CC BY
66
Бюллетень Брянского отделения РБО, 2016. № 1(7). С. 54-60.
Bulletin of Bryansk dpt. of RBS, 2016.
N 1(7). P. 54-60.
БИОТЕХНОЛОГИЯ РАСТЕНИЙ
УДК 575.174.015.3
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЛОКАЛЬНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ ALOPECURUS PRATENSIS L. (POACEAE) БРЯНСКОЙ, КАЛУЖСКОЙ И СМОЛЕНСКОЙ ОБЛАСТЕЙ
© Р. Б. Ахмедов, И. Я. Нам, В. В. Заякин
R. B. Akhmedov, I. Ya. Nam, V. V. Zayakin
Molecular genetic studies of local populations of Alopecuruspratensis L. (Poaceae) in the Bryansk, Kaluga and Smolensk regions
ФГБОУВО «Брянский государственный университет им. акад. И. Г. Петровского» 241036, г. Брянск, ул. Бежицкая, 14. Тел.: +7 (4832) 66-68-34, e-mail: [email protected]
Аннотация. Работа посвящена исследованию генетической структуры локальных популяций лисохвоста лугового методом ISSR-PCR. В ходе проведенного молекулярно-генетического исследования были получены сведения о генетической структуре рассмотренных популяций, их филогенетическом родстве. В результате были составлены генетические паспорта, построен дендрит филогенетического сходства.
Ключевые слова: Alopecurus pratensis L., молекулярно-генетическое исследование, ISSR-PCR, паспортизация, генетический паспорт, филогенетический анализ.
Abstract. The work is devoted to the research of the genetic structure of local populations of Alopecurus pratensis by ISSR-PCR. Data on the genetic structure and phylogenetic relationship of populations're obtained. Genetic passports're made, dendrite of phylogenetic similarities is built.
Keywords. Alopecurus pratensis L., molecular genetic research, Inter-Simple Sequence Repeat Polymerase Chain Reaction (ISSR-PCR), phylogenetic analysis, genetic passport, certification.
Введение
Большое фундаментальное и прикладное значение для развития ботанической науки представляет изучение генетики и филогенетики растений. В настоящее время для решения данной задачи все чаще используются современные молекулярно-генетические методы ДНК-маркирования, основанные на полимеразной цепной реакции.
К настоящему моменту изучение генетического полиморфизма природных популяций лисохвоста лугового современными методами молекулярной генетики не проводилось. Ранее нами впервые в России был проведен ISSR-PCR анализ, и составлены генетические паспорта сортообразцов лисохвоста лугового и межвидовых гибридов лисохвоста лугового и лисохвоста вздутого (Ахмедов и др., 2014а; Ахмедов и др., 2014б). Целью настоящего исследования являлось проведение молекулярно-генетического анализа локальных популяций Alopecurus pratensis L. на основе метода ISSR-PCR.
A. pratensis L. - многолетний, коротко-корневищный, рыхлокустовой злак. Высота растения 30-120 см. Корневая система неглубокая, поэтому для нормального развития растение нуждается в богатых, рыхлых почвах с достаточным увлажнением. Опыление перекрестное (ветром). Цветёт в июне, плодоносит в июле. Растение тетраплоидное, 2n = 28 (42 для эндосперма), х = 7. Злак проявляет как яровой, так и озимый типы развития (Цвелёв, 1976).
Растёт в луговых сообществах различного состава, на лесных опушках, среди кустарников, у берегов водоёмов и водотоков. Нередко формирует монодоминантные сообщества. Встречается повсеместно в умеренной зоне Евразии (Губанов и др., 2002).
A. pratensis - ценное кормовое растение. Формирует массу для ранней пастьбы, скашивания на зелёный корм и травяную муку, обладает высокой питательностью, содержит большое количество протеина и каротина, устойчив к отмоканию, холодостоек. Сено и траву хорошо поедает скот всех видов. Содержание обменной энергии - 11,0-11,5 МДж/кг сухого вещества и сырого протеина - 18-20% (Васько, 2000). Сбор сена - 4,0-5,0 т/га. Посевы используются до 10 лет (Гузнов, Кривенков, 2010).
Основные направления селекции лисохвоста: создание генотипов с хорошей отрастае-мостью и стабильностью урожаев, высокой устойчивостью к основным болезням, хорошей конкурентной способностью в многокомпонентных травостоях, а также стабильной семенной продуктивностью (Столепченко и др., 2013).
