CC BY
26
DOI 10.31588/2413-4201-1883-244-4-258-262
УДК 619: 616:98.579
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПОЛЕВЫХ ИЗОЛЯТОВ ВИРУСА БОЛЕЗНИ НЬЮКАСЛА, ВЫДЕЛЕННЫХ В ТАДЖИКИСТАНЕ
Шоназар ДЖ. М. - к.в.н., Махмудов К.Б. - к.в.н., Салимов Т.М. - д.в.н., профессор, Мамадатохонова Г.Н. - к.в.н., Рахимов А.А. - н.с., Мираков А.З. - м.н.с.
Институт проблем биологической безопасности ТАСХН (ИПББ)
Ключевые слова: болезнь Ньюкасла, филогенетическый анализ генотипа, секвениро-ванние генов, штамм болезни Ньюкасла, домашняя птица
Keywords: newcastle disease, genotype phylogenetic analysis, gene sequencing, Newcastle disease strain, poultry
Болезнь Ньюкасла (БН) является одним из самых значимых и распространённых заболеваний домашней птицы во всем мире. Болезнь наносит большой экономический ущерб птицеводству во многих частях мира. Возбудитель болезни Ньюкасла (ВБН) принадлежит к роду Avulavirus семейства Paramyxoviridae [6]. Вирусы рода Avulavirus подразделяются на девять серотипов (APMV-1-9) на основании анализа ингибирования гемагглюти-нации (Ш) и ингибирования нейраминида-зы (N1) [3]. Все штаммы ВБН содержат па-рамиксовирусов птиц серотип 1 (APMV-1). Поскольку ВБН является важным патогеном домашней птицы, APMV-1 является наиболее широко охарактеризованным се-ротипом среди парамиксовирусов птиц [10, 11].
Из всех встречающихся в природе штаммов вируса болезни Ньюкасла АРМУ-1, является единственным хорошо охарактеризованным серотипом из-за его экономической значимости. Полные последовательности генома определены для ряда штаммов БН, имеется обширная информация о молекулярной биологии и патогенезе ВБН. Однако следует отметить что, биологические характеристики и па-тогенность этих штаммов остаются плохо изученными. Штаммы APMV-2 характеризуются легкими респираторными заболеваниями, снижением яйценоскости и бесплодием у индеек [7]. В то время как АРМУ-3 вызывает энцефалит и высокую смертность у кур, респираторные заболевания у индеек и задержкой роста у моло-
дых цыплят. Штаммы APMV-4 были выделены у кур, уток и гусей [12]. Штаммы АРМУ-5 ответственны за заболевание у волнистых попугайчиков
(Melopsittacusundulatus), вызывают, одышку, диарею, кривошею и острый фатальный энтерит, что приводит к очень высокой смертности [8]. Штаммы APMV-6 впервые выделены у домашней утки, и было обнаружено, что он вызывает легкое респираторное заболевание и снижение яйценоскости у индеек, но относительно кур эти штаммы авирулентные [4]. Штаммы APMV-8 выделены у гусей и дикой утки шилохвости [13]. Штаммы APMV-9 изолированы у уток по всему миру [5].
Штамм АРМУ-7 был впервые выделен из убитого охотником голубя в 1975 году, в США, в штате Теннесси и был разработан как новый серотип, основанный на анализах ингибирования гемагглютинации и ингибирования нейраминидазы. APMV-7 был выделен в результате естественной вспышки заболевания дыхательных путей в коммерческих племенных стадах индеек в Огайо, в 1997 году. Инфекция APMV-7 вызывала у индеек респираторные заболевания аэросаккулит и снижение яйценоскости [9].
Целью исследований стало определение характеристики изолятов вируса болезни Ньюкасла, вызвавших заболевание птиц в различных регионах Республики Таджикистан с 2014 по 2017 годы.
Результат исследования. Осенью 2017 г. в частном секторе Гиссарского района Республики Таджикистана среди
цыплят 45-дневного возраста возникла вспышка БН. Собранный патологический материал происследовали методом ОТ-ПЦР и получили положительные результаты со специфических продуктов ампликон в размере 300 пар оснований.
Дальнейшие исследования
проведены совместно со специалистами Шведского национального ветеринарного университета г. Упсала с целью изучение филогенетического дерева изолята вируса болезни Ньюкасла, выделенного в Таджикистане.
Было проведено секвенирования участка гена F имеющихся в международной базе данных полных нуклеотидных последовательностей, как ген, отвечающий за вирулентность вируса болезни Ньюкасла. По результатам секвенирования проведено сравнение выделенного полевого штамма с другими штаммами вируса болезни Ньюкасла в интернет базе данных GeneBank, с помощью пакета программ MEGA6. Полученные результаты приведены на рисунке 1.
