonucleotides.
В современной медицине большое внимание уделяется созданию высокоэффективных и специфически действующих препаратов для лечения злокачественных новообразований. По мнению многих исследователей, приобретение свойства иммортальности клетками опухолей связано с активацией фермента теломеразы, компенсирующей укорочение теломер. Основываясь на данных, полученных при изучении свойств теломеразы, в настоящее время ведется активный поиск ее ингибиторов. Особую группу соединений, исследуемых в настоящее время в качестве потенциальных ингибиторов теломеразы, представляют антисмысловые олигонуклеотиды. В отличие от обычной стратегии, где антисмысловые олигонуклеотиды подавляют экспрессию определенного гена, ингибирование теломеразы основано на непосредственном блокировании функции фермента олигонуклеотидами, комплементарными его РНК-компоненту [1]. К этой же группе соединений можно отнести и олигонуклеотиды, состоящие из теломерных повторов (ТМО - telomere mimic oligonucleotide), поскольку повторы, синтезируемые теломеразой на собственной РНК-матрице, по сути, являются комплементарными ей олигонуклеотидными последовательностями, а также ДНК- и РНК- фосфоротиоатные и фосфорамидатные олигонуклеотиды. Известно, что G-богатый олигонуклеотид ТМО2^ способен формировать квадруплексную структуру, наличие которой облегчает его взаимодействие с белками теломеразного комплекса.
Ранее в экспериментах in vitro нами было показано, что фосфоротиоатные олигонуклеотиды TelP5 и ТМО2^ снижают выживаемость опухолевой линии человека Mel-10 (меланома), способствуя их накоплению в S-фазе клеточного цикла и стимулируя апоптоз [2, 3, 4]. Таким образом, данные олигонкулеотиды оказывали ингибирующее действие на теломеразу и рост опухолевых клеток линии Mel-10.
В качестве продолжения этих исследований нами изучено действие на ингибирование теломеразной активности четырех последовательностей модифицированных олигонуклеотидов: TelP5, комплементарная область, которая служит матрицей для синтеза теломерных повторов; TMO24G, состоящий из четырех гексамер-ных звеньев 5’-TTAGGG-3’; TMOJ2G, состоящий из двух гексамерных звеньев 5’-AATCCC-3’; TMO24C, состоящий из четырех гексамерных звеньев 5’-AATCCC-3’. В работе была использована клеточная линия B-16 (мела-
нома мыши). Все модифицированные олигонуклеотиды были представлены в виде фосфоротиоатных последовательностей и синтезированы компанией «ДНК-Синтез» (Москва). Исследования проводились на самках лабораторных мышей линии C57Black/6 массой 20-22 г (n=62). Всем животным (включая контрольные группы) подкожно вводилось 0,1 млн клеток линии B-16. Лабораторные животные были разделены на 10 групп (по 6-7 мышей в группе): четырем группам изучаемые олигонуклеотиды вводились подкожно трехкратно в дозе 18 мкг/мышь на 4-й, 5-й и 6-й день после подкожного клеток линии B-16. Другим четырем группам олигонуклеотиды вводились подкожно однократно в дозе 55 мкг/мышь. Две контрольные группы получали трех- и однократные подкожные инъекции PBS в объеме 150 мкл/мышь, соответственно.
В исследовании in vivo при трехкратном подкожном введении олигонуклеотидов на 21-й день после инъекции клеточной линии B-16, медианы объема опухоли были ниже в группах TelP5 и TMO24C, чем в контрольной группе - 1,81; 2,73 и 3,91, соответственно (рис.). В случае однократного введения этих олигонуклеотидов этот эффект не наблюдался. Важно отметить, что количество метастазов в легких во всех исследуемых группах с трехкратным введением олигонуклеотидов было ниже, чем в контрольной группе. Тем не менее, выживаемость мышей в сравнении с контрольной группой была выше в группах TelP5, TMO24G и TMO24C в случае однократного введения олигонуклеотидов.
K
TMO-24G - TMO-24C -TMO-12G -Te^
день
день
день
день
день
Рис. Динамика медиан объема опухоли при трехкратном введении фосфоротиоатных олигонуклеотидов
в дозе 18 мкг/мышь
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Глухов А.И., Свинарева Л.В., Северин С.Е. [и др.] Ингибиторы теломеразы - противоопухолевые лекарственные препараты нового поколения // Биотехнология. - 2010. - № 4. - С. 8-16.
2. Свинарева Л.В., Глухов А.И., Швец В.И. Ингибирование активности теломеразы модифицированными олигонуклеотидами // Тезисы докладов V Московского Международного конгресса «Биотехнология: состояние и перспективы развития». - М., 2009. - С. 210.
3. Глухов А.И., Москалева Е.Ю., Литвин Я.А. [и др.] Динамика накопления олигонуклеотидов, содержащих теломерные повторы, их внутриклеточное распределение и влияние на выживаемость опухолевых клеток // Тезисы докладов VII Конференции с международным участием «Молекулярная медицина и биобезопасность». - М., 2010. - С. 59-60.
4. Глухов А.И., Москалева Е.Ю., Литвин Я.А. [и др.] Исследование влияния олигонуклеотидов, содержащих теломерные повторы, на распределение опухолевых клеток по фазам клеточного цикла // Тезисы докладов VII Конференции с международным участием «Молекулярная медицина и биобезопасность». - М., 2010. - С. 57-58.
Глухов Александр Иванович, доктор химических наук, профессор кафедры биологической химии ГОУ ВПО «Первый Московский медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздравсоцразвития России, Россия, г. Москва, ул. Трубецкая, 8, стр. 1, тел. (499) 246-70-26
Апрятин Сергей Александрович, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник ГУЗ «Московский НИИ медицинской экологии» Департамента здравоохранения Москвы, Россия, 117149, г. Москва, Симферопольский бульвар, 8, тел. (499) 616-23-20, e-mail: mniime@mosgorzdrav.ru
Северин Сергей Евгеньевич, доктор химических наук, член-корр. РАМН, профессор, заведующий кафедрой биологической химии ГОУ ВПО «Первый Московский медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздравсоцразвития России, Россия, г. Москва, ул. Трубецкая, 8, стр. 1, тел. (499) 246-70-26