Молекулярно-генетический анализ методом ISSR-PCR - один из наиболее современных и информативных подходов для определения молекулярно-генетического разнообразия и паспортизации сортов культурных растений. Основа данного метода состоит в сравнении полиморфизма длин фрагментов ДНК, находящихся между микросателлитными повторами (Хлесткина, 2013).
Микросателлиты (Simple Sequence Repeats - SSR) - это очень короткие (2-4 нуклеотид-ные) мотивы общей длиной до 100 п. н. Обычно представлены многочисленными тандемно повторяющимися копиями, проявляющими высокий уровень гетерогенности (Лутова и др., 2000). Они фланкированы высоко консервативными последовательностями (Ly, 2002).
На данный момент микросателлитные последовательности обнаружены во всех геномах прокариот и эукариот (Rakoczy-Trojanowska, Bolibok, 1994).
В большинстве случаев в растительных геномах встречаются микросателлиты, состоящие из динуклеотидных повторов. Чаще всего это AT/TA и GT/CA (Morgante, Olivery, 1993). Так же у растений встречаются тринуклеотидные мотивы (Langercrantz et al., 1993).
ISSR (Inter-Simple Sequence Repeat) PCR - метод амплификации межмикросателлитных последовательностей. В основе метода лежит ПЦР-амплификация геномной ДНК с использованием праймеров, содержащих динуклеотидные повторы и несколько случайных нук-леотидных пар. В результате клонируется фрагмент ДНК, расположенный между SSR-локусами (Дроздов, 2013; Артюхова, 2011).
Обычно для анализа полиморфизма межмикросателлитных участков используется один или несколько ISSR-праймеров. Для анализа используются олигонуклеотиды длиной 15-24 нуклеотида, состоящие из коротких повторов в 2-4 нуклеотида и одного или двух якорных нуклеотида на 3'-конце (Календарь, Глазко, 2002).
ISSR-праймеры позволяют амплифицировать последовательности ДНК, находящиеся между достаточно близкими (от 100 до 3000 пар нуклеотидов) микросателлитными повторами. В результате реакции с подобными праймерами синтезируется 25-30 фрагментов ДНК, представленных на электрофореграмме набором дискретных полос (Генофонды..., 2006).
При строгом соблюдении условий метод достаточно хорошо воспроизводим и может быть с применен для выявления внутривидовой и межвидовой изменчивости, идентификации и паспортизации видов, популяций, сортов, линий и иногда индивидов (Gupta et al., 1994). Простота и высокая информативность метода позволяет достаточно качественно, но при этом оперативно проводить молекулярно-генетические исследования генотипов растений и животных.
Материалы и методы
Исследования проводились на 17 образцах геномной ДНК, выделенной из растительного материала (семян) A. pratensis. Сбор материала осуществлялся в трёх западных областях центральной России (Брянской, Калужской и Смоленской) в 2014-2015 гг.
Проведенный молекулярно-генетический анализ включал следующие этапы: получение геномной ДНК, проведение ISSR-PCR, электрофоретическое разделение продуктов ISSR-PCR, анализ полученных электрофоретических профилей.
Для анализа использовали четыре ISSR-праймера. Характеристика использованных ISSR-праймеров представлена в табл. 1.
Таблица 1
Характеристика использованных ISSR-праймеров
Название Нуклеотидная последовательность Обозначение Температура отжига, Со
IS3 (GA)8C С 54
IS6 (AG)8(Y)T I 54
UBC810 (GA)8T G 54
B4 (CA)6GG U 50
Амплификацию проводили в многоканальном программируемом термостате «Терцик» компании «ДНК-Технология». Для анализа использовали усовершенствованную Taq ДНК-полимеразу Dream™ компании «Fermentas».
Электрофоретическое разделение продуктов ISSR-PCR проводили в ходе горизонтального электрофореза в 2% агарозном геле, содержащем интеркалирующий краситель бромистый эти-дий. Визуализацию разделенных ПЦР-продуктов проводили в потоке ультрафиолетовых лучей с помощью системы гель-документирования ChemiDoc XRS+ компании «Bio-Rad».
Определение длины полиморфных фрагментов проводили с использованием программного обеспечения Image Lab компании «Bio-Rad».