Рисунок 1 - Дендрограмма Гиссарского изолята вируса болезни Ньюкасла по антигенному родству полученый в 2017 году
Результаты молекулярно-
биологического исследования в полиме-разной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) и методом нуклеинового секвенирования генома, позволили идентифицировать изолят от домашних птиц, относящийся к авулавирусу птиц се-ротипа -1, генотипа^ (УШ)вирус БН (Avi-anAvulavirustype 1).
Филогенетический анализ нуклео-тидных последовательностей в области гена F позволил установить, полевой штамм БН, выделенный на территории республики Таджикистан, относится к генотипу VII, который имеет тесное сход-
ство со штаммами, выделенными в странах Южной Азии, в Шри-Ланке и Пакистане [2].
Выяснилось, что также вспышки болезни Ньюкасла в республике наблюдались в 2014 году, в птицеводческих хозяйствах Согдийской области и последующем в 2016 году, в птицеводческих хозяйствах города Гиссар, районов Шахринав и Руда-ки республики Таджикистан. Результаты, полученные в 2014 году, позволили идентифицировать изолят ВБН как парамиксо-вируса серотипа - 1 генотипа 7 относящегося к группе велогенных штаммов (Рисунок 2) [1].
67
84
-гмМО/Алпт - genotype I
-NDV4-C - genotype I
-HX01 • genotype I
-VRDC/Venftn/laSotaWS • genotype В
-APMV-1£a/2098/71 - genotype V
-Chimalhuacan • genotype V
-Chicken_Sweden_95 • genotype VI
-NDV55/TUNamakkal • genotype IV
-APMV-1/NL/1S2608/93 • genotype Vila
-Japan>1barala'SG106/1999 - genotype VI
-Pheasa»ibMM20<Palastan/20l1 • genotype VII
-NDVPak/AW-14 - genotype Vlli
-Pak/SFR-611/13- genotype VI
-Isolate Tadjikistan
-VaccmeH39 • genotype III
Рисунок 2 - Дендрограммаизолята вируса болезни Ньюкасла от цыплят-бройлеров по антигенному родству выполненный в 2014 г.
51
53
Рисунок 3 - ДендрограммаизолятаNDV/Tajikistan/3411/2016 вируса болезни Ньюкасла по антигенному родству
В 2016 году, филогенетический анализ секвенированных генов ПМВ, с полными нуклеотидными последовательностями, проводили с помощью компьютерной программы MEGA 6.06, для после-
довательностей фрагмента гена F, длиной 527 нуклеотидов (нуклеотиды 199-725 ОРС гена F), изученного изолята и 275 опубликованных в базе данных GenBank.
Полученные данные приведены на рисунке 3.
Результаты исследования показали, что полевой штамм, выделенный в 2016 году у домашних птиц, также принадлежит к роду Авулавирусу птиц серотипа - 1, генотипа - 7.
Заключение. Исследования, проведенные в последние годы в республике, показывают, что выделенные полевые штаммы ВБН в хозяйствах Северного и Центрального Таджикистана относятся к генотипу VII. Это говорит о том, что, несмотря на разное месторасположение хозяйств, штаммы ВБН, циркулирующие на территории Таджикистана, аналогичны.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Салимов, Т.М. Диагностика «полевой» НБ-инфекции / Т.М. Салимов, А.Н. Махмадшоев, О.Ф. Хохлачёв// Ветеринария. - 2014. - № 10 - 12(45). - С. 2425.
2. Шоназар, Д.М. Филогенетический анализ изолятов вируса болезни Ньюкасла / Д.М. Шоназар, Г.Н. Мамадато-хонова, С. Зохари. // БИО журнал для специалистов птицеводческих и животноводческих хозяйств. - 2018. - № 11. - С. 1415.
3. Alexander, D.J. Newcastle disease, other avian paramyxoviruses, and pneu-movirus infections / Y.M. Saif, H.J. Barnes, J.R Glisson [et al.] // In: Diseases of Poultry. Iowa State Press, Ames. - 2003. - Vol 11. -P. 63-99.
4. Alexander, D. Avian Paramyxovi-ruses 2-9 / D. Alexander, D. Senne // Diseases of Poultry. - 2008. - P. 103.
5. Capua, I. Isolation of an avian paramyxovirus type 9 from migratory waterfowl in Italy / I. Capua, R. De Nardi, M.S Beato [et. al] // Vet. Rec. - 2004. - Vol. 31. - P. 155-156.
6. Lamb, R.A. Paramyxoviridae: The
Viruses and Their Replication / R.A. Lamb,
D.E. Griffin, M.A. Martin [et al.] // Parks editors. Fields Virology. - 2007. - Vol. 5. - P. 1449-1496.
7. Lipkind, M.A. The isolation of yu-caipa-like paramyxoviruses from epizootics of a respiratory disease in turkey poultry farms in Israel / M.A. Lipkind, Y. Weisman,
E. Shihmanter [et al.] // Vet.Rec. - 1979. -Vol. 105 (25-26). -P. 577-578.
8. Nerome, K.I. Solation of a new avian paramyxovirus from budgerigar / K.I. Nerome, M. Nakayama, M. Ishida, H. Fukumi // J. Gen. Virol. - 1978. - Vol. 38 (2). - P. 293-301.