Для выявления сходства рассматриваемых локальных популяций лисохвоста лугового использовали коэффициент Съёренсена-Чекановского:
где а - число полиморфных фрагментов одного образца; b - число полиморфных фрагментов другого образца; с - число общих фрагментов для обоих образцов. Пределы коэффициента - от 0 до 1 (Лукашов, 2009; Павлинов, 2005). Генетическую дистанцию определяли как разницу: 1 - К.
Результаты исследования
Для проведения молекулярно-генетического анализа были выделены и очищены образцы геномной ДНК A. pratensis. Электрофоретическое и спектроскопическое исследования показали, что в ходе выделения были получены образцы геномной ДНК достаточной концентрации для последующего ПЦР-анализа.
В ходе молекулярно-генетического исследования был проведен ISSR-PCR анализ образцов ДНК по четырем ISSR-праймерам: IS3, IS6, UBC810, B4. После ПЦР поводилось элек-трофоретическое разделение продуктов реакции.
Для дальнейшего определения длины полиморфных фрагментов (продуктов ПЦР) использовали ДНК-маркер молекулярных весов М27 компании «СибЭнзим».
В результате были получены электрофоретические профили изучаемых образцов по четырем использованным праймерам (рис. 1).
Определение длины полиморфных фрагментов проводили по трём электрофоретическим профилям для праймеров IS3, IS6 и В4. На основе данного анализа был определен генетический полиморфизм существующих локальных популяций, а также составлены генетические формулы (генетические паспорта (табл. 2)).
Анализ составленных генетических формул показал высокий уровень генетического полиморфизма изученных локальных популяций лисохвоста лугового, что объясняется особенностями его размножения.
Рис. 1. Электрофоретические профили по К3-праймеру и Кб-праймеру.
Таблица 2
Генетические формулы локальных популяций A. pratensis по трём ISSR-праймерам
№ популяции Общая формула полиморфных фрагментов*
1п Сб35 С555 С513 С423 С390 С373 Сззб С328 С305 С232 U1275 U920 Us49 UsöO U747 Ü676 U620 U592 U470 U347 Il285 IlOOO I802 I713 1б31 I560 I534 I479 I438 I400 I368 I343 I300 I830 Il70
2п С1780 С1244 С1190 С830 С740 Сб35 С580 С555 С465 С450 С373 С336 С328 С277 С168 U1550 U1170 U1130 U1090 U920 U849 U620 U551 U540 U490 U470 U440 U4^ U377 U195 I1700 I1285 !Ю66 I802 I780 I675 I438 I300 I270 I239
3п С1190 С830 С740 Сб12 С555 С513 С490 С373 С336 С328 С277 U960 U849 U620 U540 U490 U470 U440 U347 U270 I1700 I1328 I953 I802 I631 I560 I479 I438 I270
4п С1244 С1113 С950 С740 Сб50 С513 С465 С423 С336 С305 С287 С202 U1890 U1275 U1170 U1090 U960 U800 U760 U592 U551 U470 U416 U377 U347 I2100 I1700 I1125 I953 I802 I631 I590
5п С1505 С1190 С854 С830 Сб50 Сб12 С555 С490 С423 С373 С359 С336 С277 С232 U1130 U1090 U849 U747 U676 U620 U540 U490 U470 U440 U377 I953 I802 I631 I438 I300 I270 I170
6п С760 С580 С555 С513 С359 С232 U2500 U551 U490 U440 U347 U320 U270 I925 I780 I650 I479 I368
7п С1780 С1505 С1244 С1190 С950 С854 С830 С740 Сб50 С580 С555 С373 С359 С336 С287 U1890 U1550 U1200 U920 U849 U620 U540 U490 U440 U377 I2100 I1700 I1066 I953 I925 I675 I631 I590 I534 I479 I300 I270 I239 I830
8п С1780 С1505 С950 С830 С760 С740 С705 Сб35 С580 С490 С373 С336 U2500 U1890 U1275 U1090 U849 U706 U620 U540 U490 U416 I1700 I1328 I1066 I953 I925 I802 I675 I534 I479 I300 I270 I239
9п С1505 С830 С650 С580 С555 С465 С450 С373 С328 U2020 U1275 U540 U347 U320 I953 I925 I780 I650
10п С1780 С1244 С1190 С830 С760 Сб12 С580 С555 С373 С336 С287 С232 U1000 U849 U620 U540 U320 I1328 I1125 I1066 I953 I802 I675 I631 I590 I534 I479 I368 I300 I270 I239
* обозначение праймера ^ С555 ^ длина полиморфного фрагмента.