9. Saif, Y.M. Natural and experimental infection of turkeys with avian paramyxovi-rus-7 / Y.M. Saif, R. Mohan, L. Ward [et al.] // Avian Dis. - 1997. - Vol. 41(2). - P. 326329.
10. Samuel A.S. Complete genome sequence of avian paramyxovirus (APMV) serotype 5 completes the analysis of nine PMV serotypes and reveals the longest APMV genome/ A.S. Samuel, A. Palduri, , S. Kumar [et al.] // PLoS ONE. - 2010. - Vol. 5. P. 116.
11. Subbiah, M. Complete genome sequences of avian paramyxovirus serotype 2 (APMV-2) strains Bangor, England and Kenya: Evidence for the existence of subgroups within serotype 2 // M. Subbiah, S. Nayak, P. L. Collins, S. K. Samal // Virus Res. -2010. - Vol. 152. - P. 85-95.
12. Tumova, B. A hitherto unreported paramyxovirus of turkeys/ B. Tumova, J.H. Robinson, B.C. Easterday// Res. Vet. Sci. - 1979. - Vol. 27 (2). - P. 135-40.
13. Yamane, N. Characterization of avian paramyxoviruses isolated from feral ducks in northern Japan: the presence of three distinct viruses in nature / N. Yamane, J. Ari-kawa, T. Odagiri, N. Ishida // Microbiollm-munol. - 1982. - Vol. 26 (7). - P. 557-568.
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПОЛЕВЫХ ИЗОЛЯТОВ ВИРУСА БОЛЕЗНИ НЬЮКАСЛА, ВЫДЕЛЕННЫХ В ТАДЖИКИСТАНЕ
Шоназар ДЖ. М., Махмудов К.Б., Салимов Т.М., Мамадатохонова Г.Н., Рахимов А.А.,
Мираков А.З.
Резюме
Заболевания и гибель домашних птиц в Республике Таджикистан в последние годы были вызваны вирусом болезни Ньюкасла. Вспышки болезни Ньюкасла зарегистрированы в птицеводческих хозяйствах Согдийской области и районах республиканского подчинения в период с 2014 по 2017 гг. По результатам секвенирования проведено сравнение выделенного полевого штамма с другими штаммами вируса болезни Ньюкасла в интернет базе данных GeneBank с помощью пакета программ MEGA6. Результаты исследований показали, что выделенные от домашних птиц штаммы ВБН на территории Таджикистана в периоды с 2014 по 2017 гг. принадлежат к авулавирусу птиц серотипа -1, генотипа-7.
MOLECULAR-GENETIC ANALYSIS OF FIELD ISOLATED OF THE NEWCASTLE DISEASE VIRUS EXTRACTED IN TAJIKISTAN
Schonazar J.M., Mahmudov K.B., Salimov T.M., Mamadatokhonova G.N., Rahimov A.A.,
Mirakov A.Z.
Summary
The Newcastle disease virus has caused diseases and death of poultry in the Republic of Tajikistan in recent years. Outbreaks of Newcastle disease have reported in poultry farms in the Sughd region and areas of republican subordination in the period from 2014 to 2017. Based on the results of sequencing, the selected field strain has compared with other strains of the Newcastle disease virus in the GeneBank Internet database using the MEGA6 software package. The results of the study showed that strains of Newcastle disease virus isolated from poultry in Tajikistan during the period from 2014 to 2017 belong to Avulavirus of birds of serotype- 1, genotype- 7.
DOI 10.31588/2413-4201-1883-244-4-262-266 УДК 578.828.6:578.5.083.2
ПРОВИРУСНАЯ ДНК ВЛКРС В ПАТОГЕНЕЗЕ ЛЕЙКОЗА КОРОВ
Якупов Т.Р. - д.вет.н., доцент, Зиннатов Ф.Ф. - к.б.н., доцент, Гатина А.В. - студент,
Масленников Н.Н. - студент
ФГБОУ ВО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины
имени Н.Э.Баумана»
Ключевые слова: лейкоз крупного рогатого скота, провирус, полимеразная цепная реакция, иммуноферментный анализ, иммунный комплекс
Кeywords: bovine leukemia, polymerase chain reaction, immunosorbent assay, provirus, immune ^mplexes
Одним из основных факторов, сдерживающих эффективность оздоровительных мероприятий при лейкозе, является недостаточная изученность особенностей патогенеза инфекционного процесса. Несмотря на использование разноплано-
вых методов и технологий в диагностических исследованиях, основу диагностики лейкоза крупного рогатого скота составляют серологические методы, которые основаны на обнаружении в сыворотке крови животных специфических антител к анти-