Для определения существующего генетического родства между изучаемыми локальными популяциями и гербарными образцами лисохвоста лугового нами был рассчитан коэффициент сходства Съёренсена-Чекановского по электрофоретическим профилям ШЗ-праймера, на основе которого была построена дендрограмма филогенетического родства (рис. 2).
После проведения подробного анализа построенной дендрограммы был сделан вывод, что наиболее целесообразно выделить три генетически обособленных кластера (рис. 3):
1) северо-западный кластер (образцы 2г, 3г, 4п, 4г, 7п, 10п);
2) юго-западный кластер (образцы 5г, 6г, 7г, 8п, 8г);
3) юго-восточный кластер (образцы 1п, 2п, 3п, 5п, 6п, 9п).
Необходимо отметить, что многие популяции, несмотря на географическую близость, входят в разные кластеры. Возможно, это связано с наличием экологической изоляции, основанной на различиях во времени цветения, или с постоянным заносом семенного материала.
Рис. 2. Дендрит филогенетического родства Рис. 3. Условные границы северо-западного,
по ВЗ-праймеру. юго-западного и юго-восточного кластеров
Выводы
В ходе проведённого исследования были получены следующие результаты и сформулированы следующие выводы.
1. Получены электрофоретические профили локальных популяций по четырем ISSR-праймерам, и гербарных образцов по Ш3-праймеру.
2. На основе полученных профилей для локальных популяций составлены генетические формулы по трём ISSR-праймерам.
3. Составлены матрицы генетического сходства локальных популяций, построен дендрит филогенетического родства.
4. Проведён кластерный анализ, определены группы популяций, имеющих наибольшее генетическое сходство.
Полученные данные помогут сформировать более глубокое представление о генетической структуре рассмотренных популяций и микроэволюционных процессах в них. Составленные генетические формулы могут быть использованы в селекционном процессе создания новых сортов и гибридных форм А. pratensis.
Список литературы
Артюхова А. В. Паспортизация сортов люпина методами ISSR-PCR и RAPD-PCR для биотехнологических исследований. Дис. ... к.б.н. Уфа, 2011. 144 с.
Ахмедов Р. Б., Кондрацкая И. П., Нам И. Я., Заякин В. В. Молекулярно-генетический анализ межвидовых гибридов лисохвоста лугового (Älopecurus pratensis L.) и лисохвоста вздутого (Аlopecurus ventricorus Pers.) // Биотехнологические приёмы в сохранении биоразнообразия и селекции растений: материалы международной научной конференции, Минск. Минск: ГНУ «Центральный ботанический сад Академии наук Беларуси», 2014а. С. 34-38.
Ахмедов Р. Б., Нам И. Я., Заякин В. В. Молекулярно-генетический анализ сортов АЬресигш pratensis L. (Poaceae) // БИОЛОГИЯ - НАУКА XXI ВЕКА: 18-я Международная Пущинская школа-конференция молодых ученых (Пущино, 2014 г.). Сб. тез. Пущино, 2014б. С. 9.
Васько П. П. Продуктивность многолетних злаковых трав и пути ее повышения // Земледелие и растениеводство: Науч. тр. Минск: Белорусский научно-исследовательский ин-т земледелия и кормов. 2000. Вып. 37. С. 113-119.
Генофонды сельскохозяйственных животных: генет. ресурсы животноводства России / отв. ред. И. А. Захаров; Ин-т общ. генетики им. Н. И. Вавилова РАН. М.: Наука, 2006. 462 с.
Губанов И. А., Киселева К. В., Новиков В. С., Тихомиров В. Н. Иллюстрированный определитель растений Средней России. Т. 1. Папоротники, хвощи, плауны, голосеменные, покрытосеменные (однодольные). М.: Т-во науч. изд. КМК, 2002. 526 с.
Гузнов Г. Я., Кривенков В. А. Кормовые растения сенокосов и пастбищ: Методическое пособие // Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия. Нижний Новгород, 2010. 40 с.
Дроздов Е. В. Полиморфизм генов, связанных с молочной продуктивность крупного рогатого скота. дис. ... к.б.н. СПб .-Пушкин, 2013. 123 с.
Календарь Р. Н., Глазко В. И. Типы молекулярно-генетических маркеров и их применение // Физиология и биохимия культурных растений. 2002. Т. 34. № 4. С. 279-296.
Лукашов В. В. Молекулярная эволюция и филогенетический анализ: уч. пособие. М.: Изд-во БИНОМ, 2009. 256 с.
Лутова Л. А., Проворов Н. А., Тиходеев О. Н., Тихонович И. А., Ходжайова Л. Т., Шишкова С. О. Генетика развития растений / Под ред. чл.-кор. РАН С.Г. Инге-Вечтомова. СПб.: Наука, 2000. 539 с.
Павлинов И. Я. Введение в современную филогенетику (кладогенетический аспект). М.: Тов. науч. изд. КМК, 2005. 51 с.
Столепченко В. А., Васько П. П., Кондрацкая И. П., Фоменко Т. И. Разработка биотехнологических подходов создания межвидовых гибридов лисохвоста // Факторы экспериментальной эволюции организмов: сб. науч. работ. Т. 12. Киев: Логос, 2013. 360 с.
Хлесткина Е. К. Молекулярные маркеры в генетических исследованиях и в селекции // Вавиловский журн. генетики и селекции. 2013. Т. 17. № 4/2. С. 1044-1054.
ЦвелёвН. Н. Злаки СССР. Л.: Наука, 1976. 788 с.
GuptaM., Chyi Y. S., Romero-Severson J., Owen J. L. Amplification of DNA markers from evolutionar-ily diverse genomes using single primers of simple-sequence repeats // Theor. and Appl. Genet. 1994. Vol. 89. P. 998-1006.
Langercrantz U, Ellegren H., Andersson L. The abundance of various polymorphic microsatellite motifs differs between plants and vertebrates // Nucleic acids research. 1993. Vol. 21. N° 5. P. 1111-1115.
Li Y.-Ch. Microsatellites: genomic distribution, putative function and mutational mechanisms: a review / Li Y.-Ch. [et al.] // Molecular ecology. 2002. Vol. 11. P. 2453-2465.
MorganteM., OliveryA. M. PCR-amplified microsatellite as markers in plant genetics // Plant journal. 1993. Vol. 3. № 1. P. 175-182.
Rakoczy-Trojanowska M., Bolibok H. Characteristics and comparison of three classes of microsatellite-based markers and their application in plants // Cellular and molecular biology letters. 2004. Vol. 9. № 2. P. 221-238.
References
Artyuhova A. V. Pasportizaciya sortov lyupina metodami ISSR-PCR i RAPD-PCR dlya biotekhnologiche-skih issledo-vanij. dis. ... k.b.n. Ufa, 2011. 144 p.
Ahmedov R. B., Kondrackaya I. P., Nam I. Ya., Zayakin V. V. Molekulyarno-geneticheskij analiz mezhvidovyh gibri-dov lisohvosta lugovogo (Alopecurus pratensis L.) i lisohvosta vzdutogo (Alopecurus ventricorus Pers.) // Biotekhnolog-icheskie priyomy v sohranenii bioraznoobraziya i selekcii rastenij: materialy mezh-dunarodnoj nauchnoj konferencii, Minsk. Minsk: GNU «Central'nyj botanicheskij sad Akademii nauk Belarusi», 2014a. P. 34-38.
Ahmedov R. B., Nam I. Ya., Zayakin V. V. Molekulyarno-geneticheskij analiz sortov Alopecurus pratensis L. (Poaceae) // BIOLOGIYA - NAUKA XXI VEKA: 18-ya Mezhdunarodnaya Pushchinskaya shkola-konferenciya molodyh uchenyh (Pushchino, 2014 g.). Sb. tez. Pushchino, 2014b. P. 9.
Vas'ko P. P. Produktivnost' mnogoletnih zlakovyh trav i puti ee povysheniya // Zemledelie i raste-nievodstvo: Nauch. tr. Minsk: Belorusskij nauchno-issledovatel'skij in-t zemledeliya i kormov. 2000. Vyp. 37. P. 113-119.
Genofondy sel'skohozyajstvennyh zhivotnyh: genet. resursy zhivotnovodstva Rossii / otv. red. I. A. Zaharov; In-t ob-shch. genetiki im. N. I. Vavilova RAN. M.: Nauka, 2006. 462 p.
GubanovI. A., Kiseleva K. V., Novikov V. S., Tihomirov V. N. Illyustrirovannyj opredelitel' raste-nij Srednej Rossii. T. 1. Paporotniki, hvoshchi, plauny, golosemennye, pokrytosemennye (odnodol'nye). M.: T-vo nauch. izd. KMK, 2002. 526 p.
Guznov G. Ya., Krivenkov V. A. Kormovye rasteniya senokosov i pastbishch: Metodicheskoe posobie // Nizhe-gorodskaya gosudarstvennaya sel'skohozyajstvennaya akademiya. Nizhnij Novgorod, 2010. 40 p.
DrozdovE. V. Polimorfizm genov, svyazannyh s molochnoj produktivnost' krupnogo rogatogo skota. dis. ... k.b.n. S-Pb-Pushkin, 2013. 123 s.
Kalendar' R. N., Glazko V. I. Tipy molekulyarno-geneticheskih markerov i ih primenenie // Fiziologiya i biohimiya kul'turnyh rastenij. 2002. T. 34. № 4. P. 279-296.
Lukashov V. V. Molekulyarnaya ehvolyuciya i filogeneticheskij analiz: uch. posobie. M.: Izd-vo BINOM, 2009. 256 p.
Lutova L. A., Provorov N. A., Tihodeev O. N., Tihonovich I. A., Hodzhajova L. T., Shishkova S. O. Genetika razvitiya rastenij / Pod red. chl.-kor. RAN S. G. Inge-Vechtomova. SPb.: Nauka, 2000. 539 p.
PavlinovI. Ya. Vvedenie v sovremennuyu filogenetiku (kladogeneticheskij aspekt). M.: Tov. nauch. izd. KMK, 2005. 51 p.
Stolepchenko V. A., Vas'ko P. P., Kondrackaya I. P., Fomenko T. I. Razrabotka biotekhnologicheskih podhodov soz-daniya mezhvidovyh gibridov lisohvosta // Faktory ehksperimental'noj ehvolyucii organizmov: sb. nauch. rabot. T. 12. Kiev: Logos, 2013. 360 p.
Hlestkina E. K. Molekulyarnye markery v geneticheskih issledovaniyah i v selekcii // Vavilovskij zhurn. genetiki i sel-ekcii. 2013. T. 17. № 4/2. P. 1044-1054.
CvelyovN. N. Zlaki SSSR. L.: Nauka, 1976. 788 p.
GuptaM., Chyi Y. S., Romero-Severson J., Owen J. L. Amplification of DNA markers from evolutionar-ily diverse genomes using single primers of simple-sequence repeats // Theor. and Appl. Genet. 1994. Vol. 89. P. 998-1006.
Langercrantz U., Ellegren H., Andersson L. The abundance of various polymorphic microsatellite motifs differs between plants and vertebrates // Nucleic acids research. 1993. Vol. 21. №2 5. P. 1111-1115.
Li Y.-Ch. Microsatellites: genomic distribution, putative function and mutational mechanisms: a review / Li Y.-Ch. [et al.] // Molecular ecology. 2002. Vol. 11. P. 2453-2465.
MorganteM., OliveryA. M. PCR-amplified microsatellite as markers in plant genetics // Plant journal. 1993. Vol. 3. №2 1. P. 175-182.
Rakoczy-Trojanowska M., Bolibok H. Characteristics and comparison of three classes of microsatellite-based markers and their application in plants // Cellular and molecular biology letters. 2004. Vol. 9. №2 2. P. 221-238.
Сведения об авторах
Akhmedov Roman Bachtiyarovich
Postgraduate student Bryansk State University named after Acad. I. G. Petrovsky, Bryansk E-mail: [email protected]
Nam IrinaYan-Gukovna
Sc. D. in Biology Bryansk State University named after Acad. I. G. Petrovsky, Bryansk E-mail: [email protected]
Zayakin Vladimir Vasilievich
Sc. D. in Biology Bryansk State University named after Acad. I. G. Petrovsky, Bryansk E-mail: [email protected]
Ахмедов Роман Бахтиярович
аспирант
ФГБОУ ВО «Брянский государственный университет им. акад. И. Г. Петровского», Брянск E-mail: [email protected]
Нам Ирина Ян-Гуковна
доктор биологических наук
ФГБОУ ВО «Брянский государственный университет им. акад. И. Г. Петровского», Брянск E-mail: [email protected]
Заякин Владимир Васильевич
доктор биологических наук
ФГБОУ ВО «Брянский государственный университет им. акад. И. Г. Петровского», Брянск E-mail: [email protected]
